專利名稱：：一種透明質(zhì)酸的包被方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸定量檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：透明質(zhì)酸定量檢測(cè)試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法。透明質(zhì)酸(HA)包被于96孔熒免板，校準(zhǔn)品或樣品中的HA與固相表面HA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合限量的生物素標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP-Biotin)。充分反應(yīng)后，通過(guò)洗滌分離微孔表面HA結(jié)合的HABP-Biotin與未結(jié)合HABP-Biotin，再加入銪標(biāo)記鏈親和素(SA-Eu3+)，使之與微孔表面的HABP-Biotin結(jié)合。洗滌，加入熒光增強(qiáng)液，微孔表面免疫復(fù)合物中的Ei^+被熒光增強(qiáng)液解離并形成穩(wěn)定的熒光配合物，熒光強(qiáng)度與校準(zhǔn)品或樣品中的HA濃度呈負(fù)相關(guān)，根據(jù)已知HA濃度的系列校準(zhǔn)品的熒光強(qiáng)度可得到劑量-反應(yīng)曲線，通過(guò)劑量-反應(yīng)曲線可得出未知樣本的HA濃度。對(duì)于透明質(zhì)酸對(duì)熒免板的包被，由于透明質(zhì)酸屬于一強(qiáng)親水性物質(zhì)，其分子缺少疏水性官能團(tuán)，因此透明質(zhì)酸對(duì)常規(guī)熒免板的吸附性能不夠理想，影響透明質(zhì)酸的檢測(cè)，尤其是標(biāo)本中高濃度透明質(zhì)酸的準(zhǔn)確檢測(cè)。本發(fā)明提出了一種新的透明質(zhì)酸包被方法，該方法可顯著改善透明質(zhì)酸對(duì)熒免板的吸附性能。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種透明質(zhì)酸的包被方法，本發(fā)明主要是克服聚苯乙烯材質(zhì)的熒免板板條在包板時(shí)對(duì)透明質(zhì)酸的吸附性能不理想，影響透明質(zhì)酸定量檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種透明質(zhì)酸的包被方法，包括以下步驟1、將聚苯乙烯材質(zhì)的板條放置于陽(yáng)光下照射24-96小時(shí)；2、將透明質(zhì)酸用包被液稀釋至5-20ug/mL作為包板工作液，包被反應(yīng)板，并用封閉液封閉。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明對(duì)板條進(jìn)行預(yù)處理，使得其對(duì)透明質(zhì)酸的吸附性能得到明顯提升，顯著提高了透明質(zhì)酸定量檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量。3圖1為本發(fā)明板條接收陽(yáng)光照射時(shí)間和檢測(cè)方法熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系圖具體實(shí)施例方式下面參照?qǐng)Dl，通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例透明質(zhì)酸定量檢測(cè)試劑盒板條的包被首先將聚苯乙烯材質(zhì)的板條放置于陽(yáng)光下照射O、12、24、48、72、96小時(shí);1.1包被液的配制l丄l配方<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>1.1.2酉己制過(guò)禾呈室溫條件下，在1000mL的純化水中加入3.18g碳酸鈉，5.88g碳酸氫鈉和9g氯化鈉攪拌子攪勻，PH計(jì)測(cè)PH值應(yīng)在9.5±0.1以內(nèi)。1.2封閉液的配制1.2.1配方<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>室溫條件下，在1000mL的純化水中加入14.5g磷酸氫二鈉，1.49g磷酸二氫鈉，攪拌子攪拌至溶解，然后邊攪拌邊依次加入9g氯化鈉，40g糖，分次少量加入10gBSA，直至完全溶解。最后加入0.5gNaN3。PH計(jì)測(cè)PH值應(yīng)在7.8±0.1以內(nèi)。1.3包板工作液配制1.3.1配制過(guò)程移取一定量1mg/mlHA溶液于所需體積的包被液中，使其濃度達(dá)到10pg/mL;1.4包被反應(yīng)板的制備用排槍將HA工作液按每孔200pL加入熒免板板條，室溫靜置過(guò)夜(注意要防止水分蒸發(fā))。超過(guò)200塊(96T)的，用包被機(jī)包被。以洗板機(jī)吸干-洗滌(洗液每孔加200jLtL)二次，將板條在潔凈的吸水紙上拍干。用排槍將封閉緩沖液按每孔250pL加入微孔，貼上貼片紙，37度室溫過(guò)夜，然后倒掉封閉液，洗衣機(jī)甩干，放入冷凍干燥機(jī)里真空(真空度小于50帕)抽干3小時(shí)，用熱封機(jī)熱封。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)陽(yáng)光照射24小時(shí)的聚苯乙烯材質(zhì)的板條包板情況較好，在陽(yáng)光照射24-96小時(shí)時(shí)間范圍內(nèi)熒光比較穩(wěn)定，熒光再增長(zhǎng)效果不明顯(見圖1)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下表不同陽(yáng)光照射時(shí)間下的熒光計(jì)數(shù)值(CPS)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>權(quán)利要求1、一種透明質(zhì)酸的包被方法，其特征是包括以下步驟a、將聚苯乙烯材質(zhì)的板條放置于陽(yáng)光下照射24-96小時(shí)；b、將透明質(zhì)酸用包被液稀釋至10ug/mL作為包板工作液，包被反應(yīng)板，并用封閉液封閉。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種透明質(zhì)酸的包被方法，其特征是所述的包被液由3.18g碳酸鈉、5.88g碳酸氫鈉、9g氯化鈉、1000ml純化水配制而成。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種透明質(zhì)酸的包被方法，其特征是所述的封閉液由14.5g磷酸氫二鈉、1.49g磷酸二氫鈉、9g氯化鈉、10gBSA、0.5gNaN3、40g糖、1L去離子水配制而成。全文摘要本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸(HA)定量檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
。為了提高聚苯乙烯板條對(duì)透明質(zhì)酸的吸附能力，我們提出了一種新的透明質(zhì)酸的包被方法。讓聚苯乙烯板條包板前先接受陽(yáng)光照射24-96小時(shí)，再用以包被透明質(zhì)酸。結(jié)果表明這種方法使得透明質(zhì)酸的包板情況得到明顯改善，使得時(shí)間分辨熒光免疫分析法的透明質(zhì)酸定量檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量得以提高。文檔編號(hào)G01N33/531GK101614735SQ200810043549公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2008年6月25日優(yōu)先權(quán)日2008年6月25日發(fā)明者吳馮波,黃新明申請(qǐng)人:上海新波生物技術(shù)有限公司