專利名稱：同時測定煙用添加劑中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙用添加劑理化檢驗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠同時檢測煙用添加劑中所含的苯甲酸、山梨酸和水楊酸三種防腐劑含量的方法。
背景技術(shù)：
防腐劑是一類化學試劑，常用于防止食品、飲料和化妝品等細菌的生長。煙用添加劑作為卷煙配方中的重要組成部分，而為了防霉變質(zhì)，煙用添加劑中也會添加防腐劑，最常用的為苯甲酸、山梨酸和水楊酸，而苯甲酸、山梨酸、水楊酸均為有機酸類防腐劑，在酸性條件下具有較強的抗真菌性質(zhì)。大量的毒理學試驗表明防腐劑成分用量過多會對人體肝臟產(chǎn)生危害，甚至致癌，因此煙用添加劑中防腐劑成分的測定對保障卷煙產(chǎn)品安全具有重要意義。目前化妝品、木材中的防腐劑測定報道較多，而防腐劑的測定方法多采用薄層色譜法 (TLC)、高效液相色譜法(HPLC)和氣相色譜法(GC)等，尚未見采用UPLC同時測定煙用添加劑中多種防腐劑的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠同時測定煙用添加劑中所含的苯甲酸、山梨酸和水楊酸含量的方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。一種同時測定煙用添加劑中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的方法，包括以下步驟
(1)標準工作溶液制備稱取苯甲酸、山梨酸和水楊酸各IOmg 250mg的，置于IOOmL 容量瓶中混合，用甲醇溶解并定容到刻度，得到標準儲備液；分別移取20 μ L、100 μ L、 500 μ L、2000 μ L、5000 μ L和10000 μ L的標準儲備液于100 mL的容量瓶中，分別用甲醇溶解混勻并定容到刻度，得到6個濃度級別的標準工作溶液；
(2)樣品溶液的制備稱取0.300 1. OOg待測煙用添加劑樣品，用甲醇超聲萃取后， 離心，濾膜過濾，濾液即為樣品溶液；
(3)超高效液相色譜分析利用超高效液相色譜儀分別對6種濃度級別的標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析；
(4)標準曲線繪制及結(jié)果計算。所述樣品溶液制備具體為準確稱取0.300 l.OOg樣品于具塞錐形瓶中，加入 20mL甲醇，超聲萃取20min，轉(zhuǎn)移至離心管中，8500r/min離心lOmin，取上層清液經(jīng)0. 2 μ m 濾膜過濾，濾液即為樣品溶液。所述的超高效液相色譜分析，其色譜條件為采用ACOUITY UPLCe BEH C18 1.7ym 2. 1 X IOOmm柱；流動相甲醇(A)和0. 02mol/L乙酸銨，0. 02mol/L乙酸銨需調(diào)節(jié)pH至3. 4 ； 等度洗脫程序0 IOmin 35% A ；流速0. 2mL/min進樣量2 μ L ；采用三波長通道同時掃描， 其中苯甲酸檢測波長采用2^nm，山梨酸檢測波長采用260nm，水楊酸檢測波長采用300nm。
所述的標準曲線繪制及結(jié)果計算具體為以苯甲酸、山梨酸、水楊酸的色譜峰面積對其相應的濃度進行回歸分析，得到標準曲線；將相同條件下測得樣品溶液的苯甲酸、山梨酸、水楊酸的色譜峰面積，代入標準曲線，求得樣品中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的含量。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點
(1)本發(fā)明對樣品的處理方法和色譜條件進行了改進和優(yōu)化，采用PH值條件為3. 4的 0. 02mol/L乙酸銨-甲醇作為流動相，使基線平穩(wěn)，三種待測物的分離效果好，峰形好。(2)采用三波長通道同時掃描，其中苯甲酸檢測波長采用2^nm，山梨酸檢測波長采用260nm，水楊酸檢測波長采用300nm，均能獲得很好的靈敏度，相比單波長同時測定在靈敏度上具有明顯優(yōu)勢。(3)采用超高效液相色譜(UPLC)，相比高效液相色譜(HPLC)大顆粒填料柱而言， UPLC的小顆粒填料在得到同樣分析效率的基礎(chǔ)上，極大減少了分析時間，均在5. Omin內(nèi)完成分析，且流動相消耗量僅為高效液相色譜的20%。(4)本發(fā)明方法所采用的色譜條件使3種目標化合物色譜峰分離度都較好，并均具有較好的線性相關(guān)性，檢出限在0. 01 μ g/mL 0. 04 μ g/mL之間。(5)本發(fā)明的加標回收率在97% 10 之間，平均相對標準偏差(RSD)在1. 0% 4. 7%之間，說明本方法的回收率高，重復性好。


圖1為本發(fā)明測定的方法的流程圖； 圖2為標準工作溶液的色譜分析圖； 圖3為樣品溶液的色譜分析圖4為苯甲酸標準曲線圖； 圖5為山梨酸標準曲線圖； 圖6為水楊酸標準曲線圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但附圖和實施例并不是對本發(fā)明的限定。實施例1
測定煙用添加劑26588和15025中苯甲酸、山梨酸和水楊酸的含量(測定方法流程如圖 1所示)；
1、標準工作溶液的制備
(1)混合標準儲備液I分別稱取200. Omg的苯甲酸、山梨酸、水楊酸于IOOmL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，混合得到混合標準儲備液I，其中各組分的濃度分別為 2. Omg/mL ；混合標準儲備液I在4°C冰箱內(nèi)密封存放，有效期為3個月；
(2)標準工作溶液分別移取20μ L、100y L ,500 μ L ,2000 μ L ,5000 μ L 和 10000 μ L的混合標準儲備液于100 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度并混勻，得到 6個濃度級別的標準工作溶液，標準溶液現(xiàn)配現(xiàn)用；
2、樣品溶液及空白溶液的制備(1)樣品溶液制備準確稱取0.500 g樣品于具塞錐形瓶中，加入20mL甲醇，超聲萃取 20min，轉(zhuǎn)移至離心管中，8500r/min離心IOminJS 0. 2 μ m濾膜過濾，濾液即為樣品溶液供超高效液相色譜測定用；
(2)空白溶液制備具塞錐形瓶不加樣品，其他處理步驟同樣品溶液制備； 3、色譜分析
分別取標準工作溶液和樣品溶液進行色譜分析，其色譜條件用ACOUITY UPLCe BEH C18 1. 7 μ m 2. IX IOOmm柱；流動相甲醇(A)和0. 02mol/L乙酸銨，0. 02mol/L乙酸銨需調(diào)節(jié)pH至3. 4 ；等度洗脫程序0 IOmin 35% A ；流速0. 2mL/min進樣量2 μ L ；采用三波長通道同時掃描，其中苯甲酸檢測波長采用2^nm，山梨酸檢測波長采用260nm，水楊酸檢測波長采用300nm，柱溫箱溫度30°C，標準工作溶液和樣品溶液色譜分析結(jié)果分別如圖2、圖 3所示。 4、標準曲線繪制及結(jié)果計算
首先以3種目標化合物的色譜峰面積對其濃度進行回歸分析，苯甲酸、山梨酸和水楊酸的標準工作曲線結(jié)果分別如圖4、圖5、圖6所示，取最低濃度工作標準溶液，做六次平行試驗，計算標準偏差，3倍標準偏差為檢出限，10倍標準偏差為定量檢測限，結(jié)果如表1所示；
表1煙用添加劑苯甲酸、山梨酸、水楊酸的標準曲線和檢測限
權(quán)利要求
1.一種同時測定煙用添加劑中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的方法，包括以下步驟(1)標準工作溶液制備稱取苯甲酸、山梨酸和水楊酸各IOmg 250mg的，置于IOOmL 容量瓶中混合，用甲醇溶解并定容到刻度，得到標準儲備液；分別移取20 μ L、100 μ L、 500 μ L、2000 μ L、5000 μ L和10000 μ L的標準儲備液于100 mL的容量瓶中，分別用甲醇溶解混勻并定容到刻度，得到6個濃度級別的標準工作溶液；(2)樣品溶液的制備稱取0.300 1. OOg待測煙用添加劑樣品，用甲醇超聲萃取后， 離心，濾膜過濾，濾液即為樣品溶液；(3)超高效液相色譜分析利用超高效液相色譜儀分別對6種濃度級別的標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析；(4)標準曲線繪制及結(jié)果計算。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于所述的樣品溶液制備具體為準確稱取0. 300 1. OOg樣品于具塞錐形瓶中，加入20mL甲醇，超聲萃取20min，轉(zhuǎn)移至離心管中， 8500r/min離心lOmin，取上層清液經(jīng)0. 2 μ m濾膜過濾，濾液即為樣品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于所述的超高效液相色譜分析，其色譜條件為采用 ACOUITY UPLC BEH C18 1. 7 μ m 2. 1 X IOOmm 柱；流動相甲醇 A 和 0. 02mol/L 乙酸銨，0. 02mol/L乙酸銨需調(diào)節(jié)pH至3. 4 ；等度洗脫程序0 IOmin 35% A ；流速0. 2mL/ min進樣量2μ L ；采用三波長通道同時掃描，其中苯甲酸檢測波長采用2^nm，山梨酸檢測波長采用260nm，水楊酸檢測波長采用300nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于所述的標準曲線繪制及結(jié)果計算具體為以苯甲酸、山梨酸、水楊酸的色譜峰面積對其相應的濃度進行回歸分析，得到標準曲線；將相同條件下測得樣品溶液的苯甲酸、山梨酸、水楊酸的色譜峰面積，代入標準曲線，求得樣品中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同時測定煙用添加劑中苯甲酸、山梨酸、水楊酸的方法。先制備6個濃度級別的苯甲酸、山梨酸和水楊酸標準工作溶液，以及待測樣品溶液。然后利用超高效液相色譜儀分別對6種濃度級別的標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析。最后進行標準曲線繪制及結(jié)果計算。本發(fā)明對樣品的處理方法和色譜條件進行了改進和優(yōu)化，三種待測物的分離效果好，峰形好。采用三波長通道同時掃描，相比單波長同時測定在靈敏度上具有明顯優(yōu)勢。檢出限在0.01μg/mL～0.04μg/mL之間，加標回收率在97%～102%之間，平均相對標準偏差(RSD)在1.0%～4.7%之間，重復性好。具有良好的應用前景。
文檔編號G01N30/02GK102269740SQ20111016842
公開日2011年12月7日 申請日期2011年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月22日
發(fā)明者葉靈, 李響麗, 楊艷萍, 王堅, 王慶華, 范多青, 郭麗娟 申請人:紅云紅河煙草(集團)有限責任公司