專利名稱：：卡介菌多糖核酸注射液多糖快速測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及卡介菌多糖核酸注射液制備過(guò)程中多糖測(cè)定新工藝，特別涉及到卡介菌多糖核酸注射液配制中快速測(cè)定方法，采用碘法顯色獲得可靠的數(shù)據(jù)。
背景技術(shù)：
：卡介菌多糖核酸(BCGPolysaccharideandNucleic)具有調(diào)節(jié)人體的免疫功能、主要用于預(yù)防和治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘?，F(xiàn)有的卡介菌多糖核酸注射液制備全過(guò)程是取一定數(shù)量的原料放入容器內(nèi)，按比例加0.9%的氯化鈉溶液，攪拌溶解，再加活性炭脫色除熱原，然后脫炭過(guò)濾，除菌過(guò)濾，最后取樣測(cè)定含量，等待灌封。中間體含量控制根據(jù)《中國(guó)生物制品規(guī)程2000版》中卡介菌多糖核酸注射液制造及檢定規(guī)程，采用蒽酮法測(cè)定多糖含量，整個(gè)測(cè)定的時(shí)間需要3小時(shí)左右，目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家一般采用這種經(jīng)典的測(cè)定方法。我公司目前卡介菌多糖核酸注射液中間體測(cè)定方法是，采用碘法測(cè)定，測(cè)定時(shí)間只需數(shù)分鐘，而數(shù)據(jù)可靠。該方法的使用大大的縮短了生產(chǎn)時(shí)間，同時(shí)也降低了注射液配制過(guò)程中時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了卡介菌多糖核酸注射液制備過(guò)程中多糖測(cè)定新工藝，采用碘法測(cè)定多糖含量，獲得卡介菌多糖核酸注射液可靠數(shù)據(jù)?？ń榫嗵呛怂嶙⑸湟憾嗵强焖贉y(cè)定方法是取注射液中間體5毫升加2%的碘液100微升，搖勻后立即在分光光度計(jì)700納米波長(zhǎng)下讀取數(shù)據(jù)，即刻獲取多糖的含量，整個(gè)測(cè)定時(shí)間只有510分鐘。本發(fā)明縮短了生產(chǎn)時(shí)間，即采用碘對(duì)多糖特殊的顯色，在700納米獲得的數(shù)據(jù)與多糖的濃度完全成正比，符合比爾定律。實(shí)施例1卡介菌多糖核酸注射液多糖快速測(cè)定方法是取卡介菌多糖核酸注射液的中間體20毫升，分別取5毫升加入3支試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加2%的碘液100微升，搖勻后立即在分光光度計(jì)700納米波長(zhǎng)下讀取數(shù)據(jù)計(jì)算，即刻獲取多糖的含量，整個(gè)測(cè)定時(shí)間只有510分鐘。比較實(shí)施例1標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖管制備取無(wú)水葡萄糖，以生理氯化鈉溶液準(zhǔn)確稀釋至1.0mg/ml，為標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖儲(chǔ)備液。精確量取儲(chǔ)備液2.5ml容量瓶中，以生理氯化鈉溶液稀釋至刻度，為標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(100yg/ml)。樣品分別取卡介菌多糖核酸注射液中間體1.0毫升加入3支試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加新鮮配制的蒽酮混合液4.Oml混勻。標(biāo)準(zhǔn)品精確量取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(100μg/ml)0.0ml,0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml、1.0ml，加生理氯化鈉溶液補(bǔ)至1.0ml，然后將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品一起放入沸水浴20分鐘，拿出冷卻至室溫，在分光光度計(jì)上于620nm波長(zhǎng)測(cè)定A值。結(jié)果計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度與對(duì)應(yīng)A值求回歸公式，應(yīng)用該公式計(jì)算樣品多糖含量。整個(gè)測(cè)定的時(shí)間大約需3小時(shí)。新老多糖測(cè)定方法對(duì)比<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>注蒽酮法測(cè)定的時(shí)間包括做標(biāo)準(zhǔn)曲線歷年來(lái)碘法測(cè)定的數(shù)據(jù)與蒽酮法的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較2006年生產(chǎn)的卡介菌多糖核酸注射液中間體碘法測(cè)定與成品蒽酮法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2007年生產(chǎn)的卡介菌多糖核酸注射液中間體碘法測(cè)定與成品蒽酮法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2008年生產(chǎn)的卡介菌多糖核酸注射液中間體碘法測(cè)定與成品蒽酮法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據(jù)四年共318批多糖測(cè)定數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，碘法測(cè)定的平均值為0.3294，蒽酮法測(cè)定的平均值為0.3297，兩者之間的平均差是0.0003。極個(gè)別同一批號(hào)的絕對(duì)差是0.05，占3批，絕對(duì)差為0.04，占10批。本發(fā)明方法快速測(cè)定多糖的方法，大大縮短了卡介菌多糖核酸注射液生產(chǎn)時(shí)等待灌封時(shí)間，降低質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。便于針劑車間生產(chǎn)，縮短了整個(gè)生產(chǎn)周期，降低了生產(chǎn)總成本。雖然以上具體描述了本發(fā)明某些實(shí)施方案和實(shí)施例，但本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不脫離本發(fā)明基本精神和范圍的前提下可對(duì)本發(fā)明實(shí)施方案進(jìn)行各種修改和替換，而這些修改和替換均應(yīng)包括在本發(fā)明的等同范圍內(nèi)。權(quán)利要求卡介菌多糖核酸注射液多糖快速測(cè)定方法，其特征在于多糖測(cè)定新方法是取注射液中間體5毫升加2％的碘液100微升，搖勻后立即在分光光度計(jì)700納米波長(zhǎng)下讀取數(shù)據(jù)，即刻獲取多糖的含量，整個(gè)測(cè)定時(shí)間只有5～10分鐘。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了卡介菌多糖核酸注射液多糖快速測(cè)定方法是取注射液中間體5毫升加2％的碘液100微升，搖勻后立即在分光光度計(jì)700納米波長(zhǎng)下讀取數(shù)據(jù)，即刻獲取多糖的含量，整個(gè)測(cè)定時(shí)間只有5～10分鐘。本發(fā)明方法是快速測(cè)定卡介菌多糖核酸注射液對(duì)多糖含量，對(duì)于中間體含量的監(jiān)控起到至關(guān)重要的作用，縮短了整個(gè)生產(chǎn)周期，降低質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，降低了生產(chǎn)總成本。文檔編號(hào)G01N21/78GK101813631SQ20101013347公開(kāi)日2010年8月25日申請(qǐng)日期2010年3月26日優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日發(fā)明者劉小峰,江克光,趙贏,閻曉文申請(qǐng)人:浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司