專利名稱:一步半雙抗原夾心免疫檢測法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及免疫檢測領(lǐng)域,具體地說,本發(fā)明涉及一種新型的一步半雙抗原夾心 檢測法(下面簡稱一步半法)。
背景技術(shù):
免疫檢測是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測定樣本中待測物質(zhì)的方法。在臨床檢驗中主要通過 抗原抗體反應(yīng)檢測樣品中的抗體或抗原性物質(zhì)。根據(jù)檢測原理的不同,免疫檢測可以分為 間接法、夾心法(包括雙抗原夾心法和雙抗體夾心法)、捕獲法、競爭法等。雙抗原夾心法檢抗體是免疫檢測中檢測抗體的一種常用方法。其基本原理是,利 用抗原抗體之間的特異性結(jié)合作用,通過形成“包被抗原-抗體-標(biāo)記抗原”的夾心復(fù)合 體,并利用相應(yīng)的結(jié)果呈現(xiàn)技術(shù)對檢測反應(yīng)體系中形成的該夾心復(fù)合體的量進(jìn)行一定形式 的測定。例如,HIV、HBV表面抗原抗體、TP、HTLV等項目均可采用該方法對受檢樣品中的抗 體進(jìn)行檢測。進(jìn)一步,根據(jù)抗原標(biāo)記物及底物的不同,雙抗原夾心法可具體應(yīng)用在酶聯(lián)免疫 檢測(ELISA),發(fā)光免疫檢測等具體檢測技術(shù)領(lǐng)域。以ELISA檢測法為例,常用ELISA雙抗原夾心法的檢測步驟可簡單分為兩步法和
一步法。兩步法的基本步驟1)將特異性抗原包被于固相載體。2)加受檢樣本,保溫反應(yīng)。 受檢樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物。洗滌除去 其他未結(jié)合物質(zhì)。3)加酶標(biāo)抗原,保溫反應(yīng)。上述“包被抗原-抗體”免疫復(fù)合物上的抗 體與酶標(biāo)抗原結(jié)合,形成“包被抗原_抗體_酶標(biāo)抗原”復(fù)合物。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗 原。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗體的量成正相關(guān)。4)加底物顯色。固相上 的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知樣本中是否存在待檢測抗體。若將上述兩步法中的步驟2)和3)合并,即同時加入酶標(biāo)抗原和受檢樣本,一起做 保溫反應(yīng),則為一步法檢測。與兩步法相比,一步法中受檢樣本和酶標(biāo)抗原一并加入,省略 了兩步法2)中加入了受檢樣本后的洗板過程,更加簡便省時。但是,一步法由于為了緩解 鉤狀效應(yīng),需要把包被抗原和標(biāo)記抗原的使用濃度都提高很多,容易造成檢測結(jié)果具有較 高的假陽和本底,從而導(dǎo)致檢測的特異性不好。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過對傳統(tǒng)雙抗原夾心一步法和兩步法的改進(jìn),創(chuàng)造出一種既提高檢測的 靈敏度并改善特異性和本底,又能減少原有一步法技術(shù)的鉤狀效應(yīng),且操作簡便,實用可靠 的新一代一步半雙抗原夾心免疫檢測法。本發(fā)明區(qū)別于以往的一步法和兩步法,在加入受檢樣本,充分反應(yīng)第一預(yù)定時間 后,不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入標(biāo)記抗原,再反應(yīng)第二預(yù)定時間,然后,徹底洗滌未 結(jié)合的受檢樣本和標(biāo)記抗原,通過標(biāo)記物顯示結(jié)果,完成檢測。本發(fā)明一步半法的具體過程,以ELISA雙抗原夾心法為例,(i)將特異性抗原包被于固相載體,如果是采用試劑盒,則不需要此步驟,而是直接在預(yù)先包被有包被抗原的固相 支持物上加入受檢樣本;(ii)加入受檢樣本,保溫反應(yīng);當(dāng)樣本中存在受檢抗體時,樣本中 的受檢抗體與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物;(iii)反應(yīng)適當(dāng)時間后,不需 洗滌除去該反應(yīng)中其他未結(jié)合的樣本,繼續(xù)加酶標(biāo)記抗原,保溫反應(yīng),“包被抗原_抗體”復(fù) 合物上的抗體與酶標(biāo)記抗原結(jié)合;(iv)反應(yīng)適當(dāng)時間后,徹底洗滌未結(jié)合的受檢樣本和酶 標(biāo)抗原,加底物顯色,通過測量反應(yīng)體系顏色的深淺,測知樣本中是否存在受檢抗體,從而 完成檢測過程。在傳統(tǒng)的一步法中,受檢樣本和標(biāo)記抗原是同時加入,即反應(yīng)體系中同時存在游 離的標(biāo)記抗原和受檢抗體,受檢抗體部分與包被抗原形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物,部分 與標(biāo)記抗原形成“標(biāo)記抗原-抗體”復(fù)合物。尤其當(dāng)反應(yīng)體系中受檢抗體的含量很高時, 受檢抗體與游離的標(biāo)記抗原形成的“標(biāo)記抗原-抗體”復(fù)合物嚴(yán)重影響了 “包被抗原-抗 體-標(biāo)記抗原”夾心結(jié)構(gòu)的形成,從而形成鉤狀效應(yīng),甚至造成假陰的漏檢現(xiàn)象。本發(fā)明中涉及的一步半雙抗原夾心免疫檢測法,在包被有特異性抗原的固相支持 物上先加入受檢樣本,充分反應(yīng)適當(dāng)時間。此時,該反應(yīng)體系中的受檢抗體(如果有)將與 固相化的包被抗原充分結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物。然后不移除反應(yīng)中未與包被 抗原結(jié)合的受檢樣本,加入標(biāo)記抗原,進(jìn)一步形成“包被抗原-抗體-標(biāo)記抗原”復(fù)合物,進(jìn) 而完成后續(xù)檢測。若受檢抗體含量很高,對比傳統(tǒng)一步法,在反應(yīng)初期,由于受檢樣本與標(biāo) 記抗原不是同時加入,樣本中的受檢抗體與包被抗原的初期反應(yīng)未受到標(biāo)記抗原的影響, 實際延長了受檢抗體與包被抗原的單獨(dú)反應(yīng)時間,使得更多的受檢抗體得以與包被抗原充 分反應(yīng),因此本發(fā)明的一步半檢測法中標(biāo)記抗原與“包被抗原-抗體”復(fù)合物結(jié)合而形成 “包被抗原-抗體-標(biāo)記抗原”夾心復(fù)合物的概率明顯提高。換而言之,由于采用了一步半 法,可以有效的減少鉤狀效應(yīng)的不利影響。后續(xù)的實施例的實驗數(shù)據(jù)中則進(jìn)一步證明此效 果受檢抗體含量較高的受檢樣本,采用一步法由于鉤狀效應(yīng)檢出假陰結(jié)果,而采用本發(fā)明 中的一步半法檢出為陽性。與傳統(tǒng)兩步法相比,本發(fā)明的一步半法在特異性方面有明顯提高。這主要是在受 檢抗體與包被抗原反應(yīng)中,傳統(tǒng)兩步法采用多種緩沖液加一定的惰性蛋白充當(dāng)樣稀,而在 本發(fā)明的一步半法中采用受檢樣本作為天然樣稀。根據(jù)實驗結(jié)果顯示(詳見實施例部分), 將受檢樣本作為天然樣稀能有效的消除非特異性結(jié)合。這主要是由于受檢樣本中存在多種 天然蛋白,而且濃度很高。非特異性結(jié)合在天然狀態(tài)下具有動態(tài)不穩(wěn)定性,容易受到這種 “天然樣稀”的復(fù)雜蛋白成分的影響,從而使得非特異性結(jié)合的降低,天然樣稀對比傳統(tǒng)兩 步法中的人工樣稀對非特異性結(jié)合的影響更顯著,實際降低了一步半法的本底,即采用一 步半法相較傳統(tǒng)兩步法本底更低。但同時對于特異性反應(yīng),由于抗原抗體的特異性結(jié)合力 比較牢固,所以對于陽性樣品,其血清中的復(fù)雜蛋白成分對于靈敏度的干擾不大,具體可見 實施例數(shù)據(jù)。進(jìn)一步,由于本發(fā)明的一步半法具有更優(yōu)本底,所以在后續(xù)反應(yīng)體系中可以提高 標(biāo)記抗原的用量,從而大大提高檢測結(jié)果的靈敏度,這使得一步半法具有比兩步法更高的 靈敏度。此外,與傳統(tǒng)兩步法相比,本發(fā)明的一步半法中間節(jié)省了移除受檢樣品的過程,實 際延長了受檢抗體與包被抗原的反應(yīng)時間。綜合反應(yīng)時間,特異性,以及本底優(yōu)勢,本發(fā)明的一步半法較傳統(tǒng)兩步法具有更高的靈敏度。本發(fā)明的一步半法同樣適用于發(fā)光免檢檢測,其原理一致。以化學(xué)發(fā)光免疫檢測 法為例,將上述ELISA —步半雙抗原夾心法中的標(biāo)記物或者標(biāo)記物和底物進(jìn)行相應(yīng)替換, 通過對光信號的強(qiáng)度進(jìn)行測量,從而完成對受檢樣品中受檢抗體含量的檢測。本發(fā)明以HIV的ELISA雙抗原夾心法和化學(xué)發(fā)光法為例,與傳統(tǒng)一步法和兩步法 做對照,采用國家參考品以及臨床標(biāo)本為實驗對象,進(jìn)行了相關(guān)試驗,根據(jù)實施例1的實驗 結(jié)果顯示本方法在HIV項目上較以往的傳統(tǒng)方法,有顯著的效果改進(jìn)。具體參看實施例1。為進(jìn)一步推廣驗證一步半法,本發(fā)明在TP、HTLV、HBV項目上也進(jìn)行了上述HIV的 ELISA雙抗原夾心檢測和化學(xué)發(fā)光檢測的類似實驗,根據(jù)實施例2-4的數(shù)據(jù),采用本發(fā)明后 檢測效果同樣具有顯著改善。因此,本發(fā)明提供一種一步半雙抗原夾心免疫檢測法,其包括如下步驟,(1)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反 應(yīng)第一預(yù)定時間;(2)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入標(biāo)記有標(biāo)記物的標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度 下,保溫反應(yīng)第二預(yù)定時間;(3)移除未結(jié)合的受檢樣本和標(biāo)記抗原,通過標(biāo)記物顯示檢測結(jié)果,完成檢測。在一個方案中,其采用酶聯(lián)免疫檢測,包括如下步驟,(11)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫 反應(yīng)第一預(yù)定時間,讓樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù) 合物;(12)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入酶標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第二 預(yù)定時間,讓“包被抗原_抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與酶標(biāo)記抗原結(jié)合;(13)移除未結(jié)合的受檢樣本和酶標(biāo)記抗原,加底物反應(yīng)第三預(yù)定時間,終止酶反 應(yīng),完成檢測過程。在另一個方案中,其采用發(fā)光免疫檢測,包括如下步驟,(21)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反 應(yīng)第一預(yù)定時間,讓樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù) 合物;(22)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入酶標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第二 預(yù)定時間,讓“包被抗原_抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與酶標(biāo)記抗原結(jié)合;(23)移除未結(jié)合的受檢樣本和酶標(biāo)記抗原,加發(fā)光底物反應(yīng)第三預(yù)定時間,終止 酶反應(yīng),測定發(fā)光強(qiáng)度,完成檢測過程。再一個方案中,其采用發(fā)光免疫檢測,包括如下步驟,(31)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反 應(yīng)第一預(yù)定時間,讓樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原-抗體”復(fù) 合物;(32)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入發(fā)光標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第 二預(yù)定時間,讓“包被抗原-抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與發(fā)光標(biāo)記抗原結(jié)合;(33)移除未結(jié)合的受檢樣本和發(fā)光標(biāo)記抗原,通過發(fā)光標(biāo)記物顯示檢測結(jié)果,完成檢測過程。在進(jìn)一步具體的實施方案中,本發(fā)明可以分別應(yīng)用于HIV、TP、HTLV、HBV表面抗原 抗體檢測項目。關(guān)于上述檢測步驟中提到的各個時間,例如第一時間、第二時間、第三時間,都不 是固定不變的,為了使檢測效果達(dá)到最佳,這些在檢測流程中的時間長短是可以根據(jù)實際 情況而有調(diào)整的,這并不是本發(fā)明的重點(diǎn),本領(lǐng)域技術(shù)人員可以領(lǐng)會。由于本發(fā)明的實質(zhì)在是免疫檢測步驟方面的改進(jìn),跟其顯示結(jié)果時所用的標(biāo)記物 種類無關(guān),雖然實施例以HRP作為標(biāo)記物來進(jìn)行一步半檢測,但是本領(lǐng)域的技術(shù)員可以把 HRP換成其它種類的標(biāo)記物,例如化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物來實施一步半檢測,這并不超出本發(fā)明的 范圍,因為標(biāo)記物的不同只是實驗人員的選擇不同而已。本發(fā)明能彌補(bǔ)一步法檢測中所固有的鉤狀效應(yīng),改善一步法的非特異性并降低本 底,并進(jìn)一步提高兩步夾心法檢測靈敏度,降低本底的一步半法。該方法不僅結(jié)合了一步法 操作簡便的優(yōu)勢,同時能夠有效的緩解鉤狀效應(yīng)的影響,取得了靈敏度顯著提高的同時,特 異性和本底均明顯改善的突出效果。
具體實施例方式下述各實施例中,在采用的方法中都是先制備包被,然后再進(jìn)行其它步驟,實際上 如果是采用試劑盒,則不需要此制備包被的步驟,而是直接在預(yù)先包被有包被抗原的固相 支持物上加入受檢樣本。實施例1. 一步半法檢測HIV抗體1. 1抗原包被將HIV抗原H67 (深圳市菲鵬生物股份有限公司產(chǎn)品)以一定比例用碳酸鹽緩沖 液(50mM,pH9. 51)稀釋,IOOul/孔加入酶標(biāo)板(深圳金燦華實業(yè)有限公司輻照酶標(biāo)板), 4°C包被 18-24 小時;次日用 PBSTdOmM PB, 150mM NaCl,0. 05% Tween-20, ρΗ7· 4)洗滌液 洗板二次,拍干;20ul/孔加入封閉液(英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司),37°C封閉2小時 或者4°C封閉過夜;甩掉孔內(nèi)液體,拍干,置室溫20-25°C、濕度55% -65%、有通風(fēng)設(shè)備的房 間內(nèi)風(fēng)干;封裝于加有干燥劑的鋁膜袋中,包被完畢。1. 2檢測步驟為了顯示一步半法檢測的優(yōu)勢,本發(fā)明在相同條件下分別做了一步半法,以及一 步法、兩步法的檢測,具體步驟如下一步半法在包被酶標(biāo)板中加入50ul待測樣本,37°C溫育30分鐘,不洗板,再加入50ul酶稀 釋液(含有20%新生牛血清,以一定比例稀釋的H15-HRP、H65-HRP標(biāo)記綴合物的pH7. 4的 20mM PB緩沖液),37°C溫育30分鐘;用PBST洗滌液洗板五次,拍干;每孔加入顯色劑A、 B(英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司)各50ul,37°C顯色15分鐘。每孔加50ul終止液(英 科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司)終止反應(yīng),酶標(biāo)儀450nm波長(參考波長630nm)空白孔校 零后讀取OD值。一步法在包被酶標(biāo)板中加入50ul待測樣本,以及50ul酶稀釋液(含有20%新生牛血清,以一定比例稀釋的H15-HRP、H65-HRP標(biāo)記綴合物(深圳市菲鵬生物股份有限公司產(chǎn)品)的 PH7. 4的20mM PB緩沖液),37°C溫育60分鐘;用PBST洗滌液洗板五次,拍干;跟一步半法 一樣加入底物顯色,37°C顯色15分鐘。兩步法在包被酶標(biāo)板中加入50ul樣本稀釋液以及50ul待測樣本,37°C溫育30分鐘;用 PBST洗滌液洗板五次,拍干;再加入IOOul酶稀釋液(含有20%新生牛血清,以一定比例 稀釋的H15-HRP、H65-HRP標(biāo)記綴合物的pH7. 4的20mM PB緩沖液),37°C溫育30分鐘;用 PBST洗滌液洗板五次,拍干;跟一步半法一樣加入底物顯色,37°C顯色15分鐘。為了在統(tǒng)一條件下將一步半法與一步法和兩步法進(jìn)行比較,本發(fā)明中涉及到一步 半法的時間(第一預(yù)定時間30分鐘,第二預(yù)定時間30分鐘)均與兩步法時間(兩步分別 反應(yīng)30分鐘)一致,且反應(yīng)總時間與一步法(反應(yīng)1個小時)保持一致,以突出說明一步 半法的優(yōu)勢。在實際情況中,為了使檢測效果達(dá)到最佳,這些在檢測流程中的時間長短是可 以根據(jù)實際情況而有調(diào)整的,這并不是本發(fā)明的重點(diǎn),本領(lǐng)域技術(shù)人員可以領(lǐng)會。1.3檢測結(jié)果將上述三種方法的包被抗原稀釋比例以及抗原-HRP標(biāo)記綴合物的稀釋比例分別 調(diào)試到各自的最佳條件(本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該能夠領(lǐng)會,在此不贅述)來比較檢測效果。由于HIV抗體ELISA檢測的現(xiàn)有技術(shù)是兩步法(一步法存在鉤狀效應(yīng)導(dǎo)致的漏檢 風(fēng)險,所以基本上HIV項目很少使用),我們首先用一步半法和兩步法同時檢測了 HIV抗體 國家參考品(批號20061201,購自中國藥品生物制品檢定所),包括20份陽性Pl P20(其 中2份HIV-2型陽性)、20份陰性附 N20及6份最低檢出限樣品Sl S6,同時對照檢測 了 10份本實驗室的臨床陽性血清Il 110,10份本實驗室的臨床假陽血清Jl J10,這 10份血清以前用HIV確認(rèn)試劑盒檢測皆為陰性。最終檢測結(jié)果如表1所示。表1 一步半法以及兩步法檢測HIV抗體國家參考品的結(jié)果
權(quán)利要求
一步半雙抗原夾心免疫檢測法,其特征在于,包括如下步驟,(1)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反應(yīng)第一預(yù)定時間;(2)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入標(biāo)記有標(biāo)記物的標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度下,保溫反應(yīng)第二預(yù)定時間;(3)移除未結(jié)合的受檢樣本和標(biāo)記抗原,通過標(biāo)記物顯示檢測結(jié)果,完成檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步半雙抗原夾心免疫檢測法,其特征在于,本發(fā)明的一步 半雙抗原夾心免疫檢測法作為酶聯(lián)免疫檢測時,包括如下步驟,(11)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反應(yīng) 第一預(yù)定時間,樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原_抗體”復(fù)合物;(12)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入酶標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第二預(yù)定 時間,“包被抗原_抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與酶標(biāo)記抗原結(jié)合;(13)移除未結(jié)合的受檢樣本和酶標(biāo)記抗原,加底物反應(yīng)第三預(yù)定時間后終止酶反應(yīng), 完成檢測過程。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步半雙抗原夾心免疫檢測法,其特征在于,本發(fā)明的一步 半雙抗原夾心免疫檢測法作為發(fā)光免疫檢測時,包括如下步驟,(21)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反應(yīng) 第一預(yù)定時間,樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原_抗體”復(fù)合物;(23)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入酶標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第二預(yù)定 時間,“包被抗原_抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與酶標(biāo)記抗原結(jié)合;(24)移除未結(jié)合的受檢樣本和酶標(biāo)記抗原,加發(fā)光底物反應(yīng)第三預(yù)定時間后終止酶反 應(yīng),測定發(fā)光強(qiáng)度,完成檢測過程。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步半雙抗原夾心免疫檢測法,其特征在于,本發(fā)明的一步 半雙抗原夾心免疫檢測法作為發(fā)光免疫檢測時,包括如下步驟,(31)在預(yù)先包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本,在預(yù)定溫度下,保溫反應(yīng) 第一預(yù)定時間,樣本中的抗體(如果有)與包被抗原結(jié)合,形成“包被抗原_抗體”復(fù)合物;(32)不移除未結(jié)合的受檢樣本,直接加入發(fā)光標(biāo)記抗原,在預(yù)定溫度保溫反應(yīng)第二預(yù) 定時間,“包被抗原_抗體”復(fù)合物上的抗體(如果有)與發(fā)光標(biāo)記抗原結(jié)合;(33)移除未結(jié)合的受檢樣本和發(fā)光標(biāo)記抗原,通過發(fā)光標(biāo)記物顯示檢測結(jié)果,完成檢 測過程。
5.本發(fā)明一步半雙抗原夾心免疫檢測法在對HIV抗體檢測、TP抗體檢測、HTLV抗體檢 測或HBV表面抗原抗體檢測方面的應(yīng)用。
全文摘要
一步半雙抗原夾心免疫檢測法,包括如下步驟,在包被有包被抗原的固相支持物上加入受檢樣本;在預(yù)定溫度下保溫,充分反應(yīng)第一預(yù)定時間后,不移除受檢樣本,直接加入標(biāo)記抗原;再反應(yīng)第二預(yù)定時間,然后,徹底洗滌未結(jié)合的樣本和標(biāo)記抗原,加底物反應(yīng)第三預(yù)定時間,檢測顯示結(jié)果,完成檢測。本發(fā)明相較傳統(tǒng)一步法,本發(fā)明中標(biāo)記抗原與“包被抗原-抗體”復(fù)合物結(jié)合而形成“包被抗原-抗體-標(biāo)記抗原”夾心復(fù)合物的概率明顯提高,可以有效的減少鉤狀效應(yīng)的不利影響。與傳統(tǒng)兩步法相比,本發(fā)明在特異性方面有明顯提高。這主要是在受檢抗體與固相抗原反應(yīng)中,傳統(tǒng)兩步法采用多種緩沖液加一定的惰性蛋白充當(dāng)樣稀,而在本發(fā)明中受檢樣本作為天然樣稀,天然樣稀能有效的消除非特異性結(jié)合。
文檔編號G01N21/75GK101968483SQ20091015921
公開日2011年2月9日 申請日期2009年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月27日
發(fā)明者何志強(qiáng), 孫興寶, 孫婧, 崔鵬, 王紅, 王蓉娥, 胡鵬, 范凌云, 鄭煥巍, 顏文豪 申請人:深圳市菲鵬生物股份有限公司