專利名稱：：戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及體外診斷免疫分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，屬于血清(槳)中戊型肝炎IgG抗體檢測的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析測定試劑盒。同時(shí)，本發(fā)明提供了一種戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)是無包膜的單正鏈RNA病毒，經(jīng)糞口途徑傳播，引起的急性戊型肝炎(hepatitisE,HE),多表現(xiàn)為急性黃疽型肝炎，易發(fā)展為亞急性重癥肝炎或淤膽肝炎。近年來呈逐年上升趨勢。患者主要為成年人，病死率較高，尤其孕期最后3個(gè)月的妊娠婦女患病后，病死率可達(dá)10%-39%,危害嚴(yán)重。戊型病毒性肝炎，首先在印度次大陸發(fā)現(xiàn)，中亞、東南亞、非洲、印度次大陸均有較大流行的報(bào)道。多數(shù)爆發(fā)流行為水源性的。食源性的報(bào)道亦見諸文獻(xiàn)。我國人群戊型肝炎的感染率約18%。急性散發(fā)性肝炎中戊肝約占10%,是我國乙類法定傳染病之一。通過了解戊型肝炎病毒(HEV)感染后抗-HEVIgG存在持續(xù)的時(shí)間，以準(zhǔn)確、客觀評(píng)估抗-HEVIgG在戊型肝炎(戊肝)診斷中的意義。目前戊肝的診斷主要是通過ELISA(酶聯(lián)免疫法)檢測抗HEV抗體，其次有放射免疫分析(RIA)、免疫印跡測法、RT-PCR方法、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法等。免疫印跡測法靈敏度不如ELISA、RIA、RT-PCR及實(shí)時(shí)焚光RT-PCR方法，ELISA試劑靈敏度不如RIA、RT-PCR及實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑，對(duì)HEV感染窗口期患者不能提早診斷；而常規(guī)RIA靈敏度雖高，半衰期短，容易形成放射污染；RT-PCR及實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法操作繁瑣，穩(wěn)定性差、儀器昂貴。鑒于此本發(fā)明建立了一種快速、敏感、特異性強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光酶促免疫分析方法來檢測戊型肝炎病毒抗體。即有放射免疫分析、熒光免疫分析等方法的高度靈敏性，又克服了這些方法的缺點(diǎn)?，F(xiàn)在，化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒多為進(jìn)口封閉式全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測量系統(tǒng)，設(shè)備昂貴，使用成本高，從而限制了推廣使用，無法廣泛地應(yīng)用于臨床診斷和科研工作。本發(fā)明的試劑盒采用微孔板化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，既可應(yīng)用于開放式的半自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測量儀，也可用于全自動(dòng)的測量系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)大批量快檢測，使用成本低，更能適合在大、中、小醫(yī)院推廣應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明采用間接法原理，利用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)，以酶標(biāo)記抗原或抗體與樣品中待測物發(fā)生免疫反應(yīng)，所形成的免疫復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,產(chǎn)生的光信號(hào)強(qiáng)度與參與反應(yīng)的酶分子數(shù)(活性)成正比，根據(jù)發(fā)光信號(hào)可判斷待測物的濃度或含量的變化。本發(fā)明的目的是:提供一種化學(xué)發(fā)光免疫分析測定戊型肝炎病毒IgG抗體的試劑盒。本發(fā)明試劑盒包括戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品；包被固相載體；酶標(biāo)記結(jié)合物；樣品稀釋液；化學(xué)發(fā)光底物液；以及濃縮洗滌液。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒；所述標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾，其中所述1，2-二氧乙烷類衍生物，為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-l,2-二氧乙烷(AMPPD)、CSPD或CDP-Star。本發(fā)明的再一目是提供本發(fā)明試劑盒的制備方法。采用間接法原理，利用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)，間接方法檢測血清(漿)樣本中的戊型肝炎病毒IgG抗體。該發(fā)明試劑盒的制備方法是以戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性血清制備的對(duì)照品；以重組戊型肝炎病毒抗原包被固相載體；以酶標(biāo)記抗人IgG抗體(單抗或多抗)；配制樣品稀釋液；配制上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液；配制濃縮洗滌液；分裝上述各組份；并組裝為成品。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述固相載體包被的步驟2)包括以下步驟用0.1MpH值為9.0的磷酸氫二鉀(K2HP043H20)緩沖液配制成所需濃度的重組戊型肝炎病毒抗原包被液，并將包被液負(fù)載于固相載體上；再用含0.1%酪蛋白，0.01%明膠，0.l%Proclin300,pH值為7.0-7.5，濃度為0.01M的磷酸鹽緩沖液作為封閉液封閉上述的固相載體。在上述方法中，并對(duì)所述抗原包被的固相栽體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒；所述結(jié)合物為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶；所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾，其中所述1,2-二氧乙烷類衍生物為(金剛烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-l,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star，--進(jìn)行了優(yōu)選。具體的，上述試劑盒包括戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品、直接包被重組戊型肝炎病毒抗原微孔板、樣品稀釋液、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液與濃縮洗滌液等。其中，所述戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品為經(jīng)HBsAg、抗-HIV、抗-TP以及抗-HCV抗體測定均為陰性的多份混合血清，6(TC滅活1小時(shí)，適度稀釋配制(抗-HEVIgG抗體陽性效價(jià)>1:1000);包被的微孔板為48或96孔的微孔板條，標(biāo)記抗體的酶為偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP),化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾，濃縮洗滌液為PBST。本發(fā)明"戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒"可以非常專一地檢測出感染戊型肝炎病毒后人體中的戊型肝炎病毒IgG抗體，可以根據(jù)測定戊型肝炎病毒IgG抗體變化情況，判斷治療效果及病情變化。它具有簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。該戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光測定試劑盒的各項(xiàng)指標(biāo)均超過ELISA試劑盒的分析水平，可替代RIA試劑及ELISA試劑。并且，本發(fā)明的檢測系統(tǒng)為開放式操作，簡便快速，不需要昂貴的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測量儀，特別適合廣大的中小醫(yī)院推廣使用。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，載體上包被的抗原與被測樣品的戊型肝炎病毒IgG抗體結(jié)合，酶標(biāo)記的二抗再與固相上結(jié)合的抗體結(jié)合，因此本發(fā)明采用的"間接法"反應(yīng)模式，應(yīng)用的是酶催化發(fā)光底物，通過檢測發(fā)光底物產(chǎn)生的光信號(hào)代替酶免疫分析中的顯色底物，因而具有特異性、靈敏度高于現(xiàn)今的酶免疫分析試劑，可為戊型肝炎病毒IgG抗體的診斷提供更為特異、快速、可靠的依據(jù)。本發(fā)明試劑盒既有效地利用了化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理，又確保了檢測的靈敏度。另外，這種模式還便于操作和生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備本發(fā)明的戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒在本發(fā)明的研究過程中，本發(fā)明的發(fā)明人首先對(duì)所用的原材料進(jìn)行了篩選實(shí)驗(yàn)和質(zhì)量鑒定，包括標(biāo)記抗體與包被抗體的活性、載體(如不透光的白色微孔板)的吸附性能和變異大小、HRP的活性、化學(xué)發(fā)光底物的發(fā)光強(qiáng)度及發(fā)光持續(xù)時(shí)間等。然后對(duì)包被方法進(jìn)行了研究，用不同的包被緩沖液和保護(hù)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選擇出最適合的包被緩沖液和保護(hù)液，通過抗體不同包被濃度實(shí)驗(yàn)找到最佳的濃度條件。對(duì)于HRP的標(biāo)記可以有不同的方法，通過反復(fù)探索和對(duì)比實(shí)驗(yàn)最終找到了簡便、產(chǎn)率高、成本低、質(zhì)量可靠的標(biāo)記方法，并對(duì)不同的酶稀釋液進(jìn)行了長期的考察實(shí)驗(yàn)，配制出了能夠使酶標(biāo)記物長期保持活性穩(wěn)定的稀釋液一、酶標(biāo)抗體制備抗人IgG抗體用戊二醛法與辣根過氧化物酶偶聯(lián)，具體步驟包括:取HRP10mg溶于0.4ml，0.25Mol/LpH6.8PBS液中或0.Q5Mol/LpH9.6石友酸鹽緩沖液中，加入25°/。戊二醛0.lml，37。C溫育2h后加入冰冷的分析純的無水乙醇2ml，2500r/min離心沉淀10min-15min，傾去溶液。沉淀以80%乙醇4ml-5ml混懸，同上離心，傾去乙醇，將管倒置，使乙醇充分流出。沉淀用lml0.05Mol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液溶解，加入0.5ml-lml抗IgG抗體溶液(含抗體15mg左右)，放在冰箱內(nèi)過夜后，力口KH2P04，使其pH值近中性即可應(yīng)用，加等體積甘油，-20。C以下保存。酶標(biāo)抗人IgG抗體濃度選定用酶標(biāo)記抗體稀釋液將酶標(biāo)記的抗人IgG抗體，稀釋不同濃度，采用方陣滴定法選擇酶標(biāo)抗體的工作濃度為1:20000。酶標(biāo)單抗稀釋液基于1000ml酶標(biāo)抗體稀釋液，其組份含量為2.9gNa2HP0412H20、0.3gNaH2P042H20、9gNaCl、25gBSA、lmlProclin300、lmlTween-20，稱量各組份，于潔凈容器內(nèi)，用雙蒸水溶解，調(diào)為pH7.2~7.4,定溶10Q0ml。二、戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品的制備混合6份以上經(jīng)ELISA試劑盒檢測戊型肝炎病毒IgG抗體陽性血清或陰性血清，經(jīng)HBsAg、抗-HIV、抗-TP以及抗-HCV抗體陰性血清，6(TC滅活1小時(shí)，過濾除菌、分裝，1氐溫凍存。三、固相包被板的制備包被，在包被液中加入適量重組戊型肝炎病毒抗原混勻，然后加入微孔板各孔中，每孔100jaL,4'C放置吸附24小時(shí)?；?000ml包被溶液，其各組份含量為22.82g磷酸氫二鉀(1(2肝04.3H20)、于潔凈容器內(nèi)，用雙蒸水溶解，調(diào)為pH9.0~9.3定溶1000ml。每孔分別加入封閉液120nL，4。C放置24小時(shí)。甩掉封閉液，在吸水紙上拍千。室溫除濕干燥24小時(shí)。然后進(jìn)行封袋。封袋后放置15分鐘檢查無漏氣，如果有漏氣需重新封袋。貼簽后置2~8。C保存。基于1000ml封閉溶液，其各組份含量為0.36gNaH2P042H20、2.76gNa2HP0412H20、lg酪蛋白、0.lg明膠、lmlProclin300,稱量各組份，于潔凈容器內(nèi)，用雙蒸水溶解，調(diào)為pH7.0定溶1000ml。四、樣品稀釋液基于1000ml樣品稀釋液，其各組份含量為0.59gNaH2P04.2H20、5.8gNa2HP04.12H20、30gNaCl、10gBSA、ImLTween-20、lmlProclin300,稱量各組份，于潔凈容器內(nèi)，用雙蒸水溶解，調(diào)pH至7.2~7.4定溶1000ml。五、化學(xué)發(fā)光底物A液基于lOOOmlA液組份含量為lOraM魯米諾1.7716g、0.3mM4-羥基聯(lián)苯0.051g、0.05mM4-碘苯硼酸0.012g、硼酸11.4g、硼砂4.9g。稱量好各組份量放入潔凈容器中，加雙蒸水，溶解混勻，調(diào)整pH值為8.0~10.0,定容l000ml。六、化學(xué)發(fā)光底物B液基于1000mlA液組份含量為3.5mM過氧化脲0.329g、lml0,l°/。Tween20、51.58gNa2HP04.12H20、8.74gNaH鳳■2H20、稱量好各組份量放入潔凈容器中，加雙蒸水，溶解混勻，調(diào)整pH值為7.0-7.6,定容1000ml。稱量好各組份量放入潔凈容器中，加雙蒸水，溶解混勻，調(diào)整pH值為8.0-10.0,定容1000ml。使用時(shí)A液與B液等比例混合。七、20倍洗滌液基于1000ml20倍洗滌液各組份含量為58gNa2HP0412眼2gNaH2P04.2眼160gNaCl、lmLTween-20、lmLProclin300。稱量好各組份量放入潔凈容器中，加雙蒸水，溶解混勻，調(diào)整pH值為7.2~7.4,定容1000ml。八、半成品及成品組成上述步驟所得產(chǎn)品分裝即為半成品。半成品通過檢測特異性、精密性、靈敏度及穩(wěn)定性，指標(biāo)檢定合格后組裝為成品。組裝后的成品試劑盒測定特異性、精密性、靈敏度及穩(wěn)定性各項(xiàng)指標(biāo)合格后才能使用。本發(fā)明的發(fā)明人還對(duì)試劑盒的反應(yīng)模式和反應(yīng)條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，最終確定了間接法反應(yīng)模式，并就不同的反應(yīng)時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，確定最適合的反應(yīng)時(shí)間。通過對(duì)化學(xué)發(fā)光底物液發(fā)光持續(xù)時(shí)間的測定及不同發(fā)光時(shí)間對(duì)測定值的影響實(shí)驗(yàn)表明在加入化學(xué)發(fā)光底物液后5-25分鐘之間進(jìn)行測量為最佳，其結(jié)果也較為準(zhǔn)確。實(shí)施例2~3制備本發(fā)明的戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以堿性磷酸酶標(biāo)記戊型肝炎病毒抗體、以AMPPD作為化學(xué)發(fā)光底物、以塑料珠、塑料管作為載體、包被液的pH值為4.5、封閉液的pH值為7.5外，其余均以與實(shí)施例1相同的方法制備戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。實(shí)施例4制備本發(fā)明的戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以磁性顆粒作為固相載體，采用EDC偶聯(lián)法制備磁顆?？乖滔噍d體外，其余均以與實(shí)施例1相同的方法制備戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。實(shí)施例5本發(fā)明的試劑盒的使用方法以上實(shí)施例1制備的戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒的具體操作如下1)自4'C冰箱中取出試劑盒，室溫平衡15分鐘。2)取出包被板條，插入板架上。3)除空白孔外，反應(yīng)孔中分別加陰、陽對(duì)照品各兩孔，每孔100ul，各孔加待檢樣本10ul，樣品稀釋液100ul，用微量震蕩器充分振蕩混勻，37。C溫育0.5小時(shí)。4)甩去反應(yīng)液，洗板5次，每孔加然后加酶標(biāo)記物100用孩i量震蕩器充分振蕩混勻，37。C溫育0.5小時(shí)。5)甩去反應(yīng)液，洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣千。6)各孔加化學(xué)發(fā)光底物液A、B各50mL，用微量震蕩器充分振蕩混合均勻，室溫(20~25。C)避光反應(yīng)5分鐘。7)必須于加化學(xué)發(fā)光底物液后的第5~25分鐘內(nèi)測量，在化學(xué)發(fā)光測量儀上依序測量各孔的發(fā)光強(qiáng)度(RLU),測量時(shí)間l秒/孔。8)CO值=2.1^，RLU值>C0值則樣本判定為陽性樣本；RLU值<CO值則樣本判定為陰性樣本。實(shí)施例6本發(fā)明的試劑盒的方法學(xué)鑒定按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對(duì)實(shí)施例1中制備的試劑盒進(jìn)行檢定，見下表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>說明"戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒"的靈敏度、特異性、精密性以及穩(wěn)定性完全符合檢定要求。實(shí)施例7本發(fā)明的戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒的臨床應(yīng)用與ELISA試劑盒比較臨床醫(yī)院使用實(shí)施例1的戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒和ELISA試劑盒檢測臨床樣本652份，以對(duì)比兩種試劑盒檢測的符合率。一、臨床血清標(biāo)本的來源醫(yī)院臨床收集戊型肝炎病毒患者、非戊型肝炎病毒患者及正常人的樣本。二、使用戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒與ELISA試劑盒比較1、方法臨床醫(yī)院分別使用本發(fā)明實(shí)施例1制備的"戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒"(按其說明書操作)和ELISA試劑盒(按其說明書操作)檢測臨床樣本652份(乙型肝炎病毒抗原陽性105例、曱型肝炎抗體陽性95、正常人245例、戊型肝炎IgG抗體陽性205例)，以對(duì)比兩種試劑盒檢測的符合率。2、結(jié)果臨床醫(yī)院使用實(shí)施例1的"戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒"和ELISA試劑盒對(duì)比檢測結(jié)果(見表2)表2.臨床醫(yī)院對(duì)比兩種方法比較_<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>備注本發(fā)明試劑檢出曱肝患者中1例戊型肝炎IgG抗體陽性，經(jīng)臨床確認(rèn)為戊型肝炎IgG抗體陽性。對(duì)比試劑檢出乙肝陽性血樣1例戊型肝炎IgG抗體陽性，經(jīng)臨床確認(rèn)為陰性。臨床醫(yī)院使用"戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光法免疫分析測定試劑盒"與ELISA試劑盒對(duì)比檢測結(jié)果表明本發(fā)明試劑盒的臨床檢測指標(biāo)均達(dá)到或超過了ELISA法，并且本發(fā)明試劑盒特異性100%,敏感性100%。對(duì)本發(fā)明試劑盒檢出曱肝患者l例戊型肝炎病毒IgG抗體陽性，經(jīng)臨床確認(rèn)為戊型肝炎IgG抗體真陽性；對(duì)比試劑檢出乙型肝炎患者血清樣l例陽性，經(jīng)臨床確認(rèn)為戊型肝炎IgG抗體假陽性。本發(fā)明的戊型肝炎病毒IgG抗體(抗-HEVIgG)化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒特異性，敏感性，抗干擾性均好于ELISA試劑，可以應(yīng)用于臨床戊型肝炎疾病診斷。權(quán)利要求1、一種戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品；包被固相載體；酶標(biāo)記結(jié)合物；樣品稀釋液；酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液；濃縮洗滌液。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述包被固相載體為重組戊型肝炎病毒抗原直接包被的微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。3、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記結(jié)合物為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG(單抗或多抗)。4、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾。5、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物包括A液和B液，其中，所述化學(xué)發(fā)光底物A液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘代苯基硼酸、0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，其pH值為8.0~10.0;所述化學(xué)發(fā)光底物B液，包括3.5mM過氧化脲、0.l%Tween20、0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，其pH值為7.0-7.6。6、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟以戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性血清制備的對(duì)照品；以重組戊型肝炎病毒抗原直接包被固相載體；以酶標(biāo)記抗人IgG抗體(單抗或多抗)；配制樣品稀釋液；配制上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液；配制濃縮洗滌液；分裝上述戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品、樣品稀釋液、酶標(biāo)記的抗人IgG抗體、該酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液；并組裝為成品。7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述包被固相栽體的步驟2)采用以下方法用0.1MpH值為9.0的磷酸氫二鉀(1(2肝04.3H20)緩沖液配制成所需濃度的重組戊型肝炎病毒抗原包被液，并將包被液負(fù)載于固相載體上；用含O.1%酪蛋白，0.01。/。明膠pH值為7.0~7.5，濃度為0.01M的磷酸鹽緩沖液作為封閉液封閉上述的固相載體。8、如權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述包被戊型肝炎病毒抗原的固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。9、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG抗體(多抗或單抗)；所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾。進(jìn)一步，所述l,2-二氧乙烷類衍生物，為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-l,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。全文摘要本發(fā)明公開了一種戊型肝炎病毒IgG抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒及其制備方法。本發(fā)明試劑盒特征包括戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性對(duì)照品；包被固相載體；酶標(biāo)記結(jié)合物；樣品稀釋液；化學(xué)發(fā)光底物液；以及濃縮洗滌液。本發(fā)明試劑盒制備的方法包括以戊型肝炎病毒IgG抗體陰、陽性血清制備的對(duì)照品；以重組戊型肝炎病毒抗原包被固相載體；以酶標(biāo)記特異性抗人IgG抗體；配制樣品稀釋液；配制化學(xué)發(fā)光底物；配制濃縮洗滌液；分裝上述各組份；并組裝為成品。本發(fā)明的試劑盒可為戊型肝炎的預(yù)防、診斷、治療提供最為直接的臨床依據(jù)。文檔編號(hào)G01N33/576GK101551396SQ20081010326公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2008年4月2日優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日發(fā)明者于尚永,宋勝利,應(yīng)希堂,楊俊峰,胡國茂,鄭金來申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司