專(zhuān)利名稱(chēng)：以液相色譜質(zhì)譜法檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器可提取物的方法
以液相色譜質(zhì)譜法檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器可提取物
的方法相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求了于2007年8月24日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/966，065的權(quán)益。其 全部傳授內(nèi)容通過(guò)弓I用結(jié)合在此。
背景技術(shù)：
過(guò)濾裝置被廣泛用來(lái)從生物藥劑產(chǎn)品中除去顆粒和微生物或純化蛋白質(zhì)。在過(guò)濾 過(guò)程中，來(lái)自過(guò)濾裝置的材料可能被提取到產(chǎn)物之中并影響它的效力以及安全性。食品與 藥物管理局(FDA)要求對(duì)用于人類(lèi)和動(dòng)物藥品的過(guò)濾器的可提取物進(jìn)行評(píng)估。
過(guò)濾器的可提取物主要是由低濃度的低聚物以及具有不同物理和化學(xué)性質(zhì)的添 加劑所構(gòu)成的復(fù)雜的混合物。因?yàn)樯锼巹┊a(chǎn)品的其他組分的濃度將會(huì)更高，過(guò)濾器的可 提取物的分析信號(hào)可能被掩蓋，并因此致使它們的存在不可檢測(cè)出。按照慣例，使用模型 流方法(Model Stream Approach) (Stone，Τ. Ε. ；Goel，V. ；Leszczak, J. Pharmaceutical Tech. 1994,116-130)來(lái)研究在過(guò)濾步驟之后存在的可提取物。在該方法的過(guò)程中，使過(guò)濾 裝置經(jīng)受一種模型溶劑，該模型溶劑模擬了一種藥物溶液特有的化學(xué)效應(yīng)。根據(jù)該原則， 選擇模型溶劑來(lái)代表過(guò)濾裝置將可能暴露的環(huán)境中的極端(高或低的PH、高的鹽濃度、或 有機(jī)溶劑)，但并不與生物藥劑產(chǎn)品的實(shí)際含量完全一樣。在腐蝕性條件下可能產(chǎn)生“最壞 的情況”，此時(shí)過(guò)濾器的可提取物的含量被最大化。采用分析技術(shù)諸如液相色譜紫外檢測(cè)法 (LCUV)、氣相色譜質(zhì)譜法(GCMS)以及傅里葉變換紅外光譜法(FTIR)來(lái)檢測(cè)在試驗(yàn)過(guò)程中 進(jìn)入模型溶劑中的可提取物的存在。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明使用液相色譜_質(zhì)譜法來(lái)檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的污染物諸如可提取物或 可浸取物(“可提取物”的)的存在，諸如通過(guò)一種生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾被引入的過(guò)濾器的 可提取物或可能在該生物藥劑產(chǎn)品的制造和加工中從接觸產(chǎn)品的材料(或表面)中產(chǎn)生的 其他可提取物，諸如塑料。與當(dāng)前用于測(cè)試可提取物的技術(shù)相比，在此披露的方法可以用來(lái) 檢測(cè)實(shí)際的生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的以及其他可提取物的存在，而不是使用一種模型溶 劑系統(tǒng)。對(duì)實(shí)際藥品中的過(guò)濾器的以及其他可提取物的檢測(cè)提供了對(duì)于由所加工的生物藥 劑產(chǎn)品而有可能引入人類(lèi)或動(dòng)物患者體內(nèi)的這些可提取物的特征曲線(xiàn)(profile)的精確 表征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是一種檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的方法，該方法是 通過(guò)制備一個(gè)無(wú)任何可提取物的生物藥劑產(chǎn)品的參比樣品，向該參比樣品中加入可提取物 標(biāo)準(zhǔn)物。然后通過(guò)液相色譜(LC)法對(duì)該參比樣品進(jìn)行分離。在分離之后，將樣品轉(zhuǎn)向廢液 一段時(shí)間以除去參比樣品中對(duì)可提取物的檢測(cè)造成基質(zhì)干擾的組分。剩余的參比樣品通過(guò) 一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)參考質(zhì)譜圖。同樣地，制備一個(gè)測(cè)試樣品。該測(cè)試樣品是可 能包含可提取物的生物藥劑產(chǎn)品，這些可提取物是通過(guò)生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾或通過(guò)它的制 造工藝而被引入的。使用液相色譜法對(duì)測(cè)試樣品進(jìn)行分離。在分離之后，將測(cè)試樣品轉(zhuǎn)向廢 液一段時(shí)間以除去測(cè)試樣品中對(duì)可提取物的檢測(cè)造成基質(zhì)干擾的組分。剩余的參比樣品通過(guò)一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得測(cè)試質(zhì)譜圖。將測(cè)試質(zhì)譜圖與參考質(zhì)譜圖進(jìn)行比較以確定測(cè) 試樣品中可提取物的存在或缺乏。在一個(gè)實(shí)施方案中，可提取物是通過(guò)生物藥劑產(chǎn)品的過(guò) 濾而被引入的過(guò)濾器的可提取物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這些提取物可能是會(huì)從用來(lái)制造 以及加工該生物藥劑產(chǎn)品或中間產(chǎn)物的設(shè)備、材料或表面浸出的任何物質(zhì)，諸如塑料。在一 個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該過(guò)濾器的可提取物可以是來(lái)自聚丙烯(PP)支撐膜或聚偏氟 乙烯(PVDF)微孔膜(諸如來(lái)自可商購(gòu)的名字為Durapore ( Millipore Corporation) 的過(guò)濾器和膜)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，可以通過(guò)LCMS確定在生物藥劑產(chǎn)品中存在的可 提取物的量。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是針對(duì)一種使用液相色譜質(zhì)譜法(LCMS)并使用過(guò)濾器 的可提取物的特征性停留時(shí)間來(lái)檢測(cè)過(guò)濾器的可提取物的方法。另一個(gè)實(shí)施方案是使用大 約11. 5至大約12. 4分鐘的平均停留時(shí)間。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是針對(duì)使用液相色譜質(zhì)譜法(LCMS)來(lái)檢測(cè)過(guò)濾器的可 提取物的特征性離子的一種方法。另一個(gè)實(shí)施方案是檢測(cè)在大約329. 2至大約357. 2質(zhì)荷 比(M/Z)處的離子。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，該樣品通過(guò)LC被分離并然后在被MS處理之前轉(zhuǎn) 向廢液一段時(shí)間。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，在LC分離之后樣品轉(zhuǎn)向廢液的時(shí)間的長(zhǎng) 度是取決于所使用的過(guò)濾器的類(lèi)型、滅菌和過(guò)濾條件、以及生物藥劑產(chǎn)品的含量。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，在對(duì)感興趣的過(guò)濾器特征性的第一批目標(biāo)可提取化合物從LC步驟中被洗脫 掉之前盡可能最晚的時(shí)刻應(yīng)發(fā)生這種轉(zhuǎn)向。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，該時(shí)間段長(zhǎng)達(dá) 10分鐘。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這種轉(zhuǎn)向廢液的時(shí)間是10分鐘。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，導(dǎo)致基質(zhì)干擾的組分是選自下組，其構(gòu)成為活性 藥用成分、緩沖劑類(lèi)、鹽類(lèi)、防腐劑類(lèi)、增溶劑類(lèi)、螯合劑類(lèi)、酸類(lèi)、堿類(lèi)、糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、肽、以 及它們的組合。


上述內(nèi)容從以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)例性的實(shí)施方案的更具體說(shuō)明中是更清楚的。圖IA是一種液體流動(dòng)模式的示意圖，此時(shí)在液相色譜/質(zhì)譜技術(shù)中使用一個(gè)常規(guī) 的注射閥，且該注射閥處于“廢液”設(shè)置。圖IB是一種液體流動(dòng)模式的示意圖，此時(shí)圖IA中的常規(guī)注射閥被切換至“源液”設(shè)置。圖2A是按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案穿過(guò)一個(gè)液相色譜分流器的一種液體流動(dòng)模 式的示意圖，而該分流器處于“廢液”設(shè)置。圖2B按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案穿過(guò)一個(gè)液相色譜分流器的一種液體流動(dòng)模式 的示意圖，且該分流器處于“源液”設(shè)置。圖3是來(lái)自過(guò)濾器的可提取物標(biāo)準(zhǔn)物的液相色譜分離步驟的基峰色譜圖，其疊置 在對(duì)照物的色譜圖上。圖4是來(lái)自?xún)蓚€(gè)峰的質(zhì)譜圖，這兩個(gè)峰在標(biāo)準(zhǔn)物的液相色譜步驟的色譜圖中已被確定。
圖5是可提取物標(biāo)準(zhǔn)物、基于小分子的藥品、以及摻有可提取物標(biāo)準(zhǔn)物的基于小 分子的藥品的色譜圖的疊放。圖6是可提取物標(biāo)準(zhǔn)物、基于大分子的藥品、以及摻有可提取物標(biāo)準(zhǔn)物的基于大 分子的藥品的色譜圖的疊放。
具體實(shí)施例方式以下是對(duì)本發(fā)明的實(shí)例性的實(shí)施方案的一個(gè)說(shuō)明。所有專(zhuān)利、公開(kāi)的申請(qǐng)、以及在 此引用的參考文獻(xiàn)的傳授內(nèi)容通過(guò)引用以其整體結(jié)合在此。食品與藥物管理局(FDA)要求在對(duì)計(jì)劃用于人類(lèi)或動(dòng)物使用的藥品的批準(zhǔn)過(guò) 程中對(duì)過(guò)濾器的可提取物進(jìn)行評(píng)估。根據(jù)FDA的要求，用來(lái)提取來(lái)自過(guò)濾器裝置中的過(guò) 濾器的可提取物的溶劑理想地將是藥品本身，因此獲得了相同的定性的提取特征曲線(xiàn) (Guidance for Industry “The Container Closure Systemsfor Packaging Human Drugs and Biologies. " 1999 ；Attachment C :ExtrgictioriStudies) 。 M胃，)^ 白勺胃·.· 的檢測(cè)在實(shí)際的生物藥劑學(xué)的溶液中難以完成，很大程度上是因?yàn)樵谶^(guò)濾過(guò)的藥品中的 過(guò)濾器的可提取物的濃度通常要低于該溶液中的其他組分的數(shù)量級(jí)。為避開(kāi)這種分析障 礙，當(dāng)前的用于過(guò)濾器的可提取物檢測(cè)的方法是通過(guò)模型溶劑法(Stone，Τ. Ε. ；Goel, V.； Leszczak, J. Pharmaceutical Tech. 1994，116-130)獲得的。在該科學(xué)方法中，采用一種代 用品溶劑系統(tǒng)來(lái)使過(guò)濾裝置經(jīng)受極端的化學(xué)條件，這些條件并不必須是生物藥劑產(chǎn)品的條 件的代表。使用替代的溶劑的目的是產(chǎn)生一種最壞的情況來(lái)表明所有可能來(lái)自給定的過(guò)濾 器裝置的可提取物。盡管該模型溶劑法提供了有用的信息，它并不能用來(lái)檢測(cè)在用于人類(lèi) 或動(dòng)物使用的生物藥劑產(chǎn)品中存在的實(shí)際的過(guò)濾器的可提取物。檢測(cè)實(shí)際存在于生物藥劑 產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的能力將有助于保證該藥品的安全性以及效力。本發(fā)明披露了一種允許檢測(cè)實(shí)際的生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的方法， 而不是在一個(gè)模型溶劑系統(tǒng)中。該方法利用液相色譜_質(zhì)譜法(LCMS)來(lái)檢測(cè)通過(guò)生物藥 劑產(chǎn)品的過(guò)濾而被引入的可提取物特征性的離子。盡管以下實(shí)例說(shuō)明了用于檢測(cè)過(guò)濾器的 可提取物的本發(fā)明的方法，這些方法總體上是適用于任何在制造或加工中被引入生物藥劑 產(chǎn)品中的可提取物，諸如來(lái)自過(guò)濾器殼體或與生物藥劑產(chǎn)品相接觸的具有浸取潛力的其他 設(shè)備的塑料可浸取物。因此，本發(fā)明的方法允許對(duì)可提取物(總的來(lái)說(shuō)是在一種生物藥劑 產(chǎn)品中)的檢測(cè)。常規(guī)的方法(諸如LCUV和FTIR)并不適用于直接檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的可提取 物，或者是因?yàn)槭芟薜撵`敏度或者是因?yàn)閲?yán)重的基質(zhì)干擾。然而，可提取物的檢測(cè)現(xiàn)在可以 按照本發(fā)明的方法直接在生物藥劑產(chǎn)品中完成，這歸因于用于減小或消除基質(zhì)干擾的一種 方法以及系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)。對(duì)生物藥劑產(chǎn)品中會(huì)造成基質(zhì)干擾的一種或多種組分的減小或消除 將允許使用質(zhì)譜儀對(duì)低或微量水平的可提取物進(jìn)行檢測(cè)，它們否則會(huì)被干擾組分所掩蓋。 通過(guò)應(yīng)用本發(fā)明的方法，對(duì)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的檢測(cè)現(xiàn)在是有可能的， 并且因此為本行業(yè)進(jìn)行測(cè)試并向FDA報(bào)告的一種未滿(mǎn)足的需要做出了有效的貢獻(xiàn)。在此描述的方法對(duì)于檢測(cè)、鑒定以及任選地定量一種可能含可提取物、可浸取物 或雜質(zhì)的生物藥劑產(chǎn)品中的污染物是有用的?？商崛∥锸窃谝环N溶劑的存在下可能從接觸 產(chǎn)品的材料的彈性體的或塑料的組分中被提取出的化合物，可浸取物是從接觸產(chǎn)品的材料彈性體的或塑料的組分中浸取入配制品中的化合物。雜質(zhì)是在存在于生物藥劑產(chǎn)品中或可能被引入生物藥劑產(chǎn)品中的化合物。如在此講明的，術(shù)語(yǔ)“可提取物”旨在覆蓋含可提取 物、可浸取物或雜質(zhì)的污染性化合物。為方便描述，本發(fā)明的方法將描述為可提取物，但可 浸取物和雜質(zhì)也被考慮到。可提取物是主要由低聚物以及具有不同物理和化學(xué)特性的添加 劑所構(gòu)成的復(fù)雜混合物，并且通常以大大低于該生物藥劑產(chǎn)品中的任何其他成分的濃度存 在，使得檢測(cè)它們的存在是困難的。FDA要求對(duì)可提取物進(jìn)行評(píng)估而獲得它們對(duì)于生物藥劑 產(chǎn)品的安全性以及效力的影響。生物藥劑產(chǎn)品包括用于人類(lèi)或動(dòng)物使用的藥品。這種生物藥劑產(chǎn)品是由一種活性 藥用成分(API)以及賦形劑類(lèi)組成。API是在疾病的診斷、治療、緩解、處理或預(yù)防中將要提 供藥理活性或其他直接效果、或影響人類(lèi)或動(dòng)物身體的結(jié)構(gòu)或任何功能的任何化合物。術(shù) 語(yǔ)“API”包括可以在藥品的制造中經(jīng)受化學(xué)變化并且以一種旨在提供特定的活性或效果的 改性的形式存在于藥品中的那些組分。適合本發(fā)明使用的API的實(shí)例，包括但不限于有機(jī) 小分子、有機(jī)大分子、核酸、氨基酸、以及蛋白質(zhì)。有機(jī)小分子典型地具有低于500道爾頓的 分子量，而有機(jī)大分子超過(guò)500道爾頓。當(dāng)有機(jī)大分子存在時(shí)基質(zhì)干擾通常更嚴(yán)重。當(dāng)有 機(jī)大分子存在時(shí)，可能必須要在LCMS步驟之前包括一個(gè)預(yù)處理步驟。以下描述了代表性的 預(yù)處理步驟，諸如沉淀。生物藥劑產(chǎn)品可進(jìn)一步包含賦形劑，賦形劑包括但不限于緩沖劑類(lèi)、酸類(lèi)、堿類(lèi)、 鹽類(lèi)、增溶劑類(lèi)、防腐劑類(lèi)、螯合劑類(lèi)、糖類(lèi)、氨基酸、蛋白質(zhì)以及溶劑類(lèi)。在生物藥劑產(chǎn)品中 可能存在一種、幾種或所有這些組分。這些成分中的許多(若不是全部)，部分地造成了對(duì) 可提取物的檢測(cè)信號(hào)的基質(zhì)干擾并且應(yīng)該在可提取物的檢測(cè)之前從生物藥劑產(chǎn)品中被消 除或減少。可以使用已知的用于去除或減少造成基質(zhì)干擾的組分的量值的方法，諸如蛋白 質(zhì)的沉淀。例如，可以在蛋白質(zhì)溶液中以4比1的體積比加入丙酮。反應(yīng)15分鐘之后將該 溶液在15，000RPM下離心10分鐘。然后移出含一種或多種有意義的分析物的上清液，用于 進(jìn)一步的分析。用于減小或除去基質(zhì)干擾組分的方法也可以使用以下詳細(xì)描述的新穎的轉(zhuǎn) 向方法和系統(tǒng)而完成。在生產(chǎn)過(guò)程中，生物藥劑產(chǎn)品可以從它們與之接觸的容器或過(guò)濾裝置中提取 出化學(xué)的化合物。生物藥劑產(chǎn)品與其接觸的時(shí)間的長(zhǎng)度、容器或過(guò)濾裝置的溫度處理、 接觸發(fā)生的溫度、以及存在于該生物藥劑產(chǎn)品中的其他溶劑或溶質(zhì)都會(huì)影響可能存在 于該生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的量和類(lèi)型?？商崛∥锇粋€(gè)或多個(gè)化學(xué)種類(lèi)，并且 可以在生物藥劑產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程中在不同的步驟中出現(xiàn)。例如，當(dāng)使用過(guò)濾裝置來(lái)從 生物藥劑產(chǎn)品中除去顆粒和微生物或純化蛋白質(zhì)時(shí)在生物藥劑產(chǎn)品通過(guò)一個(gè)過(guò)濾裝置 時(shí)可提取物可通過(guò)過(guò)濾而被引入。過(guò)濾器的代表性實(shí)例包括聚偏氟乙烯(PVDF)微孔 膜和聚丙烯(PP)支撐膜，諸如Millipore Durapore 過(guò)濾器；硼硅酸鹽玻璃纖維微 孔膜和聚丙烯支撐膜，諸如Millipore Lifegard 過(guò)濾器；聚丙烯微孔膜和聚丙烯支 撐(PP)膜，諸如Millipore Polygard 過(guò)濾器；聚四氟乙烯微孔膜和聚丙烯支撐膜， 諸如Millipore Opticap 過(guò)濾器；以及親水的聚醚砜微孔膜和聚丙烯支撐膜，諸如 Mi 11 ipore Express 過(guò)濾器。在另一個(gè)實(shí)例中，藥品在日常存儲(chǔ)或保質(zhì)期的研究中可以提取出它們的容器中的組分，由此被可提取物所污染。代表性的實(shí)例包括處理容器膜(processcontainer films)， 其中流體接觸材料是用超低密度聚乙烯(ULDPE)制成的；氣體阻擋物是用聚乙烯乙烯醇 的共聚物(EVOH)制成的；并且外層是用乙烯醋酸乙烯酯(EVA)以及ULDPE制成的，諸如 Millipore PureFlex 處理容器膜。Durapore 、Lifegard 、Polygard , Opticap 、 Millipore Express 、PureFlex 和MilUpore 被注冊(cè)為商標(biāo) Millipore Corporation, Billerica, MA。用于檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的方法包括將一個(gè)測(cè)試樣品的質(zhì)譜圖與一 個(gè)參比樣品進(jìn)行比較。如在此使用的，“參比樣品”是一個(gè)不含任何可提取物(在生產(chǎn)期間 引入)的生物藥劑產(chǎn)品的樣品，但向其中加入了一種可提取物。例如，參比樣品可以是一個(gè) 未被過(guò)濾的生物藥劑產(chǎn)品的樣品，并向其中加入了一種可提取物標(biāo)準(zhǔn)物。可提取物標(biāo)準(zhǔn)物 是可以通過(guò)一種特定容器或過(guò)濾器裝置的使用而被引入生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的混 合物。接觸產(chǎn)品的材料(諸如一個(gè)過(guò)濾器裝置)的可提取物標(biāo)準(zhǔn)物的特征曲線(xiàn)可以通過(guò)之 前建立的方法被測(cè)定。例如，可以在寬的范圍的條件(包括極端溫度、極端PH范圍、或反應(yīng) 性溶劑(包括有機(jī)溶劑)、長(zhǎng)的提取時(shí)間、以及高壓滅菌周期的循環(huán))下將模型流法應(yīng)用于 生產(chǎn)工藝的一個(gè)特定的組成部分中，諸如一個(gè)過(guò)濾器裝置。選擇的溶劑將被選擇用來(lái)模擬 有待測(cè)試的生物藥劑產(chǎn)品中的溶劑。在許多例子中，水或其他水溶劑將成為選擇的溶劑，因 為多數(shù)的生物藥劑產(chǎn)品存在于水性介質(zhì)中。對(duì)在這種方法的過(guò)程中所發(fā)現(xiàn)的組分的分析可 以表明這樣的化學(xué)物，它們可以從用于生物藥劑產(chǎn)品的生產(chǎn)的材料中被提取或浸取出，并 且可以提供在生物藥劑產(chǎn)品中可提取物的特征曲線(xiàn)?？商崛∥飿?biāo)準(zhǔn)物以適當(dāng)?shù)臐舛劝@ 些已知的組分。如在此使用的，“測(cè)試樣品”是一種可以包含有待確定的可提取物的生物藥劑產(chǎn) 品。例如，生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾可能引入可提取物，并因此將是一種適當(dāng)?shù)臏y(cè)試樣品。制備可以在參比樣品或測(cè)試樣品的注射之前進(jìn)行。一種可能的制備方法可包括將 樣品加熱或加入十二烷基硫酸鈉(SDS)來(lái)使任何存在的蛋白質(zhì)變性和/或沉淀。一些生物 藥劑產(chǎn)品可包含其他的能通過(guò)固相提取、或PH或溶液的離子強(qiáng)度的改變而被除去的組分。 其他的樣品制備技術(shù)可以用于本發(fā)明的方法。一種用于分析模型溶劑中的可提取物的濃度 的方法是不揮發(fā)殘?jiān)治觥？梢栽谧⑸溥M(jìn)LCMS之前將這些樣品稀釋以獲得適當(dāng)?shù)臐舛取Ｊ褂靡合嗌V法分別對(duì)參比和測(cè)試樣品進(jìn)行分離。在該方法開(kāi)展期間，應(yīng)該將流 動(dòng)相、固定相、流速、溫度和注射體積最佳化。在LC分離之后，將樣品洗脫液轉(zhuǎn)向廢液一段 時(shí)間。這種轉(zhuǎn)向過(guò)程除去了或減小了可能導(dǎo)致基質(zhì)干擾的組分，該組分影響了該測(cè)試方法 的執(zhí)行因而不能產(chǎn)生可信的數(shù)據(jù)?；|(zhì)干擾是由具有極端PH值、高的鹽濃度、反應(yīng)性的化 學(xué)組分、或高濃度的非目標(biāo)化合物的樣品造成的。以下段落描述了能導(dǎo)致基質(zhì)干擾的生物 藥劑產(chǎn)品組分的總體分類(lèi)。生物藥劑產(chǎn)品的活性藥用成分(API)是基質(zhì)干擾的一個(gè)來(lái)源。在一些情形下，API 比目標(biāo)可提取物在更早的時(shí)刻洗脫，并且可以使用在此描述的轉(zhuǎn)向方法被轉(zhuǎn)向離開(kāi)MS。另一種常見(jiàn)的基質(zhì)干擾的原因是緩沖劑類(lèi)。一列可能的緩沖劑包括但不限于 ACES、乙酸鹽、ADA、氫氧化銨、AMP (2-氨-2-甲基丙醇)、AMPD (2-氨基-2-甲基-1， 3-丙二醇)、AMPS0、BES、BICINE、雙(2-羥乙基)氨基(三羥甲基)甲烷(bis-tris)、雙三 羥基甲氨基丙烷(BIS-TRIS propane)、硼酸鹽、CABS、二甲次胂酸鹽、CAPS、CAPS0、碳酸鹽、CHES、檸檬酸鹽、DIPSO、EPPS、HEPPS、乙醇胺、甲酸鹽、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、HEPBS、HEPES、 HEPPSO、組氨酸、胼、咪唑、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、MES、甲胺、MOBS、MOPS、MOPSO、磷酸鹽、哌嗪、 哌啶、PIPES、POPSO、丙酸鹽、吡啶、焦磷酸鹽、琥珀酸鹽、TABS、TAPS、TAPSO、牛磺酸(AES)、 TES、曲辛、三乙醇胺、氨基丁三醇。鹽類(lèi)是生物藥劑產(chǎn)品的另一種可能向檢測(cè)中引入基質(zhì)干擾的組分。代表性的鹽類(lèi) 包括但不限于乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、重碳酸鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣、樟 腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基 硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、glyc印tate、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、對(duì)α-羥乙酰氨基苯砷 酸鹽、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、氫溴化物、鹽酸化物、羥萘甲酸鹽、碘化物、羥 乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘 酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、樸酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/ 二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、 硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿、甲苯磺酸鹽、以及 三乙基碘的鹽類(lèi)。還包括堿金屬鹽類(lèi)(尤其是鈉和鉀)、堿土金屬鹽類(lèi)(尤其是鈣和鎂)、鋁 鹽和銨鹽、以及用生理學(xué)上可接受的有機(jī)堿成的鹽類(lèi)，這些有機(jī)堿是諸如三甲胺、三乙胺、 嗎啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二環(huán)己胺、N，N’ - 二芐乙二胺、2-羥乙胺、雙-(2-羥乙基)胺、 三-(2-羥乙基)胺、普魯卡因、二芐基哌啶、脫氫松香胺、N，N’ -雙脫氫松香胺、葡萄糖胺、 N-甲葡糖胺、三甲基吡啶、奎寧、喹嚀制、以及堿性的氨基酸諸如賴(lài)氨酸和精氨酸。防腐劑類(lèi)通常被加入生物藥劑產(chǎn)品中以延長(zhǎng)其保質(zhì)期。一個(gè)代表性的清單包括但 不限于抗壞血酸、苯甲酸、苯甲醇、氯化芐烷銨(benzylalkoniumchloride)、異抗壞血酸、 丙酸、山梨酸、硫二丙酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁對(duì)甲氧酚、丁羥甲苯、抗壞血酸鈣、丙酸 鈣、山梨酸鈣、鈣，鈣'-硫二丙酸雙十二酯、愈創(chuàng)樹(shù)脂、羥苯甲酯、焦亞硫酸鹽、間甲酚、羥 苯甲酯、亞硫酸氫鉀、焦亞硫酸鉀、山梨酸鉀、沒(méi)食子酸丙酯、對(duì)羥苯甲酸丙酯、抗壞血酸鈉、 苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、丙酸鈉、山梨酸鈉、亞硫酸鈉、氯化亞錫、二氧化硫、生 育酚。為了溶解API并維持其溶解，可以向生物藥劑產(chǎn)品中加入增溶劑，但這些增溶劑 可能導(dǎo)致基質(zhì)干擾。PEG、Tween, CMC、以及SDS是作為增溶劑使用的試劑的所有可能情況。螯合劑也可能是基質(zhì)干擾的一個(gè)來(lái)源并且包括檸檬酸、酒石酸、乙酸鈣、氯化鈣、 檸檬酸鈣、雙乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、六偏磷酸鈣、磷酸二氫鈣、植酸鈣、磷酸氫二鉀、磷酸氫二 鈉、檸檬酸異丙酯、蘋(píng)果酸、一異丙基檸檬酸鹽、檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、雙乙酸鈉、葡萄糖酸 鈉、六偏磷酸鈉、偏磷酸鈉、磷酸鈉、焦磷酸鈉、焦磷酸四鈉、酒石酸鈉、酒石酸鈉鉀、硫代硫 酸鈉、三聚磷酸鈉、十八烷酰檸檬酸酯、以及己二胺四乙酸四鈉。通常向生物藥劑產(chǎn)品中加入酸和堿以調(diào)整pH或增強(qiáng)效力，但是它們的存在是基 質(zhì)干擾的一個(gè)來(lái)源。代表性的酸包括硝酸、鹽酸、硫酸、高氯酸、氫溴酸、氫碘酸、醋酸、抗 壞血酸、硼酸、丁酸、碳酸、檸檬酸、甲酸、庚酸、己酸、氫氰酸、氫氟酸、乳酸、亞硝酸、辛酸、草 酸、戊酸、磷酸、丙酸、亞硫酸、以及尿酸。代表性的堿包括氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫 氧化鎂、氫氧化鈣、丙氨酸、氨、二甲胺、乙胺、甘氨酸、胼、甲胺、以及三甲胺。糖類(lèi)，包括葡萄糖(右旋糖)、果糖、半乳糖、核糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、纖 維二糖、阿糖醇、赤蘚糖醇、丙三醇、異麥芽酮糖醇、乳糖醇、麥芽糖醇、甘露醇、山梨糖醇、以 及木糖醇，蛋白質(zhì)類(lèi)諸如白蛋白，以及肽類(lèi)都可能是基質(zhì)干擾的來(lái)源。
作為賦形劑使用的一種氨基酸的一個(gè)實(shí)例是L-組氨酸。作為賦形劑使用的一種蛋白質(zhì)的一個(gè)實(shí)例是牛血清白蛋白(BSA)。將樣品洗脫液進(jìn)行轉(zhuǎn)向包括在本方法的液相色譜步驟之后立即將樣品引導(dǎo)離開(kāi) 質(zhì)譜儀。該轉(zhuǎn)向過(guò)程將持續(xù)一個(gè)預(yù)先設(shè)定的時(shí)間值，這是基于之前的實(shí)驗(yàn)性測(cè)定值。應(yīng)該 對(duì)樣品進(jìn)行轉(zhuǎn)向到直至在對(duì)于該標(biāo)準(zhǔn)物的第一目標(biāo)可提取物已知的停留時(shí)間之前的直接 一點(diǎn)處。轉(zhuǎn)向時(shí)間將取決于所測(cè)試的生物藥劑產(chǎn)品的組分、可能存在的可提取物的性質(zhì)、以 及分析方法。在轉(zhuǎn)向步驟之后，剩余的參比樣品通過(guò)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)參考質(zhì)譜圖。 參考質(zhì)譜圖是參比樣品的強(qiáng)度對(duì)m/z (質(zhì)/荷比)的曲線(xiàn)，參比樣品也就是，最初未包含任 何來(lái)自生物藥劑產(chǎn)品的生產(chǎn)的可提取物。在參考質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)的離子是歸因于在注射進(jìn) LCMS之前加入?yún)⒈葮悠分械目商崛∥飿?biāo)準(zhǔn)物。同樣地，剩余的測(cè)試樣品通過(guò)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)測(cè)試質(zhì)譜圖。測(cè)試質(zhì)譜 圖是測(cè)試樣品的強(qiáng)度對(duì)m/z (質(zhì)荷比)曲線(xiàn)，測(cè)試樣品也就是，已經(jīng)與一種容器或過(guò)濾器裝 置接觸、并因此可能含可提取物的生物藥劑產(chǎn)品。將 測(cè)試樣品的質(zhì)譜圖與參比樣品的質(zhì)譜 圖進(jìn)行比較以檢測(cè)在測(cè)試樣品中過(guò)濾器的可提取物的存在或缺乏。在測(cè)試質(zhì)譜圖中的離子 (如果發(fā)現(xiàn)的話(huà))是歸因于在生物藥劑產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程中從材料中浸出的可提取物。樣品的LC色譜圖或質(zhì)譜圖中一個(gè)或多個(gè)峰的出現(xiàn)表明可提取物是存在的。對(duì)可 提取物的檢測(cè)通過(guò)在LC色譜圖或質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)峰的存在而完成。對(duì)測(cè)試樣品 的質(zhì)譜圖與參比樣品的質(zhì)譜圖的比較將表明測(cè)試樣品中可提取物的存在或缺乏。在參考以 及測(cè)試質(zhì)譜圖兩者中都出現(xiàn)的峰當(dāng)作表明生物藥劑產(chǎn)品中過(guò)濾器的可提取物的存在。只在 參考質(zhì)譜圖、而未在測(cè)試質(zhì)譜圖中出現(xiàn)的峰當(dāng)作表明生物藥劑產(chǎn)品中過(guò)濾器的可提取物的 缺乏。該方法的另一個(gè)實(shí)施方案是定量、或測(cè)定不相關(guān)的過(guò)濾器的可提取物的數(shù)量以及 全部可提取物在生物藥劑產(chǎn)品中存在的濃度。定量的步驟可以包括對(duì)LC中峰高度的測(cè)量。按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，提供了一個(gè)液相色譜分流器、以及一種用于產(chǎn)生自 液相色譜法的液體的轉(zhuǎn)向方法，該方法有助于減小有待通過(guò)質(zhì)譜進(jìn)行分析的樣品中干擾化 合物的存在。根據(jù)本發(fā)明的這樣一個(gè)實(shí)施方案允許使用者檢測(cè)藥品或生物藥劑產(chǎn)品中過(guò)濾 器的可提取物，這是通過(guò)減小在質(zhì)譜分析中可以掩蓋可提取物的峰的干擾化合物的存在進(jìn) 行的。通過(guò)對(duì)根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的液相色譜分流器的說(shuō)明，首先在相似的上下 文中描述了一種常規(guī)的注射閥的用途。常規(guī)的注射閥可以在“廢液”設(shè)置和“源液”設(shè)置之 間進(jìn)行切換，這會(huì)改變?cè)撟⑸溟y的端口之間的液體流動(dòng)模式。圖IA是一種液體流動(dòng)模式的示意圖，此時(shí)在液相色譜/質(zhì)譜技術(shù)中使用一個(gè)常規(guī) 的注射閥，且該注射閥處于“廢液”設(shè)置。有待分析的液體從一個(gè)泵101流進(jìn)一個(gè)自動(dòng)進(jìn)樣 器102中，并且從那里進(jìn)入液相色譜柱103。在液體穿過(guò)液相色譜柱103之后，液相色譜洗 脫液104進(jìn)入一個(gè)常規(guī)的六端口注射閥的一個(gè)第一端口 105中。洗脫液104包含過(guò)濾器的 可提取物(它們?cè)谒幤坊蛏锼巹┊a(chǎn)品中的檢測(cè)是有意義的)，以及干擾這些可提取物的 測(cè)量的化合物。當(dāng)常規(guī)六端口注射閥處于“廢液”設(shè)置時(shí)，洗脫液自第一端口 105直接流向 該閥的第二端口 106，并且從那里直接流向質(zhì)譜儀111。與此同時(shí)，校準(zhǔn)液從注射泵112流向該閥的第五端口 109(對(duì)逆時(shí)針?lè)较颦h(huán)繞六端口注射閥進(jìn)行計(jì)數(shù))。然后校準(zhǔn)液流向第六端口 110，并從那里穿過(guò)一個(gè)液流回路113，該回路是以串聯(lián)的流動(dòng)關(guān)系定位在六端口閥的 第六端口 110和第三端口 107之間的。校準(zhǔn)液從第三端口 107向第四端口 108前進(jìn)并從那 里去往廢液114。圖IB是一種液體流動(dòng)模式的示意圖，此時(shí)圖IA中的常規(guī)注射閥被切換至“源液” 設(shè)置。如圖IA中，液體最初從泵101流入自動(dòng)進(jìn)樣器102，并且穿過(guò)液相色譜柱103流動(dòng)而 產(chǎn)生洗脫液104，該洗脫液被引入第一端口 105中。當(dāng)該六端口閥處于“源液”設(shè)置時(shí)，洗脫 液104隨后被導(dǎo)入第六端口 110，并且穿過(guò)液流回路113進(jìn)入第三端口 107。因?yàn)橐毫骰芈?113在處于圖IA中的“廢液”設(shè)置時(shí)已經(jīng)包含校準(zhǔn)液，則一些校準(zhǔn)液在其穿過(guò)液流回路113 流動(dòng)時(shí)與洗脫液一起被清除。然后洗脫液從第三端口 107流向第二端口 106，并然后直接流 向質(zhì)譜儀111。因?yàn)橐恍┬?zhǔn)液攜帶有洗脫液，則將校準(zhǔn)液與洗脫液一起引入質(zhì)譜儀111， 以允許質(zhì)量校準(zhǔn)。與此同時(shí)，來(lái)自注射泵112的校準(zhǔn)液被導(dǎo)向第五端口 109，并且從那里通 過(guò)第四端口 108被導(dǎo)向廢液114。使用如圖IA和IB中的常規(guī)六端口注射閥，在該采集方法的圖IA的“廢液”設(shè)置 與圖IB中的“源液”設(shè)置之間通過(guò)時(shí)間區(qū)段對(duì)該閥門(mén)可以進(jìn)行切換。然而，該常規(guī)六端口 注射閥處于兩種設(shè)置中時(shí)，液相色譜洗脫液104都被不斷地引入質(zhì)譜儀111中，并且因此隨 之?dāng)y帶了干擾質(zhì)譜分析、或與之不相容的化合物。因此使用圖IA和IB中的常規(guī)的六端口 注射閥難以精確地檢測(cè)和度量藥物樣品中過(guò)濾器的可提取物的存在。相比之下，圖2A是按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案穿過(guò)一個(gè)液相色譜分流器的一種 液體流動(dòng)模式的示意圖，且分流器處于“廢液”設(shè)置。不像在圖IA和IB的常規(guī)六端口注射閥 中，圖2A和2B中的分流器包括在一個(gè)六端口注射閥的相鄰端口之間的一個(gè)液流回路215， 并且在與通向質(zhì)譜儀211的端口 206以及通向廢液214的端口 208相鄰的一個(gè)端口 207處 引入液相色譜洗脫液204。處于“廢液”設(shè)置時(shí)，校準(zhǔn)液從注射泵212流入一個(gè)六端口注射 閥的第五端口 209中，并且從那里流向第六端口 210。使用在彼此相鄰的第六端口 210和第 一端口 205之間添加的一個(gè)液流回路215，則校準(zhǔn)液然后流進(jìn)第一端口 205中。校準(zhǔn)液從 那里被導(dǎo)向第二端口 205，并且導(dǎo)向質(zhì)譜儀211。與此同時(shí)，來(lái)自液相色譜柱203的洗脫液 204在第三端口 207處進(jìn)入該分流器，并被導(dǎo)向第四端口 208，而且從那里被導(dǎo)向廢液214。 因此，處于“廢液”設(shè)置時(shí)，使用圖2A的實(shí)施方案的分流器，所有來(lái)自液相色譜柱的洗脫液 204流向廢液214。因此，處于“廢液”設(shè)置時(shí)，所有在洗脫液204中存在的干擾化合物，與 洗脫液一起同樣被導(dǎo)向廢液214 ；而質(zhì)譜儀211僅接收校準(zhǔn)液。圖2B是按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案穿過(guò)一個(gè)液相色譜分流器的一種液體流動(dòng)模 式的示意圖，且該分流器處于“源液”設(shè)置。在此，從液相色譜柱203流出的洗脫液204進(jìn) 入第三端口 207中并被導(dǎo)向第二端口 206，并且從那里直接通向質(zhì)譜儀211，以允許對(duì)洗脫 液中的過(guò)濾器的可提取物的分析。因?yàn)樵诘谝欢丝?205和第二端口 206之間的液流路徑被 閉合了(就如同第五端口 209和第六端口 210之間的液流路徑)，使得從第六端口 210到第 一端口 205的液流通過(guò)液流回路215形成了一個(gè)閉合的回路。與此同時(shí)，從注射泵212流 出的校準(zhǔn)液從第五端口 209被導(dǎo)向第四端口 208，并且從那里被導(dǎo)向廢液214。使用圖2A和2B的實(shí)施方案的分流器，在采集方法的圖2A的“廢液”設(shè)置和圖2B 的“源液”設(shè)置之間通過(guò)時(shí)間區(qū)段可將該閥門(mén)進(jìn)行切換。然而，不像使用圖IA和IB的常規(guī)的閥門(mén)的技術(shù)，圖2A和2B的實(shí)施方案允許在處于“廢液”設(shè)置時(shí)，液相色譜洗脫液204被全部導(dǎo)向“廢液”；并且然后在處于“源液”設(shè)置時(shí)，被全部導(dǎo)向質(zhì)譜儀。以這種方式，圖2A 和2B的分流器可以切換至“廢液”設(shè)置一段時(shí)間，例如像，前十分鐘的液相色譜洗脫液的液 流-在此時(shí)間的過(guò)程中多數(shù)或幾乎全部的會(huì)干擾過(guò)濾器的可提取物的質(zhì)譜測(cè)試、或與之不 相容的化合物被洗脫掉。然后，一旦多數(shù)或幾乎全部的干擾化合物已經(jīng)被洗脫掉并且送往 廢液，則圖2A和2B的分流器可以被切換至“源液”設(shè)置以允許液相色譜洗脫液直接流向質(zhì) 譜儀以允許過(guò)濾器的可提取物的測(cè)量而不受干擾組分的干擾。因此，圖2A和2B的液相色 譜分流器允許對(duì)藥品或生物藥劑學(xué)樣品中過(guò)濾器的可提取物的存在進(jìn)行更精確的檢測(cè)和 測(cè)量。按照?qǐng)D2A和2B的實(shí)施方案，分流器處于“廢液”模式并且液相色譜洗脫液被直接 送往廢液的時(shí)間段可以通過(guò)分析大多數(shù)干擾化合物被洗脫掉的時(shí)間(通過(guò)與目標(biāo)過(guò)濾器 的可提取物被洗脫掉的時(shí)間比較)來(lái)確定。例如，干擾化合物的一個(gè)質(zhì)譜峰可能在某一個(gè) 初始時(shí)間段的過(guò)程中被觀察到，接著出現(xiàn)過(guò)濾器的可提取物的一個(gè)峰。理想的是，在液相 色譜洗脫液中該第一目標(biāo)過(guò)濾器可提取化合物的所感興趣特征出現(xiàn)之前的盡可能最晚的 時(shí)刻應(yīng)當(dāng)將該分流器從“廢液”切換到“源液”。如上所指出，十分鐘是使用該分流器的“廢 液”設(shè)置的一個(gè)有用時(shí)間段的一個(gè)實(shí)例，但也可以使用其他的時(shí)間段，這取決于過(guò)濾器材料 的性質(zhì)、可提取物化合物、干擾化合物、藥品成分、以及其他因素?？偟膩?lái)說(shuō)，洗脫液應(yīng)該被 轉(zhuǎn)向一段時(shí)間來(lái)將導(dǎo)致基質(zhì)干擾的污染物除去至足以在可提取物的檢測(cè)中允許所希望的 精度的程度。按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，與圖2A和2B的分流器一起使用的六端口注射閥，可 以例如是基于一個(gè)從Bruker Daltonics Inc.，Billerica，MA可得的六端口注射閥，該閥已 被改性來(lái)增加液流回路215并且使用根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的液流模式。例如，校準(zhǔn) 液能以每分鐘2至10微升的速率流動(dòng)。例如，質(zhì)譜儀211可以是一臺(tái)從Bruker Daltonics Inc.，Billerica, MA 可得的 mirOTOF 質(zhì)譜系統(tǒng)。例證實(shí)例1 過(guò)濾器的可提取物的分離和檢測(cè)在循環(huán)60分鐘的126°C下的高壓滅菌之后，將一個(gè)10英寸0. 22mDurapore 的過(guò) 濾器在Mi 11 i- Q 水中在環(huán)境溫度下提取24小時(shí)。Durapore 和Mi 11 i- Q 是Mi 11 ipore Corporation, Billerica, MA的注冊(cè)商標(biāo)。使用不含過(guò)濾器的Milli-Q 水在相同條件下 制備一個(gè)對(duì)照樣品。然后通過(guò)不揮發(fā)殘?jiān)治龇▽?duì)這些溶液進(jìn)行分析，在注射進(jìn)LCMS之前 使用MiIli-Q 水稀釋10倍。圖3中所示的是可提取物(紅色)和對(duì)照樣品(綠色)的基峰色譜圖。當(dāng)與對(duì)照 樣品比較時(shí)，發(fā)現(xiàn)可提取物包含兩個(gè)特征為Durapore 過(guò)濾器的峰。造成圖3的色譜圖中 所見(jiàn)的對(duì)兩個(gè)峰的物質(zhì)的質(zhì)譜圖描述在圖4中。在荷質(zhì)比為329和357處的峰對(duì)應(yīng)于已知 的從過(guò)濾器產(chǎn)生的可提取物化合物。這些試驗(yàn)性地被確定為在膜制造工藝中使用的酚型的 抗氧化劑。因?yàn)檫@些化合物以極低的濃度存在，LCMS提供了用于檢測(cè)它們存在的最好模式。實(shí)例2和3 生物藥劑產(chǎn)品中過(guò)濾器的可提取物的分離和檢測(cè)在藥品中摻入ppm水平的一種可提取物標(biāo)準(zhǔn)物。在大分子應(yīng)用中，使氨基酸或蛋 白質(zhì)從生物藥劑產(chǎn)品中沉淀出來(lái)，并且然后將該樣品注入LCMS中。同時(shí)，在注入之前以同樣的方式制備未摻樣的樣品?？商崛∥飿?biāo)準(zhǔn)物、一種藥品以及基于小分子的摻有可提取物標(biāo)準(zhǔn)物的藥品的色譜 圖的疊放(圖5 小分子；圖6 大分子)。其結(jié)果證實(shí)，盡管存在基質(zhì)的抑制，在摻樣的樣品 中藥品成分的存在下，可以檢測(cè)出可提取物。該方法適用于很寬范圍內(nèi)的生物藥劑學(xué)成分 并且顯示對(duì)多數(shù)應(yīng)用是敏感的且可靠的。該方法允許對(duì)在生物藥劑產(chǎn)品中可提取物的直接 存在或缺乏的第 一時(shí)間驗(yàn)證。相比之下，沒(méi)有任何常規(guī)的方法允許這樣的檢測(cè)。盡管本發(fā)明已經(jīng)具體地示出并通過(guò)參考實(shí)例描述了它的實(shí)施方案，應(yīng)被本領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員理解的是在此所做的不同形式和細(xì)節(jié)上的改變并未脫離所附權(quán)利要求書(shū)所 包含的本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的一種方法，包括使用液相色譜-質(zhì)譜法來(lái)檢測(cè)在該生物藥劑產(chǎn)品的制造中被引入的可提取物的存在。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，這些可提取物是通過(guò)該生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾而被 引入的過(guò)濾器的可提取物。
3.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的可提取物的一種方法，包括(a)制備一個(gè)參比樣品，包括i)獲得不含可提取物的生物藥劑產(chǎn)品的一個(gè)參比樣品； )向該參比樣品中加入一種含可提取物的標(biāo)準(zhǔn)物；iii)通過(guò)液相色譜法對(duì)該參比樣品進(jìn)行分離；iv)將該參比樣品轉(zhuǎn)向廢液一段時(shí)間以除去該參比樣品中對(duì)可提取物的檢測(cè)造成基質(zhì) 干擾的污染物；并且ν)將剩余的參比樣品通過(guò)一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)參考質(zhì)譜圖；(b)制備一個(gè)測(cè)試樣品，包括i)獲得可能含有可提取物的一種生物藥劑產(chǎn)品的一個(gè)測(cè)試樣品； )通過(guò)液相色譜法對(duì)該測(cè)試樣品進(jìn)行分離；iii)將該測(cè)試樣品轉(zhuǎn)向廢液一段時(shí)間以除去該測(cè)試樣品中對(duì)可提取物的檢測(cè)造成基 質(zhì)干擾的污染物；并且iv)將該剩余的測(cè)試樣品通過(guò)一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)測(cè)試質(zhì)譜圖；并且(c)將該測(cè)試樣品的質(zhì)譜圖與該參比樣品的質(zhì)譜圖進(jìn)行比較以檢測(cè)該測(cè)試樣品中的可 提取物。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，進(jìn)一步包括確定檢出的該可提取物的量。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，造成基質(zhì)干擾的可提取物是選自下組，其構(gòu)成為 活性藥用成分、緩沖劑類(lèi)、鹽類(lèi)、防腐劑類(lèi)、增溶劑類(lèi)、螯合劑類(lèi)、酸類(lèi)、堿類(lèi)、糖類(lèi)、氨基酸、 溶劑類(lèi)、蛋白質(zhì)以及它們的組合。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該可提取物是通過(guò)該生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾而被引 入的過(guò)濾器的可提取物。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該生物藥劑產(chǎn)品是通過(guò)含聚偏氟乙烯微孔膜以及 聚丙烯支撐膜的一個(gè)過(guò)濾器而被過(guò)濾的。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該生物藥劑產(chǎn)品是通過(guò)含硼硅酸鹽玻璃纖維微孔 膜以及聚丙烯支撐膜的一個(gè)過(guò)濾器而被過(guò)濾的。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該生物藥劑產(chǎn)品是通過(guò)含聚丙烯微孔膜以及聚丙 烯支撐膜的一個(gè)過(guò)濾器而被過(guò)濾的。
10.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該生物藥劑產(chǎn)品是通過(guò)含聚四氟乙烯微孔膜以及 聚丙烯支撐膜的一個(gè)過(guò)濾器而被過(guò)濾的。
11.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，該生物藥劑產(chǎn)品是通過(guò)含親水的聚醚砜微孔膜以 及聚丙烯支撐膜的一個(gè)過(guò)濾器而被過(guò)濾的。
12.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，使該生物藥劑產(chǎn)品與包含超低密度聚乙烯、聚乙 烯乙烯醇共聚物、以及乙烯醋酸乙烯酯的一個(gè)處理容器相接觸。
13.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，在該剩余的樣品通過(guò)該質(zhì)譜儀進(jìn)行處理之前使前十分鐘的該樣品轉(zhuǎn)向廢液。
14.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的一種方法，包括使用液相色譜質(zhì)譜法 (LCMS)來(lái)檢測(cè)一種生物藥劑產(chǎn)品中通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物，其中檢測(cè)了過(guò)濾器的可 提取物的特征性離子。
15.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的一種方法，包括使用液相色譜質(zhì)譜法 (LCMS)來(lái)檢測(cè)一種生物藥劑產(chǎn)品中通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物的存在，其中檢出了具有 大約329. 2和大約357. 2M/Z的質(zhì)量的過(guò)濾器的可提取物。
16.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的一種方法，包括使用液相色譜質(zhì)譜法 (LCMS)來(lái)檢測(cè)一種生物藥劑產(chǎn)品中通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物的存在，其中檢測(cè)了過(guò)濾 器的可提取物的特征性停留時(shí)間。
17.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的一種方法，包括使用液相色譜質(zhì)譜法 (LCMS)來(lái)檢測(cè)一種生物藥劑產(chǎn)品中通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物的存在，其中檢出了具有 大約11. 5以及大約12. 4分鐘的平均停留時(shí)間的過(guò)濾器的可提取物。
18.檢測(cè)生物藥劑產(chǎn)品中的過(guò)濾器的可提取物的一種方法，包括(a)制備一個(gè)參比樣品，包括i)獲得不含通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物的生物藥劑產(chǎn)品的一個(gè)參比樣品； )向該參比樣品中加入一種含可提取物的標(biāo)準(zhǔn)物；iii)通過(guò)液相色譜對(duì)該參比樣品進(jìn)行分離；iv)將該參比樣品轉(zhuǎn)向廢液一段時(shí)間以除去該參比樣品中對(duì)過(guò)濾器的可提取物的檢測(cè) 造成基質(zhì)干擾的污染物；并且ν)將該剩余的參比樣品通過(guò)一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)參考質(zhì)譜圖；(b)制備一個(gè)測(cè)試樣品，包括i)獲得可能含有通過(guò)過(guò)濾而被引入的可提取物的一種生物藥劑產(chǎn)品的一個(gè)測(cè)試樣Pm ； )通過(guò)液相色譜法對(duì)該測(cè)試樣品進(jìn)行分離； )將該測(cè)試樣品轉(zhuǎn)向廢液一段時(shí)間以除去該測(cè)試樣品中對(duì)過(guò)濾器的可提取物的檢 測(cè)造成基質(zhì)干擾的污染物；并且iv)將該剩余的測(cè)試樣品通過(guò)一臺(tái)質(zhì)譜儀進(jìn)行處理以獲得一個(gè)測(cè)試質(zhì)譜圖；并且 (C)將該測(cè)試樣品的質(zhì)譜圖與該參比樣品的質(zhì)譜圖進(jìn)行比較以檢測(cè)該測(cè)試樣品中的過(guò) 濾器的可提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及液相色譜質(zhì)譜法(LCMS)來(lái)確定在制造、過(guò)濾或存貯過(guò)程中被引入一種生物藥劑產(chǎn)品中的處于超過(guò)一個(gè)特定濃度下的可提取物的存在或缺乏。在此披露的方法可以用來(lái)檢測(cè)實(shí)際的生物藥劑產(chǎn)品中而不是一個(gè)代用品溶劑系統(tǒng)中的可提取物的存在。對(duì)實(shí)際藥品中的可提取物的檢測(cè)提供了對(duì)可能引入人類(lèi)或動(dòng)物患者體內(nèi)的可提取物的特征曲線(xiàn)的一個(gè)精確表征。在一個(gè)實(shí)施方案中，該可提取物是通過(guò)生物藥劑產(chǎn)品的過(guò)濾而被引入的。
文檔編號(hào)G01N33/15GK101815939SQ200880104236
公開(kāi)日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2008年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月24日
發(fā)明者切瑞爾·佛羅, 江同保, 莫瑞斯·G·菲倫 申請(qǐng)人:密理博公司