專利名稱:運用mbl實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,尤其涉及一種可直接運用于醫(yī)學(xué)臨床檢驗,運用MBL(甘露 糖結(jié)合凝集素,Mannose binding lectin, MBL)用于早期診斷造影劑所致的急性腎損傷的 方法。
背景技術(shù):
隨著造影技術(shù)在臨床的廣泛應(yīng)用,特別是在高齡、有嚴重合并癥病人中的應(yīng)用,造 影劑腎病(contrast induced nephropathy, CIN)成為院內(nèi)獲得性腎功能衰竭的第三大主 要原因,占發(fā)病率的11%。在美國,每年約有一百萬次的造影操作,CIN的發(fā)生率達150,000 次/年;以至少的病人需要透析治療為例來說明,不需要透析的病人住院時間平均延長 2天,假設(shè)每天需要花費$500,每年因此而增加的醫(yī)療費用高達$148,000,000。而一旦發(fā)生 腎功能衰竭后果非常嚴重,在院死亡率為36%,2年生存率僅19%。然而,急性腎損傷(AKI) 的診斷,傳統(tǒng)依賴于血清肌酐水平的急劇上升或者尿量的改變。但是,由于部分AKI并不伴 有尿量的變化;SCr升高也滯后于實際腎小球濾過率(GFR)的下降。因此,傳統(tǒng)依賴于血清 肌酐水平的急劇上升或者尿量的改變早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法,不僅存在一 定的誤診率,而且最重要的是確診時間滯后于實際發(fā)病時間,不利于早期診斷、早期干預(yù)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種運用MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方 法,以解決現(xiàn)有技術(shù)中確診時間滯后和特異性差的技術(shù)問題。為了達到上述目的,本發(fā)明提出了一種運用MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎 損傷的方法。即,運用熒光差異電泳和基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù)研究造影 劑腎損傷早期尿液蛋白質(zhì)譜的差異表達,搜尋特異的尿液診斷標(biāo)志物,并通過造影劑腎損 傷患者早期尿液和血液的檢測,確定甘露糖結(jié)合凝集素(Marmose binding lectin,MBL)的 臨床使用價值。也就是說,本發(fā)明的運用尿液MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法, 包括術(shù)后24小時患者的尿液和術(shù)前基礎(chǔ)尿液的熒光差異電泳圖的比較,尋找到若干個差 異表達的蛋白點;再經(jīng)基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù)鑒定,發(fā)現(xiàn)該些差異點中, 甘露糖結(jié)合凝集素MBL和MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶均增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,提示造影劑 所致急性腎損傷與MBL補體激活途徑相關(guān)。并通過尿液ELISA方法在造影劑腎損傷病人中 獲得驗證。如果運用于臨床,可通過ELISA的方法對術(shù)后24小時尿液MBL進行檢測,可用 于造影劑腎病的早期診斷,可以比血清肌酐提早24小時診斷,為臨床早診斷、早治療、改善 預(yù)后提供依據(jù)。
具體實施例方式而今,越來越多觀點認為SCr對AKI不是一個敏感、特異、可靠的診斷指標(biāo)。新型診斷標(biāo)志物的研究可以為早期診斷、早期干預(yù)以及指導(dǎo)治療提供依據(jù)。尿液與血清等其它體液樣本相比,其蛋白構(gòu)成相對簡單、穩(wěn)定性好、易于分析,可用于人類多種疾病的檢測,特 別是泌尿系統(tǒng)疾病,是較血清更好的臨床標(biāo)本。目前申請人研究發(fā)現(xiàn),尿白介素18(IL_18)、尿液中性粒細胞明膠酶相關(guān)的載脂蛋 白(NGAL)等可能可以作為AKI的早期診斷標(biāo)志,但關(guān)于尿液甘露糖結(jié)合凝集素對急性腎臟 病,特別是造影劑所致急性腎損傷中的診斷價值尚未見相關(guān)報道。為此,申請人提出了一種運用MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法。 即,運用熒光差異電泳和基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù)研究造影劑腎損傷早期 尿液蛋白質(zhì)譜的差異表達,搜尋特異的尿液診斷標(biāo)志物,并通過造影劑腎損傷患者早期尿 液和血液的檢測,確定甘露糖結(jié)合凝集素(Marmose binding lectin, MBL)的臨床使用價 值。在前期關(guān)于造影劑腎損傷尿液早期診斷標(biāo)志物的研究中發(fā)現(xiàn),術(shù)后24小時患者 的尿液和術(shù)前基礎(chǔ)尿液。需要說明的是,尿液直接從腎臟排出,對急性腎臟病有非常重要的診斷意義,血清 診斷指標(biāo)滯后于急性腎臟病的發(fā)生,而且特異性差,所以目前國際研究趨勢是尿液診斷指 標(biāo)的開發(fā),本次申請正是針對尿液MBL診斷CIN,而且后繼實驗發(fā)現(xiàn),血液MBL水平術(shù)前術(shù)后 并沒有明顯改變,熒光差異電泳圖的比較,尋找到若干個差異表達的蛋白點(比如采用56 個差異表達點)。再經(jīng)MALDI-T0F-質(zhì)譜(基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù))鑒 定,發(fā)現(xiàn)其中MBL和MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶(MBL associated serine protease 2)均明 顯增高(比如,增高的幅度高于某一域值),由于此2種蛋白酶均與補體激活及細胞損傷發(fā) 病機制相關(guān),提示造影劑腎病可能和MBL補體激活途徑相關(guān),尿液MBL的檢測可能可以作為 早期診斷的重要依據(jù)。絲氨酸蛋白酶是臨床檢測需要穩(wěn)定性好的指標(biāo),而MBL相對與MBL 相關(guān)的絲氨酸蛋白酶更為穩(wěn)定,不容易受到溫度、時間等因素的影響,便于臨床ELISA檢測 的實施。MBL在尿液中較為穩(wěn)定,不容易受到儲藏溫度和時間的影響,所以術(shù)后24小時尿 液MBL可用于CIN的早期診斷,可以比SCr提早24小時診斷,為臨床早診斷、早治療、改善 預(yù)后提供依據(jù)。為了能夠驗證申請人的這項研究,申請人為此做了一實驗。另選13例CIN患者和18例配對患者的尿液進行檢測,以驗證MBL對造影劑腎病早 期診斷的價值,發(fā)現(xiàn)CIN組術(shù)后24小時尿液較非CIN組明顯升高,[2. 080 (1. 420,5. 720) vs 1. 411(0. 738,1. 855)ng/L,P = 0. 002]。術(shù)后MBL和CIN發(fā)病ROC曲線分析顯示,曲線下面積 達77. 8%。MBL術(shù)后上升的絕對值對CIN發(fā)病行R0C曲線分析顯示,曲線下面積達82. 9%, 術(shù)后上升絕對值為1. lng/L時,診斷的敏感性和特異性分別為69. 2%和88. 9%。而在術(shù)后 24小時,傳統(tǒng)標(biāo)志物SCr還未見明顯升高,SCr需要術(shù)后48-72小時才能診斷。而術(shù)后24 小時血清MBL值在CIN組和非CIN組間無顯著差異[1. 08 (0. 755,1. 629) vs 0. 835 (0. 417, 1. 313)mg/L, P = 0. 943]。所以,術(shù)后24小時尿液MBL可用于CIN的早期診斷,可以比SCr提早24小時診斷, 為臨床早診斷、早治療、改善預(yù)后提供依據(jù)。即,運用尿液MBL術(shù)后和術(shù)前基礎(chǔ)值進行比較,如果術(shù)后24小時絕對值較術(shù)前上升了 1. lng/L則可以用于診斷CIN的發(fā)生,診斷特異性和敏感性均可以達到69. 2%和 88.9%。可用于CIN的早期診斷,有助于及早治療和改善預(yù)后。使更多的危重病人可以在 接受造影后,早期診斷急性腎損傷的發(fā)生,從而及時采取措施,防止腎病進入透析階段,可 以減少國家醫(yī)療開支。達到較好的社會效益和經(jīng)濟效益。 以上公開的僅為本發(fā)明的幾個具體實施例,但本發(fā)明并非局限于此,任何本領(lǐng)域 的技術(shù)人員能思之的變化,都應(yīng)落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種運用MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法,其特征在于,包括術(shù)后若干小時患者的尿液和術(shù)前基礎(chǔ)尿液的熒光差異電泳圖的比較,尋找到若干個差 異表達的蛋白點;再經(jīng)基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù)鑒定,發(fā)現(xiàn)該些差異點中甘露糖結(jié)合凝 集素MBL和MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶的平均增高于某一域值,則可初步診斷造影劑所致急 性腎損傷。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,差異表達的蛋白點為56個。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,術(shù)后若干小時為術(shù)后24小時。
4.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,經(jīng)ELISA方法檢測,該些差異點中的甘露糖 結(jié)合凝集素MBL和MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶的平均增高,若術(shù)后24小時絕對值較術(shù)前上升 了 1. lng/L則可初步診斷CIN的發(fā)生。
全文摘要
一種運用尿液MBL實現(xiàn)早期診斷造影劑所致急性腎損傷的方法,包括術(shù)后24小時患者的尿液和術(shù)前基礎(chǔ)尿液的熒光差異電泳圖的比較,尋找到若干個差異表達的蛋白點;再經(jīng)基質(zhì)支持激光解析離子飛行時間質(zhì)譜技術(shù)鑒定,發(fā)現(xiàn)該些差異點中,甘露糖結(jié)合凝集素MBL和MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶均增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,提示造影劑所致急性腎損傷與MBL補體激活途徑相關(guān)。并通過尿液ELISA方法在造影劑腎損傷病人中獲得驗證。如果運用于臨床,可通過ELISA的方法對術(shù)后24小時尿液MBL進行檢測,可用于造影劑腎病的早期診斷,可以比血清肌酐提早24小時診斷,為臨床早診斷、早治療、改善預(yù)后提供依據(jù)。
文檔編號G01N27/447GK101995428SQ20091019447
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月24日
發(fā)明者倪兆, 慧王玲, 賈明宏 申請人:賈明宏