專利名稱：一種治療癌癥的中藥口服液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療癌癥的中藥口服液，所述口服液包含紅參、黃芪、甘草、斑蝥和蟾酥的提取物作為有效成分。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有癌癥治療有許多方法，大都采用中西藥結(jié)合的方式進(jìn)行。例如，鎖骨下靜脈穿刺的方法給患者以靜脈注射，所使用的藥劑大都是通常所用的普通藥劑，其療效較差，腫瘤消退緩慢，病情穩(wěn)定差，甚至惡化；另外，采用純化學(xué)治療，患者的疼痛難以得到緩解，睡眠改善較小，食欲不見增加。從醫(yī)學(xué)上講，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能有著十分密切的關(guān)系，經(jīng)調(diào)查研究表明，惡性腫瘤患者的免疫功能、尤其是細(xì)胞免疫功能受到抑制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員致力于尋找各種能夠改善生物反應(yīng)的調(diào)劑(BRM)，以加強(qiáng)調(diào)整或保護(hù)腫瘤患者的免疫功能， 現(xiàn)已研制成的能夠改善生物反應(yīng)的調(diào)劑(BRM)有很多，但是對(duì)腫瘤患者的治療效果較差。另外，現(xiàn)有腫瘤治療中的放療和多數(shù)化學(xué)藥物都可引起相當(dāng)?shù)墓撬枰种?，這在一定程度上限制了有效治療的持續(xù)進(jìn)行和治療強(qiáng)度的增加?，F(xiàn)有技術(shù)已知由紅參、黃芪、斑蝥和蟾酥制成的中藥產(chǎn)品(得力生注射液)具有抗癌活性；在《中國(guó)藥物專利數(shù)據(jù)庫》中的檢索結(jié)果如下
i己錄1 I發(fā)明名稱(Ti)—種抗腫瘤的中藥凍干粉針劑及其制備方法/—種新制劑得力生凍干粉計(jì)劑，用于治療中晚期原發(fā)性肝癌文摘(AB)一種新制劑得力生凍干粉針劑。將人參、黃芪醇提水沉，將濾液濃縮，得干浸膏A; 將人參、黃芪的藥渣水提醇沉，將沉淀加乙醇攪拌，過濾，醇洗，干燥，與干浸膏A 合并得人參、黃芪提取物；將斑蝥用NAOH溶液提取，將濾液濃縮；將蟾酥加乙醇提??；合并斑蝥和蟾酥提取液，干燥，得斑蝥、蟾酥提取物，用環(huán)糊精包含；將上述原料混合，制成凍干粉針劑。該制劑具有穩(wěn)定性好、刺激性和毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。該組合物具有益氣扶正、消瘤散結(jié)、抗腫瘤的作用，用于治療中晚期原發(fā)性肝癌氣虛瘀滯證，癥見右肋腹積塊、疼痛不移、腹脹食少、倦怠乏力等。公開號(hào)_1682826公告日期OjD) 記錄22005-10-19申請(qǐng)?zhí)?AP)200710198471發(fā)明名稱(Tl)具有抗肝癌活性的藥物組合物文摘(AB)一種新的中藥組合物，由人參、賢芪、蟾酥和去甲斑蝥素組成。其制備方法包括·,將人參用乙醇提取，提取液過濾，濾液回收乙醇，濃縮成清膏1備用，藥渣用水提取， 提取液過濾，濃縮成清膏，加入乙醇使沉淀，干燥，得干粉1備用；將黃芪用水提取， 提取液過濾，濃縮，加入乙醇使沉淀，過濾，濾液回收乙醇，濃縮成清膏2備用，沉淀干燥，得千粉2備用；將蟾酥用乙醇提取，提取液過濾，濾液回收乙醇，得纖眘3 備用混合上述清膏1至3和千粉1至2以及去甲斑螫素，即可。該組合物真有拔肝癌活性。 ,公開號(hào)(PN)CN101181342公告曰期(PD) EJ: 32008-5-21 ■申請(qǐng)?zhí)?AP)94101456發(fā)明名稱(TI>含有人參和黃芪成分的注射液文摘(AB)一種含有人參和黃芪成分的注射液。取人參用稀醇回流提取，揮收乙醇；與·芪、斑蝥 (斑蝥)分別水煎煮提取，提取液液加入CA (OH) 2使ra值為1 2,然后通入SO 2 至PH值為3. 5-7. 0,過濾，濃縮；；蟾酥用乙醇浸泡2 4小時(shí)以上，過濾，棄去殘?jiān)缓髶]發(fā)盡乙醇；上述各種藥液混合后滅菌即得本注射液.本發(fā)明主要用于提高人體免疫功能，抗腫瘤治療及其它免疫系統(tǒng)低下或免疫失調(diào)疾病的治療。公開號(hào)(ra)111056
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療癌癥的中藥口服液，所述口服液能夠加強(qiáng)調(diào)整腫瘤患者的免疫功能，緩解患者的疼痛，改善患者的狀況，抑制腫瘤的發(fā)展，提高患者對(duì)化療的耐受性；該口服液包含紅參、黃芪、甘草、斑蝥、蟾酥的提取物作為有效成分。本發(fā)明還提供所述中藥口服液的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草、斑蝥、蟾酥先用乙醇回流提取，殘?jiān)儆盟逯筇崛?；該制備方法可將主要抗癌成分斑蝥素、吲哚類、蟾酥毒基、皂苷、多糖等基本提取完全。本發(fā)明還提供所述中藥口服液的有效成分含量測(cè)定方法，包括總皂苷、多糖、華蟾酥毒基與脂蟾毒配基、斑蝥素、水溶性吲哚類的含量測(cè)定方法。因此，本發(fā)明涉及(1) 一種治療癌癥的中藥口服液，其有效成分由紅參60-240重量份、黃芪345-1380重量份、甘草96-384重量份、斑蝥1_4重量份、蟾酥0. 5-2重量份制成；(2)根據(jù)(1)的中藥口服液，其有效成分由紅參120重量份、黃芪690重量份、甘草 192重量份、斑蝥2重量份、蟾酥1重量份制成；(3)如(1)所述中藥口服液的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草、斑蝥、蟾酥先用乙醇回流提取，殘?jiān)儆盟逯筇崛。?4)根據(jù)(3)的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草粉碎，加入75%乙醇回流提取， 得到提取液A ；殘?jiān)铀逯筇崛?，向提取液加入稀堿調(diào)節(jié)pH > 8，過濾，濾液用稀酸調(diào)節(jié) PH 6. 5-7. 0，減壓濃縮，得到提取液B ；將斑蝥、蟾酥粉碎，加入95%乙醇回流提取，得到提取液C;殘?jiān)铀逯筇崛?，過濾，濾液減壓濃縮，得到提取液D ；將以上提取液A、B、C、D混合均勻，制成口服液；(5)根據(jù)(4)的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草粉碎為粗粉，加入8倍量75%乙醇，回流提取3次，每次1. 5小時(shí)，合并醇提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，得到提取液 A ；向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次20分鐘，合并水煎液，加入氫氧化鈣乳調(diào)節(jié)pH 8. 0， 加入10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 9.0，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH 6. 5-7.0，濾液減壓濃縮， 得到提取液B ；將斑蝥粉碎為粗粉，蟾酥粉碎為細(xì)粉，混合，加入7倍量95%乙醇，回流提取3次， 每次20分鐘，合并醇提取液，減壓濃縮，得到提取液C ；向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次 20分鐘，合并水煎液，靜置2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得到提取液D ；將以上提取液A、B、C、D混合，攪拌均勻，調(diào)整體積灌封于輸液瓶，100°C滅菌30分鐘，靜置1周以上，過濾，向?yàn)V液加入蔗糖混勻，加水稀釋至2倍，灌封于口服液瓶，滅菌，即得；(6)如(1)所述中藥口服液的有效成分含量測(cè)定方法，包括總皂苷、多糖、華蟾酥毒基與脂蟾毒配基、斑蝥素、水溶性吲哚類的含量測(cè)定方法；(7)根據(jù)(6)的含量測(cè)定方法，包括a、總皂苷的含量測(cè)定方法照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000版一部附錄V A)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密取紅參皂苷Re對(duì)照品8. Omg,精密稱定，置5ml容量瓶中， 加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得，每毫升含紅參皂苷Re 1. 6mg ；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液20、40、60、80、100111，分別置IOml具塞試管中，置水浴中揮盡溶劑，立即取出，冷卻；精密加入5%香草醛的冰醋酸溶液0. anl，高氯酸 0. 8ml搖勻，置60°C水浴中加熱15分鐘取出，立即以流動(dòng)水冷卻2分鐘；再精密加入冰醋酸溶液5ml，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄33頁，在M4nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備精密吸取紅參、黃芪、甘草半成品濃縮液0.5ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，密塞、搖勻；再精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇萃取三次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用水洗兩次，每次IOml，棄去水液，正丁醇液水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙庵?ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻、即得；
測(cè)定法精密吸取供試品溶液40ul，置IOml具塞試管中，置水浴中揮盡溶劑， 立即取出冷卻，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“精密加入5%的香草醛冰醋酸溶液
0. 2ml......”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中紅參總皂苷的含量，計(jì)
算，即得；b、多糖的含量測(cè)定方法照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)80°C干燥至恒重的無水葡萄糖80mg，置IOOml容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得，每1毫升含無水葡萄糖0. OSmg ；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Oml,分別置IOml具塞試管中，各管精密加水使成1ml，在冰浴中分別加入硫酸蒽酮溶液細(xì)1，搖勻，置沸水浴中加熱10分鐘，取出，放置室溫后，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法《中華人民共和國(guó)藥典》 2000年版一部附錄，在625nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述硫酸蒽酮溶液是這樣制備的取蒽酮50mg，加水25ml及硫酸75ml使溶解，即得，臨用時(shí)新配制；供試品溶液的制備取紅參、黃芪、甘草醇提殘?jiān)乃逯笠海^濾，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法精密取供試品溶液1. 0ml，置IOml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方
法自“在冰浴中精密加入硫酸蒽酮溶液細(xì)1......”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出
供試品溶液中總多糖的含量，即得；C、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量測(cè)定方法照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0. 5%磷酸二氫鉀溶液-乙腈50 50，用磷酸調(diào)節(jié)pH 3.2;檢測(cè)波長(zhǎng)為四611111;柱溫401;理論板數(shù)按華蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰計(jì)算分別不低于4000 ；對(duì)照品溶液的制備取華蟾酥毒基對(duì)照品、脂蟾毒配基對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成Iml各含華蟾酥毒基、脂蟾毒配基50ug的溶液，即得；供試品溶液的制備分別取各批次蟾酥、斑蝥水煎煮濃縮液半成品，精密量取 20. 0ml，置分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，用少量無水硫酸鈉脫水， 減壓濃縮回收乙醚，水浴蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，即得；臨用前0. 45ul濾膜過濾；測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得；d、斑蝥素的含量測(cè)定方法照液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水 80 20為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm;理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算不低于1500;對(duì)照品溶液的制備取斑蝥素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備分別取各批蟾酥、斑蝥水煎煮濃縮液半成品，精密量取20. Oml, 置分液漏斗中，用水飽和氯仿萃取3次，每次30ml，合并氯仿液，用少量無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮回收氯仿，水浴蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，即得；臨用前0. 45ul濾膜過濾；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，計(jì)算，即得；e、蟾酥中水溶性吲哚類生物堿含量測(cè)定方法照分光光度計(jì)法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密稱取置五氧化二磷干燥器中真空干燥24h后的5-羥色按對(duì)照品，加水制成每毫升含33ug的溶液，即得；供試品溶液的制備分別取各批次斑蝥、蟾酥水煎煮濃縮液半成品，精密量取 10. 0ml，加水至100ml，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液0. 5ml置IOml容量瓶，加水使成5ml ；精密加入15% 對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘，用水做空白對(duì)照，在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中吲哚類總生物堿的量，計(jì)算含量。在本發(fā)明的中藥口服液中，紅參、黃芪大補(bǔ)元?dú)狻⒎稣瘫?、健脾益氣；黃芪多糖更有利于消腫作用，可防止肝糖原減少，提高單核巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)免疫功能；人參更可造成癌細(xì)胞的死亡。斑蝥軟堅(jiān)散結(jié)、活血祛淤，通過上述工藝所提取的藥劑含有大量斑蝥素，用來治療各種腫瘤患者；脂蟾毒配基具有止痛開竅的作用，是蟾酥破血散結(jié)、去脅肋疼痛等功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此能夠明顯增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，對(duì)腫瘤具有明顯的抑制作用。本發(fā)明用于中晚期原發(fā)性肝癌氣虛瘀滯證，癥見右肋腹積塊，疼痛不移，腹脹食少，倦怠乏力等。臨床前動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果提示本發(fā)明的中藥口服液促進(jìn)癌細(xì)胞再分化及癌細(xì)胞凋亡；在體內(nèi)、體外均能抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；對(duì)化療、放療不敏感的腺型癌細(xì)胞，也有很強(qiáng)的抑制作用；能使癌組織cAMP/cGMP比值加大，提高免疫功能，有效清除體內(nèi)自由基。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)得力生注射液相比(1)得力生注射液由于是注射劑，因此對(duì)注射劑中雜質(zhì)及熱源的除去必須徹底，其工藝采用氫氧化鈣、二氧化硫除去雜質(zhì)。藥液加氫氧化鈣至PH 12，在強(qiáng)堿性水溶液中才能有效除去熱源，導(dǎo)致有效成分總皂苷、總多糖的損失量也很大。本發(fā)明口服液不必考慮熱源，人參皂苷、黃芪皂苷以乙醇提取，無需進(jìn)一步以強(qiáng)堿性氫氧化鈣除去雜質(zhì)及熱源，僅多糖提取液用微量氫氧化鈣PH 8. O除去雜質(zhì)，因此有效成分的提取純化損失量極少。得力生注射液多糖的提取量15%，損失量達(dá)85%;人參、黃芪總皂苷的提取量?jī)H20%，損失量可達(dá)80%。而本發(fā)明口服液的人參、黃芪總皂苷、總多糖提取純化后可達(dá)85%以上，損失量?jī)H 15% ；(2)得力生注射液中的蟾酥僅用乙醇提取脂溶部分，水溶部分棄去，而蟾酥水溶部分中蟾酥生物堿有更好的抗癌作用，目前市面所售華蟾素口服液、華蟾素注射液均是以水溶部分蟾酥生物堿為主要抗癌有效成分。得力生注射液中由于水溶部分與脂溶部分同時(shí)存在導(dǎo)致藥液不穩(wěn)定，因此只能棄去水溶部分；(3)原料中甘草是一味很重要的藥；得力生注射液配伍甘草會(huì)導(dǎo)致藥液不穩(wěn)定，滅菌后即產(chǎn)生沉淀，滅菌后PH降低，甘草酸在pH低于5. 5時(shí)即沉淀析出；而甘草酸有抗癌作用，可加強(qiáng)人參、黃芪、蟾酥、斑蝥的抗癌作用，同時(shí)甘草有解百毒作用，配伍甘草對(duì)斑蝥引起的尿痛、尿頻、尿急可明顯減少，對(duì)胃腸道不良反應(yīng)可基本消失，小鼠毒性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明口服液若不加甘草的小鼠LD5tl為54. 25g/kg，加甘草后的LD5tl為61. 86g/kg，表明毒性明顯降低。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1一、原料來源1、紅參本品來源于黑龍江省富錦縣參場(chǎng)，購于樂山市中藥材公司。經(jīng)鑒定本品為五加科植物紅參Panax ginseng C. A. Mey.的栽培品(習(xí)稱“園參”)經(jīng)蒸制后的干燥根及根莖。符合《中國(guó)藥典》2000年版一部第121頁紅參項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。2、黃芪經(jīng)鑒定本品為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge. Var. mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜莢黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch) Bge..的干燥根。符合《中國(guó)藥典》2000年版一部第249頁黃芪項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。3、甘草經(jīng)鑒定本品為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch脹果甘草 Glycyhisa inf lata. Bat或光果甘草Glycyrrhiza glabru L.的干燥根及根莖。符合《中國(guó)藥典》2000年版一部第59頁甘草項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。4、斑蝥經(jīng)鑒定本品為芫青科昆蟲南方大斑蝥Mylabris phaleratapallas或黃黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus的干燥體。符合《中國(guó)藥典》2000年版一部第273 頁斑蝥項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。5、蟾酥經(jīng)鑒定為蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizansCantor或黑框蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。符合《中國(guó)藥典》2000年版一部第 316頁蟾酥項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。二、藥材的前處理及加工1、紅參進(jìn)行清洗、挑選、除去雜質(zhì)，晾干、切片、粉碎過40目篩、稱重。2、黃芪進(jìn)行清洗、挑選、除去雜質(zhì)，晾干、切片、粉碎過40目篩、稱重。3、甘草進(jìn)行清洗、挑選、除去雜質(zhì)，晾干、切片、粉碎過40目篩、稱重。4、斑蝥挑選、除去雜質(zhì)，粉碎過20目篩、稱重。5、蟾酥挑選、除去雜質(zhì)，粉碎過40目篩、稱重。三、制備工藝1、取紅參120克、黃芪690克、甘草192克、斑蝥2克、蟾酥1克。2、將紅參、黃芪、甘草粉碎為粗粉，加入8倍量75%乙醇，回流提取3次，每次1. 5 小時(shí)，合并醇提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，得到提取液A ；向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次20分鐘，合并水煎液，加入氫氧化鈣乳調(diào)節(jié)PH 8.0，加入10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 9.0，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH 6. 5-7.0，濾液減壓濃縮，得到提取液B。3、將斑蝥粉碎為粗粉，蟾酥粉碎為細(xì)粉，混合，加入7倍量95 %乙醇，回流提取3 次，每次20分鐘，合并醇提取液，減壓濃縮，得到提取液C ；
向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次20分鐘，合并水煎液，靜置2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得到提取液D。4、將以上提取液A、B、C、D混合，攪拌均勻，調(diào)整體積灌封于輸液瓶，100°C滅菌30 分鐘，靜置1周以上，過濾，向?yàn)V液加入蔗糖混勻，加水稀釋至2倍，灌封于口服液瓶，滅菌， 即得。實(shí)施例2采用紅參60克、黃芪345克、甘草96克、斑蝥1克、蟾酥0. 5克，余同實(shí)施例1。實(shí)施例3采用紅參240克、黃芪1380克、甘草384克、斑蝥4克、蟾酥2克，余同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.一種治療癌癥的中藥口服液，其有效成分由紅參60-240重量份、黃芪345-1380重量份、甘草96-384重量份、斑蝥1-4重量份、蟾酥0. 5-2重量份制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的中藥口服液，其有效成分由紅參120重量份、黃芪690重量份、甘草192重量份、斑蝥2重量份、蟾酥1重量份制成。
3.如權(quán)利要求1所述中藥口服液的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草、斑蝥、蟾酥先用乙醇回流提取，殘?jiān)儆盟逯筇崛　?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求3的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草粉碎，加入75%乙醇回流提取， 得到提取液A ；殘?jiān)铀逯筇崛?，向提取液加入稀堿調(diào)節(jié)pH > 8，過濾，濾液用稀酸調(diào)節(jié) PH 6. 5-7. 0，減壓濃縮，得到提取液B ；將斑蝥、蟾酥粉碎，加入95 %乙醇回流提取，得到提取液C ；殘?jiān)铀逯筇崛?，過濾， 濾液減壓濃縮，得到提取液D ；將以上提取液A、B、C、D混合均勻，制成口服液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，包括將紅參、黃芪、甘草粉碎為粗粉，加入8倍量75% 乙醇，回流提取3次，每次1. 5小時(shí)，合并醇提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，得到提取液A ；向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次20分鐘，合并水煎液，加入氫氧化鈣乳調(diào)節(jié)pH 8. 0，加入10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 9. 0，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH 6. 5-7. 0，濾液減壓濃縮，得到提取液B;將斑蝥粉碎為粗粉，蟾酥粉碎為細(xì)粉，混合，加入7倍量95%乙醇，回流提取3次，每次 20分鐘，合并醇提取液，減壓濃縮，得到提取液C ；向殘?jiān)尤?倍量水煎煮3次，每次20分鐘，合并水煎液，靜置2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得到提取液D ；將以上提取液A、B、C、D混合，攪拌均勻，調(diào)整體積灌封于輸液瓶，100°C滅菌30分鐘， 靜置1周以上，過濾，向?yàn)V液加入蔗糖混勻，加水稀釋至2倍，灌封于口服液瓶，滅菌，即得。
6.如權(quán)利要求1所述中藥口服液的有效成分含量測(cè)定方法，包括總皂苷、多糖、華蟾酥毒基與脂蟾毒配基、斑蝥素、水溶性吲哚類的含量測(cè)定方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的含量測(cè)定方法，包括a、總皂苷的含量測(cè)定方法照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000版一部附錄V A)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密取紅參皂苷Re對(duì)照品8. Omg，精密稱定，置5ml容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得，每毫升含紅參皂苷Re 1. 6mg ；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液20、40、60、80、100ul，分別置IOml具塞試管中，置水浴中揮盡溶劑，立即取出，冷卻；精密加入5%香草醛的冰醋酸溶液0. anl，高氯酸 0. 8ml搖勻，置60°C水浴中加熱15分鐘取出，立即以流動(dòng)水冷卻2分鐘；再精密加入冰醋酸溶液5ml，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄33頁，在M4nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備精密吸取紅參、黃芪、甘草半成品濃縮液0. 5ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，密塞、搖勻；再精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇萃取三次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用水洗兩次，每次IOml，棄去水液，正丁醇液水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙庵?ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻、即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液40ul，置IOml具塞試管中，置水浴中揮盡溶劑，立即取出冷卻，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“精密加入5%的香草醛冰醋酸溶液0. 2ml......”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中紅參總皂苷的含量，計(jì)算，即得；b、多糖的含量測(cè)定方法照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)80°C干燥至恒重的無水葡萄糖80mg，置IOOml容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得，每1毫升含無水葡萄糖0. OSmg ；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置IOml具塞試管中，各管精密加水使成1ml，在冰浴中分別加入硫酸蒽酮溶液細(xì)1，搖勻，置沸水浴中加熱10 分鐘，取出，放置室溫后，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄，在625nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述硫酸蒽酮溶液是這樣制備的取蒽酮50mg，加水25ml及硫酸75ml使溶解， 即得，臨用時(shí)新配制；供試品溶液的制備取紅參、黃芪、甘草醇提殘?jiān)乃逯笠?，過濾，精密量取續(xù)濾液 lml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法精密取供試品溶液1.0ml，置IOml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“在冰浴中精密加入硫酸蒽酮溶液細(xì)1......”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中總多糖的含量，即得；c、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量測(cè)定方法照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0. 5%磷酸二氫鉀溶液-乙腈50 50，用磷酸調(diào)節(jié)pH 3.2;檢測(cè)波長(zhǎng)為四611111;柱溫401;理論板數(shù)按華蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰計(jì)算分別不低于4000 ；對(duì)照品溶液的制備取華蟾酥毒基對(duì)照品、脂蟾毒配基對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成Iml各含華蟾酥毒基、脂蟾毒配基50ug的溶液，即得；供試品溶液的制備分別取各批次蟾酥、斑蝥水煎煮濃縮液半成品，精密量取20. 0ml，置分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，用少量無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮回收乙醚，水浴蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，即得；臨用前0. 45ul濾膜過濾；測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得；d、斑蝥素的含量測(cè)定方法照液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水80 20 為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm ；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算不低于1500 ；對(duì)照品溶液的制備取斑蝥素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，即得；供試品溶液的制備分別取各批蟾酥、斑蝥水煎煮濃縮液半成品，精密量取20. 0ml，置分液漏斗中，用水飽和氯仿萃取3次，每次30ml，合并氯仿液，用少量無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮回收氯仿，水浴蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，搖勻，即得；臨用前0. 45ul濾膜過濾；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，計(jì)算，即得； e、蟾酥中水溶性吲哚類生物堿含量測(cè)定方法 照分光光度計(jì)法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備精密稱取置五氧化二磷干燥器中真空干燥24h后的5-羥色按對(duì)照品，加水制成每毫升含33ug的溶液，即得；供試品溶液的制備分別取各批次斑蝥、蟾酥水煎煮濃縮液半成品，精密量取10. 0ml，加水至100ml，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液0. 5ml置IOml容量瓶，加水使成5ml ；精密加入15%對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置30分鐘，用水做空白對(duì)照，在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中吲哚類總生物堿的量，計(jì)算含量。
全文摘要
本發(fā)明提供一種治療癌癥的中藥口服液，包含紅參、黃芪、甘草、斑蝥、蟾酥的提取物作為有效成分；本發(fā)明還提供所述中藥口服液的制備方法和有效成分含量測(cè)定方法。
文檔編號(hào)G01N21/33GK102302542SQ20111027750
公開日2012年1月4日 申請(qǐng)日期2011年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月19日
發(fā)明者謝媛媛 申請(qǐng)人:謝媛媛