專利名稱：一種快速檢測農藥殘留的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于化學農藥的檢測技術領域，具體涉及有機磷農藥熒光檢測方法。
背景技術：
有機磷農藥是目前使用最廣泛的化學農藥，在農業(yè)生產中作為防治農作物病蟲害 的主要生產資料，具有重要的作用。有機磷農藥的使用大大的提高了農作物的產量，但是它 在給人類帶來了經濟效益的同時，也對人們身體健康及外部生態(tài)環(huán)境造成了危害。環(huán)境中 殘存的有機磷類農藥不僅會影響人體的各項機能，還會對人體的神經系統(tǒng)及其它系統(tǒng)機能 結構構成潛在的危害，甚至會降低肌體的免疫功能，表現(xiàn)有"三致"危害(致癌、致畸、致突 變)。從上個世紀40年代至今，有機磷農藥的使用已經走過了 60多年，目前在大氣、水、土 壤、食品、蔬菜瓜果中，甚至在人跡罕至的南極和北極，也檢測出了殘留的有機磷農藥成分。 有機磷農藥殘留已經成為當今世界上主要的污染源之一。因此，如何降低有機磷農藥的危 害，引起了當前國際社會的普遍關注。 為了保障人類健康和維護生態(tài)環(huán)境，必須加強有機磷類農藥殘留的檢測和防治。 由于有機磷類農藥品種多、化學結構和性質各異、待測組分復雜，尤其是近年來，高效、低 毒、低殘留的有機磷農藥品種不斷涌現(xiàn)，對有機磷農藥殘留檢測技術提出了更高的要求。因 此，實現(xiàn)微痕量有機磷農藥的快速、靈敏度高、在線實時的檢測，可以實現(xiàn)對食品、農產品的 質量評估和環(huán)境安全評價，監(jiān)控有機磷農藥污染，在保障人民生命安全和身體健康方面也 具有重要意義。 最近幾年的有機磷農藥殘留檢測研究集中在生物傳感器上，生物傳感器主要基于 乙酰膽堿酯酶的抑制原理或者直接利用有機磷水解酶檢測。AChE通過水解乙酰膽堿為乙 酸和膽堿從而阻斷乙酰膽堿在神經突觸上的傳遞。而有毒的有機磷化合物可以抑制AChE， 導致體內乙酰膽堿的聚集從而影響肌肉反應并且導致重要器官的壞死最終導致人體死亡。 AChE可以被有機磷化合物、氨基甲酸酯類農藥和其他化合物抑制，所以AChE傳感器的選擇 性較差，只能被用來預測有機磷農藥殘留的總量或是進行粗篩。 現(xiàn)有的檢測有機磷農藥殘留地方法，如2008年11月5日公開的，公開號為 CN101299029A的"一種檢測有機磷農藥殘留試紙的制備及其使用方法"專利，公開的方法 是以新鮮的母雞或母鴨的血為原料制備乙酰膽堿酯酶，將乙酰膽堿酯酶固定于濾紙上，將 濾紙冷凍干燥后切片，使用時配制底物液，顯色液和增敏液。其原理是利用增敏液處理后 的有機磷農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制作用，使乙酰膽堿酯酶的底物乙酸萘酯不能分解，從 而加入固藍B鹽后顯示的顏色深淺不一致。該方法的缺點為(l)乙酰膽堿酯酶的價格較 為昂貴；(2)乙酰膽堿酯酶不易保存，需要在冷凍條件下保存；(3)該方法所需的藥品較多， 操作過程較為繁瑣；(4)該方法只能粗略的定性檢測有機磷農藥，不能實現(xiàn)定量檢測。又如 2008年2月27日公開的，公開號為CN101131350A的"一種檢測微痕量甲基磷酸二甲酯的 方法"專利，公開的方法是以植物酯酶液和TPPS為指示劑，在液相光譜檢測裝置的反應池中 加入TPPS-植物酯酶復合溶液指示有機磷農藥D匪P對植物酯酶的抑制程度，通過反應前后
6吸光度的變化測定農藥殘留量。在該專利中，采用的藥品為植物酯酶，對DMMP的檢測限為 10ppt。該方法的缺點為(l)植物酯酶的價格較為昂貴；(2)植物酯酶不易保存，需要在冷 凍條件下保存；(3)該方法只能實現(xiàn)定性的檢測DMMP，不能對有機磷農藥實現(xiàn)定量檢測。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有的檢測有機磷類農藥殘留方法的不足之處，提供一種快 速檢測有機磷農藥的方法，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點，可以實現(xiàn)對微痕量有機磷農藥 殘留實時、快速的檢測。 本發(fā)明的原理是利用卟啉類化合物與有機磷農藥作用產生熒光強度的變化對有 機磷農藥殘留進行檢測。卟啉類化合物是以卟吩為母體的一種大環(huán)高分子化合物，由于具 有較大的平面大環(huán)結構和顯色能力很強的特點，是一類超高靈敏顯色劑。卟吩環(huán)上的四個 meso-(5，10，15，20)位以及八個P -(2， 3， 7，8， 12， 13， 17， 18)位均可被其它基團取代而生 成一系列的卟吩衍生物，即嚇啉。卟啉環(huán)的各個原子基本處于同一平面，形成一個極易受到 吡咯環(huán)和次甲基的電子效應影響的擁有11個共軛雙鍵的高度共軛體系。這一結構特征使 卟啉既表現(xiàn)出剛性平面帶來的分子識別能力，又表現(xiàn)出共軛體系導致的豐富的電子光譜； 同時高度共軛體系使其化學性質比較穩(wěn)定、顏色較深。因而卟啉具有剛柔性、電子緩沖性、 光電磁、光敏性和高度的化學穩(wěn)定性以及光譜響應寬等許多特性。金屬卟啉，由于配位鍵的 形成使得卟啉環(huán)的對稱性和軸向配位作用增強，結合位點增多，性質較非金屬卟啉更為活 潑。卟啉與金屬卟啉具有優(yōu)良的光敏性能，是檢測糧食及食品中痕量的有機磷類農藥殘留 的理想敏感材料。卟啉對農藥殘留敏感的光學本質是由于作用和n-Ji作用的存在， 主要可以反映到卟啉的吸收光譜、熒光光譜或反射光譜的變化上。卟啉化合物與有機磷農 藥分子作用后，導致卟啉化合物的熒光強度增強，并且熒光強度增強與加入的有機磷農藥 的濃度呈線性關系，由此可以定量的檢測有機磷農藥的含量。 本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種檢測有機磷農藥的方法，利用市購的帶程序的 熒光分光光度計，以卟啉化合物為熒光指示劑和顯色劑，經過制備卟啉溶液和有機磷農藥 溶液及液態(tài)卟啉檢測溶液，檢測液態(tài)卟啉檢測溶液中有機磷農藥的熒光光譜，然后對熒光 光譜進行比較分析來檢測待測樣品液中的殘留的有機磷農藥。其具體步驟如下 [ooog] (1)卟啉溶液的配制 以嚇啉(即四苯基嚇啉、單羥基四苯基嚇啉、四苯基鋅嚇啉、四苯基五氟鋅嚇啉、 四苯基銪卟啉、四苯基錳卟啉等中的l種)為熒光指示劑和顯色劑，以有機溶劑乙腈為定容 劑，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為l : 259.0 325.5的比例，分別將卟啉加入 有機溶劑乙腈中，攪拌溶解后，就分別制備出6種卟啉質量濃度為0. 003 0. 004g/L的卟 啉溶液，分別放置于冰箱中，并在3 4t:下避光保存，備用。
(2)配制已知有機磷農藥溶液
1)配制農藥母液 選取市售的有機磷農藥(如氧化樂果、敵敵畏、水胺硫磷、毒死蜱)，分別加入有機
溶劑乙腈中，攪拌均勻，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比為i : 106 1012，配制4種 農藥母液。 2)配制液態(tài)卟啉檢測溶液
7
第(2)_1)步完成后，按照第(1)步制備出的1種卟啉溶液體積:第(2)_1)步制
備出的i種已知有機磷農藥母液的體積比為i : 1 2.5的比例，在第(i)步制備出的i
種卟啉溶液中，加入第(2)-l)步制備出的l種已知有機磷農藥母液，攪拌混合均勻后，就制 備出l種液態(tài)卟啉檢測溶液，直至在第(1)步制備出的6種卟啉溶液中，分別加完第(2)-l) 步制備出的4種已知有機磷農藥母液為止。然后，對每種液態(tài)卟啉檢測溶液，再用有機溶劑 乙腈進行稀釋，再分別配制出濃度梯度從小到大為2X 10—7 iU/L 0. 2 1/L的5個濃度梯 度的液態(tài)卟啉檢測溶液，最后共制備出120種液態(tài)卟啉檢測溶液。分別靜置5 15分鐘后 進行檢測。 (3)檢測已知有機磷農藥的基本熒光光譜 第(2)步完成后，對市購的裝載有程序的熒光分光光度計通電，預熱后打開熒光 分光光度計并設定掃描范圍為350nm-700nm、狹縫寬度為5nm、掃描速度為1000nm/min，再 根據(jù)第(1)步制備出的1種卟啉溶液(即四苯基卟啉、單羥基四苯基卟啉、四苯基鋅卟啉、 四苯基五氟鋅卟啉、四苯基銪卟啉、四苯基錳卟啉等溶液中的l種)設定相應的激發(fā)波長 414nm 452nm。然后在熒光分光光度計的檢測池中，再將第(2)_2)步制備出的l種相應 的液態(tài)卟啉檢測溶液按照濃度從低到高的順序，依次加入，分別進行測量和記錄相應的熒 光光譜，并通過熒光分光光度計的信號處理系統(tǒng)分別將其基本熒光光譜保存和打印輸出， 直至測量出第(2)-2)步制備出的120種液態(tài)卟啉檢測溶液的基本熒光光譜為止，并保存和 打印輸出，備用。 (4)檢測待測樣品的熒光光譜
1)待測樣品液的配制 第(3)步完成后，按照待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 1 2. 5 的比例，用有機溶劑乙腈對待測樣品(即小麥、高粱、玉米、大米等)進行沖洗，收集沖洗液， 即為待測樣品的殘留有機磷農藥溶液(簡稱待測樣品液)。
2)檢測待測樣品液的熒光光譜 第(4)-i)步完成后，按照第(i)步配制的i種卟啉溶液有機溶劑乙腈第
(4)-1)步制備出的待測樣品液的體積比為1 : 1 2.5 : 1.5 3.0的比例，將卟啉溶液
和有機溶劑及待測樣品液，混合攪拌均勻后，放入熒光分光光度計的檢測池中，通過熒光分 光光度計的程序測量其熒光光譜，并記錄保存及打印。 (5)分析判斷
1)定性判斷 第(4)步完成后，裝載有程序的熒光分光光度計自動將第(4)_2)步測量的熒光光 譜與其保存的第(3)步測量出的24種已知有機磷農藥的基本光譜逐一進行分析比較并判 斷當?shù)?4)_2)測得的熒光光譜與第(3)步測量的某一已知有機磷農藥的熒光光譜完全 一致時，則待測樣品中殘留有有機磷農藥，且殘留的有機磷農藥為該已知的有機磷農藥；否 則，該待測樣品中不含有該已知有機磷農藥。
2)定量分析 第(5)_1)步完成后，當待測樣品中殘留有有機磷農藥時，再將第(3)步測得的對 應的卟啉_已知有機磷農藥的5種不同濃度梯度的熒光光譜的最高峰的熒光強度，作標準 導數(shù)工作曲線，得到線性回歸方程F二klogC+b，然后將第(4)-2)步測得的待測樣品液的熒光光譜的最高峰的熒光強度F代入線性回歸方程，就精確確定待測樣品中殘留的有機磷農 藥的量C。 本發(fā)明在使用中，在選用熒光指示劑和顯色劑時，根據(jù)具體情況，可選用本發(fā)明所 述的檢測效果好的6種卟啉，也可選用其他卟啉。在選用定容劑時，可選用本發(fā)明方法所 用的乙腈作為有機溶劑，也可選用其他有機溶劑如乙酸乙酯、三氯甲烷、丙酮等。在測量已 知有機磷農藥的基本光譜中配制農藥母液時，可以選取本發(fā)明所述的常用的4種有機磷農 藥，也適用于其他有機磷農藥，選用的已知有機磷農藥種類越多，測量時雖繁雜些，但檢測 殘留有機磷農藥的種類也多些，檢測范圍也更寬些。在配制液態(tài)卟啉檢測溶液時，選用每種 液態(tài)卟啉檢測溶液的濃度梯度時，可選用本發(fā)明所述的5種梯度，也可是其它5種以上的梯 度，梯度越多，所作的線性回歸方程越準確，根據(jù)線性回歸方程計算出的有機磷農藥殘留量 越準確；最少不得少于5種。 本發(fā)明采用上述技術方案后，取得的主要效果如下 (1)操作簡單，便于實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。采用本發(fā)明檢測有機磷農藥不需要準備除 樣品外的其他試劑，可以直接利用市購的熒光分光光度計進行檢測。由于本發(fā)明采用的顯 色劑是液態(tài)存在，不需要固定，便于進行快速檢測。
(2)檢測靈敏度高。采用本發(fā)明對有機磷農藥進行檢測，由于卟啉化合物固有的較
高的摩爾吸光系數(shù)使得其對有機磷農藥具有較高的靈敏度，可以實現(xiàn)準確的檢測。
(3)檢測限低。采用本發(fā)明對有機磷農藥進行檢測，最低檢測限可至lppt，從而可
以精確檢測微痕量的有機磷農藥殘留。 (4)經濟效益高，本發(fā)明所用材料種類和用量及檢測設備都較少，操作程序簡單， 具有較高的經濟價值。 (5)操作簡單。本發(fā)明所采用的儀器為市售的熒光分光光度計，操作簡單，穩(wěn)定性 好。 (6)便于推廣應用。由于本發(fā)明方法簡單、操作簡便，只采用簡單設備且靈敏度高。 因而便于推廣應用。 本發(fā)明方法可以廣泛應用于糧食，食品等易含有有機磷農藥殘留的微痕量檢測， 也可用于蔬菜、水果等食品安全評估和環(huán)境監(jiān)測，具有廣泛的應用前景。


圖1為實施例1中四苯基五氟鋅卟啉用乙腈溶解后與不同濃度的有機磷農藥毒死 蜱作用的熒光光譜圖，圖2為圖1的波峰位置的放大圖。圖3為四苯基五氟鋅卟啉與毒死 蜱的熒光導數(shù)工作曲線，其線性方程為F = 1. 1871ogC+65. 391， R2 = 0. 9952。
具體實施例方式
下面結合具體實施方式
，進一步說明本發(fā)明。
實施例1 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟如下
(1)卟啉溶液的配制 以四苯基五氟鋅卟啉為原料，選取有機溶劑乙腈為定溶劑，按卟啉的質量有機
9溶劑乙腈的體積比為l : 259.0的比例，將四苯基五氟鋅卟啉加入有機溶劑乙腈中，攪拌溶 解后，制得濃度為0. 004g/L的四苯基五氟鋅卟啉溶液。放置于冰箱中，并在3t:下避光保 存，備用。 (2)配制已知有機磷農藥溶液
1)配制農藥母液 選取市售的有機磷農藥毒死蜱，加入有機溶劑乙腈中，攪拌均勻，其有機磷農藥
有機溶劑乙腈的體積比i : 1(T，配制濃度為lxio— 1/L的毒死蜱農藥母液。 2)配制液態(tài)嚇啉檢測溶液 第(2)_1)步完成后，按照第(1)步制備出的四苯基五氟鋅卟啉溶液體積第
(2)-i)步制備出的毒死蜱農藥母液的體積比為i : i的比例，再用有機溶劑乙腈進行稀釋，
分別配制出濃度梯度從小到大(為2X10—7iil/L、2X10—Vl/L、2X10—5iil/L、2X10—V 1/ L、2X10—3iU/L)的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，攪拌混合均勻，靜置10分鐘后進行檢測。
(3)檢測已知有機磷農藥的基本熒光光譜 第(2)步完成后，對市購的裝載有程序的熒光分光光度計通電，預熱后打開熒光 分光光度計并設定掃描范圍為350nm-700nm、狹縫寬度為5nm、掃描速度為1000nm/min，并 設定相應的激發(fā)波長為416nm。然后在熒光分光光度計的檢測池中按照第(2)_2)步制備出 的濃度從低到高的順序，依次加入，分別進行測量并記錄相應的熒光光譜，并通過熒光分光 光度計的信號處理系統(tǒng)分別將其基本熒光光譜保存和打印輸出備用。
(4)檢測待測樣品的熒光光譜
1)待測樣品液的配制 第(3)步完成后，按照小麥待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 1的
比例，用有機溶劑乙腈對待測樣品小麥進行沖洗，收集沖洗液，即為待測樣品的殘留有機磷
農藥溶液(簡稱待測樣品液)。 2)檢測待測樣品液的熒光光譜 第(4)_1)步完成后，按照第(1)步配制的四苯基五氟鋅卟啉溶液第(4)_1)步
選取的有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的小麥待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5
的比例，將卟啉溶液和有機溶劑乙腈及小麥待測樣品液，混合攪拌均勻后，放入熒光分光光 度計的檢測池中，通過熒光分光光度計的程序測量其熒光光譜，并記錄保存及打印。 (5)分析判斷
1)定性判斷 第(4)步完成后，裝載有程序的熒光分光光度計，自動將第(4)_2)步測量的熒光 光譜與其保存的第(3)步測量的已知有機磷農藥的基本光譜進行分析比較并判斷當?shù)?(4)_2)測得的熒光光譜與第(3)步測量的四苯基五氟鋅卟啉-毒死蜱液態(tài)卟啉檢測溶液的 熒光光譜完全一致，則待測樣品小麥中殘留有有機磷農藥，且殘留的有機磷農藥為毒死蜱。
2)定量分析 第(5)_1)步完成后，當待測樣品小麥中殘留有毒死蜱時，將第(3)步測得的已知 有機磷農藥毒死蜱的5個不同濃度梯度的熒光光譜的最高峰的熒光強度F作標準工作曲 線，得到線性回歸方程F = 1. 1871ogC+65. 391，然后將第(4)_2)步測得的小麥待測樣品液 的熒光光譜的最高峰的熒光強度F = 62. 5代入線性回歸方程，從而可以確定待測樣品小麥中殘留的有機磷農藥毒死蜱的量C = 0. 0037 1/L。
實施例2 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟同實施例l，其中
第(1)步中以四苯基鋅卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 295.5的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基鋅卟啉溶液。在3. 5。C下避光保存。
第(2)_1)步中有機磷農藥為敵敵畏，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比
i : 1012，配制濃度為ixio—41!1/1的敵敵畏農藥母液。 第(2)_2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的 敵敵畏農藥母液的體積比為1 : 2，濃度為4X10—Vl/L、4X10—5iil/L、4X10—Vl/L、 4X10—3iil/L、4X10—2iU/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置5分鐘。
第(3)步中相應的激發(fā)波長為421nm。 第(4)_1)步中待測樣品為高粱，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為
i : 2.5。 第(4)-2)步中第(1)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-l)步制備出
的高粱待測樣品液的體積比為i : 2.0 : 2.0。
第(5)_1)步中待測樣品為高粱中殘留有有機磷農藥敵敵畏。 第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 0. 67571ogC+55. 528，待測樣品液的熒光光
譜的最高峰的熒光強度為F = 54. 235，待測樣品高粱中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C
=0. 012 ii 1/L。 實施例3 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟同實施例l，其中
第(1)步中以四苯基銪卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 262.0的比例，制得濃度為0.004g/L的四苯基銪卟啉溶液。在4。C下避光保存。
第(2)_1)步中有機磷農藥為水胺硫磷，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比
i : io1Q，配制濃度為i x io—2 l/L的水胺硫磷農藥母液。 第(2)_2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的水 胺硫磷農藥母液的體積比為1 : 2. 5，濃度為5X10—7iil/L、5X10—Vl/L、5X10—5iU/L、 5X 10—4iil/L、5X 10—3ii l/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置15分鐘。
第(3)步中相應的激發(fā)波長為423nm。 第(4)_1)步中待測樣品為玉米，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為
i : 1.5。 第(4)-2)步中第(1)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-l)步制備出
的玉米待測樣品液的體積比為i : i.o : 3.0。
第(5)_1)步中待測樣品為玉米中殘留有有機磷農藥水胺硫磷。 第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 1. 65811ogC+53. 992，待測樣品液的熒光光
譜的最高峰的熒光強度為F = 52. 208，待測樣品高粱中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C
=0. 083 ii 1/L。 實施例4 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟同實施例l，其中
11
第(1)步中以四苯基卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為
1 : 325.5的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基卟啉溶液。在4。C下避光保存。 第(2)_1)步中有機磷農藥為氧化樂果，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比
i : io6，配制濃度為i x io2 i！ l/L的氧化樂果農藥母液。 第(2)_2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-1)步制備出的氧 化樂果農藥母液的體積比為1 : 1，濃度為2X10—Vl/L、2X10—5iil/L、2X10—Vl/L、 2X 10—、1/L、2X 10—2iU/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘。
第(3)步中相應的激發(fā)波長為414nm。 第(4)_1)步中待測樣品為大米，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為
i : 1.5。 第(4)-2)步中第(1)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-1)步制備出
的大米待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5。
第(5)_1)步中待測樣品為大米中殘留有有機磷農藥氧化樂果。 第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 1. 16531ogC+53. 218，待測樣品液的熒光光
譜的最高峰的熒光強度為F = 51. 755，待測樣品大米中殘留的有機磷農藥氧化樂果的量為
C = 0. 055 ii 1/L。 實施例5 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟同實施例l，其中 第(1)步中以四苯基單羥基卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積
比為l : 318.0的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基單羥基卟啉溶液。在4t:下避光保存。
第(2)_1)步中有機磷農藥為氧化樂果，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比
i : 1(^，配制濃度為lxi0—21!1/1的氧化樂果農藥母液。 第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-1)步制備出的氧 化樂果農藥母液的體積比為1 : 1，濃度為2X10—Vl/L、2X10—5iil/L、2X10—Vl/L、 2X 10—、1/L、2X 10—2iU/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘。
第(3)步中相應的激發(fā)波長為418nm。 第(4)_1)步中待測樣品為小麥，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為
i : 1.5。 第(4)-2)步中第(1)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-1)步制備出
的小麥待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5。
第(5)_1)步中待測樣品為小麥中殘留有有機磷農藥氧化樂果。 第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 0. 47871ogC+51. 732，待測樣品液的熒光光
譜的最高峰的熒光強度為F = 50. 762，待測樣品小麥中殘留的有機磷農藥氧化樂果的量為
C = 0. 009 ii 1/L。 實施例6 —種快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其具體方法步驟同實施例l，其中 第(1)步中以四苯基錳卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為
1 : 300.0的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基錳卟啉溶液。在3t:下避光保存。
第(2)_1)步中有機磷農藥為敵敵畏，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比
i : 1(^，配制濃度為ixio—21!1/1的敵敵畏農藥母液。 第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的 敵敵畏農藥母液的體積比為1 : 2，濃度為4X10—Vl/L、4X10—5iil/L、4X10—Vl/L、 4X10—3iil/L、4X10—2iU/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘。
第(3)步中相應的激發(fā)波長為452nm。 第(4)_1)步中待測樣品為高梁，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為
i : 2.5。第(4)-2)步中第(1)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-l)步制備出
的高粱待測樣品液的體積比為i : 2.0 : 2.0。
第(5)_1)步中待測樣品為高粱中殘留有有機磷農藥敵敵畏。
第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 0. 63081ogC+26. 441，待測樣品液的熒光光 譜的最高峰的熒光強度為F = 23. 065，待測樣品高梁中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C =4.4X10—V 1/L。實驗結果分析 從圖1及圖2中看到四苯基五氟鋅卟啉對不同濃度的毒死蜱的熒光光譜具有 顯著區(qū)別，根據(jù)590nm附近的特征峰強度可以對不同濃度的毒死蜱進行定量檢測，根 據(jù)不同濃度梯度的熒光特征峰處的熒光強度F作出毒死蜱的標準導數(shù)工作曲線F = 1. 1871ogC+65. 391，待加入待測樣品后得到的590nm附近的熒光強度F與標準工作曲線上 的點作比較分析就可以實現(xiàn)對毒死蜱的定量檢測。 綜上所述，本發(fā)明的方法可以實現(xiàn)對有機磷農藥的定量檢測，且檢測的重復性和 穩(wěn)定性好、準確度高，檢測的靈敏度好，而且本發(fā)明具有操作簡便，、快速，成本低等特點，可 以廣泛應用于糧食，食品等易含有有機磷農藥殘留的微痕量檢測，也可用于蔬菜、水果等食 品安全評估和環(huán)境監(jiān)測，具有廣泛的應用前景。
權利要求
一種快速檢測有機磷農藥的方法，其特征在于具體步驟如下(1)卟啉溶液的配制以卟啉，即四苯基卟啉、單羥基四苯基卟啉、四苯基鋅卟啉、四苯基五氟鋅卟啉、四苯基銪卟啉、四苯基錳卟啉中的1種為熒光指示劑和顯色劑，以有機溶劑乙腈為定容劑，按卟啉的質量∶有機溶劑乙腈的體積比為1∶259.0～325.5的比例，分別將卟啉加入有機溶劑乙腈中，攪拌溶解后，就分別制備出6種卟啉質量濃度為0.003～0.004g/L的卟啉溶液，在3～4℃下避光保存；(2)配制已知有機磷農藥溶液1)配制農藥母液選取市售的有機磷農藥，即氧化樂果、敵敵畏、水胺硫磷、毒死蜱，分別加入有機溶劑乙腈中，攪拌均勻，其有機磷農藥∶有機溶劑乙腈的體積比為1∶106～1012；2)配制液態(tài)卟啉檢測溶液第(2)-1)步完成后，按照第(1)步制備出的1種卟啉溶液體積∶第(2)-1)步制備出的1種已知有機磷農藥母液的體積比為1∶1～2.5的比例，在第(1)步制備出的1種卟啉溶液中加入第(2)-1)步制備出的1種已知有機磷農藥母液，攪拌均勻，直至在第(1)步制備出的6種卟啉溶液中，分別加入完第(2)-1)步制備出的4種已知有機磷農藥母液為止，然后對每種液態(tài)卟啉檢測溶液，用有機溶劑乙腈進行稀釋，再分別配制出濃度的梯度從小到大為2x10-7μl/L～0.2μl/L的5個液態(tài)卟啉檢測溶液，分別靜置5～15分鐘；(3)檢測已知有機磷農藥的基本熒光光譜第(2)步完成后，對市購的裝載有程序的熒光分光光度計通電預熱后，打開熒光分光光度計并設定掃描范圍為350nm-700nm、狹縫寬度為5nm、掃描速度為1000nm/min，再根據(jù)第(1)步制備出的1種卟啉溶液，即四苯基卟啉、單羥基四苯基卟啉、四苯基鋅卟啉、四苯基五氟鋅卟啉、四苯基銪卟啉、四苯基錳卟啉溶液中的1種設定相應的激發(fā)波長414nm～452nm，然后在熒光分光光度計的檢測池中，再將第(2)-2)步制備出的1種相應的液態(tài)卟啉檢測溶液，按照濃度從低到高的順序，依次加入，分別進行測量和記錄相應的熒光光譜，并通過熒光分光光度計的信號處理系統(tǒng)分別將其基本熒光光譜保存和打印輸出，直至測量出第(2)-2)步制備出的120種液態(tài)卟啉檢測溶液的基本熒光光譜為止，并保存和打印輸出；(4)檢測待測樣品的熒光光譜1)待測樣品液的配制第(3)步完成后，按照待測樣品的質量∶有機溶劑乙腈的體積比為1∶1～2.5的比例，用有機溶劑乙腈對待測樣品即小麥、高粱、玉米、大米進行沖洗，收集沖洗液；2)檢測待測樣品液的熒光光譜第(4)-1)步完成后，按照第(1)步配制的1種卟啉溶液∶有機溶劑乙腈∶第(4)-1)步制備出的待測樣品液的體積比為1∶1～2.5∶1.5～3.0的比例，將卟啉溶液和有機溶劑及待測樣品液混合攪拌均勻后，放入熒光分光光度計的檢測池中，通過熒光分光光度計的程序測量其熒光光譜，并記錄保存及打??；(5)分析判斷1)定性判斷第(4)步完成后，裝載有程序的熒光分光光度計自動將第(4)-2)步測量的熒光光譜與其保存的第(3)步測量出的24種已知有機磷農藥的基本光譜逐一進行分析比較并判斷當?shù)?4)-2)測得的熒光光譜與第(3)步測量的某一已知有機磷農藥的熒光光譜完全一致時，則待測樣品中殘留有有機磷農藥，且殘留的有機磷農藥為該已知的有機磷農藥；否則，該待測樣品中不含有該已知有機磷農藥；2)定量分析第(5)-1)步完成后，當待測樣品中殘留有有機磷農藥時，再將第(3)步測得的對應的卟啉-已知有機磷農藥的5種不同濃度梯度的熒光光譜的最高峰的熒光強度，作標準導數(shù)工作曲線，得到線性回歸方程F＝klogC+b，然后將第(4)-2)步測得的待測樣品液的熒光光譜的最高峰的熒光強度F代入線性回歸方程，就精確確定待測樣品中殘留的有機磷農藥的量C。
2. 按照權利要求1所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中第(1)步中以四苯基五氟鋅卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 259.0的比例，制得濃度為0.004g/L的四苯基五氟鋅卟啉溶液，在3t:下避光保存；第(2)_1)步中有機磷農藥為毒死蜱，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比 1 : 1(^，配制濃度為1x10—2iU/L的毒死蜱農藥母液；第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的毒死蜱 農藥母液的體積比為1 : l，濃度為2x10—7iil/L、2xlO—、1/L、2xl0—5iil/L、2xlO—4ii 1/L、 2x10—3iil/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘；第(3)步中相應的激發(fā)波長為416nm ;第(4)_1)步中待測樣品為小麥，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1:1;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的高 粱待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5;第(5)_1)步中待測樣品為小麥中殘留有有機磷農藥毒死蜱；第(5)-2)步中線性回歸方程為F二 1. 1871ogC+65.391，待測樣品液的熒光光譜 的最高峰的熒光強度為F = 62. 5，待測樣品小麥中殘留的有機磷農藥毒死蜱的量為C = 0. 0037 ii 1/L。
3. 按照權利要求l所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中第(i)步中以四苯基鋅卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 295.5的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基鋅卟啉溶液，在3.5t:下避光保存；第(2)_1)步中有機磷農藥為敵敵畏，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比1 : 1012，配制濃度為1x10-4 iU/L的敵敵畏農藥母液；第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的敵敵畏 農藥母液的體積比為1 : 2，濃度為4x10—Vl/L、4x10—5iil/L、4xlO—4iil/L、4xlO—3iU/L、 4xl0—2 ii 1/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置5分鐘；第(3)步中相應的激發(fā)波長為421nm ;第(4)_1)步中待測樣品為高粱，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 2. 5 ;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的高 粱待測樣品液的體積比為i : 2.0 : 2.0;第(5)_1)步中待測樣品為高粱中殘留有有機磷農藥敵敵畏；第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 0. 67571ogC+55. 528，待測樣品液的熒光光譜的 最高峰的熒光強度為F = 54. 235，待測樣品高粱中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C = 0. 012 ii 1/L。
4. 按照權利要求1所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中第(i)步中以四苯基銪卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 262. 0的比例，制得濃度為0. 004g/L的四苯基銪卟啉溶液，在4"C下避光保存；第(2)_1)步中有機磷農藥為水胺硫磷，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比i : ioio，配制濃度為lxio—2111/1的水胺硫磷農藥母液；第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的水胺硫磷 農藥母液的體積比為1 : 2. 5，濃度為5x10—7 ii 1/L、5xl0—、 1/L、5xl0—5y 1/L、5xl0—V 1/L、 5x10—3iU/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置15分鐘；第(3)步中相應的激發(fā)波長為423nm ;第(4)_1)步中待測樣品為玉米，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 1. 5 ;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的玉 米待測樣品液的體積比為i : i.o : 3.0;第(5)_1)步中待測樣品為玉米中殘留有有機磷農藥水胺硫磷；第(5)-2)步中線性回歸方程為F二 1.65811ogC+53.992，待測樣品液的熒光光譜的最高峰的熒光強度為F = 52. 208，待測樣品高粱中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C =0. 083 ii 1/L。
5. 按照權利要求l所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中第(i)步中以四苯基卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 325.5的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基卟啉溶液，在4t:下避光保存；第(2)_1)步中有機磷農藥為氧化樂果，其有機磷農藥；有機溶劑乙腈的體積比 1 : 106，配制濃度為lxl(fiU/L的氧化樂果農藥母液；第(2)-2)步中其第(1)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-l)步制備出的氧化樂果 農藥母液的體積比為1 : l，濃度為2x10—、1/L、2xl0—5iil/L、2xlO—4iil/L、2xlO—3ii 1/L、 2xl0—2 ii 1/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘；第(3)步中相應的激發(fā)波長為414nm ;第(4)_1)步中待測樣品為大米，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 1. 5 ;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的大 米待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5;第(5)_1)步中待測樣品為大米中殘留有有機磷農藥氧化樂果；第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 1. 16531ogC+53. 218，待測樣品液的熒光光譜的最高峰的熒光強度為F = 51. 755，待測樣品大米中殘留的有機磷農藥氧化樂果的量為C =0. 055 ii 1/L。
6. 按照權利要求l所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中第(1)步中以四苯基單羥基卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為 1 : 318.0的比例，制得濃度為0.003g/L的四苯基單羥基卟啉溶液，在4t:下避光保存；第(2)-i)步中有機磷農藥為氧化樂果，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比 i : 1(T，配制濃度為lxio—21!1/1的氧化樂果農藥母液；第(2)-2)步中其第(i)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-1)步制備出的氧化樂果農藥母液的體積比為1 : l，濃度為2x10—、1/L、2xl0—5iil/L、2xlO—4iil/L、2xlO—3ii 1/L、 2xl0—2 ii 1/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘； 第(3)步中相應的激發(fā)波長為418nm ;第(4)_1)步中待測樣品為小麥，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 1. 5 ;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液:有機溶劑乙腈:第(4)-i)步制備出的小 麥待測樣品液的體積比為i : 2.5 : 1.5;第(5)_1)步中待測樣品為小麥中殘留有有機磷農藥氧化樂果；第(5)-2)步中線性回歸方程為F二 0.47871ogC+51.732，待測樣品液的熒光光譜的最高峰的熒光強度為F = 50. 762，待測樣品小麥中殘留的有機磷農藥氧化樂果的量為C =0. 009 ii 1/L。
7.按照權利要求l所述的一種快速檢測農藥殘留的方法，其特征在于具體步驟中 第(1)步中以四苯基錳卟啉為原料，按卟啉的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 300. 0的比例，制得濃度為0. 003g/L的四苯基錳嚇啉溶液，在3t:下避光保存； 第(2)-i)步中有機磷農藥為敵敵畏，其有機磷農藥有機溶劑乙腈的體積比i : i(T，配制濃度為lxio—21!1/1的敵敵畏農藥母液；第(2)-2)步中其第(i)步制備出的卟啉溶液體積第(2)-i)步制備出的敵敵畏農藥母液的體積比為1 : 2，濃度為4x10—Vl/L、4xl0—5iil/L、4xlO—4iil/L、4xlO—3iU/L、 4xl0—2 ii 1/L的5個梯度的液態(tài)卟啉檢測溶液，靜置10分鐘； 第(3)步中相應的激發(fā)波長為452nm ;第(4)_1)步中待測樣品為高粱，待測樣品的質量有機溶劑乙腈的體積比為1 : 2. 5 ;第(4)-2)步中第(i)步配制的卟啉溶液有機溶劑乙腈第(4)-i)步制備出的高 粱待測樣品液的體積比為i : 2.0 : 2.0;第(5)_1)步中待測樣品為高粱中殘留有有機磷農藥敵敵畏；第(5)-2)步中線性回歸方程為F = 0. 63081ogC+26. 441，待測樣品液的熒光光譜的 最高峰的熒光強度為F = 23. 065，待測樣品高粱中殘留的有機磷農藥敵敵畏的量為C = 4. 4x10—6 ii 1/L。
全文摘要
一種快速檢測農藥殘留的方法，涉及有機磷農藥的熒光檢測方法。本發(fā)明利用帶程序的熒光分光光度計，以卟啉化合物為熒光指示劑和顯色劑，經制備卟啉溶液和有機磷農藥溶液及液態(tài)檢測溶液，測量液態(tài)卟啉檢測溶液中有機磷農藥。本發(fā)明具有檢測靈敏度高，檢測限低，準確性高，操作簡便，便于現(xiàn)場快速檢測，經濟性好，便于推廣應用等特點。本發(fā)明可廣泛應用于糧食、食品等易含有有機磷農藥殘留的微痕量檢測，也可用于蔬菜、水果等食品安全評估和環(huán)境檢測中。
文檔編號G01N21/64GK101776601SQ20101010046
公開日2010年7月14日 申請日期2010年1月25日 優(yōu)先權日2010年1月25日
發(fā)明者侯長軍, 傅深娜, 張宿義, 張明, 張良, 沈才洪, 法煥寶, 霍丹群 申請人:瀘州老窖集團有限責任公司;重慶大學