專利名稱：對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種臨床診斷用的體外檢測(cè)試劑，具體的說(shuō)是一種對(duì)人體內(nèi)代謝異常的判定試劑一對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
由體內(nèi)細(xì)胞代謝異常而引發(fā)的如惡性腫瘤及糖尿病等重大代謝疾病越來(lái)越受到人們的普遍關(guān)注，治療由體內(nèi)代謝異常引起的疾病的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療。目前，由此引起的疾病診斷方法主要有物理學(xué)、組織細(xì)胞學(xué)和生物化學(xué)三大類。對(duì)于腫瘤類疾病，物理學(xué)和組織細(xì)胞學(xué)往往只能發(fā)現(xiàn)中晚期，難以達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)的目的，且大多數(shù)操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴。代謝類疾病如惡性腫瘤等的早期診斷是二級(jí)預(yù)防中最關(guān)鍵的一步，只有在早期診斷的基礎(chǔ)上才能進(jìn)行早期治療，降低死亡率，提高生存率。無(wú)癥狀人群的普查篩查又是早期診斷的主要手段之一。尿中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)是目前研究的熱點(diǎn)之一。尿中腫瘤標(biāo)志物主要分兩大類一類是特異性蛋白質(zhì)，如本一周氏蛋白、硫酸酯酶等；另一類則是腫瘤代謝產(chǎn)物，如核酸代謝產(chǎn)物多胺、氨基酸代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸、對(duì)羥基苯丙銅酸等。對(duì)后者的檢測(cè)方法很多，其中包括含汞試劑，最近的相關(guān)技術(shù)專利為歐洲專利EP341803和中國(guó)專利《癌癥顯示劑》CN1096374A (申請(qǐng)?zhí)?3106885. 1 )，它們分別提出了較為實(shí)用的含汞尿檢試劑配方，其共同點(diǎn)是均采用了兩種汞離子Hg2+和Hg2+，將二者按一定比例溶解在酸性溶液中，即得專利所述試劑。該試劑中的兩種汞離子分別與尿中的不同成分反應(yīng)，Hg2+與底物對(duì)羥基苯丙銅酸反應(yīng)生成紅色沉淀，Hg2+與其他陰離子反應(yīng)(如CL_、NO2-等)生成白色沉淀。 中國(guó)專利CN1096374提出加入金屬鎳，用以穩(wěn)定反應(yīng)產(chǎn)生的紅色沉淀。上述現(xiàn)有技術(shù)所提供的試劑在應(yīng)用中有一定效果，特異性、靈敏度較高，但仍有不足之處，中國(guó)專利CN1096374 所提供的試劑，其假陽(yáng)性率偏高，大于10%，不適用于腫瘤的普查篩檢，EP341803的標(biāo)本檢測(cè)數(shù)較少，因而統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果可靠性不強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提出一種新配方的代謝異?？焖倌驒z試劑——對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑，同時(shí)引入新組分，以提高試劑的穩(wěn)定性、靈敏度及應(yīng)用范圍。本發(fā)明還提供了上述尿液檢測(cè)試劑的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，該尿液檢測(cè)試劑是將Hg2+、Hg2+、Ni2+、Cd2+分別溶解于相應(yīng)的酸溶液中，然后按比例混合后制得的。所述的硫酸汞作為Hg2+的供體溶解于硫酸溶液中，硝酸亞汞作為Hg2+的供體溶解于硝酸溶液中，硫酸鎳作為M2+的供體溶解于蒸餾水中，硫酸鎘作為Cd2+的供體溶解于硝酸溶液中。該尿液檢測(cè)試劑的制備方法包括以下步驟
①、A液配制將18g硫酸汞加入到6mol濃度的硫酸溶液中攪拌溶解后，再用6個(gè)mol濃度的硫酸溶液稀釋至IOOml得到無(wú)色透明的液體待用；
②、B液配制將65g硝酸亞汞加入到12mol濃度的硝酸溶液中，溶解后用12mol硝酸溶液稀釋至100ml，得到綠色液體，放置待溶液綠色褪去后，方可使用；
③、C液配制將硫酸鎳3g溶解到蒸餾水中，然后用蒸餾水稀釋至100ml，得到藍(lán)綠色液體，待用；
④、D液配制將硫酸鎘2g溶解于的6mol濃度的硝酸溶液中，溶解后用6mol硝酸溶液稀釋至100ml，得到D液待用；
⑤、混合將上述①、②、③、④中制得的A、B、C、D、四種液體按體積比1 1.5: 1. 2 1.8: 0.2 0.4: 0.05 01進(jìn)行混合后，即得到目標(biāo)產(chǎn)品對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑。本發(fā)明依據(jù)的理論基礎(chǔ)是
尿液是人體不斷產(chǎn)生、不斷排泄的代謝產(chǎn)物，在全身各個(gè)組織與部分細(xì)胞代謝過(guò)程中， 代謝產(chǎn)物就匯溶在尿液中形成了一個(gè)復(fù)雜的含多種有機(jī)物及有機(jī)化學(xué)成分的混合物，尿液中成分與含量可以準(zhǔn)確的反映體內(nèi)各器官的生理功能和狀態(tài)，特別是當(dāng)體內(nèi)腫瘤因子活動(dòng)時(shí)，體內(nèi)相對(duì)部分的分子量為4000 6000的蛋白代謝異常使尿液中的硫脲、硫乙醇胺、 酪氨酸色氨酸等多種有機(jī)物量與含毒激素明顯增加，這種情況下，尿液與對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)試劑匯合發(fā)生桃紅色反應(yīng)，這種明顯的顏色反應(yīng)就是本試劑完成代謝異常尿檢的理論 ■石出。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果
1、本公司研制的“對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑“具有取樣容易、操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速、 結(jié)果明顯等特點(diǎn)，其原理是利用重大代謝類疾病，都會(huì)引起人體的應(yīng)激反應(yīng)，這些應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致人體內(nèi)的氨基酸代謝異常，使得人體尿液中酪氨酸的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)正常人，本試劑通過(guò)與尿液中的酪氨酸發(fā)生特征顯色反應(yīng)，通過(guò)沉淀物顏色的變化即可判定被測(cè)試者體內(nèi)是否有相關(guān)的細(xì)胞異常代謝，可做為細(xì)胞內(nèi)代謝異常類疾病篩查的輔助診斷指標(biāo)。2、本發(fā)明對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑是硝酸和硫酸的混合性溶液，其中含有硝酸亞汞和硫酸汞，硝酸亞汞作為Hg2+的供體溶解于硝酸溶液中，硫酸汞作為Hg2+的供體溶解于硫酸溶液中，它還含有硫酸鎳，作為M2+供體，另外還含有硫酸鎘它們分別溶解于硝酸溶液中作為組分，Hg2+、Hg2\ Ni2+、Cd2+。3、本發(fā)明將Hg2+、Hg2+、Ni2+、Cd2+分別溶解于相應(yīng)的酸溶液中，然后按一定比例混合得到一種新的對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑，該試劑能與尿中色氨酸、酪氨酸的衍生物及含有此類氨基酸殘基的變性蛋白發(fā)生具特異性顏色的沉淀反應(yīng)，尿中這些氨基酸及其衍生物的代謝量隨惡性腫瘤的有無(wú)及病情變化而不同。因此沉淀反應(yīng)呈現(xiàn)不同顏色，顏色判斷標(biāo)準(zhǔn)為根據(jù)大量試驗(yàn)資料制成的比色板。4、本發(fā)明試劑中的Hg2+可與單羥基酚發(fā)生紅色絡(luò)合沉淀反應(yīng)，Hg2+、Ni2+則優(yōu)先與尿液中其他陰離子(如鹵素離子、亞硝酸根離子)反應(yīng)生成白色絡(luò)合物沉淀，從而消除了這些離子對(duì)Hg2+的影響。5、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較新加入組分硫酸鎘的作用主要是1、與色氨酸的代謝產(chǎn)物5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸發(fā)生反應(yīng)而生成紅色；2、與上述金屬離子絡(luò)合，以穩(wěn)定試劑體系，這是因?yàn)镠g2+、Hg；易水解，或隨溫度高低變化而使二者水解或加快氧化還原反應(yīng)速度而使二者比例發(fā)生變化，影響試劑反應(yīng)靈敏度。加入硫酸鎘這一新組份后即可起到穩(wěn)定上述體系的作用。6、本發(fā)明試劑中硫酸鎳作為Ni2+的供體，從而克服了 CN1096374專利中將金屬鎳溶解于硝酸中帶來(lái)的缺陷，因?yàn)榻饘冁嚺c硝酸反應(yīng)產(chǎn)生大量二氧化氮?dú)怏w和氫氣，對(duì)操作人員極為有害，且不安全，而利用硫酸鎳則可消除對(duì)操作人員的不良影響。7、本發(fā)明對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑能夠使體內(nèi)代謝異常者在普檢中簡(jiǎn)便快速準(zhǔn)確的反映出來(lái)，通過(guò)這種檢測(cè)試劑進(jìn)行簡(jiǎn)單的標(biāo)本試驗(yàn)將體內(nèi)代謝異常者準(zhǔn)確的判斷出進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)、早期治療。8、本發(fā)明對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑具有取樣容易、操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速、結(jié)果明顯等特點(diǎn)，對(duì)人體無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)痛苦，而且價(jià)格低，可以用于大規(guī)模腫瘤代謝異常等普查，真正做到早檢查、早預(yù)防、早診斷、早治療。針對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品的有關(guān)臨床研究的具體情況報(bào)告如下1、資料和方法
1. 1實(shí)驗(yàn)對(duì)象(共分五組)
一組惡性腫瘤組7106例，年齡30—80歲，男女各半，經(jīng)影象學(xué)如B超、X線、CT等查到腫物，又經(jīng)病理診斷所證實(shí)，確診為癌癥的病例，有肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽喉、膀胱癌、其他惡性腫瘤，采取新鮮尿樣檢測(cè)(最好是早晨首次尿液)
二組正常健康人群組6718例，年齡20—60歲，男女各半，健康體檢者。三組非腫瘤的良性疾病患者組6813例，年齡20— 80歲，男女各半，患者均來(lái)自國(guó)內(nèi)7家醫(yī)院提供的門(mén)診和住院的良性病人。四組自2003年開(kāi)始我們?cè)谧≡杭伴T(mén)診患者中篩選了 158例尿酪氨酸高值者進(jìn)行了為期三年的跟蹤檢測(cè)研究，采取新鮮尿液檢測(cè)。檢出結(jié)果與后期以各種手段檢查(診斷腫瘤的金標(biāo)準(zhǔn)包括病理學(xué)、手術(shù)發(fā)現(xiàn)、影象診斷)預(yù)示出癌癥的病例數(shù)的比較。五組用該試劑觀察了各種惡性腫瘤部分病例的動(dòng)態(tài)變化，即治療前與治療(手術(shù)治療、化療、放療)后的比較。1、2實(shí)驗(yàn)方法
前期已通過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究確定了尿中酪氨酸的正常值判斷標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表1)。使用吉林生物研究院有限公司研制的對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑將新鮮清潔尿樣5ml加入裝有0. 6ml試劑的安瓿中，稍振蕩后靜置5分鐘，將沉淀物顏色與標(biāo)準(zhǔn)色板對(duì)照以判定結(jié)果。結(jié)果判定包裝盒內(nèi)有標(biāo)準(zhǔn)比色板，即淺黃色為陰性；淺紅色為弱陽(yáng)性；紅色為陽(yáng)性；磚紅色為強(qiáng)陽(yáng)性。表1 尿中酪氨酸的正常值判斷標(biāo)準(zhǔn)
權(quán)利要求
1.一種對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑，其特征在于該尿液檢測(cè)試劑是將Hg2+、Hg2+、Μ2+、Cd2+分別溶解于相應(yīng)的酸溶液中，然后按比例混合后制得的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑，其特征在于所述的硫酸汞作為Hg2+的供體溶解于硫酸溶液中，硝酸亞汞作為Hg2+的供體溶解于硝酸溶液中，硫酸鎳作為Ni2+的供體溶解于蒸餾水中，硫酸鎘作為Cd2+的供體溶解于硝酸溶液中。
3.一種對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟①、A液配制將18g硫酸汞加入到6mol濃度的硫酸溶液中攪拌溶解后，再用6個(gè)mol濃度的硫酸溶液稀釋至IOOml得到無(wú)色透明的液體待用；②、B液配制將65g硝酸亞汞加入到12mol濃度的硝酸溶液中，溶解后用12mol硝酸溶液稀釋至100ml，得到綠色液體，放置待溶液綠色褪去后，方可使用；③、C液配制將硫酸鎳3g溶解到蒸餾水中，然后用蒸餾水稀釋至100ml，得到藍(lán)綠色液體，待用；④、D液配制將硫酸鎘2g溶解于的6mol濃度得硝酸溶液中，溶解后用6mol濃度硝酸溶液稀釋至100ml，得到D液待用；⑤、混合將上述①、②、③、④中制得的A、B、C、D、四種液體按體積比1 1.5: 1. 2 1.8: 0.2 0.4: 0.05 01進(jìn)行混合后，即得到目標(biāo)產(chǎn)品對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種臨床診斷用的體外檢測(cè)試劑，具體的說(shuō)是一種對(duì)人體內(nèi)代謝異常的判定試劑——對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑及其制備方法。該尿液檢測(cè)試劑是將Hg2+、Hg2+、Ni2+、Cd2+分別溶解于相應(yīng)的酸溶液中，然后按比例混合后制得的。所述的硫酸汞作為Hg2+的供體溶解于硫酸溶液中，硝酸亞汞作為Hg2+的供體溶解于硝酸溶液中，硫酸鎳作為Ni2+的供體溶解于蒸餾水中，硫酸鎘作為Cd2+的供體溶解于硝酸溶液中。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，是一種新配方的代謝異?？焖倌驒z試劑，具有高的穩(wěn)定性、靈敏度和廣泛的應(yīng)用范圍。
文檔編號(hào)G01N33/531GK102368069SQ201110073229
公開(kāi)日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者張鳳華 申請(qǐng)人:吉林生物研究院有限公司