專利名稱：一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及標(biāo)本的制作方法，具體涉及一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法。
背景技術(shù)：
真菌孢子的形態(tài)特征是對真菌分類鑒定的主要特征之一。制作叢枝菌根菌孢子的玻片標(biāo)本，對于相關(guān)的教學(xué)、研究、技術(shù)推廣等具有重要的意義，也是生物標(biāo)本廠一個很好的生產(chǎn)項(xiàng)目。叢枝菌根菌的孢子較大，多數(shù)種類的孢子直徑在100 200Mffl之間，大的可達(dá) 400Mm以上(如木薯球囊霉Glomus manihotis的孢子可達(dá)450Mm，易誤巨孢囊霉Gigaspora decipiens的孢子可達(dá)490 μ m)，而且這類孢子的壁不堅(jiān)實(shí)，稍遇壓力即破裂，這給制作整體孢子的玻片標(biāo)本造成了一定的困難。傳統(tǒng)的玻片標(biāo)本制作方法是在載玻片上滴上少量的膠液，然后將孢子放在膠液中，再在上面蓋上蓋玻片，待膠液干燥將蓋玻片黏著固定后，即成為永久玻片標(biāo)本。由于多數(shù)叢枝菌根菌的孢子較大，無法用少量的膠液在載玻片與蓋玻片之間形成足以盛載孢子的位置，并將載玻片、孢子和蓋玻片黏著固定在一起。若用大量的膠液，雖然可在載玻片與蓋玻片之間形成足以盛載孢子的位置，并將載玻片、孢子和蓋玻片黏著固定在一起，但膠液在干燥過程中收縮將使蓋玻片對孢子的壓力增大，致使孢子破裂，無法制作出整體孢子(孢子完整、不破裂)的玻片標(biāo)本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案，一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，包括以下步驟
(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；
(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；
(2)借助于體視顯微鏡，用毛細(xì)吸管從濕篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子， 用濾紙吸去孢子表面的水分后放置在膠液表面；
(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在烘箱中干燥8 12個小時；
(5)取出烘干的載玻片平放在操作臺上，用吸管在載玻片的凹口外圍涂上封片膠，然后蓋上蓋玻片；
(6)把上述制好的玻片標(biāo)本平放在烘箱中，經(jīng)8 12個小時干燥，即制成整體孢子玻片標(biāo)本。一個載玻片凹穴中的膠液表面可僅放1個孢子，也可放數(shù)個孢子；放數(shù)個孢子時， 使孢子間保持一定的距離，不要使孢子擠在一起，以免影響觀察效果。步驟(4)、(6)所述的烘箱的溫度為45 55°C。
所述的封片膠為作粘合劑的樹膠，優(yōu)選加拿大樹膠。用本發(fā)明方法制作的叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本可利用體視顯微鏡觀察完整孢子的外觀形態(tài)特征，并可長期保存。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用凹圓載玻片，將孢子封存在凹圓載玻片的凹穴中，凹圓載玻片的凹穴底部鋪一層膠，孢子被黏著固定在膠的表面，蓋玻片與孢子之間有一定的空間距離，可保證大而且壁不堅(jiān)實(shí)的叢枝菌根菌孢子在永久玻片標(biāo)本中保持完整的外觀形態(tài)， 不破裂。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本實(shí)施例叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法如下所述
(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上。凹圓載玻片規(guī)格為長寬76X^mm，厚度1. 2 1. 5mm,凹穴直徑15 18mm，凹穴深度0. 6 0. 8mm ；
(2)用吸管向凹穴中滴一滴阿拉伯膠混合液，膠液的用量控制在液面距凹口處的距離要大于所用孢子的直徑；
阿拉伯膠混合液配方30g阿拉伯膠、200g水合三氯乙醛、20mL甘油、50mL蒸餾水；
配制方法將阿拉伯膠粉放入燒杯，徐徐加入蒸餾水并攪拌，同時將燒杯水浴加熱，然后慢慢加入水合三氯乙醛混合液，邊加邊攪拌均勻，最后加入甘油拌勻，倒入細(xì)頸瓶中，蓋上玻塞，置60 °C溫箱內(nèi)Mh，并在溫箱中用潔凈玻璃棉和紗布過濾，保存在黑暗處，備用；
(3)借助于體視顯微鏡，用毛細(xì)吸管從濕篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取單個孢子，用濾紙吸去孢子表面的水分后放置在膠液表面；
(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在50°C烘箱中干燥12個小時；
(5)取出烘干的載玻片平放在操作臺上，用吸管在凹圓載玻片的凹口外圍涂上加拿大樹膠，然后蓋上蓋玻片；涂膠液的范圍掌握在凹口外圍蓋玻片能蓋住的區(qū)域，膠液的用量掌握在蓋上蓋玻片后膠液不缺也不溢到凹穴內(nèi)和蓋玻片外緣；蓋玻片的規(guī)格為長寬 22 X 22mm，或 24 X 24mm，或 24 X 32mm，厚度 0. 15mm 0. 19mm ；
(6)把上述制好的玻片標(biāo)本平放在50°C烘箱中，經(jīng)12個小時干燥，即制成整體孢子玻片標(biāo)本。
權(quán)利要求
1.一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；(3)借助于體視顯微鏡，用毛細(xì)吸管從濕篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子， 放置在膠液表面；(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在烘箱中干燥8 12h；(5)取出烘干的載玻片平放在操作臺上，在載玻片的凹口外圍涂上封片膠，然后蓋上蓋玻片；(6)把上述制好的玻片標(biāo)本平放在烘箱中，經(jīng)8 1 干燥，即制成整體孢子玻片標(biāo)本。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，其特征在于，步驟(2)膠液的用量控制在液面距凹口處的距離大于所用孢子的直徑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，其特征在于，步驟(4)、(6)所述的烘箱的溫度為45 55°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述的封片膠為作粘合劑的樹膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述的樹膠為加拿大樹膠。
全文摘要
本發(fā)明涉及標(biāo)本的制作方法，具體涉及一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標(biāo)本的制作方法。該方法包括以下步驟(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；(3)借助于體視顯微鏡，用毛細(xì)吸管從濕篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子，放在膠液表面；(4)把步驟(3)的載玻片平放在烘箱中干燥8～12h；(5)取出烘干的載玻片平放在操作臺上，在載玻片的凹口外圍涂上封片膠，然后蓋上蓋玻片；(6)把制好的標(biāo)本平放在烘箱中，經(jīng)8～12h干燥，即制成整體孢子玻片標(biāo)本。該方法制成的標(biāo)本可使大且壁不堅(jiān)實(shí)的菌根菌孢子在標(biāo)本中保持完整的外觀形態(tài)，不破裂。
文檔編號G01N1/28GK102175497SQ20111005451
公開日2011年9月7日 申請日期2011年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月8日
發(fā)明者劉愛榮, 徐建強(qiáng), 林曉民, 王少先, 胡梅 申請人:河南科技大學(xué)