專利名稱：：一種枇杷葉藥材的質(zhì)量評價方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及枇杷葉藥材的鑒別及質(zhì)量評價方法，具體地說是用指紋圖譜來鑒別和評價枇杷葉質(zhì)娛的方法，尤其涉及用高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜或高效液相色譜指紋圖譜鑒別枇杷葉真?zhèn)魏唾|(zhì)量穩(wěn)定的方法。背條技術(shù)枇杷葉為薔薇科植物枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl,的干燥葉，是常用大宗中藥材，具有清肺.!h咳，降逆止嘔等功效，用于肺熱咳嗽，氣逆喘急，胃熱嘔逆，煩熱口渴等(國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典.第一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:142)。近年來大量研究發(fā)現(xiàn)(林玉森，林文津，林立強(qiáng).枇杷葉研究現(xiàn)狀與開發(fā)前景，中藥材.2006，29(10):1111-1114),枇杷葉的主要活性成分有熊果酸、齊墩果酸、苦杏仁甙、皂苷類、多糖類等，A有止咳、祛痰、抗炎、保肝、止痛、抗腫瘤及調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用；臨床可用于治療呼吸道炎癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、過敏性紫癜、蕁麻疹、濕疹及高血糖等病癥。有關(guān)枇杷葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，2005年版《中國藥典》一部只檢査簡單的性狀、理化鑒別及水溶性浸出物，尚未對有效成分的檢測做出規(guī)定。目前已有文獻(xiàn)報道用HPLC法測定枇杷葉藥材指紋圖譜的研究漲呂浩，吳松吉，朱延萍，等.枇杷葉高效液相指紋圖譜研究.時珍國醫(yī)國藥.2007,18(2):269-271)。但由于不同K域枇杷葉的質(zhì)量差異較大，針對福建省地道藥材枇把葉的高效液相色譜指紋圖譜未見報道。毛細(xì)管電泳是一種高效分離技術(shù)，具有高效、快速、進(jìn)樣體積小、溶劑消耗少和抗污染能力強(qiáng)等特點(diǎn)，在中藥有效成分分析、指紋圖譜研究方面顯示出顯著的優(yōu)勢(馬欣,孫毓慶.銀杏葉提取物的毛細(xì)管電泳指紋圖譜研究.中草藥,2004,35(8):876-878)。目前，未見采用毛細(xì)管電泳指紋圖譜鑒別及評價枇杷葉藥材質(zhì)量的報道，本申請人對不同產(chǎn)地枇杷葉進(jìn)行了考察比較，于2002年在福建莆田建成枇杷葉GAP示范種植基地，實(shí)行GAP管理。為建立枇杷葉藥材質(zhì)量的綜合評價方法，特以國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年頒發(fā)的關(guān)于中藥注射劑指紋圖譜技術(shù)要求，對福建枇杷主栽品種及枇杷葉GAP基地的10批以上枇杷葉藥材進(jìn)行了測定，建立了福建地道藥材枇杷葉指紋圖譜測定方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用指紋圖譜鑒別和評價枇杷葉藥材質(zhì)量的方法，并可將其用于枇杷葉質(zhì)量控制及其真?zhèn)舞b別的指標(biāo)之一。本發(fā)明通過下列步驟實(shí)施-第一步，先建立枇杷葉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要步驟包括(a)采集10批次以上具代表性的枇杷葉藥材，并鑒定其品種及質(zhì)量。(b)枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取枇杷葉藥材，粉碎，過篩，干燥至恒重。精密稱取枇杷葉粉末適量，用醇性溶劑(C數(shù)小于5，優(yōu)選為甲醇或正丁醇)超聲提取23次，合并提取液。濾過，濾液濃縮后，加醇性溶劑(C數(shù)小于5，優(yōu)選為甲醇或正丁醇)或者流動相稀釋至一定濃度，搖勻，即得。進(jìn)樣前用微孔濾膜濾過。采用高效毛細(xì)管電泳色譜法測定的指紋圖譜，其枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液的具體制備優(yōu)選的步驟為取枇杷葉粉末(過四號篩)約lg，精密稱定，加30倍量正丁醇，靜置15min，超聲提取3次，每次30min，濾過，取濾液，加熱揮去溶劑，用甲醇溶解，移至5ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；即得。采用高效液相色譜法測定的指紋圖譜，其枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液的具體制備過程為取枇杷葉藥材，粉碎，過四號篩，粉末6(TC干燥至恒重。精密稱取枇杷葉粉末lg，置50m慮瓶中，用甲醇30ml超聲提取2次，每次30min，合并提取液。濾過，濾液在水浴上濃縮，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。(c)參照物溶液的制備參照物為枇杷葉中的有效成分，優(yōu)選為三萜酸類化合物，更優(yōu)選為熊果酸。其供試液具體制備方法為精密稱取熊果酸對照品5rag置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得。(d)測定方法的選擇測定方法為色譜法，優(yōu)選為高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)或高效液相色譜法(HPLC)。(f)測定精密吸取枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液及參照物溶液，分別注入檢測儀器，測定枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。采用高效毛細(xì)管電泳色譜法測定的指紋圖譜，其優(yōu)選的條件為毛細(xì)管柱(60cm長，50nm內(nèi)徑)；緩沖液(0.1mol/L硼酸溶液0.2mol/L氫氧化鉀溶液-4:2);分離電壓20kV;實(shí)驗(yàn)溫度25°C;檢測波長為200nm。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于3000。采用高效液相色譜法測定的指紋圖譜，其優(yōu)選的條件為色譜柱EclipseXDB-C18柱(4.6mmX150咖，5um),流動相甲醇1%醋酸水溶液(90:10)，檢測波長215nm，流速1.Omlmin'，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10u1。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于2000。第二步，以上述相同的方法測定待測枇杷葉樣品指紋圖譜；第三步，將待測枇杷葉樣品指紋圖譜與枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，篩選符合枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的枇杷葉藥材。以高效毛細(xì)管電泳色譜法測定的指紋圖譜，其9個共有峰的相對保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于3%，其中1號峰的平均相對保留時間RT為0.656,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.62%;2號峰的平均RT為0.712，RSD為0.50%;3號峰的平均RT為0.818,RSD為1.08%;4號峰的平均RT為0.871，RSD為0.34%;5號峰的平均RT為0.892，RSD為0.30%;6號峰的平均RT為0.919，RSD為0.29%;7號峰的平均RT為0.953，RSD為0.62%;8號峰為熊果酸，即參照物，其平均RT為1.000，RSD為0.00%;7號峰的平均RT為1.070，RSD為0.54%。以高效液相色譜法測定的指紋圖譜，其8個共有峰的相對保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于3%,其中i號峰的平均相對保留時間RT為0.322,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.34%;2號峰的平均RT為0.344，RSD為2.17%;3號峰的平均RT為0.372,RSD為1.57%;4號峰的平均RT為0.574,RSD為2.01%;5號峰的平均RT為0.607，RSD為1.18%;6號峰的平均RT為0.762，RSD為2.92%;7號峰的平均RT為0.950，RSD為1.28%;8號峰為熊果酸，即參照物，其平均RT為1.000，RSD為0.00%。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下(1)所建立的枇杷葉指紋圖譜，能有效地表征枇杷葉藥材的質(zhì)量，對枇杷葉中的全部化學(xué)成分進(jìn)行檢測，既不現(xiàn)實(shí)也沒必要。大量的藥理和臨床研究結(jié)果表明枇杷葉中的三萜酸類成分為其重要的有效成分之一，故選用其中的熊果酸作為參考品就很有代表性。(2)以枇杷葉整個指紋圖譜作為一個整體看待，注重各個構(gòu)成指紋特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征，既避免了因只測定一兩個化學(xué)成分而判定枇杷葉整體質(zhì)量的片面性，又減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性，本發(fā)明為完整、準(zhǔn)確評價枇杷葉的質(zhì)量提供了新的對照標(biāo)準(zhǔn)，將為提高枇杷葉及其中成藥制劑的質(zhì)量及療效做出貢獻(xiàn)。(3)本發(fā)明具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的特點(diǎn)。本發(fā)明采用超聲法提取制備供試液，樣品處理大為簡便、節(jié)約了檢驗(yàn)的成本和時間。同時本發(fā)明提出同時采用毛細(xì)管電泳指紋圖譜和高效液相指紋圖譜的方法對同一批次藥材綜合評價枇杷葉藥材的質(zhì)量。附圑說明圖l枇杷葉毛細(xì)管電泳色譜圖共有峰(A為枇杷葉樣品色譜圖，B為熊果酸對照品色譜圖)圖2枇杷葉高效毛細(xì)管電泳色譜疊加圖圖3枇杷葉高效液相色譜圖共有峰(A為枇杷葉樣品色譜圖，B為熊果酸對照品色譜圖)圖4枇杷葉高效液相色譜疊加圖具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。實(shí)施例一枇杷葉高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜方法的建立1儀器與試藥P/ACEMDQ毛細(xì)管電泳系統(tǒng)(美國貝克曼庫爾特有限公司)，二級管陣列檢測器；未涂層石英毛細(xì)管(河北永年光導(dǎo)纖維廠)，METTLERAL204電子天平(德國)；KUDOSSK3310HP型超聲儀(上海)；GZX-9070MBE恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海)；艾科普超純水機(jī)；指紋圖譜計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件(國家藥典委員會推薦軟件)。甲醇為色譜純，正丁醇為分析純，水為超純水。對照品熊果酸購自中國藥品生物制品檢定所，批號110742-200415。枇杷葉供試品采自福建莆田市枇杷葉GAP藥材基地的掛樹老葉，采樣時間為2005年12月01日一12月20日，經(jīng)6(TC烘千共得13批次樣品，各樣品產(chǎn)地來源及編號見表l，經(jīng)福建省醫(yī)學(xué)測試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中藥室鑒定，各批次藥材質(zhì)量均符合中國藥典2005年版一部枇杷葉項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。表l實(shí)驗(yàn)藥材一覽表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2方法與結(jié)果2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)毛細(xì)管柱(60cm長，50拜內(nèi)徑)；緩沖液(0.1mol/L硼酸溶液0.2mol/L氫氧化鉀溶液=4:2);分離電壓20kV;實(shí)驗(yàn)溫度25°C;檢測波長為200nm。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于3000。2.2參照物溶液的制備精密稱取熊果酸對照品5rag置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻即得。2.3供試品溶液的制備取本品粉末(過四號篩)約lg，精密稱定，加30倍量正丁醇，靜置15min,超聲提取3次，每次30min，濾過，取濾液，加熱揮去溶劑，用甲醇溶解，移至5ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；0.45nm微孔濾膜濾過，備用。2.4測定法采用壓力進(jìn)樣，進(jìn)樣量0.5psixl0s，樣品與對照品同法測定。2.5方法學(xué)考察2.5.1精密度試驗(yàn)取熊果酸對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，考察色譜峰保留時間和峰面積的一致性，熊果酸的保留時間RSD和峰面積RSD分別為0.48%禾卩1.32%。2.5.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取熊果酸對照品溶液，取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，6,8,10h不同時間點(diǎn)進(jìn)行測定考察保留時間和峰面積的一致性，熊果酸的保留時間RSD和峰面積RSD分別為1.57%和1.84%。2.S.3重現(xiàn)性試驗(yàn)取熊果酸對照品溶液，同法檢測5份，考察保留時間和峰面積的一致性，熊果酸的保留時間RSD和峰面積RSD分別為1.42%和2.17。/0。2.6檢測結(jié)果按上述2.2.1方法制備13批次枇杷葉藥材的供試品溶液，在上述2.1選定的同一實(shí)驗(yàn)條件下依次進(jìn)樣檢測，結(jié)果測得12個供試品的HPLC色譜圖。2.7指紋圖譜相似度分析2.7.1共有特征峰的選擇根據(jù)13批次供試品測定結(jié)果所給出的峰數(shù)、峰值(積分值)和峰位(相對保留時間)等相關(guān)參數(shù)進(jìn)行分析、經(jīng)與對照品對照，并比較所有測定和記錄的色譜圖，選取9個共有峰作為指紋圖譜的特征峰,其中8號峰來源于熊果酸(見圖l,A為枇杷葉樣品色譜圖，B為熊果酸對照品色譜圖)。2.7.2共有圖譜模式的建立將各批次樣品的測試數(shù)據(jù)導(dǎo)入計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件，經(jīng)選峰，設(shè)定匹配模板，將譜峰自動匹配，建立其共有圖譜標(biāo)準(zhǔn)模板，然后進(jìn)行各樣品的相似度評價。2.7.3圖譜相似度分析采用計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件分析各批次樣品指紋圖譜的相似度，結(jié)果見圖2,表2表4。經(jīng)分析，除批IO(夾腳)與批13(莆新本)的枇杷葉相似度在0.9以下，其余l(xiāng)l批次不同產(chǎn)地及品種的枇杷葉樣本HPCE指紋色譜圖相似度值均大于0.9。表2指紋圖譜相似度分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例二枇杷葉髙效液相色譜指紋圖譜方法的建立1、儀器與試藥HP1100高效液相色譜儀，EclipseXDB-C18柱(4.6mmx150mm,5nm),二級管陣列檢測器；METTLERAL204電子天平(德國)；KUDOSSK3310HP型超聲儀(上海)；GZX-9070MBE恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海)；指紋圖譜計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件(福建省醫(yī)學(xué)測試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室編寫)。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為純化水。對照品熊果酸購自中國藥品生物制品檢定所，批號110742-200415。枇杷葉供試品采自福建莆田市的常太鎮(zhèn)枇杷葉GAP藥材基地(高山區(qū))、新度鎮(zhèn)果場(平原區(qū))、莆田市果樹研究所(低山區(qū))和福建省果樹研究所(福州市低山區(qū))四個采樣點(diǎn)，采樣時間為2005年10月01日一10月20日，分別采集解放鐘、早鐘6號、長虹3號(系福建省三大枇杷主栽品種)的掛樹老葉，經(jīng)60'C烘干共得12批次樣品，各樣品產(chǎn)地來源及編號見表5，經(jīng)福建省醫(yī)學(xué)測試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中藥室鑒定，各批次藥材質(zhì)量均符合中國藥典2005年版一部枇杷葉項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。表5藥材樣品來源<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱EclipseXDB-C18柱(4.6mmX150mm，5wm)，流動相甲醇1%醋酸水溶液(90:10)，檢測波長215nm，流速l.Omlmin'，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10ul。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于2000。2.2溶液的制備2.2.1供試品溶液的制備取枇杷葉藥材，粉碎，過四號篩，粉末6(TC干燥至恒重。精密稱取枇杷葉粉末lg，置50ml量瓶中，用甲醇30ml超聲提取2次，每次30min，合并提取液。濾過，濾液在水浴上濃縮，移至10m慮瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45阿微孔濾膜過濾，即得。2.2.2對照品溶液的制備精密稱取熊果酸對照品5mg置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻即得。2.3方法學(xué)考察2.3.1精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液10wl，重復(fù)進(jìn)樣6次，熊果酸峰面積的RSD為1.20X,表明精密度良好。2.3.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在O,1，2,4，8,24h分別進(jìn)樣10u1，結(jié)果6次進(jìn)樣熊果酸峰面積的RSD為2.15%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批次枇杷葉藥材5份，按上述樣品測定方法分別測定，結(jié)果熊果酸峰面積的RSD為l.56%,表明該測定方法的重復(fù)性良好。2.4檢測結(jié)果按上述2.2.1方法制備12批次枇杷葉藥材的供試品溶液，在上述2.1選定的同一實(shí)驗(yàn)條件下依次進(jìn)樣檢測，結(jié)果測得12個供試品的HPLC色譜圖。2.5指紋圖譜相似度分析2.5.1共有特征峰的選擇根據(jù)12批次供試品測定結(jié)果所給出的峰數(shù)、峰值(積分值)和峰位(相對保留時間)等相關(guān)參數(shù)進(jìn)行分析、比較,枇杷葉高效液相色譜可分離出10多個色譜峰，經(jīng)與對照品對照，并比較所有測定和記錄的色譜圖，選取8個共有峰作為指紋圖譜的特征峰，其中8號峰來源于熊果酸(見圖3，A為枇杷葉樣品色譜圖，B為熊果酸對照品色譜圖)。2.5.2共有圖譜模式的建立將各批次樣品的測試數(shù)據(jù)導(dǎo)入計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件，經(jīng)選峰，設(shè)定匹配模板，將譜峰自動匹配，建立其共有圖譜標(biāo)準(zhǔn)模板，然后進(jìn)行各樣品的相似度評價。2.5.3圖譜相似度分析采用計算機(jī)輔助相似性評價系統(tǒng)軟件分析各批次樣品指紋圖譜的相似度，結(jié)果見圖4、表6~表8。表6枇杷葉高效液相色譜指紋圖譜相似度樣品號123456789101112對照品相似度0.9120.9530.9460.9610.9920.9940.9880.9960.9600.9890.9780.995l細(xì)表7枇杷葉指紋圖譜中共有指紋峰的相對保留時間表1234567810.3420.3600.3840.5690.5950.7300.917l扁20.3200.3440.3710.5740.6110.7580.957l細(xì)30.3140.3350.3650.5630.6020.8020.953l細(xì)40.3170.3400.3670.5710.6070.8090.956l細(xì)50.3200.3430.3700.5690.6070.7510.956l細(xì)60.3210.3430.3690.6060.6060.7590.956l扁0.3160.3360.3660.5670.6030.7510.952l細(xì)80.3190.3420.3690.5670.6050.7500.951l扁90.3250.3500.3790.5840.6230.7680.954l細(xì)100.3210.3430.3700.5680.6040.7510.953l細(xì)110.3210.3450.3720.5690房0.7540.934l細(xì)120.3310.3530.3790.5740.6170.7560.958l細(xì)平均值0.3220.3440.3720.5740.6070.7620.950l扁RSD(%)2.3402.0351.5672.0131.1812.9161.2830細(xì)表8<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>經(jīng)分析，12批次不同產(chǎn)地及品種的枇杷葉樣本HPLC色譜圖相似度值均大于0.9。權(quán)利要求1.一種枇杷葉藥材的質(zhì)量評價方法，包括如下步驟第一步，先建立枇杷葉的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要步驟包括(a)采集10批次以上的枇杷葉藥材，并鑒定其品種及質(zhì)量；(b)枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備；(c)參照物溶液的制備；(d)測定方法的選擇；(f)測定精密吸取枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液及參照物溶液，分別注入檢測儀器，測定枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。第二步，以上述相同的方法測定待測枇杷葉樣品指紋圖譜；第三步，將待測枇杷葉樣品指紋圖譜與枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，篩選符合枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的枇杷葉藥材。2.如權(quán)利要求1所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述枇杷葉藥材標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備過程為取枇杷葉藥材，粉碎，過篩，干燥至恒重。精密稱取枇杷葉粉末適量，用醇性溶劑(C數(shù)小于5，優(yōu)選為甲醇或正丁醇)超聲提取2~3次，合并提取液。濾過，濾液濃縮后，加醇性溶劑(C數(shù)小于5,優(yōu)選為甲醇或正丁醇)或者流動相稀釋至一定濃度，搖勻，即得。進(jìn)樣前用微孔濾膜濾過。優(yōu)選的制備過程為取枇杷葉粉末(過四號篩)約lg，精密稱定，加30倍量正丁醇，靜置15min，超聲提取3次，每次30min，濾過，取濾液，加熱揮去溶劑，用甲醇溶解，移至5ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；即得。3.如權(quán)利要求1所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述參照物溶液的制備中參照物為枇杷葉中的有效成分，優(yōu)選為三萜酸類化合物，更優(yōu)選為熊果酸。4.如權(quán)利要求1所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述測定方法的選擇中測定方法為色譜法，優(yōu)選為高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)或高效液相色譜法(HPLC)。5.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于所述枇杷葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為福建省枇杷葉藥材指紋圖譜。6.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于所述采用高效毛細(xì)管電泳色譜法測定的指紋圖譜，其9個共有峰的相對保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于3%，其中1號峰的平均相對保留時間RT為0.656，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.62%;2號峰的平均RT為0.712，RSD為0.50%;3號峰的平均RT為0.818，RSD為1.08%;4號峰的平均RT為0.871,RSD為0.34%;5號峰的平均RT為0.892,RSD為0.30%;6號峰的平均RT為0.919,RSD為0.29%;7號峰的平均RT為0.953，RSD為0.62%;8號峰為熊果酸，即參照物，其平均RT為1.000，RSD為0.00%;7號峰的平均RT為1.070，RSD為0.54%。7.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于所述采用高效液相色譜法測定的指紋圖譜，其8個共有峰的相對保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于3%，其中1號峰的平均相對保留時間RT為0.322，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.34%;2號峰的平均RT為0.344，RSD為2.17%;3號峰的平均RT為0.372，RSD為1.57%:4號峰的平均RT為0.574，RSD為2.01%;5號峰的平均RT為0.607，RSD為1.18%;6號峰的平均RT為0.762,RSD為2.92%;7號峰的平均RT為0.950，RSD為1.28%;8號峰為熊果酸，即參照物，其平均RT為1.000,RSD為0.00%。8.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述參照物溶液的制備中參照物溶液的制備的具體方法為精密稱取熊果酸對照品5mg置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得。9.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述采用高效毛細(xì)管電泳色譜法測定的指紋圖譜，其優(yōu)選的條件為毛細(xì)管柱(60cm長，50nm內(nèi)徑)；緩沖液(0.1mol/L硼酸溶液0.2mol/L氫氧化鉀溶液-4:2);分離電壓20kV;實(shí)驗(yàn)溫度25°C;檢測波長為200nm。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于3000。10.如權(quán)利要求1~4所述的枇杷葉藥材質(zhì)量評價方法，其特征在于，所述采用高效液相色譜法測定的指紋圖譜，其優(yōu)選的條件為色譜柱EclipseXDB-C18柱(4.6mmX150ram,5ym)，流動相甲醇1%醋酸水溶液(90:10)，檢測波長215nm,流速1.Omlmin—'，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10ul。理論板數(shù)按熊果酸峰計算不低于2000。全文摘要本發(fā)明涉及枇杷葉藥材指紋圖譜建立的方法及其指紋圖譜。首先采集10批次以上的枇杷葉藥材，制備供試品溶液，再配制對照品溶液，參照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，運(yùn)用高效液相色譜法和高效毛細(xì)管電泳法進(jìn)行測定，最后運(yùn)用中藥指紋圖譜相似度計算軟件分析(國家藥典委員會推薦)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、穩(wěn)定、精密度、重現(xiàn)性好、易于掌握，能從色譜的整體特征面同高貌上把握枇杷葉的品種和質(zhì)量情況，可將其作為枇杷葉質(zhì)量評價和真?zhèn)舞b別的方法之一。文檔編號G01N30/00GK101354381SQ20071000928公開日2009年1月28日申請日期2007年7月27日優(yōu)先權(quán)日2007年7月27日發(fā)明者徐榕青,林力強(qiáng),林文津,林玉霖申請人:莆田市中醫(yī)藥研究所