專利名稱：微量稀釋法和扣除上清液法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用免疫檢驗(yàn)技術(shù)，特別是用來(lái)克服HOOK效應(yīng)和省去洗滌的免 疫檢驗(yàn)技術(shù)，二者可分別使用或聯(lián)合使用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的免疫檢驗(yàn)方法(比如ELISA)中的一步法，常會(huì)遇到H00K效應(yīng)，即 在檢測(cè)高濃度標(biāo)本時(shí)，反而呈現(xiàn)假低值或陰性(后帶現(xiàn)象)。通常通過稀釋待測(cè)物或 兩步法或競(jìng)爭(zhēng)法來(lái)解決，而這些方法存在操作繁瑣或線性范圍較窄等問題。本發(fā)明以 一種簡(jiǎn)便的微量稀釋法就可基本克服H00K效應(yīng)。大多數(shù)免疫檢驗(yàn)方法都需要將結(jié)合 物和未結(jié)合物分離，以使結(jié)合物的顯示不受干擾。 一般是通過洗滌來(lái)達(dá)到此目的，而 洗滌是個(gè)繁瑣又容易造成誤差的環(huán)節(jié)。本發(fā)明以一種扣除上清液法就可避免常規(guī)洗 滌。

發(fā)明內(nèi)容
一. 微量稀釋法將一尖頭物(比如細(xì)針或牙簽硬毛等)在待測(cè)物中點(diǎn)一下，使尖頭 沾微量待測(cè)物；將此尖頭(可除去或不除去多余液體)在反應(yīng)容器(試管或微孔)底 壁點(diǎn)一下(或在該容器的試劑中點(diǎn)一下)，加入試劑(容器中已有試劑時(shí)省去此步)， 混合反應(yīng)一定時(shí)間；將已沾待測(cè)物的尖頭在容器的試劑中點(diǎn)一下，再混合反應(yīng)一定時(shí) 間(可重復(fù)此歩驟)。即在檢測(cè)時(shí)稀釋?？捎脽o(wú)吸附無(wú)殘留反應(yīng)容器。
二. 扣除上清法將上清液和沉集物分離后(可用磁分離或其他分離方式)，將部分 或全部上清液(或稀釋的上清液)吸入另一相同容器(吸頭和容器用硅烷化材料制成， 無(wú)吸附無(wú)殘留，或使各吸頭或容器中殘留量盡量一致)，并聯(lián)檢測(cè)(對(duì)照值)，再?gòu)某?集物的顯示值扣除對(duì)照值或經(jīng)過計(jì)算的對(duì)照值，就可得出沉集物上結(jié)合物的顯示值。 由此省去洗滌。另一方案是將上清液(或稀釋的上清液)和沉集物在同一反應(yīng)容器中 分歩反應(yīng)顯示，比如，在沉集物集于容器底一側(cè)后，在磁場(chǎng)固定下，用無(wú)殘留吸頭移 去部分或全部上清液，將試劑加入該容器，反應(yīng)一定時(shí)間后，測(cè)顯示值；然后去掉磁 場(chǎng)，使沉集物重懸混勻，再反應(yīng)一定時(shí)間后，使沉集物沉集于容器底一側(cè)，測(cè)上清液 顯示值，算出沉集物上結(jié)合物的顯示值，査出待測(cè)物濃度。
方案特點(diǎn)
3一. 根據(jù)文獻(xiàn)，在液相中抗原和抗體結(jié)合反應(yīng)可在數(shù)秒中內(nèi)完成。同理，微量稀 釋法使高濃度待測(cè)物稀減到合適濃度后，在數(shù)秒內(nèi)就可完成抗原和抗體結(jié)合反應(yīng)，達(dá) 到或超過某一上限顯示值(無(wú)需準(zhǔn)確定量)，提示需做進(jìn)一步定量分析。微量稀釋法 雖然不能準(zhǔn)確加標(biāo)本，但可用來(lái)篩檢高濃度標(biāo)本。用無(wú)吸附無(wú)殘留吸頭和容器。
二. 將上清液初步分離后測(cè)的顯示值，減去沉集物中所剩余上清液所產(chǎn)生的顯示 值，其效果應(yīng)基本等同于充分洗滌沉集物后測(cè)的顯示值。全部移去上清液后各容器之 間殘余上清液量的差別應(yīng)基本等同于放射免疫法時(shí)殘余上清液量的差別。也可去掉全 部上清液，加入稀洗液，再將稀洗液移入另一容器，并聯(lián)測(cè)定顯示值，進(jìn)一步減少誤 差。用無(wú)吸附無(wú)殘留的吸頭和容器。
三. 一種硅垸化的微孔條板可用作無(wú)吸附無(wú)殘留容器。
具體實(shí)施例方式
用微量加樣排針(在一排用松緊帶相連的小塊上各附一根細(xì)針或牙簽等尖頭物， 各針間距可伸縮改變)批量加樣。拉開微量加樣排針，使針距加大，針頭插入各試管 的標(biāo)本中點(diǎn)一下，松開排針使針距縮小，將沾有標(biāo)本的針對(duì)準(zhǔn)插入各反應(yīng)容器(試管 或微孔)在容器底壁點(diǎn)一下，加試劑混合反應(yīng)；又將沾有標(biāo)本的排針插入各反應(yīng)容器 的試劑中點(diǎn)一下，混合反應(yīng)；然后加入足量標(biāo)本，混合反應(yīng)，繼續(xù)進(jìn)行余步驟。
經(jīng)磁吸(或其他分離方式)分離后，將容器(沉集孔)中部分或全部上清液移入 另一空白容器(對(duì)照孔)中，并聯(lián)加入試劑反應(yīng)、檢測(cè)沉集孔和對(duì)照孔顯示值，再?gòu)?沉集孔顯示值扣除對(duì)照孔顯示值(或經(jīng)過計(jì)算的值)，就可得出沉集物中結(jié)合物的顯 示值，查出待測(cè)物含量。
權(quán)利要求
1一組用于免疫檢測(cè)的技術(shù)，其特征是以微量稀釋法來(lái)基本克服HOOK效應(yīng)；以扣除上清液法來(lái)避免常規(guī)洗滌，兩者可組合使用或分別使用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述技術(shù)，微量稀釋法是用一尖頭物沾取微量標(biāo)本，置入反應(yīng) 容器中，使微量標(biāo)本參與反應(yīng)(可重復(fù)此步驟)；再加足量標(biāo)本參與反應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述技術(shù)，在與沉集物分離后，將部分或全部上清液(或稀釋 上清液)移入另一容器對(duì)照反應(yīng)顯示；或?qū)⑸锨逡?或稀釋上清液)和沉集物在同一 容器中分步反應(yīng)顯示，再算出沉集物的顯示值，査出待測(cè)物濃度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述技術(shù)，所用硅烷化微孔板。
全文摘要
一組用于免疫檢測(cè)技術(shù)，其特征是(一)以微量稀釋法來(lái)基本克服HOOK效應(yīng)用一尖頭物沾取微量標(biāo)本，置入無(wú)吸附反應(yīng)容器中，使微量標(biāo)本參與反應(yīng)，再加足量標(biāo)本參與反應(yīng)；(二)以扣除上清液法來(lái)避免常規(guī)洗滌在與沉集物分離后，用無(wú)殘留吸頭將部分或全部上清液(或稀釋上清液)吸入另一容器對(duì)照反應(yīng)顯示，再?gòu)某良罪@示值扣除對(duì)照孔顯示值(或經(jīng)過計(jì)算的值)，就可得出沉集物中結(jié)合物的顯示值，查出待測(cè)物含量；或?qū)⑸锨逡?或稀釋上清液)和沉集物在同一容器中分步反應(yīng)顯示，再算出沉集物的顯示值，查出待測(cè)物濃度。兩者可組合使用或分別使用。
文檔編號(hào)G01N33/50GK101676720SQ200810149019
公開日2010年3月24日 申請(qǐng)日期2008年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月16日
發(fā)明者陳純美 申請(qǐng)人:陳純美