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一種肌鈣蛋白i和肌鈣蛋白t的雙通道檢測(cè)卡的制作方法

文檔序號(hào):5873082閱讀:248來(lái)源:國(guó)知局
專(zhuān)利名稱(chēng):一種肌鈣蛋白i和肌鈣蛋白t的雙通道檢測(cè)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
一種同時(shí)檢測(cè)肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡,涉及一種同時(shí)檢測(cè)肌鈣 蛋白的器具,屬于血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
肌鈣蛋白(troponin,Τη)是與心肌收縮有關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白,調(diào)節(jié)心肌的收 縮和舒張。由肌鈣蛋白I (tropomyosin inhibitory component, TnI)、肌鈣蛋白 T (tropomyosin-binding component, TnT)、肌 丐蛋白 C(calinmbinding component, TnC) 3 個(gè)亞基組成。TnI分子量為21kD,是肌原纖維ATP酶的抑制性亞單位,它可抑制肌球蛋白 與肌動(dòng)蛋白的偶聯(lián),松弛骨骼肌或心肌。TnT分子量為37kD,是與原肌球蛋白結(jié)合的亞單 位,它將肌鈣蛋白C和肌鈣蛋白I連接到肌動(dòng)蛋白和原肌蛋白上,從而在肌纖維收縮和舒展 工程中發(fā)揮中介作用。其為一球形單鏈,分子量可隨種屬不同而略有差異。TnC分子量為 18kD,呈晶體結(jié)構(gòu),是肌鈣蛋白的Ca2+結(jié)合亞基,是僅有的與鈣離子結(jié)合的亞單位,骨骼肌 和心肌中的TnC是相同的,與鈣離子結(jié)合后促使細(xì)胞絲活化,引起肌纖維收縮。3個(gè)亞單位 結(jié)合與原肌球蛋白一起構(gòu)成Tm-Tn復(fù)合體,調(diào)節(jié)肌肉收縮和舒張的力量和速度。心肌細(xì)胞胞漿游離cTnl只占4. 1 %,大部分cTnl與肌鈣蛋白T及C亞單位結(jié)合 在一起以復(fù)合體的形式存在。當(dāng)心肌因缺血、缺氧而發(fā)生變化性和壞死時(shí),游離于胞漿內(nèi)的 cTnl可迅速透過(guò)受損細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞間質(zhì),隨之進(jìn)入血管和淋巴管內(nèi),血清水平于3-5h內(nèi) 升高;而結(jié)合的cTnl由于分子質(zhì)量相對(duì)較大,延遲透出胞膜進(jìn)入血流,其肌原纖維不斷崩 解破壞并逐漸分解出cTnl,血清水平于15-24h達(dá)高峰,可升高至正常人的5_50倍,5_20d 后降至正常。心肌細(xì)胞內(nèi)游離于胞漿的CTnT約5 %,約95 %的cTnT結(jié)合于肌鈣蛋白-原肌球蛋 白復(fù)合物中。在心肌細(xì)胞受到可逆性損害時(shí),細(xì)胞膜的完整性被破壞,游離的cTnT首先釋 放入血液中,構(gòu)成短暫而迅速的升高;如發(fā)生不可逆的心肌細(xì)胞損傷,結(jié)合部分的cTnT繼 續(xù)從細(xì)肌絲上降解下來(lái),導(dǎo)致血清cTnT持續(xù)性升高。在這個(gè)過(guò)程中,可形成2個(gè)高峰,一般 于2-4h內(nèi)血中cTnT開(kāi)始上升,于第22h左右形成第一個(gè)高峰,此時(shí)血清中cTnl為正常人 的40-120倍,然后緩慢下降,第2-5天出現(xiàn)第二個(gè)高峰,峰值為正常人的30-40倍,持續(xù)半 個(gè)月左右后降至正常。目前,心肌肌鈣蛋白的檢測(cè)在心肌缺血損傷的臨床診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用非常 廣泛。如急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(包括隱性心絞痛和不穩(wěn)定心絞痛,急性心肌梗死等)、心肌 炎、心肌創(chuàng)傷、圍手術(shù)期心臟并發(fā)癥、膿毒血癥導(dǎo)致的左心衰竭等等。此外還可用于溶栓治 療效果觀察,心肌損傷面積的估計(jì),心臟移植后排異反應(yīng)觀察,某些藥物療效觀察等。目前,現(xiàn)有技術(shù)對(duì)于心肌肌鈣蛋白的檢測(cè)主要采用酶免疫檢測(cè)試劑盒、自動(dòng)化免 疫分析儀等,也有單一檢測(cè)肌鈣蛋白I或肌鈣蛋白T的膠體金快速檢測(cè)卡。但到目前為止, 沒(méi)有同時(shí)檢測(cè)這兩種物質(zhì)的檢測(cè)器具。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能同時(shí)檢測(cè)肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的器具,克服現(xiàn) 有技術(shù)進(jìn)行單獨(dú)檢查的缺陷,能有效地應(yīng)用于心肌缺血損傷的臨床診斷和預(yù)后判斷。本發(fā)明的技術(shù)方案一種肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡,它是在長(zhǎng)條 扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2),檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣 孔(4),測(cè)試條(2)是由支承背板(5)上粘貼五種元件組成支承背板中部疊置粘貼硝酸纖 維素膜(6),支承背板一端部上疊置粘貼吸水膜(10),另一端部上疊置粘貼樣品墊(9),吸 水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜一端搭接,在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭 接部,兩者之間夾置粘貼兩段膠體金膜(7)和(8),膠體金膜(7)是含抗肌鈣蛋白I抗體膠 體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜,膠體金膜(8)是含抗肌鈣蛋白T抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維 膜,硝酸纖維素膜上有2條檢測(cè)帶和1條質(zhì)控帶,檢測(cè)帶(11)含抗肌鈣蛋白I抗體,檢測(cè)帶 (12)含抗肌鈣蛋白T抗體,質(zhì)控帶(13)含抗鼠抗體;測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi),樣品墊正 對(duì)加樣孔(4),硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔(3)。本發(fā)明的有益 效果用本發(fā)明檢測(cè)卡能同時(shí)檢測(cè)出患者血清或血漿中的肌鈣蛋白 I和肌鈣蛋白T,該檢測(cè)卡易于制備,且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用,使用方便,檢測(cè)快速,靈敏度高,結(jié)果 準(zhǔn)確。


圖1 肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、 檢測(cè)卡外殼,2、測(cè)試條,3、檢測(cè)窗孔,4、加樣孔。圖2 肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡的檢測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖。6、硝酸 纖維素膜,11、含抗肌鈣蛋白I抗體的檢測(cè)帶,12、含抗肌鈣蛋白T抗體的檢測(cè)帶,13、含抗鼠 抗體的質(zhì)控帶。圖3 檢測(cè)試條的硝酸玻璃纖維膜上顯示印跡示意圖。5、支承背板,6、硝酸纖維素 膜,7和8、膠體金膜,9、樣品墊,10、吸水膜。
具體實(shí)施例方式結(jié)合具體實(shí)施例參見(jiàn)附圖進(jìn)一步說(shuō)明如下一種肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡,它是在檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試 條2,檢測(cè)卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測(cè)試條2的設(shè)置參見(jiàn)附圖1,檢測(cè)卡外殼1為長(zhǎng)條扁平薄殼狀 殼體,長(zhǎng)7cm,寬2cm,厚0. 5cm,薄殼壁厚0. Icm,由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼1由殼蓋與 殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成,在檢測(cè)卡外殼1殼蓋上有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4。測(cè)試條2放置在檢測(cè) 卡外殼1的殼座內(nèi)。測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片,片長(zhǎng)約6. 0cm,片寬約0. 4cm,厚度小于2. 5mm。 測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5,為聚氯乙烯塑料薄片,厚約0. 5mm,長(zhǎng)6. Ocm,寬 0. 4cm ;支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6,硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長(zhǎng)2_2. 5cm,寬 0.4cm。硝酸纖維素膜6上有三條間隔開(kāi)的橫向顯示印跡帶,參見(jiàn)附圖3,三條顯示印跡帶 中,一條是檢測(cè)帶11,含抗肌鈣蛋白I抗體,另一條是檢測(cè)帶12,含抗肌鈣蛋白T抗體,第三 條是質(zhì)控帶13,含抗鼠抗體。支承背板5 —端部上疊置粘貼吸水膜10,支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊9,吸水膜10內(nèi)端與樣品墊9內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭 接,在樣品墊9與硝酸纖維素膜6的搭接部,兩者之間夾置粘貼兩段膠體金膜7和8,膠體金 膜7是含抗肌鈣蛋白I抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜,膠體金膜8是含抗肌鈣蛋白T抗 體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7及膠體金膜8各厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)0. 5-0. 6cm, 寬 0. 4cm。樣品墊 9 厚 0. 5-0. 8mm,長(zhǎng) 2cm,寬 0. 4cm。吸水膜 10 厚 0. 5-0. 8mm,長(zhǎng) 1. 6_2cm, 寬0. 4cm。膠體金膜7、膠體金膜8、樣品墊9及吸水膜10與硝酸纖維素膜搭接長(zhǎng)度為 0. 1-0. 2cm。吸水膜10材料是吸水紙,樣品墊9材料是吸水玻璃纖維膜。
測(cè)試條置外殼內(nèi),樣品墊9正對(duì)加樣孔4,硝酸纖維素膜6正對(duì)檢測(cè)窗孔3。檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng),在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 標(biāo)記抗肌鈣蛋白I和抗肌鈣蛋白T,在測(cè)試帶上分別吸附抗肌鈣蛋白I和抗肌鈣蛋白T,以 及質(zhì)控帶抗抗鼠抗體反應(yīng)。若樣品中含有相應(yīng)的待檢肌鈣蛋白I和/或肌鈣蛋白T存在, 即與相應(yīng)的膠體金標(biāo)記抗肌鈣蛋白I和/或抗肌鈣蛋白T發(fā)生反應(yīng),結(jié)合的免疫結(jié)合物與 在硝酸纖維素膜上的抗肌鈣蛋白I和/或抗肌鈣蛋白T反應(yīng),而呈現(xiàn)棕紅色印跡帶。樣品 中若不含相應(yīng)的待檢肌鈣蛋白I和/或肌鈣蛋白T時(shí),不呈現(xiàn)棕紅色印跡帶。主要反應(yīng)的 結(jié)果有以下5種情況1、如果顯示檢測(cè)帶11、12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶,表示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng) 性,說(shuō)明被檢測(cè)樣品中含有待測(cè)的肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T。2、反之,檢測(cè)帶11、12不顯示顏色,只有質(zhì)控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡,檢測(cè)結(jié)果為陰 性,表明被檢測(cè)樣品中不含有待測(cè)的肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T。3、如果檢測(cè)帶11不顯示顏色,檢測(cè)帶12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡,檢測(cè) 結(jié)果為陽(yáng)性,表明被檢測(cè)樣品中含有肌鈣蛋白T。4、如果檢測(cè)帶12不顯示顏色,檢測(cè)帶11和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡,檢測(cè) 結(jié)果為陽(yáng)性,表明被檢測(cè)樣品中含有肌鈣蛋白I。5、如果檢測(cè)帶11、12和質(zhì)控帶13均不顯色,則表明檢測(cè)試條失效。
權(quán)利要求
一種肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡,它是在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2),檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣孔(4),其特征在于測(cè)試條(2)是由支承背板(5)上粘貼五種元件組成支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6),支承背板一端部上疊置粘貼吸水膜(10),另一端部上疊置粘貼樣品墊(9),吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜一端搭接,在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部,兩者之間夾置粘貼兩段膠體金膜(7)和(8),膠體金膜(7)是含抗肌鈣蛋白I抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜,膠體金膜(8)是含抗肌鈣蛋白T抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜,硝酸纖維素膜上有2條檢測(cè)帶和1條質(zhì)控帶,檢測(cè)帶(11)含抗肌鈣蛋白I抗體,檢測(cè)帶(12)含抗肌鈣蛋白T抗體,質(zhì)控帶(13)含抗鼠抗體;測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi),樣品墊正對(duì)加樣孔(4),硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔(3)。
全文摘要
一種肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的雙通道檢測(cè)卡,屬于血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。檢測(cè)卡外殼內(nèi)有測(cè)試條,測(cè)試條由支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜,兩端部上分別粘貼吸水膜和樣品墊,其內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜一端搭接,在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部之間夾置粘貼兩段膠體金膜,分別是含肌鈣蛋白I單抗膠體金標(biāo)記物及肌鈣蛋白T單抗膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜,硝酸纖維素膜上有2條檢測(cè)帶,分別含抗肌鈣蛋白I抗體及抗肌鈣蛋白T抗體,另有一條質(zhì)孔帶含抗鼠抗體。樣品墊和硝酸纖維素膜分別正對(duì)加樣孔與檢測(cè)窗孔。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是能同時(shí)檢測(cè)出患者血清或血漿中含有的肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T,本檢測(cè)卡易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用,使用方便,檢測(cè)快速,靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/68GK101881775SQ201010197148
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2010年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月4日
發(fā)明者周堅(jiān), 熊曉芳 申請(qǐng)人:無(wú)錫安抗生物科技有限公司
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