專利名稱：一種用于含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。涉及含朱砂中藥制劑中酸可溶性汞含量的測(cè)定方法，更具體的說(shuō)就是采用仿生提取法提取含朱砂中藥制劑中的可溶性汞，利用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)對(duì)可溶性汞含量進(jìn)行測(cè)定。
背景技術(shù)：
朱砂具有清心鎮(zhèn)驚、安神、明目、解毒之功效，用于心悸易驚、失眠多夢(mèng)、癲癇發(fā)狂、 小兒驚風(fēng)、視物昏花、口瘡、喉痹、瘡瘍腫毒。作為具有悠久歷史的礦物藥，存在于不少中藥處方中，如安宮牛黃丸、柏子養(yǎng)心丸、天王補(bǔ)心丸，不少兒科成方中也含有朱砂，如小兒至寶丸、小兒金丹片、小兒七珍丸等。朱砂的主要成分為硫化汞(HgS)，《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定朱砂中HgS含量不得低于96%。因此，含朱砂中藥制劑的總汞含量都非常高，有的甚至達(dá)到了百分?jǐn)?shù)級(jí)，大大超出了《中國(guó)藥典》規(guī)定的汞的限量0. ang/kg，致使部分中藥進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)時(shí)受阻。但有研究表明，HgS在體內(nèi)不能完全溶解吸收，占給藥量98. 5%的HgS隨糞便排出體外。因而認(rèn)為硫化汞實(shí)際上是不被機(jī)體所吸收的無(wú)毒、無(wú)效成分，而朱砂中所含的 1. 5%的酸可溶性汞才是其有毒、有效成分。于是有學(xué)者開(kāi)始質(zhì)疑朱砂在方劑中的存在必要性，并進(jìn)行了相關(guān)的研究工作，對(duì)含與不含朱砂對(duì)藥效的影響進(jìn)行研究。但是朱砂作為礦物藥入藥短期內(nèi)還不會(huì)退出歷史舞臺(tái)，因此，正確認(rèn)識(shí)朱砂的毒性非常重要，測(cè)定含朱砂中藥制劑中的酸可溶性汞含量更具有實(shí)際意義。目前，國(guó)內(nèi)用于中藥中汞含量測(cè)定的方法主要是原子熒光光譜技術(shù)，該技術(shù)是我國(guó)自主研發(fā)的，專屬性很強(qiáng)，成熟度很高的測(cè)定方法，已應(yīng)用到各個(gè)行業(yè)中汞含量的檢測(cè)。 但國(guó)外現(xiàn)在很少采用這種檢測(cè)技術(shù)，而是采用電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)(ICP-MS)。電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)以其具有的高靈敏度、高準(zhǔn)確度、多元素同時(shí)測(cè)定等特點(diǎn)在各個(gè)行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，在元素分析領(lǐng)域得到迅速發(fā)展，已慢慢取代原子吸收光譜技術(shù)(AAS)、 原子熒光光譜技術(shù)(AFS)和紫外分光光譜技術(shù)(UV)等傳統(tǒng)元素分析技術(shù)成為主要的檢測(cè)技術(shù)。為了與國(guó)際檢測(cè)技術(shù)接軌，本發(fā)明采用電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)對(duì)含朱砂中藥制劑中的酸可溶性汞含量進(jìn)行測(cè)定。仿生提取法源于仿生學(xué)原理，模擬口服藥經(jīng)胃腸道環(huán)境轉(zhuǎn)運(yùn)原理而設(shè)計(jì)，目的是盡可能的保留原藥中的有效成分(包括在體內(nèi)有效的代謝物、水解物、鰲合物或新的化合物)。符合中醫(yī)藥傳統(tǒng)哲學(xué)的整體現(xiàn)、系統(tǒng)觀，體現(xiàn)了中醫(yī)藥多種成分復(fù)合作用的特點(diǎn)。為了較真實(shí)的反映中藥經(jīng)口服進(jìn)入人體后可溶性汞的含量，本發(fā)明采用仿生提取法，選用人工胃液，通過(guò)模擬人體胃腸道環(huán)境，提取中藥中酸可溶性汞，結(jié)合ICP-MS技術(shù)對(duì)其含量進(jìn)行分析測(cè)定。為制定科學(xué)、合理的中藥產(chǎn)品中汞的限量控制標(biāo)準(zhǔn)及用藥安全提供重要的理論依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了真實(shí)的反映配方中含有朱砂的中藥制劑經(jīng)口服進(jìn)入人體后可溶性汞的含量，提供一種仿生提取-電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)(ICP-MS)測(cè)定含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下的技術(shù)方案
一種用于含朱砂中藥制劑中酸可溶性汞含量的測(cè)定方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)
行
(1)人工胃液配制取稀鹽酸16.4mL，加水SOOmL與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水稀釋成 1000 mL ；
(2)將待測(cè)樣品置于三角瓶中，加入50mL人工胃液，控制恒定溫度為37°C，振蕩提取 2-24h ；
(3)提取液經(jīng)離心后，吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量稀釋到5Pg/L以內(nèi)，上機(jī)前用 0. 45 μ m濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定酸可溶性汞含量。本發(fā)明所述的測(cè)定方法，其中振蕩提取的振蕩頻率為150r/min，離心速率為 4000r/min，離心lOmin。其中提取時(shí)間為》i-4h。本發(fā)明優(yōu)選的測(cè)定方法，它是準(zhǔn)確稱取中藥樣品0. 2g，精確至0. OOOlg，置三角瓶中，加入50mL人工胃液，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心lOmin， 吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量作適當(dāng)稀釋，上機(jī)前用0. 45 μ m濾膜過(guò)濾，濾液采用仿生提取-電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的方法。
本發(fā)明的人工胃液配制按照《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄85配制人工胃液。取稀鹽酸16. 4mL，加水800mL與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水稀釋成1000 mL,即得。其中，稀鹽酸溶液按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄174配制，取鹽酸234mL，加水稀釋成1000 mL。本發(fā)明所述檢測(cè)的對(duì)象為配方中含有朱砂的中成藥制劑。朱砂入藥歷史悠久，其功效作用明顯，但含朱砂中藥制劑的總汞含量都達(dá)到了百分?jǐn)?shù)級(jí)，大大超出了世界各國(guó)的限量標(biāo)準(zhǔn)，因此，對(duì)其可溶性汞含量進(jìn)行定量更具有實(shí)際意義。本發(fā)明所述的待測(cè)樣品與人工胃液的固液比為1:250，所采用的提取劑為人工胃液。本發(fā)明所述提取方法的提取溫度為恒溫37°C，通過(guò)模擬人體胃腸道環(huán)境溫度，更能準(zhǔn)確的反映出中藥經(jīng)口服進(jìn)入人體后可溶性汞的存在形態(tài)。本發(fā)明所述提取方法的提取時(shí)間為4h，更加優(yōu)選的提取時(shí)間為a!、4h、M!、8h、 10h、12h、16h、18h、24h。本發(fā)明典型的檢測(cè)方法如下
準(zhǔn)確稱取中藥樣品0. 2g (精確至0. OOOlg)，置250mL三角瓶中，加入50mL人工胃液 (pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min,于4000r/min離心IOmin,吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量稀釋到5Pg/L以內(nèi)，上機(jī)前用0. 45 μ m濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定可溶性汞含量。本發(fā)明提供的用于含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的測(cè)定方法與已有技術(shù)對(duì)比特點(diǎn)是
(1)本發(fā)明采用仿生提取法，可較真實(shí)的的反映中藥經(jīng)口服進(jìn)入人體后可溶性汞的存在形態(tài)，為制定科學(xué)、合理的中藥產(chǎn)品中汞的限量控制標(biāo)準(zhǔn)及用藥安全提供重要的理論依據(jù)。(2)本發(fā)明具有檢出限低(0.8Pg/kg)、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，是集靈敏度和操作簡(jiǎn)便于一體，切實(shí)可行的優(yōu)良方法。(3)本發(fā)明的測(cè)定方法適用于各種含朱砂中藥制劑中可溶性汞的測(cè)定方法。(4)本發(fā)明方法所采用電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)與國(guó)際先進(jìn)檢測(cè)技術(shù)接軌，檢測(cè)數(shù)據(jù)更具說(shuō)服力。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，這里所述實(shí)施例的方案，不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域的專業(yè)人員按照本發(fā)明的精神可以對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)和變化，所述的這些改進(jìn)和變化都應(yīng)視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)由權(quán)利要求來(lái)限定。實(shí)施例1
稱量0.2g (精確至O.OOOlg)胃腸安丸(批號(hào)B1090M)于250mL三角瓶中，然后加入50mL人工胃液(pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心 lOmin，吸取上清液，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測(cè)定胃腸安丸中可溶性汞含量為 12. 9mg/kg。原子熒光光譜法與電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的比較實(shí)驗(yàn)
將上述提取液采用原子熒光光譜法測(cè)定結(jié)果為12.7 mg/kg。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致，沒(méi)有差異，但采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法，省去了還原過(guò)程，使檢測(cè)過(guò)程更加簡(jiǎn)便、快速。實(shí)施例2
稱量0. 2g (精確至0. OOOlg)小兒金丹片(批號(hào)=0905167)于250mL三角瓶中，然后加入50mL人工胃液(pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心 lOmin，吸取上清液，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測(cè)定小兒金丹片中可溶性汞含量為 54. 2mg/kg。實(shí)施例3
稱量0. 2g (精確至0. OOOlg)小兒至寶丸(批號(hào)=4970019)于250mL三角瓶中，然后加入50mL人工胃液(pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心 lOmin，吸取上清液，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測(cè)定小兒至寶丸中可溶性汞含量為 1. 29mg/kg。實(shí)施例4
稱量0. 2g (精確至0. OOOlg)柏子養(yǎng)心丸(批號(hào)=7035026)于250mL三角瓶中，然后加入50mL人工胃液(pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心 IOmin,吸取上清液，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測(cè)定柏子養(yǎng)心丸中可溶性汞含量為 0. ^^ig/kg。實(shí)施例5 對(duì)比試驗(yàn)
常規(guī)方法電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定中藥樣品中總汞含量。取供試品于60°C干燥2小時(shí)，粉碎成粗粉，取約0. 5g，精密稱定，置微波消解罐中，加硝酸8mL，密閉按消解程序消解。消解完畢，冷卻，將消解液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用少量去離子水沖洗罐體，洗液合并于容量瓶中，定容，搖勻。同時(shí)做樣品空白。以209Bi作為內(nèi)標(biāo)，上ICP-MS進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明的方法仿生提取-電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定含朱砂中藥制劑中可
溶性汞含量。準(zhǔn)確稱取中藥樣品0. 2g (精確至0. OOOlg)，置250mL三角瓶中，加入50mL人工胃液(pH=l. 48)，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心lOmin，吸取上清液，用0. 45 μ m濾膜過(guò)濾，以2tl9Bi作為內(nèi)標(biāo)，上ICP-MS進(jìn)行測(cè)定。
權(quán)利要求
1.一種用于含朱砂中藥制劑中酸可溶性汞含量的測(cè)定方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行(1)人工胃液配制取稀鹽酸16.4mL，加水SOOmL與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水稀釋成 1000 mL ；(2)將待測(cè)樣品置于三角瓶中，加入50mL人工胃液，控制恒定溫度為37°C，振蕩提取 2-24h ；(3)提取液經(jīng)離心后，吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量稀釋到5Pg/L以內(nèi)，上機(jī)前用 0. 45 μ m濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定酸可溶性汞含量。
2.權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其中振蕩提取的振蕩頻率為150r/min，離心速率為 4000r/min，離心 IOmin0
3.權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其中提取時(shí)間為》i-4h。
4.權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，準(zhǔn)確稱取中藥樣品0.2g，精確至0. OOOlg, 置三角瓶中，加入50mL人工胃液，于恒溫37°C振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心lOmin，吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量稀釋至5Pg/L以內(nèi)，上機(jī)前用0. 45 μ m濾膜過(guò)濾， 濾液經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定可溶性汞含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于含朱砂中藥制劑中可溶性汞含量的測(cè)定方法，它是準(zhǔn)確稱取中藥樣品0.2g，精確至0.0001g，置三角瓶中，加入50mL人工胃液，于恒溫37℃振蕩4h，振蕩頻率150r/min，于4000r/min離心10min，吸取上清液，根據(jù)樣品中汞含量稀釋到5μg/L以內(nèi)，上機(jī)前用0.45μm濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定酸可溶性汞含量。本發(fā)明的方法具有檢出限低(0.8μg/kg)、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，是集靈敏度和操作簡(jiǎn)便于一體，切實(shí)可行的優(yōu)良方法。適用于各種含朱砂中藥制劑中可溶性汞的測(cè)定方法。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102331452SQ201110160878
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月16日
發(fā)明者劉燁潼, 孟兆芳, 張強(qiáng), 程奕, 陳秋生 申請(qǐng)人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室