專利名稱：一種丙烯酰胺快速檢測(cè)卡及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)丙烯酰胺的器具，特別是涉及一種丙烯酰胺的快速檢測(cè)卡及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
2002年4月，瑞典斯德哥爾摩大學(xué)和瑞典國家食品管理研究人員率先報(bào)道，從油炸薯?xiàng)l、薯片，餅干等食品中檢出了高濃度可疑致癌物-丙烯酰胺(acrylamide)，隨后許多國家紛紛開始調(diào)查，都得到了與瑞典相似的結(jié)果。2005年2月，聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)聯(lián)合食品添加劑專家委員會(huì)(JECFA)第64次會(huì)議根據(jù)近兩年來的新資料，對(duì)食品中的丙烯酰胺進(jìn)行了系統(tǒng)的危險(xiǎn)性評(píng)估。丙烯酰胺是一種白色晶體樣物質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量為71. 08，室溫下穩(wěn)定，易溶于水， 在乙醇、乙醚、丙酮等有機(jī)溶劑中易聚合和共聚.丙烯酰胺是生產(chǎn)聚丙烯酰胺的工業(yè)原料， 并廣泛用于染料、塑膠的合成以及用作建材和日用品中的增稠劑，而聚丙烯酰胺作為助凝劑用于污水和飲用水處理。食品中丙烯酰胺的污染與高溫加工有關(guān)，研究表明面包、油炸薯?xiàng)l、土豆片等含淀粉碳水化合物高的食物，經(jīng)120°C以上高溫長時(shí)間烘烤、油炸，可檢測(cè)出丙烯酰胺。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明丙烯酰胺具有神經(jīng)、生殖、遺傳毒性及潛在致癌性。基于其累積效應(yīng)，長期暴露于低濃度的丙烯酰胺尤其是食源性攝入對(duì)機(jī)體存在潛在危害，目前，已在人體內(nèi)檢測(cè)到丙烯酰胺DNA加合物和蛋白質(zhì)加合物。據(jù)我國調(diào)查發(fā)現(xiàn)，丙烯酰胺在薯類油炸食品中含量為0. 78-3. 21mg/kg,同時(shí)調(diào)查發(fā)現(xiàn)北京地區(qū)有67. 8%的居民丙烯酰胺攝入量超過了美國FDA的每日容許攝入量，且有明顯的年齡差異，兒童丙烯酰胺的暴露水平是成人的 2-3倍，因此食品中丙烯酰胺的危害應(yīng)引起人們的廣泛關(guān)注。本發(fā)明擬發(fā)明一種基于小分子物質(zhì)丙烯酰胺偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學(xué)檢測(cè)方法，采取免疫學(xué)競(jìng)爭(zhēng)法的原理，結(jié)合膠體金(或乳膠顆粒)標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計(jì)的一種快速檢測(cè)試劑，可快速特異地檢測(cè)食品中的丙烯酰胺。反應(yīng)是利用丙烯酰胺類似物的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測(cè)方法，具有特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可避免其它檢測(cè)方法的假陽性導(dǎo)致的誤檢問題。同時(shí)檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單快速，無需特殊的儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場(chǎng)操作。由于樣本量需要少、簡(jiǎn)便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，準(zhǔn)確率大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能檢測(cè)食品中丙烯酰胺含量的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方法檢測(cè)食品中丙烯酰胺的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測(cè)的操作繁瑣等缺點(diǎn)，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測(cè)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案一種丙烯酰胺快速檢測(cè)卡，其為在長條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4 ；測(cè)試條2是由支承背板 5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金(或乳膠顆粒)膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9，另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金(或乳膠顆粒)膜7 ；膠體金(或乳膠顆粒)膜為含抗丙烯酰胺抗體膠體金(或乳膠顆粒)標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶 10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。采用上述丙烯酰胺快速檢測(cè)卡，檢測(cè)食品中丙烯酰胺的含量，檢測(cè)樣品的處理方法如下
A 若樣品為溶液，可直接檢測(cè)或簡(jiǎn)單過濾后檢測(cè)
β 若樣品為固體，以ι%的甲酸水溶液室溫?cái)嚢璩睾螅∵^濾液進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量未超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽性，表示被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測(cè)試條已失效。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)食品中丙烯酰胺含量，易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，使用方便，檢測(cè)快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。


圖1丙烯酰胺快速檢測(cè)卡外殼及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測(cè)試條，3、 檢測(cè)窗孔，4、加樣孔。圖2測(cè)試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測(cè)帶，11、 質(zhì)控帶。圖3丙烯酰胺快速檢測(cè)卡的測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、 膠體金(或乳膠顆粒)膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合具體實(shí)施例參見附圖進(jìn)一步說明如下 實(shí)施例1
一種丙烯酰胺快速檢測(cè)卡，它是在檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測(cè)試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測(cè)卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚 5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測(cè)卡外殼1殼蓋上有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4。測(cè)試條2放置在檢測(cè)卡外殼1的殼座內(nèi)。測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測(cè)帶10，含N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 —端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6—端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金(或乳膠顆粒)膜7，膠體金(或乳膠顆粒)膜7是含抗丙烯酰胺單克隆抗體膠體金(或乳膠顆粒)標(biāo)記物的玻璃纖維膜。膠體金 (或乳膠顆粒)膜7厚0. 5-0. 8匪，長5匪，寬4匪。樣品墊8厚0. 5-0. 8匪，長20匪，寬4匪。 吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長16_20mm，寬4mm。膠體金(或乳膠顆粒)膜7、樣品墊8及吸水膜 9與硝酸纖維素膜搭接長度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本發(fā)明丙烯酰胺檢測(cè)卡用于食品中丙烯酰胺的檢測(cè)。實(shí)施例2 樣品的處理方法如下
A 若樣品為溶液，可直接檢測(cè)或簡(jiǎn)單過濾后檢測(cè)
β 若樣品為固體，以ι%的甲酸水溶液室溫?cái)嚢璩睾?，取過濾液進(jìn)行檢測(cè)。使用丙烯酰胺快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，先將待檢測(cè)的樣品液從加樣孔4中滴注入丙烯酰胺快速檢測(cè)卡的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測(cè)的樣品液及膠體金(或乳膠顆粒)膜7所含的抗丙烯酰胺單克隆抗體膠體金(或乳膠顆粒)標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 (或乳膠顆粒)標(biāo)記的抗體，在測(cè)試帶上分別與含N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢丙烯酰胺存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)與檢測(cè)帶所含的N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況
1、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測(cè)結(jié)果為陰性，說明被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量未超標(biāo)。2、當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽性，說明被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量超標(biāo)。3、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶12均不顯色，則表明檢測(cè)試條已失效。
權(quán)利要求
1.一種丙烯酰胺快速檢測(cè)卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2)，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣孔(4);測(cè)試條(2)是由支承背板(5) 上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、 和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜 (7)，膠體金膜為含抗丙烯酰胺抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜、或乳膠顆粒膜為含抗丙烯酰胺抗體乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜；硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是 含N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11 )，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。
2.用權(quán)利要求1所述的丙烯酰胺快速檢測(cè)卡的檢測(cè)方法，其特征在于應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)食品中丙烯酰胺的含量，檢測(cè)樣品的處理方法如下A 樣品為溶液，直接檢測(cè)或簡(jiǎn)單過濾后檢測(cè)；或B 樣品為固體，以質(zhì)量濃度1%的甲酸水溶液室溫?cái)嚢璩睾?，取過濾液進(jìn)行檢測(cè)；當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量未超標(biāo)；當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽性，表示被檢測(cè)樣品中丙烯酰胺含量超標(biāo)；當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測(cè)試條已失效。
全文摘要
一種丙烯酰胺快速檢測(cè)卡及其檢測(cè)方法，屬于丙烯酰胺檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明丙烯酰胺快速檢測(cè)卡外殼內(nèi)有測(cè)試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金(或乳膠顆粒)膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金(或乳膠顆粒)膜為含抗丙烯酰胺單克隆抗體膠體金(或含抗丙烯酰胺單克隆抗體乳膠顆粒)標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜橫向上有兩條檢測(cè)帶，一條為含丙烯酰胺類人工抗原的檢測(cè)帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)食品樣品中丙烯酰胺的含量。本發(fā)明丙烯酰胺快速檢測(cè)卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/02GK102507880SQ201110349769
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月8日
發(fā)明者周堅(jiān), 王黎麗 申請(qǐng)人:無錫安迪生物工程有限公司