專利名稱：硫代螺環(huán)內(nèi)酯在細胞內(nèi)次氯酸檢測中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種熒光檢測方法，尤其是涉及一種將硫代螺環(huán)內(nèi)酯作為熒光探針應用于檢測細胞內(nèi)產(chǎn)生的活性氧物種次氯酸(HClO)的方法。
背景技術(shù)：
活性氧是生物體產(chǎn)生的一系列化學性質(zhì)活潑、氧化能力強的含氧物質(zhì)的總稱?；?性氧不僅包括一些自由基，如羥自由基(·0Η)、超氧陰離子(02_·)、過氧自由基(R00 ·)等， 也包括一些非自由基，如過氧化氫(H2O2)、單線態(tài)氧(1O2)和次氯酸(HOCl)等。生物體自發(fā)產(chǎn)生的適量活性氧在信號轉(zhuǎn)換、神經(jīng)傳遞、免疫系統(tǒng)控制以及重要生 理活性物質(zhì)的合成與代謝等多種生命活動中，均發(fā)揮重要的積極作用。然而，當機體在外來 不良環(huán)境因素的脅迫下產(chǎn)生過量活性氧，或機體自身的抗氧化劑大量減少時，產(chǎn)生及積蓄 的過量活性氧則會誘導一系列有害的細胞及組織損傷，導致機體產(chǎn)生各種疾病。目前，許多 研究結(jié)果表明，人類許多重要疾病，如癌癥、冠狀動脈硬化等，均與活性氧的參與密切相關(guān)。由于活性氧在生物學過程中扮演的重要角色，因此迫切需要有效的檢測手段進行 更深入的觀察和了解它們的作用機制。但是，生物體系中存在活性氧含量低、反應活性高、 壽命短等不足，給活性氧檢測帶來了極大的困難。將熒光探針與顯微成像技術(shù)相結(jié)合的熒光探針技術(shù)，是人們探測微觀生命系統(tǒng)的 有力武器，具有高靈敏性及易于數(shù)據(jù)采集的特點，尤其是具有提供目標生物分子瞬時和空 間信息的突出優(yōu)勢，而成為實時、在體檢測生物體內(nèi)活性物質(zhì)的有力工具。尋求優(yōu)良性能 的熒光探針用于建立可靠的細胞內(nèi)活性氧的熒光檢測方法，成為目前的研究熱點。迄今， 人們應用不同的熒光探針，對不同的活性氧物種實現(xiàn)了檢測，如熒光探針二(2，4_ 二硝基 苯磺酸酯基)二氟熒光素檢測細胞中超氧陰離子自由基02_·(參見文獻Maeda，H.et al, J. Am. Chem. Soc. 2005，127，68)、熒光探針二硼酸酯基熒光素檢測細胞中H2O2 (文獻Chang， Μ. C. et al, J. Am. Chem. Soc. 2004，126，15392.)等。次氯酸(HClO)由生物體內(nèi)髓過氧化物酶(myeloperoxidase，ΜΡ0)催化H2O2氧化 Cl_反應產(chǎn)生，是重要的活性氧之一，在諸多的生理、病理過程中扮演重要角色。然而，較之 于其他的活性氧物種，人們對其生物學過程中的具體行為了解較少，其中的重要原因之一 是有效 HClO 探針的匱乏(Dan Yang, et al, Org. Lett.，2008，10，2171.)。近幾年來，已報 道了 HClO 的熒光探針數(shù)種，如 DCFH、DHR(參見文獻:A. Bizyukin, et al, Bull. Exp. Biol. Med. 1995，119,347.)、APF (文獻Τ· Nagano, J. Biol. Chem. 2003，278，3170.)、MitoAR(文 獻:T. Nagano. J. Am. Chem. Soc. 2007，129，10324.)等，但以上探針除了能夠檢測 HC10，對其 他的活性氧物種亦有不同程度的熒光響應。由于每種活性氧都有其各自獨特的生理或病 理作用，因此對專一性強的HClO熒光探針的需求顯得尤為迫切。已報道的另外一些HClO 探針中，有的需在PH12的苛刻的操作條件(文獻:H. Μ. Ma, Chem. Eur. J. 2008，14，4719.)， 或水溶性差(文獻:W. Tan, et al，Chem. Eur. J. 2009，15,2305.)，無法真正應用于生物體系 中。目前，能夠真正應用于細胞中HClO檢測的熒光探針極少，需在繁瑣苛刻的條件下多步驟高成本制備而得(文獻:T. Nagano, J. Am. Chem. Soc. 2007，129，7313.；文獻 J. Tae, Org. Lett. 2009，11，(4) ,859.；文獻:R. Weissleder, P. Libby，Chem. Biol. 2007，14，1221.)。三苯甲烷類螺環(huán)化合物具有獨特的“閉_開”環(huán)結(jié)構(gòu)變化從而引起其光學信號發(fā) 生從無到強的急劇變化的性質(zhì)，成為人們構(gòu)建““ο -οη”光開關(guān)型熒光探針理想的分子 框架(V. Dujols, F. Ford and A. W. Czarnik, J. Am. Chem. Soc.，1997，119，7386 ;J. Y. Kwon, J. Y. Jang, Y. J. Lee, W. Nam and J. Y. Yoon，J. Am. Chem. Soc.，2005，127，10107)。本申請人將 硫原子巧妙地替代羅丹明B內(nèi)酯中與螺碳原子共價相連的氧原子，合成的硫代羅丹明B螺 環(huán)內(nèi)酯成功地實現(xiàn)了對水中汞離子的高靈敏檢測(Chem. Commun.，2008，1859-1861)，合成 路線異常簡單，產(chǎn)率高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對已報道的細胞內(nèi)次氯酸(HC10)熒光探針存在的不足與缺 陷，提供一種高靈敏、高選擇性的用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針。本發(fā)明的另一目的在于提供硫代螺環(huán)內(nèi)酯在細胞內(nèi)次氯酸檢測中的應用。所述用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針的結(jié)構(gòu)為一類含有咕噸(Xanthene)環(huán)母
體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類熒光探針，其結(jié)構(gòu)式為 其中，R為羥基，或二乙基胺基，或乙基胺基；S為硫原子。本發(fā)明所述檢測細胞中HClO的熒光探針的結(jié)構(gòu)為一類含有咕噸(Xanthene)環(huán)母 體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類化合物。所述含有咕噸(Xanthene)環(huán)母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類化合物是指羅丹明 (Rhodamine)類化合物或熒光素(Fluorescein)類化合物。所述羅丹明(Rhodamine)類化合物是指羅丹明B(Rhodamine B)衍生物或羅丹明 6G (Rhodamine 6G)衍生物。所述熒光素(Fluorescein)類化合物是指熒光素(Fluorescein)衍生物或萘熒光 素(Naphthofluorescein)衍生物。 所述羅丹明B (Rhodamine B)衍生物或羅丹明6G (Rhodamine 6G)衍生物是 指硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯(Thiospirolactone Rhodamine B)、二硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi) 酯(DithiospirolactoneRhodamine B)或硫代羅丹明 6G 螺環(huán)內(nèi)酯(Thiospirolactone Rhodamine 6G)等。所述熒光素(Fluorescein)衍生物或萘熒光素(Naphthofluorescein)衍生物是 指硫代熒光素螺環(huán)內(nèi)酯(Thiospirolactone Fluorescein)或硫代萘熒光素螺環(huán)內(nèi)酯(Thi ospiroIactoneNaphthofluorescein)等。 以上硫代螺環(huán)內(nèi)酯熒光探針均以相應螺環(huán)內(nèi)酯為原料，按本申請人已報道的合成 路線(Chem. Commun.，2008，1859-1861) —步法合成而得(備注二硫代羅丹明B內(nèi)酯合成 所用硫化試劑“勞氏試劑”兩倍于羅丹明B內(nèi)酯摩爾當量數(shù)，其余步驟與其他探針合成相似)。本發(fā)明所述硫代螺環(huán)內(nèi)酯同時對次氯酸亦具有高靈敏的熒光響應特性，將其應用于細胞中次氯酸檢測的熒光探針，選擇性高。探針本身光穩(wěn)定性強、無光照自氧化、對目標 物響應迅速、與目標物結(jié)合的產(chǎn)物抗光漂白能力強，細胞滲透性好，無細胞毒性。檢測目標 物次氯酸靈敏度高，專一性強，細胞中其他活性氧均不干擾檢測。是性能優(yōu)異的細胞用熒光 探針。本發(fā)明所提出的檢測次氯酸的方法依賴于以下兩個化學反應機制1)次氯酸作為活性氧中最強的氧化劑，易于進攻加成含硫基團，生成含-S-Cl基 團之化合物中間體。(參見文獻1、P.V.Antwerpen，K. Ζ. Boudjeltia, J. Ne~ve. et al.， Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005, 337,82 ；2、L. K. Folkes, L. P. Candeias, P. ffardman. Arch. Biochem. Biophy. 323(1) 120—126，1995)。2)次氯酸特異性地與探針分子中與螺碳原子共價相連的硫原子發(fā)生加成反應，生 成含-S-CI基團之化合物中間體，從而立即觸發(fā)開環(huán)反應的“扳機”。含-S-Cl基團之中間 體繼而水解生成相應的含羧基的熒光團。由于探針硫代螺環(huán)內(nèi)酯的閉環(huán)形式不存在共軛電 子結(jié)構(gòu)而表現(xiàn)為無色、無熒光，而一旦發(fā)生開環(huán)反應即“釋放”出剛性的、大共軛結(jié)構(gòu)的發(fā)色 團(熒光團)，實現(xiàn)吸收及熒光從“無”到“有”的表觀信號的急劇變化。反應過程如下所 示 由上式可見，本發(fā)明的起效基團為硫代螺環(huán)內(nèi)酯，咕噸(Xanthene)環(huán)母體結(jié)構(gòu)上 的不同取得基團R最終僅構(gòu)成探針的不同吸收及熒光波長，不影響探針分子與HClO的作用。本發(fā)明提供了一種基于新穎的螺環(huán)“開_閉”環(huán)光學信號傳感機制而設計的一類 對HClO具有特性光學響應的探針分子。不同于文獻報道的是，該類熒光探針與HClO發(fā)生 特異性作用后，能夠同時產(chǎn)生三種光學性質(zhì)(即顏色、分光、熒光)從“無”至“有”的轉(zhuǎn)變， 大大拓展了其潛在的使用范圍。其性能在以下實施例和附圖中給予詳細說明。


圖1為ρΗ7. 4，硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯濃度為1. 0 X 10_5mol/L條件下，不同濃度 HClO存在時的吸收光譜變化(由下而上HClO濃度依次為0，5. 0，6. 0，8. 0，9. Oymol/L)。 在圖1中，橫坐標為波長(nm)，縱坐標為吸光度。圖2為pH7. 4，硫代羅丹明B內(nèi)酯濃度為1. 0 X 10_5mol/L條件下，不同濃度HClO存 在時的熒光發(fā)射光譜變化(由下而上HClO濃度依次為0，2.0，4.0，7.0，9. Oymol/L)。在 圖2中，橫坐標為波長(nm)，縱坐標為相對熒光強度；激發(fā)波長為525nm，激發(fā)、發(fā)射單色器 的狹縫均為5nm。圖3為pH7. 4，硫代羅丹明B內(nèi)酯濃度為1. 0X 10_5mol/L條件下不同種類的活性氧分別單獨存在下的熒光發(fā)射光譜。在圖3中，橫坐標為波長(nm)，縱坐標為相對熒光強度。圖4為pH7. 4，濃度為1. 0X 10_5mol/L的硫代羅丹明B內(nèi)酯本身(曲線1)以及濃 度為4.0ymol/LHC10存在下(曲線2)。在圖4中，橫坐標為時間(s)，縱坐標為相對熒光強度。圖5為pH7. 4，濃度為1. 0X 10_5mol/L的硫代羅丹明B內(nèi)酯在不同濃度的HClO存在下的相對熒光強度工作曲線圖。在圖5中，橫坐標為次氯酸濃度(ymol/L)，縱坐標為相 對熒光強度。圖6為本發(fā)明所提供的次氯酸探針分別在不同濃度存在下細胞存活百分比(活細 胞數(shù)/總細胞數(shù)X 100 %，均為3個復孔平均值)。在圖6中，橫坐標為探針濃度(μ mol/ L)，縱坐標為細胞存活數(shù)(％) ； ■曲線1，·曲線2，▲曲線3，▼曲線4， 曲線5，曲線1 5分別對應硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯、二硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯、硫代羅丹明6G螺環(huán)內(nèi)酯、硫 代熒光素螺環(huán)內(nèi)酯、硫代萘熒光素螺環(huán)內(nèi)酯；圖7為硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯熒光探針對人嗜中性粒細胞中HClO熒光成像圖。圖 7A :ΜΡ0抑制前；圖7B :ΜΡ0抑制后。在圖7中，標尺為IOym0圖8為人嗜中性粒細胞中HClO熒光成像圖。圖8A 硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯；圖8B 二硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯；圖8C 硫代羅丹明6G螺環(huán)內(nèi)酯；圖8D硫代熒光素螺環(huán)內(nèi)酯；圖 8E硫代萘熒光素螺環(huán)內(nèi)酯。
具體實施例方式本發(fā)明所述用于檢測細胞內(nèi)次氯酸的熒光探針的化學性能說明如下。一、在體外水溶液中熒光探針的化學性能測試(一 )測試液的配制步驟在IOmL的刻度試管中，依次加入5. OmL濃度為0. 2mol/L的pH 7. 40磷酸緩沖液， 一定量的標準HClO溶液(事先以分光光度法準確標定(參見文獻=Dazda M. and Margerum D. W. Inorg. Chem. 1994，33，118.)，以3次蒸餾水稀釋至刻度。搖勻。加入0. ImL的濃度為 1. OX 10-3mol/L的硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯的二甲亞砜溶液，搖勻，立即進行相關(guān)測定。如上操作，不加入HClO或其他活性氧之溶液，為空白試液的配制。(二)水溶液中的熒光探針光譜特性及性能。以下結(jié)合圖例說明。 由圖1顯示，硫代羅丹明B內(nèi)酯本身在可見波長區(qū)幾乎無吸收(無色)，在HClO存 在下，體系的吸光度顯著增強，在561nm處有一最大吸收波長。吸光度隨著HClO濃度的增 大而增強。該現(xiàn)象表明，探針硫代羅丹明B內(nèi)酯對HClO具有靈敏而迅速的顯色效應。由圖2顯示，硫代羅丹明B內(nèi)酯本身幾乎無熒光，在HClO存在下，體系的相對熒光 強度顯著增強，在579nm處有一最大熒光發(fā)射波長。相對熒光強度隨著HClO濃度的增大而 增強。該現(xiàn)象表明，探針硫代羅丹明B內(nèi)酯對HClO具有靈敏而迅速的熒光信號響應。圖3為pH7. 4，硫代羅丹明B內(nèi)酯濃度為1. 0X 10_5mol/L條件下不同種類的活性氧 分別單獨存在下的熒光發(fā)射光譜。激發(fā)波長為525nm，激發(fā)、發(fā)射單色器的狹縫均為5nm。曲 線1為HClO濃度為4. 0 μ mol/L存在時的熒光發(fā)射光譜；曲線2為硫代羅丹明B內(nèi)酯(空 白)的熒光發(fā)射光譜；曲線3為其他活性氧物種分別單獨存在時的熒光發(fā)射光譜，這里所指 的其他活性氧物種分別是過氧化氫(H2O2),單態(tài)氧(1O2), —氧化氮(NO)，超氧陰離子自由基(O2-)，超氧亞硝基陰離子(0N00—)，羥基自由基(·0Η)，它們的濃度分別均為40.0μπιΟ1/ L0由圖3顯示，硫代羅丹明B內(nèi)酯本身幾乎無熒光，HClO存在下體系的相對熒光強 度顯著增強。相比之下，濃度為HClO的10倍當量的其他常見活性氧分別單獨存在時，均幾 乎不引起明顯的熒光信號。該現(xiàn)象表明，探針對目標物HClO具有高度的熒光特異性識別。圖4為ρΗ7. 4，濃度為1. 0X 10_5mol/L的硫代羅丹明B內(nèi)酯本身(曲線1)以及濃 度為4.0 μ mol/LHC10存在下(曲線2)，以波長為525nm的激發(fā)光在反應開始至600s時間 范圍內(nèi)持續(xù)照射的相對熒光強度。由圖4顯示①由曲線1可見，探針本身在持續(xù)光照下保持無熒光；②由曲線2可 見，探針與HClO的作用幾乎在瞬間發(fā)生，并在約60s內(nèi)即達到熒光信號的最大值；③由曲線 2可見，探針與HClO作用之產(chǎn)物在持續(xù)光照下熒光強度保持不變。以上現(xiàn)象表明，本發(fā)明提供的熒光探針具備如下優(yōu)越的化學性能①光穩(wěn)定性強、 無光照自氧化；②對目標物響應迅速；③目標物結(jié)合的產(chǎn)物抗光漂白現(xiàn)象能力強。圖5為pH7. 4，濃度為1. 0X 10_5mol/L的硫代羅丹明B內(nèi)酯在不同濃度的HClO存 在下的相對熒光強度工作曲線圖。激發(fā)波長為525nm，發(fā)射波長579nm，激發(fā)、發(fā)射單色器狹 縫均為5nm。由圖5顯示，HClO在0. 5 7. 0 μ mol/L的濃度范圍內(nèi)，探針的熒光強度與HClO濃 度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。二，細胞實驗(一 )探針的細胞毒性實驗濃度為4X IO5個/mL的Hela細胞液ISOuL加至96孔板后，加不同母液濃度的探 針溶液 20uL (1 % DMSO, 99% PBS)使探針終濃度分別為 0. 5，1. 0，5. 0，10. 0，50. 0 μ mol/L,同 時以PBS作空白試驗。每個濃度及空白均復孔3個。0)2培養(yǎng)箱中37°C孵育4h。取出，臺 盼藍染色。40倍顯微鏡下計算鏡下細胞數(shù)。圖6為本發(fā)明所提供的HClO探針分別在不同濃度存在下細胞存活百分比(活細 胞數(shù)/空白實驗活細胞數(shù)X 100%，均為3個復孔平均值)。圖6中的曲線1 5分別對應 硫代羅丹明B內(nèi)酯、二硫代羅丹明B內(nèi)酯、硫代羅丹明6G內(nèi)酯、硫代熒光素內(nèi)酯、硫代萘熒 光素內(nèi)酯。由圖6顯示，本發(fā)明所提供的探針在濃度0. 5 50 μ mol/L范圍內(nèi)細胞存活率均 大于95%，表明本發(fā)明提供的探針無細胞毒性。( 二 )熒光探針檢測細胞內(nèi)HClO的性能測試1.細胞的預處理步驟健康志愿者抗凝鮮血數(shù)ml，以中性粒細胞分離液梯度密度法分離得中性粒細胞。 以pH7. 4的PBS溶液調(diào)整細胞濃度4X IO5個/mL。2.探針對細胞中HClO檢測的特異性實驗實驗步驟細胞培養(yǎng)皿兩組(各3個)分別加入1份體積的上述細胞液后，第一組 的3個培養(yǎng)皿分別加入0. 5份體積pH7. 4的PBS溶液；第二組的3個培養(yǎng)皿分別加入0. 5 份體積的濃度為80 μ mol/L的對氨基苯甲酰胼溶液(髓過氧化物酶的抑制劑，配制方法 對氨基苯甲酰胼固體1. 2mg溶解于100mlpH7. 4的PBS溶液中，得對氨基苯甲酰胼濃度為8(^11101/1的溶液)。搖勻，0)2培養(yǎng)箱中37°C孵育60 90min。取出后，各皿分別加入0. 5 份體積的4. OX 10_5mOl/L的硫代羅丹明B內(nèi)酯(1% DMSO，99% PBS)，搖勻。CO2培養(yǎng)箱中 37°C孵育30 45min。共聚焦熒光成像，熒光激發(fā)波長均為515nm。結(jié)果如圖7A，7B。如前所述，細胞中HClO僅由髓過氧化物酶(MPO)催化細胞中過氧化氫(H2O2)氧化 氯離子(Cr)產(chǎn)生。MPO在血液中噬中性粒細胞中大量表達，因而本實驗以人血噬中性粒細 胞為細胞模型。
由圖7A可見，中性粒細胞在探針存在下產(chǎn)生明亮的熒光，而無核的紅細胞不表達 MPO(參見文獻“臨床血液學與檢驗(第四版)，許文榮等編著”)，呈現(xiàn)無熒光。該結(jié)果表 明探針不僅對HClO具有靈敏的熒光響應，而且具有優(yōu)異的選擇性。同時，也表明了探針具 有良好的細胞滲透性。由圖7B可見，當噬中性粒細胞與MPO特異性的抑制劑對氨基苯甲酰胼(參見文 獻:R. Weissleder，P. Libby，Chem. Biol. 2007，14，1221)共存時，細胞呈現(xiàn)弱熒光。該現(xiàn)象 進一步確證了探針對細胞內(nèi)HClO檢測的高度專一性。3.本發(fā)明所提供探針對細胞中HClO熒光成像實驗實驗步驟各細胞培養(yǎng)皿分別加入1份體積的上述細胞液后，再分別加入1份體 積的2. OX 10_5mOl/L的硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯、二硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯、硫代羅丹明6G 螺環(huán)內(nèi)酯、硫代熒光素螺環(huán)內(nèi)酯、硫代萘熒光素螺環(huán)內(nèi)酯探針溶液(1% DMS0,99% PBS)，搖 勻，CO2培養(yǎng)箱中37°C孵育30 50min。共聚焦熒光成像。結(jié)果如圖8A 8E，圖8A 8E 分別對應硫代羅丹明B內(nèi)酯、二硫代羅丹明B內(nèi)酯、硫代羅丹明6G內(nèi)酯、硫代熒光素內(nèi)酯、 硫代萘熒光素內(nèi)酯熒光成像圖；熒光激發(fā)波長分別為515nm，515nm，515nm，488nm，635nm。
權(quán)利要求
用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于其結(jié)構(gòu)為一類含有呫噸環(huán)母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類熒光探針，其結(jié)構(gòu)式為其中，R為羥基，或二乙基胺基，或乙基胺基；S為硫原子。FSA00000013038500011.tif
2.如權(quán)利要求1所述用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述一類含有咕 噸環(huán)母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類熒光探針為一類含有咕噸環(huán)母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類化合物。
3.如權(quán)利要求1所述用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述含有咕噸環(huán) 母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類化合物是指羅丹明類化合物或熒光素類化合物。
4.如權(quán)利要求3所述用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述羅丹明類化 合物是指羅丹明B衍生物或羅丹明6G衍生物。
5.如權(quán)利要求3所述的用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述熒光素類 化合物是指熒光素衍生物或萘熒光素衍生物。
6.如權(quán)利要求4所述的用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述羅丹明B 衍生物或羅丹明6G衍生物是指硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯、二硫代羅丹明B螺環(huán)內(nèi)酯或硫代羅 丹明6G螺環(huán)內(nèi)酯。
7.如權(quán)利要求5所述的用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，其特征在于所述熒光素衍 生物或萘熒光素衍生物是指硫代熒光素螺環(huán)內(nèi)酯或硫代萘熒光素螺環(huán)內(nèi)酯。
8.硫代螺環(huán)內(nèi)酯在細胞內(nèi)次氯酸檢測中的應用。
全文摘要
硫代螺環(huán)內(nèi)酯在細胞內(nèi)次氯酸檢測中的應用，涉及一種熒光檢測方法。提供一種高靈敏、高選擇性的用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針，以及硫代螺環(huán)內(nèi)酯在細胞內(nèi)次氯酸檢測中的應用。用于檢測細胞中次氯酸的熒光探針的結(jié)構(gòu)為一類含有呫噸環(huán)母體結(jié)構(gòu)的三苯甲烷類熒光探針；硫代螺環(huán)內(nèi)酯熒光探針均以相應螺環(huán)內(nèi)酯為原料。硫代螺環(huán)內(nèi)酯同時對次氯酸亦具有高靈敏的熒光響應特性，將其應用于細胞中次氯酸檢測的熒光探針，選擇性高。探針本身光穩(wěn)定性強、無光照自氧化、對目標物響應迅速、與目標物結(jié)合的產(chǎn)物抗光漂白能力強，細胞滲透性好，無細胞毒性。檢測目標物次氯酸靈敏度高，專一性強，細胞中其他活性氧均不干擾檢測。
文檔編號G01N21/64GK101870864SQ20101010852
公開日2010年10月27日 申請日期2010年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日
發(fā)明者詹心琪, 許金鉤, 鄭洪 申請人:廈門大學