專利名稱：分析用試劑和承載了該試劑的分析用儀器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高精度分析生物試樣的高密度脂蛋白膽固醇的試劑和用于液體試樣分析的分析用儀器。
背景技術(shù)：
一直以來，利用一臺(tái)裝置使血液等生物試樣與分析試劑反應(yīng)且能定量生物試樣中的各種成分的大型自動(dòng)分析裝置正在被實(shí)際應(yīng)用，并成為醫(yī)療領(lǐng)域中不可或缺的存在。然而，并非所有的醫(yī)院都能引進(jìn)上述裝置，特別是在診療所等小規(guī)模的醫(yī)療機(jī)構(gòu)中，不少醫(yī)院因使用成本等各種原因而采用將試樣分析進(jìn)行外部委托的形式。當(dāng)采用將分析進(jìn)行外部委托的形式時(shí)，到得到分析結(jié)果需要花費(fèi)時(shí)間，其結(jié)果是，存在患者為接受基于檢查結(jié)果的適當(dāng)?shù)闹委煻坏貌辉俅蝸磲t(yī)院等不便和在急病等緊急情況下不容易迅速應(yīng)對(duì)等問題。在這樣的背景下，醫(yī)療現(xiàn)場希望出現(xiàn)實(shí)現(xiàn)低成本、試樣液的少量化、裝置的小型化、短時(shí)間測定等的更高精度且應(yīng)用的自由度高的分析裝置。這樣迅速簡便的診斷系統(tǒng)被稱為即時(shí)檢驗(yàn)(水、> 卜 才7·· ·夕7 ·歹7歹4 >夕’)(以下為P0CT)，其定義為在必須進(jìn)行檢查時(shí)，可以在受試者身邊迅速得到檢查結(jié)果，主要著眼于醫(yī)療質(zhì)量的提高和患者的生活質(zhì)量提升的檢查。為了實(shí)現(xiàn)POCT所定義的可提高使用的自由度和醫(yī)療服務(wù)的質(zhì)量的分析裝置，一個(gè)理想形態(tài)是例如滿足從通過患者負(fù)擔(dān)少的指尖采血等所采集到的少量標(biāo)本中能短時(shí)間且高精度地測定多種成分的濃度的條件。但是，通過指尖采血等無需壓力便可采集到的標(biāo)本量最多也就十幾微升左右，將如此少量的標(biāo)本以前述的條件、特別是以高精度進(jìn)行多種成分的分析，在技術(shù)上是很難的。特別是針對(duì)必須有預(yù)處理的分析項(xiàng)目來說，還處于較難在短時(shí)間內(nèi)重復(fù)且高精度地對(duì)少量標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理、具備足夠的測定精度的產(chǎn)品的數(shù)量至今還較少的狀態(tài)。在專利文獻(xiàn)1中，通過預(yù)處理用的試劑裝載在多孔質(zhì)體中，使標(biāo)本浸透在其中，來實(shí)施標(biāo)本的預(yù)處理(血細(xì)胞分離和沉淀、分離處理)，測定高密度脂蛋白膽固醇(以下為 HDL膽固醇)。另外，在分析血液中的HDL(High Density Lipoprotein)膽固醇時(shí)，要使血液中的分析所不需要的成分(非HDL成分)凝聚沉淀，而使分析所需的成分(HDL成分)分離計(jì)量。圖觀所示為專利文獻(xiàn)2等中記載的使用了膜濾器的分析用儀器。分析用儀器的分離層303、第一載體304和第二載體305積層在與HDL成分反應(yīng)而顯色的測定膜306的前方。如果液體試樣的血液附著在分離層303，則血液中的血細(xì)胞成分被分離層303捕獲，血漿成分浸透到第一載體304。在第一載體304上承載有凝聚非HDL成分的試劑，通過血漿成分穿過第一載體304，非HDL成分凝聚。穿過第一載體304的HDL成分和凝聚的非 HDL成分中，僅凝聚的非HDL成分被第二載體305捕集，只有不含非HDL成分的成分穿過第二載體305浸透到測定膜306中。與HDL成分反應(yīng)而顯色的測定膜306的顯色狀態(tài)透過膜 307而被檢測，從而進(jìn)行HDL成分的定量測定。302是殼體。專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1日本專利特公平7-6600專利文獻(xiàn)2美國專利US6171849B1發(fā)明的內(nèi)容血中的膽固醇作為是脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的復(fù)合體的脂蛋白的構(gòu)成成分在體內(nèi)循環(huán)。脂蛋白根據(jù)密度差異分類，按照密度由低到高的順序，被大致分為乳麋微粒(力4 π S夂π >)、超低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白(以下為HDL)。該HDL中所含的膽固醇為HDL膽固醇，已知為動(dòng)脈硬化的負(fù)因子，俗稱為有益膽固醇。為此，主要在動(dòng)脈硬化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、脂質(zhì)代謝異常的篩選用途中分析該HDL膽固醇。HDL膽固醇的測定方法被大致分為2種。第1種分析方法是將HDL以外的脂蛋白沉淀、除去后，分析留下的HDL所含的HDL 膽固醇的方法，但是該方法存在必須通過工藝進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理的問題。另外，如專利文獻(xiàn) 1所述，還存在通過將預(yù)處理試劑承載在小型的多孔質(zhì)體上，使少量的標(biāo)本浸透到該多孔質(zhì)體中，自動(dòng)進(jìn)行沉淀產(chǎn)生和沉淀除去處理的被稱為干化學(xué)(K，4 * S 7卜U —)的裝置， 但是因?yàn)轭A(yù)處理反應(yīng)是利用多孔質(zhì)體和毛細(xì)管力的反應(yīng)，所以還存在因多孔質(zhì)體的孔徑等物理形狀的不均勻、先被導(dǎo)入至多孔質(zhì)體內(nèi)部的標(biāo)本前端部和其后導(dǎo)入的標(biāo)本之間的預(yù)處理試劑濃度的梯度以及標(biāo)本的物理特性上的偏差，在沉淀生成除去上容易產(chǎn)生不均等的問題。此外，作為前述預(yù)處理試劑，通常使用由聚陰離子(^」7 二才 > )和二價(jià)陽離子所形成的試劑，但在該狀態(tài)下，存在干燥化時(shí)的潮解性和溶解性上的問題。第2種分析方法是通過使用某特定的高分子材料和表面活性劑來發(fā)揮阻礙HDL膽固醇以外的脂蛋白膽固醇的反應(yīng)性等效果，以省去沉淀生成、除去等預(yù)處理本身的方法。該方法被稱為直接法，是現(xiàn)在主流的HDL膽固醇的分析方法，但是因其是為前述大型自動(dòng)分析裝置所開發(fā)出的方法，如前所述其裝置大，再加之應(yīng)用成本的問題，較難在全部的醫(yī)療機(jī)構(gòu)引入使用。另外，因?yàn)樵摲椒ㄊ且栽噭┬螤顬橐后w作為前提設(shè)計(jì)的，所以現(xiàn)狀為在其使用上需要較多的機(jī)械構(gòu)造，較難進(jìn)行裝置的小型化，存在作為POCT應(yīng)用時(shí)的缺點(diǎn)，不能達(dá)到 POCT所定義的應(yīng)用。本發(fā)明的目的在于，為了實(shí)現(xiàn)提高POCT所定義的醫(yī)療服務(wù)質(zhì)量和患者的生活質(zhì)量，發(fā)明者考慮需要可對(duì)減輕患者負(fù)擔(dān)的指尖采血所采集到十幾微升以下的血液標(biāo)本進(jìn)行分析、且在數(shù)分鐘的短時(shí)間內(nèi)高精度地對(duì)血中的目標(biāo)成分進(jìn)行測定的系統(tǒng)，選擇干化學(xué)方式的測定系統(tǒng)作為滿足上述條件的方法，提供一種可在該方式中準(zhǔn)確且短時(shí)間地對(duì)血中的 HDL膽固醇的濃度進(jìn)行測定的溶解性極高的、且穩(wěn)定性高的預(yù)處理試劑。另外，在專利文獻(xiàn)2中，因?yàn)槟け环殖沙休d試劑的第一載體304和具有分離非HDL 成分的功能的第二載體305這2層，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，所以這可能成為測定結(jié)果出現(xiàn)偏差的原因。另外，將血液附著在分離層303上，與使非HDL凝集的試劑接觸時(shí)，存在試劑的溶解程度出現(xiàn)分布，且非HDL凝集成分的生成花費(fèi)時(shí)間，處理不充分而不能獲得準(zhǔn)確值的問題。膜濾器特有的課題是測定所需的HDL成分的一部分很可能被捕獲在第二載體305中，液體試樣的損失大。為此，必須要準(zhǔn)備所需量以上的液體試樣。這給受試者帶來了極大
的痛苦。本發(fā)明的目的是提供一種分析用儀器和分析方法，該裝置和該方法的測定結(jié)果偏差少，即使短時(shí)間也能得到準(zhǔn)確值，液體試樣損失少。本發(fā)明的分析用試劑是在分析生物試樣所含的高密度脂蛋白膽固醇時(shí)，使高密度脂蛋白以外的脂蛋白凝集的分析用試劑，其特征在于，在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有琥珀酸、葡糖酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇中的任何一種或其化合物中的至少一種以上。本發(fā)明的分析用試劑是在分析生物試樣所含的高密度脂蛋白膽固醇時(shí)，使高密度脂蛋白以外的脂蛋白凝集的分析用試劑，其特征在于，在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有二羧酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、牛磺酸、糖醇、單糖類的木糖、二糖類或者三糖類中的任意一種或其化合物中的至少一種以上。本發(fā)明的分析用儀器是具有通過離心力向測定室移送試樣液的微通道結(jié)構(gòu)、用于讀取所述測定室中的反應(yīng)液的信息的分析用儀器，其特征在于，將如下固體狀態(tài)的分析用試劑承載在到達(dá)所述測定室之前的微通道結(jié)構(gòu)的流路中，所述的試劑是在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有琥珀酸、葡糖酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇中的任何一種或其化合物中的至少一種以上的試劑。本發(fā)明的分析用儀器是具有通過離心力向測定室移送試樣液的微通道結(jié)構(gòu)、用于讀取所述測定室中的反應(yīng)液的信息的分析用儀器，其特征在于，將如下固體狀態(tài)的分析用試劑承載在到達(dá)所述測定室之前的微通道結(jié)構(gòu)的流路中，所述試劑是在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有二羧酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、?；撬帷⑻谴肌翁穷惖哪咎?、二糖類或者三糖類中的任意一種或其化合物中的至少一種以上的試齊LU另外，本發(fā)明的分析用試劑的選定方法是在從分析用試劑的候選項(xiàng)中選定適合的分析用試劑時(shí)，選定如下的物質(zhì)作為適合的分析用試劑的方法所述物質(zhì)含有聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物、以及一種以上的化合物，在干燥狀態(tài)下與生物試樣接觸后，攪拌，靜置，將所生成的非HDL的凝集進(jìn)行離心分離后的上清液的非高密度脂蛋白膽固醇除去率為100士20%，且在干燥時(shí)離心后無潮解產(chǎn)生。本發(fā)明的分析用試劑，通過含有選自琥珀酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇的化合物中的至少一種以上，可提高預(yù)處理試劑的溶解性，可在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行預(yù)處理，且較難受到濃度梯度和各標(biāo)本的不同的物理性質(zhì)的影響，所以可以進(jìn)行均勻處理。由此可在短時(shí)間內(nèi)高精度地測定HDL膽固醇。詳細(xì)而言，本發(fā)明的分析用試劑，雖然是基于由聚陰離子和二價(jià)陽離子形成的公知的技術(shù)，但在該狀態(tài)下，在干燥化時(shí)的潮解性和溶解性上存在問題，該問題得不到解決。 本發(fā)明的分析用試劑就是為了解決該課題而使干燥化時(shí)的潮解性減輕且使其溶解性得到提高的試劑。作為減輕預(yù)處理試劑的潮解性、提高溶解性的手段，對(duì)各試劑成分的鹽的種類和添加劑的選定就變得重要。這是因?yàn)楦鶕?jù)鹽的種類和添加劑的不同，潮解性的強(qiáng)弱和溶解性會(huì)發(fā)生很大變化。作為試劑成分的鹽的種類，雖然不能適用于所有的化合物，但是例如與鹽酸鹽相比，硫酸鹽在潮解性上有較低的趨勢。另外，對(duì)于添加劑，具有如下效果將試劑混合物的干燥時(shí)的結(jié)晶狀態(tài)從例如巨大結(jié)晶析出而在溶解性方面不利的單個(gè)或多個(gè)單結(jié)晶的狀態(tài)向在溶解性方面更加有利的細(xì)結(jié)晶聚集的多結(jié)晶狀態(tài)或者非晶體、無結(jié)晶狀態(tài)變化，從而提高溶解性，或者將潮解性高的試劑成分吸入、涂布到添加劑的晶體結(jié)構(gòu)中，通過這樣的效果來降低潮解性。對(duì)于聚陰離子化合物，如果僅實(shí)現(xiàn)使非HDL沉淀的功能，則可以選自下述的磷鎢酸、磷鉬酸、鎢酸、鉬酸、它們的無機(jī)鹽類、或者葡聚糖硫酸酯、肝素、硫酸直鏈淀粉、硫酸支鏈淀粉等硫酸多糖類，但是為了滿足所述條件，較好選自磷鎢酸、磷鉬酸或其鹽，更好是磷鎢酸鈉。然后，作為與所述的聚陰離子化合物組合的二價(jià)陽離子化合物，如果僅實(shí)現(xiàn)使非HDL沉淀的功能，則可以選自下述的鈣、鎂、錳、鈷、鎳、鍶、鋅、鋇、銅的2價(jià)的離子，或者鋁、鐵、鉻的2價(jià)以外的離子，或者銨離子。但是，與所述聚陰離子的情況相同，為了滿足所述條件，較好選自鈣或者鎂的離子，以化合物名稱來描述，較好選自硫酸鈣和硫酸鎂，也可以將它們組合使用。為了使非HDL沉淀，雖能通過所述聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物的組合來實(shí)施，但是為了如上所述滿足固體狀態(tài)下的溶解性和潮解性的降低條件，必須還要添加添加劑。作為添加劑，較好為糖類、氨基酸、常溫下為固體的二羧酸或其鹽，進(jìn)一步說，如果是糖類，較好為甘露糖醇、麥芽糖醇；如果是氨基酸，較好為丙氨酸、甘氨酸、組氨酸；如果是二羧酸，較好為琥珀酸或其鹽；與所述聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物的組合及本發(fā)明的分析用試劑最適合的添加劑為琥珀酸二鈉。所述組合形成的預(yù)處理試劑具有干燥化時(shí)的潮解性低，且與生物試樣接觸時(shí)的溶解性極高的性質(zhì)，通過使用利用該預(yù)處理試劑的分析系統(tǒng)，能進(jìn)行與所述POCT的定義一致的HDL膽固醇的測定。另外，本發(fā)明的分析用儀器由保持腔、具有HDL膽固醇分析用試劑的操作腔、分離腔、計(jì)量流路、測定室、具有酶試劑和介質(zhì)的毛細(xì)管區(qū)以微通道結(jié)構(gòu)形成，通過控制離心力進(jìn)行移送、與試劑的混合攪拌、分離，液體試樣的損失少，且即使在短時(shí)間內(nèi)也可得到準(zhǔn)確的值。


圖1 是本發(fā)明的實(shí)施方式1中的分析用儀器的保護(hù)罩處于關(guān)閉狀態(tài)和處于打開狀態(tài)的立體圖。圖2是上述實(shí)施方式中的分析用儀器的分解立體圖。圖3是上述實(shí)施方式的基底基板的放大立體圖。圖4是上述實(shí)施方式的稀釋液容器的俯視圖、A-A剖視圖、側(cè)視圖、后視圖、主視圖。圖5是上述實(shí)施方式的保護(hù)罩的俯視圖、側(cè)視圖、B-B剖視圖、主視圖。圖6是上述實(shí)施方式的稀釋液容器的密封狀態(tài)和保護(hù)罩打開的狀態(tài)以及稀釋液釋放狀態(tài)的剖視圖。圖7是將上述實(shí)施方式中的分析用儀器設(shè)置成出廠狀態(tài)的工序的剖視圖。圖8是上述實(shí)施方式的分析裝置的門處于打開狀態(tài)的立體圖。圖9是上述實(shí)施方式的分析裝置的剖視圖。圖10是上述實(shí)施方式的分析裝置的結(jié)構(gòu)圖。
圖11是上述實(shí)施方式的分析用儀器的注入口附近的放大立體圖、打開保護(hù)罩從指尖采集試樣液的狀態(tài)的立體圖、從轉(zhuǎn)臺(tái)側(cè)透過覆蓋基板觀察分析用儀器的微通道結(jié)構(gòu)時(shí)的放大立體圖。圖12是滴注于上述實(shí)施方式的分析用儀器并設(shè)置在轉(zhuǎn)臺(tái)上后使其旋轉(zhuǎn)前的狀態(tài)圖。圖13是將試樣液保持于上述實(shí)施方式的分析用儀器的毛細(xì)管腔內(nèi)并在稀釋液溶液的密封鋁箔破裂的狀態(tài)下設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)時(shí)的狀態(tài)圖和分離時(shí)的狀態(tài)圖。圖14是用于說明上述實(shí)施方式的稀釋液容器的液體釋放的放大剖視圖。圖15是上述實(shí)施方式的工序3中從分離腔流入計(jì)量流路并保持規(guī)定量時(shí)的狀態(tài)圖和工序4中從計(jì)量流路流入混合腔時(shí)的狀態(tài)圖。圖16是上述實(shí)施方式的工序6中使分析用儀器擺動(dòng)時(shí)的狀態(tài)圖和將轉(zhuǎn)臺(tái)沿順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)而流入測定室和保持腔時(shí)的狀態(tài)圖。圖17是上述實(shí)施方式的工序8中使分析用儀器擺動(dòng)時(shí)的狀態(tài)圖和工序9中將轉(zhuǎn)臺(tái)沿順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)而使與操作腔的試劑反應(yīng)后的稀釋血漿流入分離腔后，通過維持高速旋轉(zhuǎn)而將操作腔內(nèi)生成的凝集物離心分離時(shí)的狀態(tài)圖。圖18是上述實(shí)施方式的工序10中使轉(zhuǎn)臺(tái)停止，稀釋血漿流入計(jì)量流路并保持規(guī)定量時(shí)的狀態(tài)圖，以及工序11中保持于計(jì)量流路的稀釋血漿流入測定室時(shí)的狀態(tài)圖。圖19是上述實(shí)施方式的工序12中測定室的稀釋血漿與試劑的反應(yīng)開始時(shí)的狀態(tài)圖，以及工序13中攪拌試劑和稀釋血漿的狀態(tài)圖。圖20是上述實(shí)施方式的工序2中從稀釋液容器流出的稀釋液經(jīng)由排出流路流入保持腔的狀態(tài)的放大立體圖，以及將稀釋血漿從混合腔經(jīng)由毛細(xì)管流路移送至下一工序的狀態(tài)的放大立體圖。圖21是使轉(zhuǎn)臺(tái)停止于180°附近時(shí)的分析用儀器的俯視圖，以及使轉(zhuǎn)臺(tái)停止于 60°、300°附近時(shí)的分析用儀器的俯視圖。圖22是上述實(shí)施方式的分析用儀器的圖16中的F-F剖視圖。圖23是表示上述實(shí)施方式的分析用儀器的毛細(xì)管區(qū)中的試劑的承載狀態(tài)的放大俯視圖和G-G剖視圖。圖M是表示上述實(shí)施方式的分析用儀器的操作腔中的試劑的承載狀態(tài)的放大俯視圖和H-H剖視圖。圖25是本發(fā)明的實(shí)施方式2中的參照試劑和添加了各種添加劑到參照試劑中的試劑的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說明圖。圖沈是使用了具有本發(fā)明的試劑的分析用儀器的HDL膽固醇的分析流程圖。圖27是同一分析用儀器的HDL膽固醇的測定值的直線性的說明圖。圖28是專利文獻(xiàn)2的結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式(實(shí)施方式1)圖1 圖7表示本發(fā)明的分析用儀器。圖1 (a)、圖1 (b)是表示分析用儀器1的保護(hù)罩2的關(guān)閉狀態(tài)和打開狀態(tài)。圖2表示在將圖1(a)中的下側(cè)向上的狀態(tài)下進(jìn)行了分解的狀態(tài)。該分析用儀器1由相互組合的以下4個(gè)部件構(gòu)成在一面形成有表面具有微細(xì)的凹凸形狀的微通道結(jié)構(gòu)的基底基板3、覆蓋基底基板3的表面的覆蓋基板4、保持稀釋液的稀釋液容器5、用于防止試樣液飛散的保護(hù)罩2。圖3所示為基底基板3的表面的凹凸形狀，陰影150表示的地方是與覆蓋基板4 粘合的面。以陰影151表現(xiàn)的地方表示比與覆蓋基板4粘合的面略低而形成的地方，是在與覆蓋基板4粘合后變?yōu)槊?xì)管力作用的間隙的地方。在分析用儀器1的底面，所述覆蓋基板4形成有向分析用儀器1的底部突出的作為調(diào)芯用嵌合部的旋轉(zhuǎn)支承部15。保護(hù)罩2的內(nèi)周部形成有旋轉(zhuǎn)支承部16，保護(hù)罩2關(guān)閉的分析用儀器1中，旋轉(zhuǎn)支承部16以與旋轉(zhuǎn)支承部15的外周相接的方式形成。另外，所述覆蓋基板4形成有其基端與旋轉(zhuǎn)支承部15連接且其前端向外周延伸的作為制動(dòng)用卡合部的凸部114?；谆?與覆蓋基板4以將稀釋液容器5等設(shè)置于內(nèi)部的狀態(tài)接合，在上述接合后的部件上安裝有保護(hù)罩2。通過將形成于基底基板3的上表面的多個(gè)凹部的開口用覆蓋基板4覆蓋，形成后述的多個(gè)收容區(qū)域和連接這些收容區(qū)域之間的微通道結(jié)構(gòu)的流路等。收容區(qū)域中有需要的部分預(yù)先承載有各種分析所需要的試劑。保護(hù)罩2的單側(cè)樞軸支撐為與形成于基底基板3和覆蓋基板4的軸6a、6b卡合并能夠進(jìn)行打開和關(guān)閉。 當(dāng)欲檢查的試樣液為血液時(shí)，毛細(xì)管力作用的上述微通道結(jié)構(gòu)的各流路的間隙被設(shè)定為 50 μ m ~ 300 μ m。使用上述分析用儀器1的分析工序的概要如下將試樣液滴注于預(yù)先設(shè)置有稀釋液的分析用儀器1中，用所述稀釋液稀釋該試樣液的至少一部分后作為待測定的試樣液。圖4表示稀釋液容器5的形狀。圖4(a)是俯視圖，圖4(b)是圖4(a)的A-A剖視圖，圖4 (c)是側(cè)視圖，圖4(d)是后視圖，圖4(e)是從開口部7觀察到的主視圖。如圖6(a)所示，上述開口部7在稀釋液容器5的內(nèi)部fe于填充稀釋液8后被鋁箔等的密封件9所密封。稀釋液容器5的與開口部7 相反的一側(cè)形成有彈簧鎖部(latch) 10。上述稀釋液容器5形成于基底基板3與覆蓋基板 4之間，設(shè)置于稀釋液容器收容部11，并在圖6(a)所示的液體保持位置和圖6(c)所示的液體釋放位置上可自由移動(dòng)地收容。圖5表示保護(hù)罩2的形狀。圖5 (a)是俯視圖，圖5 (b)是側(cè)視圖，圖5 (c)是圖5 (a)的B-B剖視圖，圖5⑷是從開口加觀察到的主視圖。在圖1(a)所示的閉塞狀態(tài)下，如圖6(a)所示，在保護(hù)罩2的內(nèi)側(cè)形成有能與稀釋液容器5的彈簧鎖部10卡合的卡定用槽12。上述圖6 (a)表示使用前的分析用儀器1。在該狀態(tài)下，保護(hù)罩2被閉塞，稀釋液容器5的彈簧鎖部10卡合在保護(hù)罩2的卡定用槽12中，并被卡定在液體保持位置，以使稀釋液容器5無法朝箭頭J方向移動(dòng)。以該狀態(tài)提供給利用者。當(dāng)?shù)巫⒃嚇右簳r(shí)，若保護(hù)罩2抵抗圖6(a)中的與彈簧鎖部10的卡合而如圖1 (b) 所示被打開，則形成有保護(hù)罩2的卡定用槽12的底部2b彈性變形，并如圖6(b)所示解除保護(hù)罩2的卡定用槽12與稀釋液容器5的彈簧鎖部10間的卡合。
在上述狀態(tài)下，將試樣液滴注在分析用儀器1的露出的注入口 13后關(guān)閉保護(hù)罩2。 此時(shí)，通過關(guān)閉保護(hù)罩2，形成有卡定用槽12的壁面14與稀釋液容器5的彈簧鎖部10的在保護(hù)罩2側(cè)的面恥抵接，將稀釋液容器5朝上述箭頭J方向(靠近液體釋放位置的方向) 推入。稀釋液容器收容部11中從基底基板3—側(cè)形成有作為突出部的開啟凸緣(rib) 11a， 若稀釋液容器5被保護(hù)罩2推入，則在朝稀釋液容器5的斜面傾斜的開口部7的密封面伸展的密封件9如圖6(c)所示與開啟凸緣Ila碰撞而破裂。另外，圖7表示將分析用儀器1設(shè)置成圖6 (a)所示的出廠狀態(tài)的制造工序。首先， 在關(guān)閉保護(hù)罩2之前，使設(shè)于稀釋液容器5的下表面的槽42 (參照?qǐng)D2和圖4(d))與設(shè)于覆蓋基板4的孔43位置重合，在上述液體保持位置上穿過孔43在稀釋液容器5的槽42中與另設(shè)于基底基板3或覆蓋基板4的卡定夾具44的突起4 卡合，將稀釋液容器5設(shè)置成卡定于液體保持位置的狀態(tài)。然后，通過在從形成于保護(hù)罩2的上表面的缺口 45(參照?qǐng)D 1)插入按壓夾具46后按壓保護(hù)罩2的底面而使其彈性變形的狀態(tài)下關(guān)閉保護(hù)罩2后解除按壓夾具46，從而設(shè)置成圖6 (a)的狀態(tài)。另外，在上述實(shí)施方式中以在稀釋液容器5的下表面設(shè)置槽42為例進(jìn)行說明，但也能構(gòu)成為在稀釋液容器5的上表面設(shè)置槽42并對(duì)應(yīng)該槽42在基底基板3上設(shè)置孔43， 使卡定模具44的突起4 與槽42卡合。此外，保護(hù)罩2的卡定用槽12直接與稀釋液容器5的彈簧鎖部10卡合并將稀釋液容器5卡定在液體保持位置上，但也可以使保護(hù)罩2的卡定用槽12間接地與稀釋液容器 5的彈簧鎖部10卡合并將稀釋液容器5卡定在液體保持位置上。將該分析用儀器1設(shè)置于圖8和圖9所示的分析裝置100的轉(zhuǎn)臺(tái)101。該實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)臺(tái)101被安裝于如圖9所示的傾斜的旋轉(zhuǎn)軸心107處，相對(duì)水平線H傾斜角度θ (10° 45°的范圍)，可以根據(jù)分析用器件1的旋轉(zhuǎn)停止位置來控制分析用器件1內(nèi)的溶液所受到的重力的方向。具體而言，在圖21(a)所示位置(正上方用0° (360° )表示時(shí)180°附近的位置)使分析用儀器1停止時(shí)，由于操作腔121的下側(cè)122從正面看朝向下側(cè)，因此操作腔 121內(nèi)的溶液125朝外周方向(下側(cè)122)受到重力。此外，在圖21 (b)所示的60°附近的位置使分析用儀器1停止時(shí)，由于操作腔121 的左上側(cè)123從正面看朝向下側(cè)，因此操作腔121內(nèi)的溶液125朝左上方受到重力。同樣地，在圖21 (c)所示的300°附近的位置，由于操作腔121的右上側(cè)IM從正面看朝向下側(cè)， 因此操作腔121內(nèi)的溶液125朝右上方受到重力。如上所述，使旋轉(zhuǎn)軸心107傾斜，在任意位置使分析用儀器1停止，便能作為用于將分析用儀器1內(nèi)的溶液向規(guī)定方向移送的驅(qū)動(dòng)力中的一種來利用。分析用儀器1內(nèi)的溶液所受到的重力的大小可通過調(diào)整旋轉(zhuǎn)軸心107的角度θ 來設(shè)定，較為理想的是根據(jù)所移送的液量與附著在分析用儀器1內(nèi)的壁面上的力的關(guān)系來設(shè)定。若角度θ小于10°，則溶液受到的重力過小而可能無法得到移送所需的驅(qū)動(dòng)力， 若角度θ大于45°，則對(duì)旋轉(zhuǎn)軸心107的載荷增大，利用離心力來移送的溶液可能因自重隨意移動(dòng)而無法控制。轉(zhuǎn)臺(tái)101的上表面形成有環(huán)狀槽102，在將分析用儀器1設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)101的狀態(tài)
10下，形成于分析用儀器1的覆蓋基板4的旋轉(zhuǎn)支承部15和形成于保護(hù)罩2的旋轉(zhuǎn)支承部16 與環(huán)狀槽102卡合來收容分析用儀器1。將分析用儀器1設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)101之后，在使轉(zhuǎn)臺(tái)101旋轉(zhuǎn)前關(guān)閉分析裝置的門 103，設(shè)置后的分析用儀器1的在轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)軸心上的位置藉由設(shè)于門103側(cè)的夾持器 (clamper) 104通過作為加力單元的彈簧10 的作用力被壓向轉(zhuǎn)臺(tái)101側(cè)，分析用儀器1與通過旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)單元106的無刷電動(dòng)機(jī)(7，* > ^ 一夕)71a旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)的轉(zhuǎn)臺(tái)101 —體地旋轉(zhuǎn)。符號(hào)107表示轉(zhuǎn)臺(tái)101旋轉(zhuǎn)中的軸心。因?yàn)橛兴龅慕Y(jié)構(gòu)，將分析用儀器1設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)101之后，如圖9所示，在轉(zhuǎn)臺(tái)101 的環(huán)狀槽102的內(nèi)周上等間隔地形成的任一槽與分析用儀器1的凸部114的前端114a卡合，形成分析用儀器1不會(huì)沿轉(zhuǎn)臺(tái)101的周向滑動(dòng)的狀態(tài)。安裝保護(hù)罩2的目的是為了防止附著于注入口 13附近的試樣液在分析中因離心力而飛散至外部。作為構(gòu)成分析用儀器1的部件的材料，理想的是材料成本低廉且量產(chǎn)性良好的樹脂材料。所述分析裝置100通過測定透過分析用儀器1的光的光學(xué)測定方法來進(jìn)行試樣液的分析，因此作為基底基板3和覆蓋基板4的材料，理想的是PC、PMMA、AS、MS等的透明性好的合成樹脂。此外，作為稀釋液容器5的材料，由于需要預(yù)先將稀釋液8長時(shí)間封入稀釋液容器 5的內(nèi)部，因此理想的是PP、PE等的水分透過率低的結(jié)晶性的合成樹脂。作為保護(hù)罩2的材料，只要是成形性好的材料就沒有特別的問題，較為理想的是采用PP、PE、ABS等低價(jià)的樹脂?；谆?與覆蓋基板4的接合較為理想的是采用不容易給在上述收容區(qū)域內(nèi)載有的試劑的反應(yīng)活性帶來影響的方法，較為理想的是采用在接合時(shí)不容易產(chǎn)生反應(yīng)性氣體和溶劑的超聲波熔敷和激光熔敷等。此外，在利用基底基板3與覆蓋基板4接合所產(chǎn)生的基底基板3和覆蓋基板4之間的微小間隙的毛細(xì)管力來移送溶液的部分進(jìn)行用于提高毛細(xì)管力的親水處理。具體而言， 使用親水性聚合物和表面活性劑等來進(jìn)行親水處理。在此，親水性是指與水的接觸角不足 90°，更為理想的是接觸角不足40°。圖10表示分析裝置100的結(jié)構(gòu)。該分析裝置100由如下構(gòu)件構(gòu)成旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)單元106，該旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)單元106用于使轉(zhuǎn)臺(tái)101旋轉(zhuǎn)；光學(xué)測定單元108，該光學(xué)測定單元108用于光學(xué)測定分析用儀器1內(nèi)的溶液；控制單元109，該控制單元109控制轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)速度和旋轉(zhuǎn)方向以及光學(xué)測定單元的測定時(shí)機(jī)等；運(yùn)算部110，該運(yùn)算部110用于對(duì)光學(xué)測定單元108得到的信號(hào)進(jìn)行處理并運(yùn)算測定結(jié)果；以及顯示部111，該顯示部111用于顯示運(yùn)算部110得到的結(jié)果。旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)單元106構(gòu)成為經(jīng)由轉(zhuǎn)臺(tái)101使分析用儀器1不僅能繞旋轉(zhuǎn)軸心107向任意方向以規(guī)定的旋轉(zhuǎn)速度旋轉(zhuǎn)，還能在規(guī)定的停止位置處以旋轉(zhuǎn)軸心107為中心按規(guī)定的振幅范圍、周期左右往復(fù)運(yùn)動(dòng)，使分析用儀器1擺動(dòng)。光學(xué)測定單元108包括用于對(duì)分析用儀器1的測定部照射特定波長的光的光源 112和檢測自光源112照射的光中透過分析用儀器1的透射光的光量的光檢測器113。構(gòu)成為通過轉(zhuǎn)臺(tái)101驅(qū)動(dòng)分析用儀器1旋轉(zhuǎn)，從注入口 13取入到內(nèi)部的試樣液采用以處于比注入口 13更靠內(nèi)周的上述旋轉(zhuǎn)軸心107為中心使分析用儀器1旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力和設(shè)于分析用儀器1內(nèi)的毛細(xì)管流路的毛細(xì)管力，在分析用儀器1的內(nèi)部移送溶液， 對(duì)分析用儀器1的微通道結(jié)構(gòu)和分析工序進(jìn)行詳細(xì)說明。圖11表示分析用儀器1的注入口 13附近。圖11 (a)表示從分析用儀器1的外側(cè)觀察注入口 13時(shí)的放大圖，圖11 (b)是表示打開保護(hù)罩2來從指尖120采集試樣液18時(shí)的狀態(tài)的圖，圖11 (c)是從轉(zhuǎn)臺(tái)101側(cè)透過覆蓋基板4觀察所述微通道結(jié)構(gòu)時(shí)的圖。注入口 13以從設(shè)定于分析用儀器1內(nèi)部的旋轉(zhuǎn)軸心107朝外周方向突出的形狀， 經(jīng)由在基底基板3與覆蓋基板4之間形成為朝內(nèi)周方向伸長的微小間隙δ的毛細(xì)管力所作用的誘導(dǎo)部17，與利用毛細(xì)管力能保持所需量的毛細(xì)管腔19連接，因而，通過打開保護(hù)罩2后在上述注入口 13直接沾取試樣液18，附著于注入口 13附近的試樣液利用誘導(dǎo)部17 的毛細(xì)管力被取入到分析用儀器1的內(nèi)部。在誘導(dǎo)部17與毛細(xì)管腔19之間的連接部處形成有彎曲部22，該彎曲部22在基底基板3上形成凹部21來改變通路的流向。從誘導(dǎo)部17觀察，經(jīng)由毛細(xì)管腔19在誘導(dǎo)部17的前部形成有毛細(xì)管力不作用的間隙的收容腔23a。毛細(xì)管腔19和彎曲部22以及誘導(dǎo)部17的一部分的側(cè)方形成有向大氣開放的腔對(duì)。通過腔M的作用，從注入口 13采集的試樣液優(yōu)先順著誘導(dǎo)部17和毛細(xì)管腔 19的未形成腔M的一側(cè)的側(cè)壁填充，因此在注入口 13混入氣泡的情況下，在誘導(dǎo)部17的與腔M鄰接的區(qū)間內(nèi)空氣被向腔M排出，可以在不混入氣泡的情況下填充試樣液18。圖12表示如上所述滴注后的分析用儀器1設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)101后使其旋轉(zhuǎn)前的狀態(tài)。 此時(shí)，如在圖6 (c)中所說明的那樣，稀釋液容器5的密封件9與開啟凸緣Ila碰撞而破裂。 25a 25m是形成于基底基板3的空氣孔。將分析工序與控制旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)單元106的運(yùn)轉(zhuǎn)的控制單元109的構(gòu)成一起進(jìn)行說明。-工序 1-在注入口 13滴注了接受檢查的試樣液的分析用儀器1如圖13(a)所示將試樣液保持于毛細(xì)管腔19內(nèi)，在稀釋液溶液5的密封件9破裂的狀態(tài)下被設(shè)置于轉(zhuǎn)臺(tái)101。-工序 2-關(guān)閉門103后，將轉(zhuǎn)臺(tái)101朝順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)(5000rpm SOOOrpm)后，所保持的試樣液在彎曲部22的位置被斷開，誘導(dǎo)部17內(nèi)的試樣液被排出至保護(hù)罩2內(nèi)，而毛細(xì)管腔19內(nèi)的試樣液18經(jīng)由收容腔23a如圖13(b)所示流入分離腔23b 和23c。保持40 70秒旋轉(zhuǎn)，在分離腔2 和23c內(nèi)，血漿成分18a和血細(xì)胞成分18b被
離心分離。如圖13(b)和圖20(a)中箭頭K所示，從稀釋液容器5流出的稀釋液8經(jīng)由排出流路沈流入保持腔27。如果流入保持腔27的稀釋液8超過規(guī)定量，則剩余的稀釋液8經(jīng)由溢流流路28a流入溢流腔^a，再如箭頭Y所示越過毛細(xì)管流路37，經(jīng)由溢流腔^b、溢流流路^b，流入作為參照測定室的溢流腔^c。與保持腔27同樣，如果流入溢流腔29c的稀釋液超過規(guī)定量，，則剩余稀釋液經(jīng)由溢流流路28c流入溢流腔^d。
還有，稀釋液容器5的與被密封件9密封的開口部7相反的一側(cè)的底部形狀如圖 4(a)、(b)所示以圓弧面32形成，且在圖13(b)所示的狀態(tài)的稀釋液容器5的液體釋放位置，如圖14所示，以圓弧面32的中心m相對(duì)于旋轉(zhuǎn)軸心107在更靠近排出流路沈的方向上偏置恰好距離d的方式形成，因此向該圓弧面32流動(dòng)的稀釋液8被變?yōu)檠貓A弧面32從外側(cè)向開口部7流動(dòng)(箭頭η方向)，被從稀釋液容器5的開口部7高效地釋放至稀釋液容器收容部11。-工序 3-接著，使轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)停止后，血漿成分18a被抽吸至形成于分離腔2 的壁面的毛細(xì)管腔33，如圖15(a)所示經(jīng)由與毛細(xì)管腔33連通的連接流路30流至計(jì)量流路38， 從而保持規(guī)定量。在這里，該實(shí)施方式采用如下構(gòu)成在計(jì)量流路38的出口形成有朝內(nèi)周方向伸長的填充確認(rèn)區(qū)域38a，進(jìn)入下一工序前，以IOOrpm左右低速旋轉(zhuǎn)，可以在將血漿成分18a保持于填充確認(rèn)區(qū)域38a的狀態(tài)下通過光學(xué)方法檢測血漿成分18a的有無。分析用儀器1內(nèi)的填充確認(rèn)區(qū)域38a的內(nèi)表面粗糙化，使得使光透射時(shí)通過填充確認(rèn)區(qū)域38a的光發(fā)生散射，未填充血漿成分18a時(shí)，透射的光量減少，填充有血漿成分18a時(shí)，由于表面的微細(xì)凹凸中也填充液體，因此光的散射受到抑制，透射的光量增加。通過檢測該光量的差，可以檢出是否填充有血漿成分18a。此外，分離腔23b、23c內(nèi)的試樣液被吸至連接分離腔23c和溢流腔36b的具有虹吸管形狀的連接流路34內(nèi)，同樣稀釋液8也被吸至連接保持腔27和混合腔39的具有虹吸管形狀的連接流路41內(nèi)。在這里，形成于連接流路41的出口的防流入槽3 為了防止稀釋液8從連接流路 41流入計(jì)量流路38而形成，以0. 2mm 0. 5mm左右的深度同時(shí)形成于基底基板3和覆蓋基板4。毛細(xì)管腔33自分離腔23b的最外周的位置向內(nèi)周側(cè)形成。換言之，毛細(xì)管腔33 的最外周的位置伸長至比圖13(b)所示的血漿成分18a和血細(xì)胞成分18b的分離界面18c 更靠外周方向的位置而形成。通過如上所述設(shè)定毛細(xì)管腔33的外周側(cè)的位置，毛細(xì)管腔33的外周端浸漬于在分離腔2 中分離而得的血漿成分18a和血細(xì)胞成分18b，由于血漿成分18a的粘度比血細(xì)胞成分18b低，所以血漿成分18a優(yōu)先被毛細(xì)管腔33吸出，可以經(jīng)由連接流路30向計(jì)量流路38移送血漿成分18a。此外，血漿成分18a被吸出后，血細(xì)胞成分18b也緊跟著血漿成分18a被吸出，因此可以將毛細(xì)管腔33和連接流路30的到途中為止的通路用血細(xì)胞成分18b置換，計(jì)量流路38被血漿成分18a充滿后，連接流路30和毛細(xì)管腔33內(nèi)的液體的移送也停止，因此血細(xì)胞成分18b不會(huì)混入計(jì)量流路38。-工序 4-將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)GOOOrpm 6000rpm)后，如圖 15(b)所示，保持于計(jì)量流路38的血漿成分18a在大氣開放腔31的位置斷開，只以規(guī)定量的血漿成分18a流入混合腔39，保持腔27內(nèi)的稀釋液8也經(jīng)由虹吸管形狀的連接流路41 流入混合腔39。
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此外，分離腔23b、23c和連接通路30、毛細(xì)管腔33內(nèi)的試樣液18經(jīng)由虹吸管形狀的連接流路34和防逆流通路35流入溢流腔36a。-工序 5-接著，停止轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)，使分析用儀器1處于圖15(b)所示的位置，以20 70Hz的頻率控制轉(zhuǎn)臺(tái)101而使分析用儀器1產(chǎn)生士 Imm左右的擺動(dòng)，對(duì)由被移送至混合腔 39內(nèi)的稀釋液8和血漿成分18a形成的作為測定對(duì)象的稀釋血漿40進(jìn)行攪拌。-工序 6-然后，使分析用儀器1處于圖16(a)所示的位置，慢慢提高轉(zhuǎn)臺(tái)101的擺動(dòng)強(qiáng)度至 IOOHz左右，而使分析用儀器1產(chǎn)生士 Imm左右的擺動(dòng)，將保持于混合腔39的稀釋血漿40 移送至形成于比稀釋血漿40的液面更靠近內(nèi)周側(cè)的位置的毛細(xì)管流路37的入口。被移送至毛細(xì)管流路37的入口的稀釋血漿40通過毛細(xì)管力如箭頭X所示被吸出至毛細(xì)管流路37內(nèi)，被依次移送至毛細(xì)管流路37、計(jì)量流路47a、47b、47c、溢流流路47d。-工序7-將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)GOOOrpm 6000rpm)后，如圖 16(b)所示，保持于計(jì)量流路47a、47b、47c的稀釋血漿40在作為與連通大氣的大氣開放腔 50的連接部的彎曲部48a、48b、48c、48d的位置斷開，恰好規(guī)定量的稀釋血漿流入測定室 5 、52c和保持腔53。此外，這時(shí)保持于溢流流路47d的稀釋血漿40經(jīng)由防逆流通路55流入溢流腔M。 此外，這時(shí)毛細(xì)管流路37內(nèi)的稀釋血漿40經(jīng)由溢流腔^b、溢流流路28b流入溢流腔^c。在計(jì)量流路47a的一部分的側(cè)壁形成有凹部49而在彎曲部48a附近與大氣開放腔50連通，因此彎曲部48a附近的附著于壁面的力減小，使彎曲部48a處的液體斷開良好。測定室5 52c的形狀為沿離心力作用的方向伸長的形狀，具體地說，以分析用儀器1的圓周方向的寬度自分析用儀器1的旋轉(zhuǎn)中心向最外周變窄的方式形成。多個(gè)測定室52a 52c的外周側(cè)的底部配置在分析用儀器1的同一半徑上，因此測定多個(gè)測定室52a 52c時(shí)不需要為不同的半徑距離配置多個(gè)同一波長的光源112及與之對(duì)應(yīng)的光檢測器113，不僅可以削減裝置的成本，而且可以在同一測定盒內(nèi)使用多種不同的波長進(jìn)行測定，因此可以通過根據(jù)混合溶液的濃度選擇最適的波長來使測定靈敏度提尚ο另外，在位于各測定室52a 52c的周向的側(cè)壁的一側(cè)壁以自所述測定室的外周位置向內(nèi)周方向伸長的方式形成有承載有試劑的毛細(xì)管區(qū)56a 56c。圖16(b)中的F-F 剖面示于圖22。毛細(xì)管區(qū)56b的可吸取容量形成為比可將保持于測定室52b的試樣液全部收容的容量少的容量。毛細(xì)管區(qū)56a、56c也同樣，形成為比可將保持于各測定室52a、52c的試樣液全部收容的容量少的容量。測定室5 52c的光路長度根據(jù)由使各檢查對(duì)象的成分與試劑反應(yīng)后的混合溶液得到的吸光度的范圍進(jìn)行調(diào)整。此外，在毛細(xì)管區(qū)56a、56b、56c內(nèi)，如圖23(a)所示，用于與各檢查對(duì)象的成分反應(yīng)的試劑58al、58a2、58bl、58b2、58b3、58cl、58c2承載在形成于毛細(xì)管區(qū)56a、56b、56c 內(nèi)的試劑承載部57al、57a2、57bl、57b2、57b3、57cl、57c2。圖23(a)中的G-G剖面示于圖23 (b)。試劑承載部57bl、57b2、57b3的與覆蓋基板4的間隙以比毛細(xì)管區(qū)56b的與覆蓋基板4的間隙窄的方式從毛細(xì)管區(qū)56b突出地形成。因此，通過將試劑58bl、58b2、58b3涂布于該試劑承載部57bl、57b2、57b3，能以試劑承載部57bl、57b2、57b3與毛細(xì)管區(qū)56b的臺(tái)階來抑制試劑58bl、5m32、58b3的擴(kuò)散，因此能夠在不使種類不同的試劑間相互混雜的情況下承載。另外，試劑承載部57b 1、57b2、57b3的間隙比毛細(xì)管區(qū)56b窄，所以吸入毛細(xì)管區(qū)56b的液體可靠地被填充至試劑承載部57bl、57b2、57b3，因而可以可靠地使試劑58b 1、 58b2,58b3 溶解。毛細(xì)管區(qū)56b以50 300 μ m左右的有毛細(xì)管力作用的間隙形成，因此試劑承載部57bl、57b2、57b3比毛細(xì)管區(qū)56b突出數(shù)十微米左右形成。毛細(xì)管區(qū)56a、56c也被同樣地構(gòu)成。-工序 8-接著，停止轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)，使分析用儀器1處于圖17(a)所示的位置，以60 120Hz的頻率控制轉(zhuǎn)臺(tái)101而使分析用儀器1產(chǎn)生士 Imm左右的擺動(dòng)，將保持于保持腔53 的稀釋血漿40經(jīng)由以浸沒于稀釋血漿40的液面的方式形成于保持腔53的側(cè)壁的連接部 59通過毛細(xì)管力的作用移送至操作腔61。然后，以10 40Hz的頻率控制轉(zhuǎn)臺(tái)101為時(shí)40秒-60秒，對(duì)如圖M(a)所示的承載于操作腔61的試劑67a、67b與稀釋血漿40進(jìn)行攪拌，使稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑反應(yīng)。此處，在測定室5 中檢測HDL-膽固醇時(shí)，干燥承載在操作腔61的試劑67a、67b 是使分析所不需要的非HDL成分凝聚沉淀的HDL膽固醇分析用試劑，具體使用了磷鎢酸鈉 (由f力，4歹^々株式會(huì)社制造)。此外，移送至測定室52b、52c的稀釋血漿40通過毛細(xì)管力如圖17(a)所示被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c，這時(shí)開始試劑58bl、58b2、58b3、58cl、58c2的溶解，開始稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑的反應(yīng)。如圖所示，操作腔61相對(duì)于旋轉(zhuǎn)軸心107與保持腔53的周向鄰接地形成。 操作腔61的與覆蓋基板4的間隙形成為有毛細(xì)管力作用的間隙，試劑67a、67b承載于試劑承載部65a、65b。在操作腔61中，在試劑67a、67b的周邊，具體來說在試劑67a、67b之間形成沿半徑方向伸長并且其高度比所述操作腔61的外周壁的尺寸(=基底基板3和覆蓋基板4的間隙)小的攪拌肋63。如圖M(b)所示，攪拌肋63與覆蓋基板4的厚度方向的剖面尺寸比操作腔61的與覆蓋基板4的厚度方向的剖面尺寸小。S卩，試劑承載部65a，65b的間隙以比所述操作腔 61的間隙窄的方式從所述腔61突出形成。此外，試劑承載部65a、6^的與覆蓋基板4的間隙以比操作腔61與覆蓋基板4的間隙窄的方式從操作腔61突出地形成。因此，試劑承載部65a、65b的間隙比操作腔61窄，因此流入操作腔61的液體可靠地被填充至試劑承載部65a、65b，因而可以可靠地使試劑67a、67b溶解。試劑承載部65a、 65b比操作腔61突出數(shù)十微米左右形成。
在操作腔61的內(nèi)周側(cè)的側(cè)方形成有腔62，腔62通過保持腔53與連通部60連接。 腔62的與覆蓋基板4的間隙形成為沒有毛細(xì)管力作用的間隙。此外，腔62通過形成于連通部60附近的空氣孔25h與大氣連通。保持腔53與操作腔61藉由從保持腔53的側(cè)壁通過所述連通部60延伸的連接部 59連接。連接部59的與覆蓋基板4的間隙形成為有毛細(xì)管力作用的間隙。在這里，連接部59的前端伸長至比保持于保持腔53的稀釋血漿40的液面相對(duì)于所述旋轉(zhuǎn)軸心更靠近外周方向的位置而形成。在操作腔61的外周側(cè)形成有分離腔66，通過連接通路64連接。連接通路64的與覆蓋基板4之間的厚度方向的剖面尺寸為有毛細(xì)管力作用的間隙，限制為比作用于操作腔 61的毛細(xì)管力大的尺寸。操作腔61中，以稀釋血漿40充滿的空間的大小和間隙的大小相同，但殘留少量未充滿稀釋血漿40的空間61a。圖17(a)所示的狀態(tài)下，稀釋血漿40與試劑67a、67b接觸，試劑67a、67b溶出至稀釋血漿40。如果在該狀態(tài)下使分析用儀器1以旋轉(zhuǎn)軸心107為中心進(jìn)行規(guī)定角度的擺動(dòng)，則操作腔61的稀釋血漿40由于存在所述空間61a而在操作腔61中移動(dòng)，在該攪拌時(shí)撞擊攪拌肋63，因而更加切實(shí)地得到攪拌。藉此，即使在試劑的比重大的情況下，也使試劑不會(huì)沉淀，更有效地發(fā)揮作用，-工序 9-接著，將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)(5000rpm 7000rpm)后，如圖17(b)所示，與操作腔61的試劑反應(yīng)后的稀釋血漿通過連接通路64流入分離腔66，再通過20 40秒維持高速旋轉(zhuǎn)而將含有操作腔61內(nèi)所生成的非HDL凝集成分和HDL成分的稀釋血漿成分進(jìn)行離心分離。在該實(shí)施方式中，以將在使檢查對(duì)象的成分與試劑反應(yīng)時(shí)阻礙所述反應(yīng)的成分于前一工序中排除的方式構(gòu)成，通過在操作腔61使稀釋血漿與試劑反應(yīng)，從而對(duì)阻礙后一工序的反應(yīng)的特定成分進(jìn)行凝集處理，藉由在下一工序中進(jìn)行離心分離來排除所述凝集物。此外，保持于毛細(xì)管區(qū)56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力移送至測定室52b、52c的外周側(cè)，從而進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。在這里，通過反復(fù)進(jìn)行分析用儀器1的旋轉(zhuǎn)和停止的動(dòng)作，可以促進(jìn)試劑與稀釋血漿的攪拌，因此與僅基于擴(kuò)散的攪拌相比，可以切實(shí)地在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行攪拌。-工序 10-接著，如果使轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)停止，包含稀釋血漿40中的HDL成分的稀釋血漿成分被吸至形成于分離腔66的壁面的毛細(xì)管腔69，經(jīng)由與毛細(xì)管腔69連通的連接流路70如圖18(a)所示流至計(jì)量流路80，被保持規(guī)定量。此外，分離腔66內(nèi)的含非HDL凝集成分的稀釋血漿40被吸入連接分離腔66與溢流腔81a的具有虹吸管形狀的連接流路68內(nèi)。此外，移送至測定室52b、52c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過毛細(xì)管力再次被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c。如圖18(a)所示，毛細(xì)管腔69的最外周的位置以浸沒在保持于分離腔66的稀釋血漿的方式朝外周方向伸長而形成。
通過這樣形成毛細(xì)管腔69，上清的稀釋血漿比比重大的沉淀物優(yōu)先地被毛細(xì)管腔 69吸出，經(jīng)由連接流路70向計(jì)量流路80移送除去了沉淀物的含有HDL成分的稀釋血漿40。-工序 11-將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)GOOOrpm 6000rpm)后，如圖 18(b)所示，保持于計(jì)量流路80的稀釋血漿40在作為與連通大氣的大氣開放腔83的連接部的彎曲部84的位置斷開，恰好規(guī)定量的稀釋血漿流入測定室52a。此外，分離腔66和連接通路70、毛細(xì)管腔69內(nèi)的稀釋血漿40經(jīng)由虹吸管形狀的連接流路68流入溢流腔81a。此外，保持于毛細(xì)管區(qū)56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力移送至測定室52b、52c的外周側(cè)，進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。在這里，移送至溢流腔81a的稀釋血漿40隨著分析用儀器1的旋轉(zhuǎn)的停止而被填充至與連通大氣的溢流腔81b連接的溢流流路82c，因此溢流腔81a的出口與大氣隔斷而內(nèi)部形成負(fù)壓。因此，可以防止稀釋血漿40從溢流腔81a經(jīng)連接流路68流出。-工序 12-接著，使轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)停止后，移送至測定室5 的含有HDL成分的稀釋血漿40 通過毛細(xì)管力如圖19(a)所示被吸至毛細(xì)管區(qū)56a，這時(shí)開始圖23(a)所示的試劑58al、 58a2的溶解，開始稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑的反應(yīng)。在這里，在測定室52a中，因?yàn)橐獧z測HDL-膽固醇，所以作為HDL測定試劑的試劑 58al和58a2中的被干燥承載的試劑58al是酶試劑，具體地使用了膽固醇酯酶(東洋紡社制造)、膽固醇脫氫酶(天野酶制劑公司制造)和心肌黃酶(東洋紡社制造)。被干燥承載的試劑58a2是作為介質(zhì)(^ Π -—夕)的顯色試劑，具體地使用了 NAD+(東方酵母公司制造)和WST-8 (同仁化學(xué)公司制造)此外，移送至測定室52b、52c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過毛細(xì)管力再次被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c。-工序 13-將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)后，如圖19(b)所示，保持于毛細(xì)管區(qū)56a、56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力移送至測定室52a、52b、52c的外周側(cè)，進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。對(duì)于移送至測定室52a的稀釋血漿40，也通過反復(fù)進(jìn)行工序11和工序12的動(dòng)作來促進(jìn)試劑與稀釋血漿所含有的HDL-膽固醇的試劑的反應(yīng)，因此與僅基于擴(kuò)散的攪拌相比，可以切實(shí)地短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行攪拌。-工序 14-將分析用儀器1沿逆時(shí)針方向(Cl方向)或順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng) (IOOOrpm 1500rpm)，在各測定室52a、52b、52c通過光源112與光檢測器113之間的時(shí)刻， 運(yùn)算部110讀取光檢測器113的檢出值，算出特定成分的濃度。還有，在工序7和工序11 中，稀釋血漿40流入各測定室52a、52b、52c時(shí)，在各測定室52a、52b、52c通過光源112與光檢測器113之間的時(shí)機(jī)，運(yùn)算部110讀取光檢測器113的檢出值，從而可以算出與試劑反應(yīng)前的吸光度，因此通過將該吸光度作為測定室52a、52b、52c的參照數(shù)據(jù)用于運(yùn)算部110 的計(jì)算處理，可以改善測定精度。
另外，流入保持腔53的規(guī)定量的稀釋血漿40在與試劑反應(yīng)的同時(shí)，通過離心力的作用向測定室5 移送，進(jìn)行測定，所以也不出現(xiàn)試劑的溶解程度的分布，能夠期待提高測定精度。另外，按照保持腔53、操作腔61、分離腔66、計(jì)量流路80、測定室52a、毛細(xì)管區(qū) 56a和測定室52a的順序通過離心力進(jìn)行移送，能夠高效將HDL成分送到測定室52a，因此液體試樣的損失也可以很少，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)于受試者容易接受的檢查。在上述實(shí)施方式中，測定室中通過光學(xué)方法讀取信息而根據(jù)衰減量來測定成分， 但在測定室中通過電學(xué)方法讀取試劑與試樣的反應(yīng)產(chǎn)物的信息來測定成分的情況下也同樣。該情況下，作為使用電極進(jìn)行信息讀取時(shí)的介質(zhì)，可使用鐵氰化鉀等。在所述實(shí)施方式中，為了提高承載在操作腔61的HDL膽固醇分析用試劑和試樣的攪拌效率，配置了攪拌肋63，但也可在毛細(xì)管區(qū)56a、56b、56c形成同樣的攪拌肋以提高試劑和試樣的攪拌效率。(實(shí)施方式2)就實(shí)施方式1中的具體試劑進(jìn)行詳細(xì)的說明。圖25 圖27示出本發(fā)明的實(shí)施方式2。分析的工序1-工序7的具體例與實(shí)施方式1相同，所以就工序8及其以后的工序進(jìn)行具體的說明。對(duì)于與實(shí)施方式1相同的部件標(biāo)以相同的符號(hào)，進(jìn)行說明。結(jié)束工序7，在工序8中，停止轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)，使分析用儀器1處于圖17(a)所示的位置，以60 120Hz的頻率控制轉(zhuǎn)臺(tái)101而使分析用儀器1產(chǎn)生士 Imm左右的擺動(dòng)，將保持于保持腔53的稀釋血漿40經(jīng)由以浸沒于稀釋血漿40的液面的方式形成于保持腔53 的側(cè)壁的連接部59通過毛細(xì)管力的作用移送至操作腔61。然后，以10 40Hz的頻率控制轉(zhuǎn)臺(tái)101，對(duì)如圖所示的承載于操作腔61的試劑67a、67b與稀釋血漿40進(jìn)行攪拌，使稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑反應(yīng)。這里，操作腔61是到達(dá)測定室5 之前的微通道構(gòu)造的流路。此外，移送至測定室52b、52c的稀釋血漿40通過毛細(xì)管力如圖17(a)所示被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c，這時(shí)開始試劑58bl、58b2、58b3、58cl、58c2的溶解，開始稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑的反應(yīng)。接著，將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)后，如圖17(b)所示，與操作腔61的試劑反應(yīng)后的稀釋血漿通過連接通路64流入分離腔66，再通過維持高速旋轉(zhuǎn)而將操作腔61內(nèi)生成的凝集物離心分離。在這里，在該實(shí)施方式中，以將在使檢查對(duì)象的成分與試劑反應(yīng)時(shí)阻礙所述反應(yīng)的成分于前一工序中排除的方式構(gòu)成，通過在操作腔61使稀釋血漿與試劑反應(yīng)，從而對(duì)阻礙后一工序的反應(yīng)的特定成分進(jìn)行凝集處理，藉由在下一工序中進(jìn)行離心分離來排除所述凝集物。此外，保持于毛細(xì)管區(qū)56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力被移送至測定室52b、52c的外周側(cè)，從而進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。接著，使轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)停止后，稀釋血漿40被吸至形成于分離腔66的壁面的毛細(xì)管腔69，經(jīng)由與毛細(xì)管腔69連通的連接流路70如圖18(a)所示流至計(jì)量流路80，從而
保持規(guī)定量。此外，分離腔66內(nèi)的含凝集物的稀釋血漿40被吸入連接分離腔66與溢流腔81a
18的具有虹吸管形狀的連接流路68內(nèi)。此外，移送至測定室52b、52c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過毛細(xì)管力再次被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c。將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)后，如圖18(b)所示，保持于計(jì)量流路80的稀釋血漿40在作為與連通大氣的大氣開放腔83的連接部的彎曲部84的位置斷開， 恰好規(guī)定量的稀釋血漿流入測定室52a。此外，分離腔66和連接通路70、毛細(xì)管腔69內(nèi)的稀釋血漿40經(jīng)由虹吸管形狀的連接流路68流入溢流腔81a。此外，保持于毛細(xì)管區(qū)56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力被移送至測定室52b、52c的外周側(cè)，從而進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。接著，使轉(zhuǎn)臺(tái)101的旋轉(zhuǎn)停止后，移送至測定室52a的稀釋血漿40通過毛細(xì)管力如圖19(a)所示被吸至毛細(xì)管區(qū)56a，這時(shí)開始試劑58al、58a2的溶解，開始稀釋血漿40內(nèi)所含的特定的成分與試劑的反應(yīng)。此外，移送至測定室52b、52c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過毛細(xì)管力再次被吸至毛細(xì)管區(qū)56b、56c。將轉(zhuǎn)臺(tái)101沿順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)后，如圖19(b)所示，保持于毛細(xì)管區(qū)56a、56b、56c的試劑與稀釋血漿的混合溶液通過離心力移送至測定室52a、52b、52c的外周側(cè)，從而進(jìn)行試劑與稀釋血漿的攪拌。將分析用儀器1沿逆時(shí)針方向(Cl方向)或順時(shí)針方向(C2方向)旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)，在各測定室52a、52b、52c通過光源112與光檢測器113之間時(shí)機(jī)，運(yùn)算部110讀取光檢測器 113的檢出值，算出特定成分的濃度。在測定室52a中定量測定HDL膽固醇時(shí)，作為試劑67a和67b，使用如下制得的物質(zhì)。在從血液標(biāo)本中去除HDL以外的脂蛋白即非HDL時(shí)，需要聚陰離子和二價(jià)陽離子。 通常作為聚陰離子，可以如上所述選自磷鎢酸、磷鉬酸、鎢酸、鉬酸、它們的無機(jī)鹽類、或者葡聚糖硫酸酯、肝素、硫酸直鏈淀粉、硫酸支鏈淀粉等的硫酸多糖類，但是考慮到溶解性和以固體狀態(tài)長期穩(wěn)定配置在分析用儀器上的必要性的情況下，較好是上述聚陰離子中的無機(jī)化合物，即較好選自磷鎢酸或磷鎢酸鹽、磷鉬酸或磷鉬酸鹽的至少一種。作為二價(jià)陽離子，可以如上所述選自鈣、鎂、錳、鈷、鎳、鍶、鋅、鋇、銅的至少一種，但是如果考慮到在分析用儀器內(nèi)進(jìn)行酶反應(yīng)，則可能使酶失活的金屬陽離子是不理想的；如果考慮到獲取的難易程度，則較好選自鈣和鎂。如果還考慮到溶解性，則較好為鎂；如果考慮到潮解性，則較好使用硫酸鹽，即硫酸鎂。此外，較好在所述的磷鎢酸鈉和硫酸鎂的混合物中進(jìn)一步添加硫酸鈣，其具有使結(jié)晶狀態(tài)變化、從而提高試劑的溶解性的作用。磷鎢酸鈉20mg/ml硫酸鎂40mg/ml硫酸鈣12mM琥珀酸二鈉15mg/ml非HDL的除去方法中，首先制備所述組成的試劑，將20μ 1的該試劑滴入試管，使其干燥。以磷酸緩沖生理鹽水(ΡΗ7.4)將從普通人采集到的血液標(biāo)本稀釋為4倍，將該標(biāo)本200 μ 1添加到所述干燥過的試劑中，通過漩渦攪拌器攪拌45秒后，靜置75秒，以1500G 離心分離30秒鐘所生成的非HDL的凝集。標(biāo)本的稀釋倍數(shù)如果為2倍以上，則本實(shí)施例的試劑可直接使用，但是如果標(biāo)本的稀釋倍數(shù)為2倍以下，則要對(duì)各試劑成分的濃度進(jìn)行調(diào)整才能使用。分取除去了非HDL的上清液，將液中的膽固醇(相當(dāng)于HDL膽固醇)通過株式會(huì)社日立高新技術(shù)制造7020型自動(dòng)分析裝置且使用積水醫(yī)療株式會(huì)社制“ 二 V卞吁卞卜-CH0”進(jìn)行測定。作為試劑的潮解性的判斷方法，將試劑干燥承載在樹脂基板上，在氣溫30°C濕度 80%的條件下暴露30分鐘后，以500G進(jìn)行離心，使得樹脂基板的水平方向上受到離心力， 通過離心力方向是否有試劑的流出來判斷有無潮解性。該潮解性的有無的判斷理由是，分析用儀器1在內(nèi)部的標(biāo)本移送等中利用了離心力，因而在受到離心力的狀態(tài)下試劑不飛散成為重要的判斷基準(zhǔn)。關(guān)于所述步驟中的非HDL膽固醇的除去率和潮解性的有無，將本試劑、不含有琥珀酸二鈉的參照試劑、以及添加了琥珀酸二鈉以外的添加劑的試劑的比較示于圖25。在這里，作為所述的添加劑，如圖25所示對(duì)如下物質(zhì)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。二羧酸中，對(duì)琥珀酸二鈉、戊二酸、葡糖酸鈉進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。氨基酸中，對(duì)丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸鈉、纈氨酸、組氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸鈉、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸、賴氨酸·鹽酸、精氨酸、半胱氨酸、組氨酸 鹽酸、蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酰替甘氨酸(- 'J ^ - 'J > )、乙酰甘氨酸 (r-t 'J ν -J > )、作為氨基酸樣化合物的牛磺酸進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。糖醇中，對(duì)麥芽糖醇、葡萄糖醇、乳糖醇、甘露糖醇進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。糖類中，作為單糖類對(duì)葡萄糖、木糖進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，作為二糖類對(duì)蔗糖、海藻糖進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，作為三糖類對(duì)麥芽三糖、蜜三糖、乳糖進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。關(guān)于非HDL膽固醇除去率大大超過100%的原因被推測為是由于發(fā)生了 HDL膽固醇本身也被除去的過度或異常反應(yīng)所致。另外，關(guān)于潮解性，添加劑的種類和濃度是重要的因素，圖25的潮解性的欄中所示為作為參考的不易潮解的添加濃度條件。雖然已知存在許多超過不含有添加劑的參照試劑的非HDL膽固醇除去率25%的有效的添加劑，但更重要的是在更短時(shí)間內(nèi)除去標(biāo)本中的非HDL膽固醇，以及為了以固體狀態(tài)穩(wěn)定地配置在分析用儀器上而沒有潮解性。從圖25可知，使用不含琥珀酸二鈉的公知的參照試劑，非HDL膽固醇的除去率為 25%,是不夠的，且具有潮解性，反之，含有琥珀酸二鈉的本試劑的非HDL膽固醇的除去率為92%，可以兼顧高除去率和沒有潮解性。本申請(qǐng)所示的非HDL膽固醇的除去率由(總膽固醇濃度-預(yù)處理后的膽固醇濃度)/(總膽固醇濃度-HDL膽固醇濃度的真值)X 100算得。雖然可以說是近100%左右的高效的添加劑，但是該數(shù)值依賴于所述的預(yù)處理?xiàng)l件，所以對(duì)數(shù)值的解釋是相對(duì)的解釋。 由此，在應(yīng)用于本實(shí)施例所示的分析儀器的情況下，評(píng)價(jià)相對(duì)于HDL膽固醇的真值的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，滿足作為國際膽固醇認(rèn)證組織的CRMLN(Cholesterol Reference Method Laboratory Network)所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)(決定系數(shù)> 0.97 的添加劑的條件是非HDL膽固醇的除去率落入100士20%的范圍的添加劑。由此，作為最適合于本實(shí)施例的所示的分析儀器的添加劑，因?yàn)榫哂袃?yōu)異的除去率和沒有潮解性，所以除了琥珀酸二鈉以外，還可以是葡糖酸鈉、丙氨酸、甘氨酸或者纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇和甘露糖醇。另外，關(guān)于這些添加劑的降低潮解性的添加濃度，琥珀酸二鈉、葡糖酸鈉、丙氨酸、 甘氨酸或者纈氨酸以及組氨酸在5mg/ml以上的濃度下具有效果，麥芽糖醇和甘露糖醇在 lmg/ml以上10mg/ml以下的濃度下具有效果。通過圖沈來對(duì)將所述的本試劑以固體狀態(tài)配置在分析用儀器1的操作腔61上來測定HDL膽固醇濃度的情況進(jìn)行說明。首先在步驟Sl中，將血液標(biāo)本導(dǎo)入作為標(biāo)本導(dǎo)入部的誘導(dǎo)部17中。作為導(dǎo)入方法，可以將指尖采血所得的血液直接滴注于注入部13，或者也可以用注射器等將血液采集于采血管，使用移液管等器具將血液由采血管取出并滴注于注入部13。在步驟S2中，將導(dǎo)入的血液標(biāo)本移送至作為血細(xì)胞分離部的分離腔23b、23c，通過離心力將血細(xì)胞成分和血漿成分分離。作為血液標(biāo)本，并不限于全血，血清的導(dǎo)入也是可以的，此時(shí)也可將分離腔23b、23c省略掉。另外，關(guān)于標(biāo)本的移送，通過將毛細(xì)管力、虹吸管結(jié)構(gòu)和離心力進(jìn)行組合來進(jìn)行。在步驟S3中，將分離腔23b、23c所分離的血漿成分移送至作為標(biāo)本定量部的計(jì)量流路38，定量分取任意量的標(biāo)本。在步驟S4中，將定量后的標(biāo)本移送至作為標(biāo)本稀釋部的混合腔39，將標(biāo)本稀釋到任意的稀釋倍數(shù)。該標(biāo)本的稀釋倍數(shù)由分析系統(tǒng)的檢測靈敏度和分析用儀器所需的液體量等進(jìn)行設(shè)定。在步驟S5中，將稀釋后的標(biāo)本移送至作為稀釋標(biāo)本定量部的計(jì)量流路47a，從稀釋標(biāo)本中定量分取任意量的標(biāo)本。在步驟S6中，將該定量后的標(biāo)本移送至作為以固體狀態(tài)配置的預(yù)處理試劑承載部的操作腔61。通過該操作腔61的試劑67a和67b使非HDL凝集。在步驟S7中，移送至作為非HDL分離部的分離腔66，通過離心力將非HDL的凝集除去。在步驟S8中，將殘留有HDL的上清液部分移送至作為酶試劑承載部的毛細(xì)管區(qū) 56a。這一系列的非HDL的分離除去動(dòng)作以進(jìn)行60秒鐘的攪拌，其后不靜置，以500G進(jìn)行 30秒鐘的離心分離進(jìn)行。在毛細(xì)管區(qū)56a中以固體狀態(tài)配置有與膽固醇進(jìn)行特異反應(yīng)，根據(jù)膽固醇的濃度進(jìn)行顯色反應(yīng)的公知的酶、色原體等試劑58al和58a2。在步驟S9中，將在毛細(xì)管區(qū)56a根據(jù)HDL膽固醇的濃度顯色了的標(biāo)本移送至作為測定部的測定室52a，由測定顯色程度的裝置照射光來測定其吸光度。通過事先制成的校正曲線由該標(biāo)本的吸光度換算成膽固醇濃度，由此可以求出標(biāo)本中的HDL膽固醇濃度。圖27是使用分析用儀器1對(duì)從普通人所采集到的血液標(biāo)本進(jìn)行HDL膽固醇濃度測定的結(jié)果，以通過株式會(huì)社日立高科技制7020型自動(dòng)分析裝置且使用了積水醫(yī)療株式會(huì)社制HDL-膽固醇試劑盒“二 > 7 f 7卜N-HDL”所得的測定值作為參照值示出。可知，在通過使用了本試劑的分析用儀器1進(jìn)行的HDL膽固醇濃度測定中，相對(duì)于參照值具有相關(guān)系數(shù)為0. 979的良好的線性，即使是短時(shí)間的預(yù)處理也具有足夠的HDL膽固醇濃度的測定能力。另外，因?yàn)楸驹噭┮怨腆w狀態(tài)配置在分析用儀器上，所以可將分析用儀器本身小型化，因?yàn)楸緦?shí)施例所需的血液標(biāo)本量為十幾微升，能夠以較少的標(biāo)本量在短時(shí)間內(nèi)以高精度自動(dòng)地測定HDL膽固醇濃度，所以對(duì)于POCT所定的提高醫(yī)療質(zhì)量和減輕患者負(fù)擔(dān)是有用的。在對(duì)所述添加劑進(jìn)行篩選時(shí)，雖然將落入100士20%的范圍作為最適合的添加劑條件，但是與單獨(dú)使用參照試劑的情況的非HDL膽固醇的除去率為25%相比，即使將篩選條件擴(kuò)大至非HDL膽固醇的除去率超過25%且落入100+20%，也可以實(shí)現(xiàn)分析裝置的高性能化。通過擴(kuò)大到所述條件而被篩選的所述添加劑能夠使用圖25的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的戊二酸、?；撬帷⑵咸烟谴?、乳糖醇、木糖、蔗糖、海藻糖、麥芽三糖、蜜三糖和乳糖。通過擴(kuò)大到所述條件而得到的所述添加劑中的各個(gè)添加劑的添加濃度分別是使用戊二酸、?；撬?、乳糖醇、木糖、蔗糖、海藻糖、麥芽三糖、蜜三糖和乳糖時(shí)，其濃度分別為5mg/ml以上，使用葡萄糖醇時(shí)，其濃度為5mg/ml以上20mg/ml以下左右。另外，在圖25的實(shí)施例中雖然添加上述添加劑中的任一種作為添加劑、且以試劑 67a和67b作為預(yù)處理試劑，但是即使在含有有效的添加劑中的任一種或其的化合物中的至少一種的情況下，也是同樣的。另外，從分析用試劑的候選項(xiàng)中選定適合的分析用試劑時(shí)，考慮到上文中實(shí)施的工序的條件，選擇以下的選定條件。將如下的試劑選定為適合的分析用試劑，即，所述試劑含有聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物、以及一種以上的化合物，在干燥狀態(tài)下與生物試樣接觸后，攪拌45秒，靜置75秒，將所生成的非HDL的凝集以1500G離心分離30秒后的上清液中的非高密度脂蛋白膽固醇除去率為100士20%，且干燥時(shí)在氣溫?cái)z氏度為30度、 濕度為80%的環(huán)境下以500G進(jìn)行5分鐘的離心后無潮解產(chǎn)生。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明有助于實(shí)現(xiàn)對(duì)用于從生物等采集的液體的成分分析的分析用儀器的小型化和高性能化。
權(quán)利要求
1.一種分析用試劑，所述試劑是在分析生物試樣所含的高密度脂蛋白膽固醇時(shí)，使高密度脂蛋白以外的脂蛋白凝集的分析用試劑，其特征在于，在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有琥珀酸、葡糖酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇中的任何一種或其化合物中的至少一種以上。
2.一種分析用試劑，所述試劑在分析生物試樣所含的高密度脂蛋白膽固醇時(shí)，使高密度脂蛋白以外的脂蛋白凝集的分析用試劑，其特征在于，在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有二羧酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、?；撬?、糖醇、單糖類的木糖、二糖類或者三糖類中的任意一種或其化合物中的至少一種以上。
3.如權(quán)利要求2所述的分析用試劑，其特征在于，所述二羧酸是琥珀酸、戊二酸或者葡糖酸。
4.如權(quán)利要求2所述的分析用試劑，其特征在于，所述糖醇是麥芽糖醇、葡萄糖醇、乳糖醇或者甘露糖醇。
5.如權(quán)利要求2所述的分析用試劑，其特征在于，所述二糖類為蔗糖、乳糖或者海藻糖。
6.如權(quán)利要求2所述的分析用試劑，其特征在于，所述三糖類為蜜三糖或者麥芽三糖。
7.如權(quán)利要求1或2所述的分析用試劑，其特征在于，所述聚陰離子化合物是選自磷鎢酸或磷鎢酸鹽、磷鉬酸或磷鉬酸鹽中的至少一種。
8.如權(quán)利要求1或2所述的分析用試劑，其特征在于，所述二價(jià)陽離子化合物是選自鎂離子化合物或鎂離子化合物鹽、鈣離子化合物或鈣離子化合物鹽中的至少一種。
9.一種分析用儀器，該裝置是具有通過離心力向測定室移送試樣液的微通道結(jié)構(gòu)、用于讀取所述測定室中的反應(yīng)液的信息的分析用儀器，其特征在于，將如下固體狀態(tài)的分析用試劑承載在到達(dá)所述測定室之前的微通道結(jié)構(gòu)的流路中；所述的試劑是在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有琥珀酸、葡糖酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、 組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇中的任何一種或其化合物中的至少一種以上的試劑。
10.一種分析用儀器，該裝置是具有通過離心力向測定室移送試樣液的微通道結(jié)構(gòu)、用于讀取所述測定室中的反應(yīng)液的信息的分析用儀器，其特征在于，將如下固體狀態(tài)的分析用試劑承載在到達(dá)所述測定室之前的微通道結(jié)構(gòu)的流路中；所述的試劑是在在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有二羧酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、?；撬?、糖醇、單糖類的木糖、二糖類或者三糖類中的任意一種或其化合物中的至少一種以上。
11.一種分析用試劑的選定方法，其特征在于，從分析用試劑的候選項(xiàng)中選定適合的分析用試劑時(shí)，選定如下的物質(zhì)作為適合的分析用試劑所述物質(zhì)含有聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物、以及一種以上的化合物，在干燥狀態(tài)下與生物試樣接觸后，攪拌，靜置，將所生成的非HDL的凝集進(jìn)行離心分離后的上清液的非高密度脂蛋白膽固醇除去率為 100 士 20 %，且在干燥時(shí)離心后無潮解產(chǎn)生。
12.如權(quán)利要求9或10所述的分析用儀器，其特征在于，具有保持腔，該保持腔供作為液體試樣的規(guī)定量的稀釋血漿流入；操作腔，該操作腔形成在鄰接于所述保持腔的周向的位置上，通過毛細(xì)管力所作用的連接部與所述保持腔連接，且具有高密度脂蛋白膽固醇分析用試劑；分離腔，該分離腔形成在比所述操作腔更靠外周側(cè)的位置上，通過毛細(xì)管力作用的間隙的連接流路進(jìn)行連接；計(jì)量流路，該計(jì)量流路與所述分離腔的周向鄰接，通過毛細(xì)管力作用的連接流路與所述分離腔連接；測定室，該測定室形成在比所述計(jì)量流路更靠外周側(cè)的位置上；毛細(xì)管區(qū)，該毛細(xì)管區(qū)形成在比所述測定室更靠內(nèi)周側(cè)的位置上，具有酶試劑和介質(zhì)；所述分析用儀器形成如下功能的結(jié)構(gòu)，即增大所述離心力將在所述毛細(xì)管區(qū)反應(yīng)后的反應(yīng)溶液移送到所述測定室的外周側(cè)，讀取停留在所述測定室的外周側(cè)的所述反應(yīng)溶液的信息，檢測所述液體試樣的HDL。
13.如權(quán)利要求12所述的分析用儀器，其特征在于，承載所述操作腔中的所述高密度脂蛋白膽固醇分析用試劑的試劑承載部的間隙以比所述操作腔的間隙窄的方式從所述操作腔突出形成。
14.如權(quán)利要求12所述的分析用儀器，其特征在于，在所述操作腔上形成沿半徑方向伸長的攪拌肋，所述攪拌肋的高度比所述操作腔的外周壁低。
全文摘要
本發(fā)明是以在由聚陰離子化合物和二價(jià)陽離子化合物組合形成的試劑中含有琥珀酸、葡糖酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、組氨酸、麥芽糖醇或者甘露糖醇中的任何一種或其化合物中的至少一種以上作為特征，可改善試劑的干燥化和潮解性。
文檔編號(hào)G01N35/00GK102472757SQ20108003029
公開日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月15日
發(fā)明者丸山祐樹, 佐伯博司, 渡部賢治, 田頭幸造, 石橋憲二 申請(qǐng)人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社