專利名稱：用于診斷結(jié)核病的方法和裝置的制作方法
用于診斷結(jié)核病的方法和裝置
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用于活動(dòng)性結(jié)核病(TB)的診斷的方法。結(jié)核病(tuberculosis)是世界上生育年齡婦女最大的傳染性殺手和患有HIV/ AIDS的人中主要的死亡原因。它由分枝桿菌(myccAacteria)、在人中通常是結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)導(dǎo)致，據(jù)信世界人口的三分之一被結(jié)核分枝桿菌 (M. tuberculosis)感染。人中大部分感染導(dǎo)致無(wú)癥狀、潛伏感染(LTBI)，但是有些潛伏感染最終進(jìn)展為活動(dòng)性疾病，其如果不治療，殺死超過(guò)一半的其受害者。當(dāng)疾病變?yōu)榛顒?dòng)性的，75-85%的病例是肺TB。在其余15_25%的活動(dòng)性病例中， 感染從肺中移動(dòng)，導(dǎo)致肺外的結(jié)核病(EPTB)。肺外的感染位點(diǎn)包括胸膜(在結(jié)核性胸膜炎中)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)和蛛網(wǎng)膜下腔(在腦膜炎中)，淋巴系統(tǒng)外周淋巴結(jié)，生殖泌尿系統(tǒng)(在泌尿生殖器結(jié)核中)，心包腔，腹腔，和骨和關(guān)節(jié)(在波特病(Pott' s disease)中)。活動(dòng)性TB在非洲和亞洲特別常見，在受影響的社區(qū)導(dǎo)致重大死亡率、發(fā)病率和經(jīng)濟(jì)衰退。診斷結(jié)核感染的常用方法是結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(Tuberculin Skin Test(TST)), 其是應(yīng)答結(jié)核抗原(PPD)刺激的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的復(fù)合測(cè)量。然而，其需要2至3天后才能獲得結(jié)果并經(jīng)常給出假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。這種試驗(yàn)也不能從活動(dòng)性疾病中區(qū)分潛伏感染，這在臨床環(huán)境中是重要的。最近，已經(jīng)開發(fā)并商業(yè)化了兩種檢測(cè)應(yīng)答分枝桿菌-特異性蛋白的干擾素 Y (IFN-γ)釋放的測(cè)定法QuantiFERON-TB Gold h-tube (ELISA 測(cè)定法)和 T-SP0T. TB， (ELISP0T測(cè)定法)。這些干擾素-Y釋放測(cè)定法(IGRAs)是基于這樣的能力，即結(jié)核分枝桿菌抗原早期分泌抗原靶標(biāo)6 (early secretory antigen target 6 (ESAT-6))和培養(yǎng)濾過(guò)蛋白10(culture filtrate protein 10 (CFP-10))刺激宿主淋巴細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ的能力。來(lái)自于患者血液的淋巴細(xì)胞與抗原一起培養(yǎng)并溫育16至M小時(shí)。如果患者以前已經(jīng)暴露于結(jié)核病，T淋巴細(xì)胞應(yīng)答產(chǎn)生干擾素Y。兩種測(cè)試都是血液測(cè)試，盡管一種使用全血而另一種使用外周血單核細(xì)胞。測(cè)試之間的區(qū)別是QuantiFERON-TB Gold定量當(dāng)全血暴露于抗原時(shí)上清液中干擾素、的總量，而T-SP0T. TB通過(guò)計(jì)數(shù)ELISP0T孔內(nèi)點(diǎn)的數(shù)目來(lái)計(jì)數(shù)產(chǎn)生干擾素Y的活化的T淋巴細(xì)胞的數(shù)目。測(cè)試是費(fèi)時(shí)的(從樣品收集到獲得結(jié)果它們需要大約2天)并且是勞動(dòng)密集的，需要使用實(shí)驗(yàn)室和復(fù)雜儀器。此外，它們不從潛伏結(jié)核病中區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病。需要臨床評(píng)價(jià)和另外的測(cè)試，諸如培養(yǎng)來(lái)自于懷疑受感染區(qū)的血液或流體，用來(lái)從潛伏TB感染中區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病。肺外的TB難以診斷。培養(yǎng)僅在少量病例中有幫助。由于通常僅有少數(shù)細(xì)菌存在于樣品中，在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)這種生長(zhǎng)緩慢的生物需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間(大約4至6周)，并且并不總是成功的。這樣長(zhǎng)度的延遲是不可接受的，因?yàn)榈交颊弑辉\斷為活動(dòng)性TB時(shí)，他們可能已經(jīng)死亡或遭受嚴(yán)重殘疾，諸如在TB腦膜炎病例中的腦損傷。因此開發(fā)用于活動(dòng)性結(jié)核病的快速且廉價(jià)的診斷測(cè)試將非常有價(jià)值，特別是在發(fā)展中國(guó)家中。發(fā)明概述
根據(jù)本發(fā)明的第一實(shí)施方案，提供診斷受試者中結(jié)核病的方法，所述方法包括步驟(i)提供來(lái)自于所述受試者的流體樣品；(ii)在不用抗原刺激流體樣品的情況下，使所述流體樣品與結(jié)核病的生物標(biāo)志的抗體接觸；和(iii)檢測(cè)所述抗體是否結(jié)合來(lái)自于所述樣品的生物標(biāo)志。所述抗體與生物標(biāo)志的結(jié)合可以指示所述受試者患有結(jié)核病，和更特別地，活動(dòng)性結(jié)核病。所述結(jié)核病可以是肺外的結(jié)核病。所述生物標(biāo)志可以是細(xì)胞因子，諸如IFN-γ，或趨化因子，諸如IP-10。所述抗體可以是抗-IFN-γ抗體或抗-IP-10抗體，或其組合，由此用來(lái)檢測(cè) IFN-Y和/或IP-10是否存在于所述樣品中。能夠結(jié)合所述抗-生物標(biāo)志抗體或結(jié)合所述生物標(biāo)志的捕獲抗體也可以用于所述方法中。所述抗體或捕獲抗體可以是單克隆抗體。所述抗體可以與顆粒諸如膠體金復(fù)合(complexed)。可以使用指示劑(indicator)來(lái)指示所述抗體與所述生物標(biāo)志的結(jié)合。所述指示劑可以是色譜的、熒光的、光學(xué)的、酶聯(lián)的或放射性標(biāo)記的指示劑。所述方法可以是及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理(point-of-care)免疫測(cè)定法，并且例如所述抗體和指示劑可以設(shè)置于測(cè)試條測(cè)定上，所述樣品可放置到所述測(cè)試條測(cè)定上。備選地，或者除了所述條-測(cè)試(strip-test)測(cè)定之外，所述方法可以在實(shí)驗(yàn)室中使用ELISA測(cè)定、流式細(xì)胞術(shù)、生物分析儀、波導(dǎo)生物傳感器或SERS實(shí)施。典型地，所述方法可以在大約5小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選地在大約3小時(shí)內(nèi)和甚至更優(yōu)選地在大約10分鐘內(nèi)實(shí)施。根據(jù)本發(fā)明的第二實(shí)施方案，提供用于在來(lái)自于受試者的未受刺激的流體樣品中診斷結(jié)核病的測(cè)試裝置(test device)，所述測(cè)試裝置包括(i)能夠結(jié)合結(jié)核病生物標(biāo)志的抗體；和(ii)當(dāng)所述抗體結(jié)合所述生物標(biāo)志時(shí)進(jìn)行指示的指示劑。所述測(cè)試裝置可以是條-測(cè)試裝置，來(lái)自于所述受試者的所述流體樣品被放置到所述條-測(cè)試裝置上，或者可以是ELISA測(cè)定板，所述ELISA測(cè)定板具有其中可放置來(lái)自于單個(gè)受試者的流體樣品的孔。備選地，所述測(cè)試裝置可被配置用于流式細(xì)胞儀、生物分析儀、波導(dǎo)生物傳感器或SERS分光計(jì)中。根據(jù)本發(fā)明的第三實(shí)施方案，提供用于在來(lái)自于受試者的未受刺激的樣品中診斷結(jié)核病的試劑盒，所述試劑盒包含(i)能夠結(jié)合結(jié)核病標(biāo)志的抗體；和(ii)當(dāng)所述抗體已經(jīng)結(jié)合所述生物標(biāo)志時(shí)進(jìn)行指示的指示劑。 所述試劑盒還可以包含用于實(shí)施上文描述的方法的說(shuō)明書。所述試劑盒還可以包含捕獲抗體。
附圖簡(jiǎn)述


圖1顯示74個(gè)患有胸膜TB的患者相對(duì)于非-TB對(duì)照的IP-10水平的散點(diǎn)圖(左組)和ROC下面積(右組)。在4035pg/ml的切割點(diǎn)(cut-point)(左手組中的實(shí)線)，靈敏度是100%并且NPV是100%。ROC曲線下面積是0.82。圖2顯示使用來(lái)自于74個(gè)有TB和非-TB滲出液的連續(xù)募集的患者的胸膜液的未受刺激的IFN-γ的散點(diǎn)圖(左組)和ROC下面積(右組)。在0.31IU/1的切割點(diǎn)，未受刺激的 IFNi 的靈敏度、特異性、PPV和 NPV(95% Cl)分別是 97% (85-99) ；100% (81-100)； 100% (90-100)和 94% (73-99)。精確度是 98% (90-100)和 ROC 下面積是 0. 99。圖3從140TB腦膜炎疑似患者獲得的腦脊液中未受刺激的IFN- γ水平。這些數(shù)據(jù)顯示未受刺激的干擾素-、作為腦脊液中TB診斷標(biāo)志的優(yōu)異表現(xiàn)結(jié)果。圖4顯示使用染色微球的側(cè)向流測(cè)試技術(shù)(lateral flow test technology)的原理，該微球沿著條遷移，如果目的生物標(biāo)志存在，結(jié)合檢測(cè)線，其改變顏色(抗體1 =與A 和B組中左手側(cè)上的微球結(jié)合的抗體；抗體2 = A、B和C組中自左邊的第二列抗體中的抗體和D組中結(jié)合抗原的抗體；抗體3是A至D組中最后一列的抗體(最右邊)。圖5顯示可在本發(fā)明中使用的條測(cè)試儀器(strip test apparatus)的實(shí)例。發(fā)明詳述本發(fā)明提供用于在來(lái)自于受試者的未受刺激的流體樣品中診斷結(jié)核病(TB)的快速方法。不像其它商業(yè)上可獲得的方法，本發(fā)明的方法能夠區(qū)分活動(dòng)性和潛伏性結(jié)核病，這對(duì)于確定受試者的治療是重要的。所述方法還可檢測(cè)肺外的結(jié)核病。非常重要地，不像其它需要溫育樣品超過(guò)12小時(shí)的測(cè)試，所述方法還在大約數(shù)分鐘內(nèi)提供結(jié)果?；顒?dòng)性結(jié)核病是這樣的疾病狀態(tài)，即其中在具有活動(dòng)性疾病的臨床和放射學(xué)特征的受試者中，生物學(xué)流體或組織關(guān)于結(jié)核分枝桿菌(M. tuberculosis)的顯微鏡涂片或培養(yǎng)陽(yáng)性，或通過(guò)核酸擴(kuò)增測(cè)試可檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌；常常存在全身癥狀。潛伏性結(jié)核感染是其中可能活的結(jié)核分枝桿菌存在于人組織中但個(gè)體無(wú)癥狀，并且沒(méi)有活動(dòng)性疾病的臨床-放射學(xué)特征。
如前文所提及，可獲得的用于檢測(cè)結(jié)核病的測(cè)試具有差的靈敏度并且是費(fèi)時(shí)和勞動(dòng)密集的。在臨床環(huán)境中快速、精確診斷疾病是重要的。還有利地是擁有能夠容易地使用和在及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理(諸如在診室、醫(yī)院病房或家中)使用的診斷方法。本發(fā)明在來(lái)自于患者的未受刺激的樣品(即該樣品未用抗原刺激(或處理))中利用抗體檢測(cè)特異性生物標(biāo)志，諸如細(xì)胞因子或趨化因子，特別是干擾素-Y或IP-10的存在。一般而言，在抗體與生物標(biāo)志結(jié)合時(shí)色譜的指示劑將改變顏色，指示患者患有活動(dòng)性肺外的結(jié)核病。然而，目的生物標(biāo)志也可以通過(guò)其它光學(xué)的、分子生物學(xué)的、微流體的或納米技術(shù)等(例如SERS (surface enhanced Raman spectroscopy，表面增強(qiáng)拉曼光譜學(xué)))或波導(dǎo)生物傳感器(諸如槽式波導(dǎo)生物傳感器(slot-waveguide biosensor)來(lái)檢測(cè)。生物標(biāo)志在生物流體本身中檢測(cè)，在其它方法中必需的過(guò)夜抗原刺激是不需要的。樣品可以是來(lái)自于胸膜腔、心包腔、腹腔或蛛網(wǎng)膜下腔的流體，或來(lái)自于血液樣品的血漿或血清、唾液或尿。更特別地，樣品可以是來(lái)自于胸腔積液(pleural effusion)的流體。不像商業(yè)上可獲得的測(cè)試，樣品優(yōu)選地不是血液樣品。樣品可應(yīng)用于條上，所述的條與妊娠測(cè)試和其它尿液分析測(cè)試中常用的類型相
6似，所述的條包含生物標(biāo)志抗體和用于檢測(cè)干擾素-Y和/或IP- ο與該抗體的結(jié)合的色譜指示劑。所述的條可包含針對(duì)IFN- γ或IP-10的抗體或針對(duì)干擾素-Y和IP_10兩者的抗體。包含這些生物標(biāo)志兩者將使得測(cè)試更不可能返回假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，因?yàn)楦蓴_素-Y 是良好的列入(rule-in)標(biāo)志并且IP-10是良好的排除(rule-out)標(biāo)志。這些條-測(cè)試的結(jié)果可在應(yīng)用樣品至所述條的數(shù)分鐘(諸如2-3分鐘)內(nèi)獲得。備選地或另外，可以使用免疫測(cè)定(例如ELISA)、流式細(xì)胞術(shù)或生物分析儀。也可以提供包含至少抗體、色譜指示劑和使用說(shuō)明書的試劑盒。盡管這種測(cè)試條將足夠用于一些類型的肺外的TB，例如胸膜TB，在一些難以診斷類型的結(jié)核病諸如TB腦膜炎中，上文描述的條測(cè)試可與免疫測(cè)定諸如ELISA測(cè)定聯(lián)合以保證作出精確的診斷。商業(yè)上可獲得的IFN- y ELISA測(cè)定板可與適宜抗體和適當(dāng)指示方式一起獲得。所述板具有96個(gè)孔，一次能夠測(cè)試M個(gè)樣品。因?yàn)槊總€(gè)板費(fèi)用在 US $300和500之間，在發(fā)展中國(guó)家環(huán)境中使用板一次僅測(cè)試一個(gè)樣品是非常昂貴的，因此并不是特別適合于本發(fā)明。對(duì)于本發(fā)明，將提供用于進(jìn)行單個(gè)樣品測(cè)定的IFN-γ ELISA測(cè)定板。例如，測(cè)定板可以僅有8個(gè)孔G個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，1個(gè)陰性對(duì)照，2個(gè)樣品孔)。這種測(cè)定的結(jié)果可在2至3小時(shí)內(nèi)獲得。申請(qǐng)人:評(píng)價(jià)了數(shù)種用于診斷TB胸腔積液的新工具和生物標(biāo)志，包括T細(xì)胞測(cè)定、 LAM抗原檢測(cè)、PCR、IP-10、IFN- y、ADA、顯微鏡涂片、培養(yǎng)和胸膜活檢。病例-對(duì)照原則研究的初步證據(jù)已經(jīng)表明T細(xì)胞測(cè)定可能是有幫助的。然而，當(dāng)在臨床環(huán)境中評(píng)價(jià)時(shí)，它們表現(xiàn)差。IP-10是有前途的但仍然在5個(gè)TB受試者中漏掉1個(gè)并且在5個(gè)中過(guò)度診斷 (over-diagnosed) 1個(gè)，相比之下在更高切割點(diǎn)IP-10具有100%陰性預(yù)測(cè)值(表明對(duì)于TB 胸腔積液它是優(yōu)異的排除測(cè)試(圖1))。然而，最精確的鑒別物(discriminator)是未受刺激的IFN-Y，其具有接近100%的靈敏度和特異性(圖2)。因此IFN-Y是非常精確的用于 TB胸腔積液的標(biāo)志。本發(fā)明通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)一步描述。然而，這種實(shí)施例不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的精神或范圍。
實(shí)施例圖3顯示從140個(gè)TB腦膜炎疑似患者中獲得的腦脊液中未受刺激的IFN- γ水平。數(shù)據(jù)顯示當(dāng)與其它容易且快速可得的測(cè)試結(jié)果(例如革蘭氏染色和隱球菌的乳膠凝聚試驗(yàn))聯(lián)合時(shí)，未受刺激的IFN-Y具有接近95%的靈敏度和特異性。圖4提供了適當(dāng)測(cè)試如何工作的總結(jié)概要。提供具有硝化纖維素膜載體 (nitrocellulase membrane carrier)的條測(cè)試(圖5)，所述載體帶有與抗-IFN-γ抗體和可能也與抗-ΙΡ-10抗體復(fù)合的膠體金綴合物溶液(色譜指示劑)，和捕獲抗體帶，其被封閉于塑料盒中。將少量來(lái)自于患者的樣品，例如從特定身體區(qū)室諸如胸膜腔抽吸的流體放置到測(cè)試條上。
如果IFN- Y細(xì)胞因子(還有可能的IP-10生物標(biāo)志/趨化因子)存在于來(lái)自患者的未受刺激的樣品中，它們將在硝化纖維素膜上分別結(jié)合抗-IFN- γ和抗-IP-10抗體， 并且這些復(fù)合物將向捕獲抗體的帶遷移。對(duì)于其它生物標(biāo)志這將相似地工作。一旦結(jié)合， 色譜指示劑將改變顏色，表示對(duì)于結(jié)核病的陽(yáng)性測(cè)試。因此，申請(qǐng)人已經(jīng)開發(fā)了用于診斷結(jié)核病的方法，其能夠比目前診斷方法顯著更快地提供結(jié)果。所述方法也是有成本效益的并且能夠區(qū)分潛伏性和活動(dòng)性結(jié)核病。此外， 它是及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理測(cè)試，并且它不必由具有專門技術(shù)的人實(shí)施或在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施。
權(quán)利要求
1.診斷受試者中結(jié)核病的方法，所述方法包括步驟(i)在不用抗原刺激來(lái)自于所述受試者的流體樣品的情況下，使所述流體樣品與結(jié)核病的生物標(biāo)志的抗體接觸；和( )檢測(cè)所述抗體是否結(jié)合來(lái)自于所述樣品的生物標(biāo)志。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體與生物標(biāo)志的結(jié)合指示所述受試者患有結(jié)核病。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述結(jié)核病是肺外的結(jié)核病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)的方法，其中所述結(jié)核病是活動(dòng)性結(jié)核病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)的方法，其中所述生物標(biāo)志是細(xì)胞因子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述細(xì)胞因子是IFN-Y。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述抗體是抗-IFNi抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)的方法，其中所述生物標(biāo)志是趨化因子。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述趨化因子是IP-10。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述抗體是抗-IP-10抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任意一項(xiàng)的方法，其中所述方法檢測(cè)IFN-γ和IP-10是否存在于所述樣品中。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中使用抗-IFN-γ抗體和抗-IP-10抗體。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任意一項(xiàng)的方法，其還包括使用能夠結(jié)合所述生物標(biāo)志或結(jié)合所述抗-生物標(biāo)志抗體的捕獲抗體。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體或捕獲抗體是單克隆抗體。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任意一項(xiàng)的方法，其中使用指示劑來(lái)指示所述抗體與所述生物標(biāo)志的結(jié)合。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中所述指示劑是色譜的、光學(xué)的、熒光的或放射性標(biāo)記的指示劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16的方法，其中所述指示劑是膠體金指示劑，并且所述抗體結(jié)合金顆粒。
18.根據(jù)權(quán)利要求1至17中任意一項(xiàng)的方法，其中所述方法是及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理方法。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體與所述生物標(biāo)志的結(jié)合在 5小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至19中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體與所述生物標(biāo)志的結(jié)合在 3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
21.根據(jù)權(quán)利要求1至20中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體與所述生物標(biāo)志的結(jié)合在 10分鐘內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
22.根據(jù)權(quán)利要求15至21中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體和指示劑設(shè)置于測(cè)試條測(cè)定上，所述樣品放置到所述測(cè)試條測(cè)定上。
23.根據(jù)權(quán)利要求15至21中任意一項(xiàng)的方法，其中所述抗體和指示劑設(shè)置于ELISA測(cè)定板中。
24.根據(jù)權(quán)利要求1至21中任意一項(xiàng)的方法，其中所述方法使用流式細(xì)胞儀、生物分析儀、波導(dǎo)生物傳感器或表面增強(qiáng)拉曼光譜學(xué)實(shí)施。
25.用于在來(lái)自于受試者的未受刺激的流體樣品中診斷結(jié)核病的測(cè)試裝置，所述測(cè)試裝置包括(i)能夠結(jié)合結(jié)核病生物標(biāo)志的抗體；和( )當(dāng)所述抗體結(jié)合所述生物標(biāo)志時(shí)進(jìn)行指示的指示劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的測(cè)試裝置，其能夠檢測(cè)受試者中活動(dòng)性結(jié)核病。
27.根據(jù)權(quán)利要求25或沈的測(cè)試裝置，其能夠檢測(cè)受試者中肺外的結(jié)核病。
28.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其中所述抗體是抗-IFN-Y抗體。
29.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其中所述抗體是抗-IP-10抗體。
30.根據(jù)權(quán)利要求25至四中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其包含抗-IFN-γ抗體和抗-IP-10 抗體。
31.根據(jù)權(quán)利要求25至30中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其還包含捕獲抗體。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的測(cè)試裝置，其中所述捕獲抗體能夠結(jié)合所述生物標(biāo)志或所述生物標(biāo)志抗體。
33.根據(jù)權(quán)利要求25至32中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其中所述生物標(biāo)志抗體和/或捕獲抗體是單克隆抗體。
34.根據(jù)權(quán)利要求25至33中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其中所述指示劑是色譜的、光學(xué)的、 熒光的或放射性標(biāo)記的指示劑。
35.根據(jù)權(quán)利要求25至34中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其中所述指示劑是膠體金指示劑， 并且所述抗體結(jié)合金顆粒。
36.根據(jù)權(quán)利要求25至35中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其是及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理裝置。
37.根據(jù)權(quán)利要求25至36中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其是條-測(cè)試裝置，來(lái)自于所述受試者的所述流體樣品被放置到所述條-測(cè)試裝置上。
38.根據(jù)權(quán)利要求25至36中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其是ELISA測(cè)定板，所述ELISA測(cè)定板具有用于測(cè)試來(lái)自于單個(gè)受試者的流體樣品的孔。
39.根據(jù)權(quán)利要求25至35中任意一項(xiàng)的測(cè)試裝置，其被配置用于流式細(xì)胞儀、生物分析儀、波導(dǎo)生物傳感器或表面增強(qiáng)拉曼光譜學(xué)中。
40.用于在來(lái)自于受試者的未受刺激的樣品中診斷結(jié)核病的試劑盒，所述試劑盒包括(i)能夠結(jié)合結(jié)核病標(biāo)志的抗體；和( )當(dāng)所述抗體已經(jīng)結(jié)合所述生物標(biāo)志時(shí)進(jìn)行指示的指示劑。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的試劑盒，其還包含用于實(shí)施權(quán)利要求1至對(duì)中任意一項(xiàng)的方法的說(shuō)明書。
42.根據(jù)權(quán)利要求40或41的試劑盒，其用于診斷肺外的結(jié)核病。
43.根據(jù)權(quán)利要求40至42中任意一項(xiàng)的試劑盒，其用于診斷活動(dòng)性結(jié)核病。
44.根據(jù)權(quán)利要求40至43中任意一項(xiàng)的試劑盒，其中所述抗體是抗-IFN-γ抗體。
45.根據(jù)權(quán)利要求40至43中任意一項(xiàng)的試劑盒，其中所述抗體是抗-IP-10抗體。
46.根據(jù)權(quán)利要求40至45中任意一項(xiàng)的試劑盒，其包含抗IFN-γ和ΙΡ-10兩者的抗體。
47.根據(jù)權(quán)利要求40至46中任意一項(xiàng)的試劑盒，其還包含捕獲抗體。
全文摘要
描述了用于診斷受試者中結(jié)核病(TB)的快速的方法。使用抗體檢測(cè)來(lái)自于受試者的未受刺激的樣品中特異性生物標(biāo)志諸如細(xì)胞因子或趨化因子特別是IFN-γ或IP-10的存在。使用指示劑指示抗體與生物標(biāo)志的結(jié)合，指示患者患有活動(dòng)性肺外的結(jié)核病。所述方法可以使用含有抗體和指示劑的測(cè)試條并向該測(cè)試條放置樣品來(lái)實(shí)施，使用ELISA測(cè)定，或使用流式細(xì)胞術(shù)，生物分析儀，波導(dǎo)生物傳感器或表面增強(qiáng)拉曼光譜學(xué)來(lái)實(shí)施。根據(jù)所用測(cè)試裝置的類型，結(jié)果可在幾分鐘至幾小時(shí)獲得。所述方法可檢測(cè)肺外的結(jié)核病并且可區(qū)分活動(dòng)性和潛伏性結(jié)核病。還描述了包含抗體和色譜指示劑和使用說(shuō)明書的試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102246040SQ200980150396
公開日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月15日
發(fā)明者基爾坦·溫卡·杰拉姆·德達(dá) 申請(qǐng)人:開普敦大學(xué)