專利名稱：：診斷檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于檢測能識別豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的一種或多種蛋白質(zhì)和/或抗原的抗體的試劑盒、裝置和方法。所述抗體可存在于被PRRSV感染或有被PRRSV感染的風險的對象的生物液內(nèi)。本發(fā)明優(yōu)選用于PRRSV感染的診斷和預(yù)防。
背景技術(shù)：
：在美國，養(yǎng)豬業(yè)遭受經(jīng)濟損失的主要原因是豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)病毒或PRRSV。PRRSV是豬無法繁殖和呼吸系統(tǒng)疾病的致病因子。與PRRS相關(guān)的經(jīng)濟損失主要是由于該病毒可引起懷孕母豬流產(chǎn)以及正在成長的豬患呼吸系統(tǒng)疾病綜合癥(PRDC)。現(xiàn)在已經(jīng)實踐了不同的控制方法，其中包括使用疫苗和改善管理。參見，例如，美國專利5,690,940。盡管養(yǎng)豬場都會進行常規(guī)的免疫，但是爆發(fā)PRRSV也并非罕見。PRRSV爆發(fā)最常見的原因是生物安全措施失效。已被PRRSV感染的后備母豬未經(jīng)檢測就放入飼養(yǎng)群中是生物安全措施失效的一個常見原因。如果養(yǎng)豬場采取簡單而經(jīng)濟的方法來檢測PRRSV感染，這些問題都可以解決。這種方法還可用于檢測母豬所生產(chǎn)的斷奶豬仔是否是無病毒的以及斷奶豬仔在環(huán)境適應(yīng)過程中是否能夠保持無病毒狀態(tài)。為了檢測PRRSV抗體，獸醫(yī)應(yīng)采集血樣并送到獸醫(yī)診斷實驗室。目前，ELISA、間接熒光抗體試驗以及免疫過氧化物單層分析是常用的檢測抗PRRSV抗體的實驗室方法。然而，這些方法需要昂貴的設(shè)備和訓(xùn)練有素的技術(shù)人員。利用這些方法至少需要3天才能得到結(jié)果，其中包括郵寄結(jié)果的時間。另外，養(yǎng)豬農(nóng)民為了采集樣品并將其送到診斷實驗室也要付出經(jīng)濟成本。一種用于檢測PRRSV抗體的以養(yǎng)殖場為基礎(chǔ)的簡單而快速的試驗在獸醫(yī)診所或養(yǎng)豬合作組織的實驗室中是十分有用的。利用PRRSV疫苗來根除疾病在農(nóng)戶水平上通常是不成功的。方法如撲殺全部種群并從新建立種群可以有效地根除養(yǎng)殖場的病毒。但是，這種方法不能用于所有養(yǎng)殖場，并且操作起來經(jīng)濟損失相當大。另外，這種方法依賴于PRRSV的檢測。某些PRRS病毒株的核酸序列及其編碼的蛋白已有報道。利用組織樣品，其中包括肺組織，檢測PRRSV也有討論(參見WO96/06619)，其結(jié)果與PRRSV優(yōu)先在肺泡肺巨噬細胞內(nèi)復(fù)制的結(jié)果一致。通過口鼻途徑感染以后，PRRSV在肺巨噬細胞內(nèi)復(fù)制，再進入肺淋巴結(jié)，然后通過血流進入其他器官內(nèi)。本文所文獻的引用并不等于承認這些文獻是相關(guān)的在先領(lǐng)域。有關(guān)日期的所有描述或有關(guān)文獻內(nèi)容的陳述的根據(jù)是申請人所提供的信息，并不等于承認日期或文獻內(nèi)容的正確性。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于檢測對象被豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)病毒，即PRRSV感染的試劑盒、裝置和方法。檢測可通過利用包含一種或多種PRRSV編碼蛋白和/或抗原的組合物來完成，其中蛋白和/或抗原可與抗所述蛋白的抗體結(jié)合。因此，本發(fā)明可被視為是基于"抗體捕獲"隨后檢測抗體的原理而建立的?？贵w是指被PRRSV感染的對象體內(nèi)存在而未感染個體內(nèi)不存在的那些抗體。一種或多種PRRSV編碼的蛋白包括核殼(N)蛋白和/或一種或多種病毒包膜("E")蛋白。蛋白可以是PRRSV感染細胞表面上的糖蛋白。蛋白也可被認為是用于檢測對象體內(nèi)抗體的PRRSV抗原，其中抗體可識別PRRSV蛋白，從而識別PRRSV。PRRSV蛋白和/或抗原優(yōu)選用于本發(fā)明的試劑盒、裝置和方法中以便于在早期時間點根據(jù)對抗PRRSV抗體的檢測來檢測PRRSV感染。這種檢測方法依賴于抗體的存在，其中抗體是感染后早期被感染對象體內(nèi)存在的抗至少一種如本文所述的PRRSV蛋白和/或抗原的抗體。在第一方面，本發(fā)明提供了使用包含一種或多種PRRSV表達的蛋白和/或抗原的組合物來制造或使用本文所述試劑盒或裝置的方法。在某些實施方式中，所述裝置是被本發(fā)明的組合物包被的平皿。這種平皿的非限制性例子包括各種尺寸的培養(yǎng)皿以及微量滴定板的孔。這種平皿可用于診斷試驗以檢測抗組合物中所含的一種或多種PRRSV蛋白和/或抗原的抗體。因此，這種裝置可用于檢測是否存在抗組合物中所含的一種或多種PRRSV蛋白和/抗原的抗體。被檢測的抗體可以存在于生物液樣品中，如果存在抗體，它可以作為用來采集樣品的對象存在PRRSV感染的指示劑。因此，該裝置可作為一種診斷PRRSV感染是否存在的快速方式。在本發(fā)明的這種裝置的核心是以固定形式存在于組合物中的一種或多種PRRSV蛋白和/或抗原。作為非限制性的例子，PRRSV蛋白和/或抗原可直接，例如通過吸附(例如，包被)或通過結(jié)合，固定到裝置的表面。另外，蛋白和/或抗原還可以間接固定，例如通過使用與蛋白和/或抗原結(jié)合的試劑或通過使用既和表面結(jié)合又和蛋白或抗原結(jié)合的連接子。因此，固定的PRRSV蛋白和/或抗原可以被看作是"捕獲劑"用于抗蛋白和/或抗原的抗體的結(jié)合以形成包含蛋白和/或抗原的固定復(fù)合物。當然，固定的"捕獲劑"可被看作是能"捕獲"與因子結(jié)合的抗體的因子。然后，如本文所述，利用"檢測劑"檢測復(fù)合物，例如，與復(fù)合物結(jié)合的標記試劑。如果"檢測劑"與復(fù)合物結(jié)合則說明樣品中存在抗-PRRSV抗體。在某些實施方式中，"檢測劑"上標記有第二抗體，樣品中如果存在抗體，第二抗體則與抗體結(jié)合，其中第二抗體作為復(fù)合物的一部分被固定。抗-PRRSV抗體的存在可作為對象體內(nèi)存在PRRSV感染的指示劑，其中樣品取自該對象。如果沒有抗-PRRSV抗體則說明沒有感染。樣品優(yōu)選取自豬對象或懷疑被PRRSV感染的其他對象，但是可能被PRRSV或PRRSV載體感染的任何對象都可用于本發(fā)明的裝置中。"檢測劑"可以被標記以便于直接檢測，例如，通過連接一個特殊的標記物，一旦充分凝集就可以用肉眼觀察到。另外，因子可以被標記以便于間接檢測，例如，通過連接一個酶，該酶被檢測的依據(jù)是其對可檢測底物的活性，或者該酶可產(chǎn)生一個可被檢測的產(chǎn)物。當然，"檢測劑"可以是"第二因子"，第二因子可結(jié)合能與本發(fā)明的復(fù)合物結(jié)合的標記或未標記"初級"結(jié)合因子。本發(fā)明的裝置還可以包含控制位點或控制區(qū)，其中控制位點或控制區(qū)位于裝置內(nèi)，無論加載到裝置上的樣品內(nèi)是否存在PRRSV抗體，控制位點或控制區(qū)都能確保裝置正確行使功能。這種控制的基礎(chǔ)在于對樣品內(nèi)存在的其他分子或大分子實體的檢測。如果不能被所使用的裝置的組分結(jié)合，本發(fā)明的PRRSV蛋白和/或抗原以及包含PRRSV抗原和/或蛋白的組合物還可用于檢測抗PRRSV蛋白和/或抗原的抗體的方法中。這種方法可被設(shè)計成用于檢測來自于對象的生物液內(nèi)的這種抗體，例如懷疑已被PRRSV感染的個體。該方法包括使樣品或其稀釋形式與PRRSV編碼蛋白和/或抗原接觸以確定樣品中是否存在與蛋白和/或抗原結(jié)合的抗體?？贵w與PRRSV蛋白和/或抗原結(jié)合形成復(fù)合物，檢測到這種復(fù)合物則說明存在抗體，因而說明對象體內(nèi)存在PRRSV感染，其中樣品取自該對象。樣品優(yōu)選來自豬對象，但是被PRRSV或PRRSV載體感染的任何對象都可用于本發(fā)明?？捎糜趯崿F(xiàn)本發(fā)明的生物液的范圍包括其中存在可檢測水平的抗PRRSV蛋白和/或抗原的抗體的任何液體。非限制性的例子包括對象的體液，如血液、血清、血漿、唾液、眼淚、粘液、鼻涕和陰道分泌物。當然，這種液體的稀釋液也可作為樣品用于實現(xiàn)本發(fā)明。在某些實施方式中，包含EDTA或其他二價陽離子螯合劑的稀釋劑與來自于對象的生物液樣品以1:1的比例混合來使用。在使用血清或血漿的實施方式中，可以省略稀釋步驟。樣品優(yōu)選來自于懷疑已被PRRSV感染的個體，所以被懷疑是因為存在顯示感染的癥狀。另外，本發(fā)明的方法可作為動物常規(guī)篩選的一部分來使用，例如養(yǎng)殖場所使用的用于快速鑒定和分離被感染個體的那些方法。方法還可在特殊的情況下使用，例如，在將動物從一個地方運輸或轉(zhuǎn)移到另一個地方前用于鑒定感染和防止感染擴散。在本發(fā)明的許多實施方式中，對象是豬，因此樣品可以是豬的體液或分泌物?？蓮闹蝎@取樣品以用于本發(fā)明的豬的非限制性例子包括公豬、后備母豬、母豬、育肥豬、豬仔和未斷奶小豬。豬可以是從出生到死亡之間的任何豬齡的豬。非限制性的例子包括約30到約40、41到約50、或51到約60天或更大的豬，都可用于實現(xiàn)本發(fā)明。在某些實施方式中，所述方法是以垂直免疫擴散酶分析(VIDEA)為基礎(chǔ)的方法。該方法利用固定的PRRSV蛋白和/或抗原，其中蛋白和/或抗原是利用可通透屏障從包含或懷疑包含抗PRRSV抗體的樣品中分離的。樣品通過多孔材料透過屏障，樣品中的抗PRRSV抗體擴散通過屏障與PRRSV蛋白和/或抗原接觸?？贵w與蛋白禾口/或抗原的接觸導(dǎo)致復(fù)合物的形成，然后檢測復(fù)合物，如果有復(fù)合物形成則說明樣品中存在抗體。檢測可以是采取一個區(qū)域的形式，其中含有復(fù)合物。在某些實施方式中，可通透屏障是瓊脂或瓊脂糖。在其他實施方式中，方法是以水平免疫擴散酶分析(HIDEA)為基礎(chǔ)的方法。該方法與上述VIDEA相似，二者都利用固定的PRRSV蛋白和/或抗原。HIDEA方法包括通過可通透屏障從包含或懷疑包含抗PRRSV抗體的樣品中分離固定的蛋白/抗原。樣品直接提呈給屏障，這樣抗PRRSV抗體擴散通過可通透屏障與PRRSV蛋白和/或抗原接觸。擴散還可以是從樣品點向外呈放射狀擴散，然后與屏障接觸?？贵w與蛋白和/或抗原的接觸導(dǎo)致復(fù)合物的形成，然后檢測復(fù)合物，如果有復(fù)合物形成則說明樣品中存在抗體。檢測可以是采取圈或環(huán)的形式，其中含有復(fù)合物。在某些實施方式中，可通透屏障是瓊脂或瓊脂糖。本發(fā)明的各個方面都可用于與北美株抗原性相關(guān)的所有PRRSV株。因此，本發(fā)明的基礎(chǔ)通常被視為任何PRRSV病毒的蛋白。另外，提供了與制造這種裝置有關(guān)的方法。本發(fā)明的這種附加方面與本文所述的試劑盒、裝置和方法的組分的制備方法有關(guān)。本發(fā)明包括從感染PRRSV的細胞中制備PRRSV蛋白的方法。在某些實施方式中，在感染后的早期時間點收獲蛋白，這時蛋白的大部分或全部還依然保持著與被感染細胞聯(lián)系。或者換一個說法，大部分或全部PRRSV編碼蛋白或者存在于被感染細胞內(nèi)，或者與被感染細胞的細胞膜相連。在這種條件下，細胞外環(huán)境中存在的PRRSV顆粒相對很少，即使存在的話。另一方面提供了將第一結(jié)合因子固定在上述裝置的至少一個表面上的方法，例如但不限于PRRSV的N蛋白和/或一種或多種包膜蛋白。在本發(fā)明的其他方面，提供了包含本發(fā)明的裝置或用于實現(xiàn)本文所述的方法的試劑盒。其他方面包括用于實現(xiàn)本發(fā)明所提供的一種或多種方法的組合物和制造條款。這種組合物的非限制性例子包括用于制備本發(fā)明的試劑盒或裝置的那些組合物。試劑盒的非限制性例子包括那些包含用于本文所公開的方法中的，本發(fā)明的一種或多種組合物或因子或者本發(fā)明的一種或多種裝置的那些試劑盒。本發(fā)明的一個或多個實施方式的細節(jié)在附圖和下面的說明中有描述。通過閱讀附圖、詳細描述和權(quán)利要求可以清楚地了解本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點。附圖簡述圖1是代表兩個免疫擴散酶分析(IDEA)的示意圖。圖中顯示的是垂直(VIDEA)和水平(HIDEA)實施方式，而圖中位置l、2和3是如何分別顯示陽性、陰性和陽性結(jié)果的。定義在本文中，術(shù)語豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)病毒，或PRRSV，是指可引起PRRS、神秘豬病(MSD)、豬不孕及呼吸綜合征(SIRS)(以前被稱為"藍耳綜合征")、豬流行性流產(chǎn)及呼吸綜合征(PEARS)、瓦伯希綜合征(Wabashsyndrome)、神秘豬病(MPD)、豬瘟、英國的藍色流產(chǎn)病毒或藍耳病、荷蘭的藍耳病(abortusblau)、德國的豬藍耳病PRRSV蛋白是指由PRRSV基因組編碼的和/或僅僅作為PRRSV感染或PRRSV生命周期的結(jié)果而產(chǎn)生的任何多肽。因此，PRRSV特異性的以及非PRRSV感染細胞編碼的或表達的多肽都包含在這個術(shù)語的范圍內(nèi)。PRRSV感染細胞編碼的，但是在沒有PRRSV感染和/或生命周期時不表達的內(nèi)源性多肽不屬于這個術(shù)語的范疇。然而，僅僅是作為PRRSV感染和/或生命周期的結(jié)果而表達的內(nèi)源性多肽處于這個術(shù)語的范圍之內(nèi)。該術(shù)語還包括因次級和/或三級結(jié)構(gòu)的改變而導(dǎo)致的其他形式的多肽，例如，非限制性的例子有部分或全部蛋白變性而產(chǎn)生的那些多肽。因此，多肽的變性形式也包括在該術(shù)語的范圍之內(nèi)。PRRSV抗原是指可被抗PRRSV抗體識別的PRRSV多肽的任何部分或片段。在某些情況下，部分或片段可以是帶有連接基序的肽，例如而不限于糖基序、磷酸根基序或脂質(zhì)基序。另外，部分或片段可以是不帶任何粘附非肽基序的肽。發(fā)明詳述及實施模式本發(fā)明涉及用于檢測抗PRRSV抗體的試劑盒、裝置和方法。檢測的基礎(chǔ)在于使用一種或多種可與抗所述蛋白的抗體結(jié)合的PRRSV編碼蛋白和/或抗原?？贵w是指那些存在于PRRSV感染對象體內(nèi)而不存在于未感染個體內(nèi)的抗體。本發(fā)明可被視為檢測捕獲抗體的"抗體捕獲"分析。本發(fā)明還可被視為用于檢測抗PRRSV抗體的以免疫擴散為基礎(chǔ)的方法。本發(fā)明的基礎(chǔ)部分在于人們認識到PRRSV的結(jié)構(gòu)蛋白，其中包括相關(guān)的核殼蛋白(N)、膜相關(guān)蛋白(M)以及至少4個包膜蛋白(E)，可用于檢測PRRSV對象體內(nèi)的抗體。換一種說法，本發(fā)明的基礎(chǔ)部分在于發(fā)現(xiàn)了PRRSV感染對象體內(nèi)存在抗這些蛋白和/或其抗原性片段的抗體，因此，抗體的檢測提供了一種指示對象被PRRSV感染的良好方式。本發(fā)明還部分基于發(fā)現(xiàn)了某些條件和方法可用于獲得包含高濃度的與其他PRRSV蛋白和/或抗原相關(guān)的E蛋白的PRRSV蛋白和/或抗原組合物。因此，本發(fā)明包括從感染PRRSV的細胞中制備PRRSV蛋白和/或抗原的方法。在感染后的早期時間點收獲蛋白，這時蛋白的大部分或全部還依然保持著與被感染細胞聯(lián)系，或者是本發(fā)明的細胞相關(guān)性病毒組分(CAVC)的一部分?；蛘邠Q一個說法，大部分或全部PRRSV蛋白和/或抗原或者存在于被感染細胞內(nèi)，或者與被感染細胞的細胞膜相連。在這種條件下，細胞外環(huán)境中存在的PRRSV顆粒相對很少，即使存在的話。本發(fā)明的基礎(chǔ)部分在于意外地發(fā)現(xiàn)，在細胞被感染后的一段相對較短的時期內(nèi)，細胞可產(chǎn)生足量的PRRSV編碼蛋白，這些蛋白適用于本發(fā)明的檢測方法。在較早的時間點制備CAVC，例如在PRRSV顆粒產(chǎn)生和/或釋放到細胞外環(huán)境之前，還有提高安全性的好處，這樣所得到的CAVC就不會被非感染性的病毒顆粒污染。感染的細胞可以是能被PRRSV有效感染的任何細胞。非限制性的例子包括體外或體內(nèi)的豬細胞。體外細胞的一個非限制性例子是來源于被PRRSV感染的豬對象的原代細胞。體內(nèi)細胞的一個非限制性例子是PRRSV通過口鼻途徑感染的豬肺泡巨噬細胞(PAM)，這種細胞隨后可被收獲用于制備PRRSV蛋白和/或抗原。另一個非限制性例子是使用猿細胞系MARC-145。根據(jù)本發(fā)明的方法制備的PRRSV蛋白和/或抗原包括至少一種PRRSVN、M和E蛋白。這些蛋白的組合物也可從本發(fā)明的細胞中制備。在某些實施方式中，制備出的蛋白/抗原中E蛋白的比例相較N和M蛋白高。因此，本發(fā)明提供了從PRRS病毒感染細胞中制備PRRS病毒蛋白和抗原的方法，該方法包括a)提供一個被PRRS病毒感染的細胞群；b)將無細胞PRRS病毒與感染細胞分離以形成包含細胞相關(guān)PRRS病毒蛋白和抗原的細胞；以及c)從步驟b)分離的細胞中提取或洗脫PRRS病毒蛋白和抗原。在沒有無細胞病毒存在的例子中，步驟b)可以修改為只是簡單從可能干擾本方法的其他材料中分離細胞，例如用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。步驟b)可以通過本領(lǐng)域熟知的任何方法完成，例如，通過離心產(chǎn)生細胞團和上清，然后去除或丟棄上清，或者利用膜過濾去除上清，保留細胞。步驟c)可任選通過將細胞重懸在緩沖液中來完成。在某些實施方式中，提取或洗脫是用包含去污劑的溶液完成的，因此，用于重懸細胞的緩沖液可能包含去污劑。在其他實施方式中，該方法包括利用PRRS病毒感染細胞群足夠的時間以使每毫升上清如用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基中的感染單位降低到不可檢測的水平。非限制性的例子包括低于1015的組織培養(yǎng)感染量(TCIDs()/ml)。用于本方法的細胞群可任選用PRRS病毒感染足夠的時間以觀察CPE。當然，細胞被感染的時間未達到可以觀察到CPE或CPE早期階段的長度時的細胞也可用于實現(xiàn)本發(fā)明。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了從PRRS病毒感染的豬肺泡巨噬細胞(PAM)中制備PRRS病毒蛋白和抗原的方法。該方法包括從PAM細胞群中制備所述的蛋白和抗原，其中PAM細胞是通過灌洗口鼻接種PRRS病毒的豬的肺而獲得的。PRRS病毒蛋白和抗原可從上述細胞中提取或洗脫。因此，細胞可重懸到提取緩沖液中。在某些實施方式中，提取或洗脫是用包含去污劑的溶液完成的，因此，用于重懸細胞的緩沖液可能包含去污劑。包含去污劑的溶液可以是適于提取或洗脫PRRSV蛋白和/或抗原的任何溶液。一個非限制性的例子是使用非離子型去污劑，如聚(乙烯甘油)對-異辛基-苯基醚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(諾乃P-40(NonidetP-40))或曲通X-100(TritonX-100)。在本發(fā)明的某些實施方式中，溶液中去污劑的濃度約為0.5%，例如，約0.5。/。曲通X-100溶液。本發(fā)明還提供了從PRRS病毒感染細胞中制備PRRS病毒蛋白和抗原的方法。這種方法包括從體外或體內(nèi)方法制備的細胞群中制備所述的蛋白和抗原。對于體外方法來說，培養(yǎng)豬肺泡巨噬細胞(PAM)或MARC-145細胞系，感染PRRSV后收獲細胞。對于不使用細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的體內(nèi)方法來說，口鼻接種PRRS病毒后通過灌洗豬的肺來獲得PAM細胞。比較使用不同PRRSV分離株以及病毒接種后不同天數(shù)所產(chǎn)生的抗原，通過比較試驗可以預(yù)先確定達到最高抗原產(chǎn)量所需要的最佳條件。當然，本發(fā)明包括含有游離PRRSV蛋白和/或抗原的組合物，其中的游離PRRSV蛋白和/或抗原是利用本文公開的任何方法制備的。組合物可用于使用PRRSV蛋白和/或抗原的任何目的。非限制性的例子包括用于制備抗蛋白/抗原的抗體；用作PRRSV蛋白的參照標記；以及用作免疫原性組合物，例如疫苗制劑，可任選加入合適的佐劑，這種疫苗給予動物后可產(chǎn)生免疫反應(yīng)。組合物的其他非限制性例子包括其中的蛋白/抗原是可溶或凍干(冷凍干燥)形式的那些組合物。在某些實施方式中，組合物溶解在適于包被表面的溶液中，例如本發(fā)明的裝置的表面。這種溶液可以使蛋白包被在培養(yǎng)皿的底部。非限制性的例子包括用pH9.6的0.06M碳酸鹽緩沖液稀釋的PRRSV蛋白/抗原溶液。溶液可用于包被平皿或孔的表面，例如聚苯乙烯或玻璃培養(yǎng)皿或多孔培養(yǎng)板的孔。倒掉未吸附的材料，然后任選用不含蛋白/抗原的緩沖液洗滌一次或多次。包被可在各種溫度下進行，其中包括25。C以下，包被時間也可以各不相同。在某些實施方式中，包被可在4'C或約4。C進行約72小時。因此，本發(fā)明還提供了用病毒蛋白和/或抗原包被表面的方法，所述方法包括a)提供一種包含如本文所述的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原的溶液；以及b)使所述的溶液與表面接觸一段時間以使所述的蛋白和抗原吸附到所述平皿的表面。在某些實施方式中，通過利用如本文所述的包含去污劑的溶液從PRRSV感染細胞中提取或洗脫蛋白和/或抗原。在其他實施方式中，被包被的表面是用聚苯乙烯或玻璃或類似材料制備的。優(yōu)選用乙醇洗滌表面，然后將其吸干。PRRSV蛋白/抗原溶液可用于清潔表面，使其吸附約2-4小時到過夜。蛋白/抗原可被稀釋到最佳濃度，約0.01到0.001%之間，優(yōu)選用碳酸鈉-碳酸氫鈉包被緩沖液稀釋以促使蛋白/抗原粘附到表面上。包被緩沖液的濃度優(yōu)選在約0.01M到0.1M之間(pH9到10)，其中每升溶液包含約0.84到8.4gNaHC03和0.11到10.6gNa2CO3。包被期過后，倒掉或用其他方式去掉多余的溶液。被包被的表面用蒸餾水或不含蛋白/抗原的緩沖液洗滌。用PRRSV蛋白和/抗原包被以后可以選擇再用封閉劑，例如而不限于，溶于pH7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS)中的1。/。牛血清白蛋白(BSA)包被。包被可在各種溫度下進行，其中包括約37"C包被不同的時間。在某些實施方式中，包被可以在37t:或約37"C進行約1小時。使用封閉劑以后，去掉溶液，任選再用水或不含試劑的緩沖液洗滌一次或多次。包被以后，將可通透屏障層加到包被表面。屏障可以溶液的形式使用，在變干后形成可通透屏障。非限制性的例子包括瓊脂和/瓊脂糖溶液，這種溶液變干后形成由凝膠樣材料組成的可通透屏障。因此，可使用融化的瓊脂或瓊脂糖層，然后使其固定。瓊脂層的厚度并不是關(guān)鍵的，可以從至少約1.5mm，優(yōu)選從約2mm，到約10mm。制備瓊脂層的溶液濃度為約0.75到1.5%之間，優(yōu)選約1%。作為非限制性的例子，本文所述的以VIDEA為基礎(chǔ)的方法可使用直徑為60mm的聚苯乙烯培養(yǎng)皿和4ml溶于PBS中的0.6%瓊脂糖。以HIDEA為基礎(chǔ)的方法可使用6ml相同的溶液。溶液固定過夜，例如在4°C。如此包被的裝置可儲存，例如在4°C潮濕的容器內(nèi)，最多達4個月。具有如本文所述的包被表面的裝置可作為診斷試劑盒的全部或部分用于檢測抗PRRSV抗體。因此，本發(fā)明還提供了檢測抗PRRS病毒的抗體的方法，該方法包括a)采集對象的血樣或血清樣品；b)使所述樣品與本文所述的包被裝置的可通透屏障接觸；c)孵育所述樣品使分子如抗體擴散通過可通透屏障與包被裝置的蛋白/抗原結(jié)合;d)去掉可通透屏障并任選洗滌裝置以去除未結(jié)合的抗體;e)檢測抗體與蛋白/抗原結(jié)合而形成的復(fù)合物。關(guān)于步驟b)中的裝置，一個非限制性的例子是裝置為平皿試驗板(dishtestplate)，其中包括(l)具有平坦支持表面的平皿；(2)PRRSV蛋白/抗原包被吸附到所述表面上；以及(3)瓊脂層覆蓋所述的包被。關(guān)于步驟e)，方法可通過使用能與形成的復(fù)合物結(jié)合的檢測劑來實現(xiàn)。一個非限制性的例子是使用第二抗體，其中第二抗體可與樣品中存在的抗體結(jié)合。這種第二抗體的非限制性例子包括來自于特殊動物，例如，小鼠、大鼠、山羊、兔等，的那些抗體，第二抗體可識別被測樣品中的抗體的Fc部分。第二抗體可以連接標記物以便于其檢測。連接通過將另一個基序連接到抗體上來修飾抗體?；騼?yōu)選可檢測標記，其中包括可直接檢測的標記，如放射性同位素、熒光標記(非限制性的例子有Cy3和Cy5)或顆粒標記。顆粒標記的非限制性例子包括乳膠顆粒、金屬液膠以及膠體金顆粒。另外，標記也可用于間接檢測。非限制性的例子包括酶，例如而不限于，過氧化物酶、熒光素酶、堿性磷酸酶以及辣根過氧化物酶。其他非限制性的例子包括可被另一種分子結(jié)合的分子，例如而不限于生物素、親和肽或純化標記。標記優(yōu)選共價連接。在某些實施方式中，第二抗體是酶偶聯(lián)的豬免疫球蛋白，它可以在約30到約60分鐘內(nèi)結(jié)合復(fù)合物內(nèi)的抗體。結(jié)合以后，通過一次或多次可選的洗滌去除未結(jié)合的第二抗體。酶可以是任何合適的酶，例如用于酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)中的酶，其中包括過氧化物酶。過氧化物酶與氨基水楊酸和過氧化氫，或者對苯二胺和過氧化氫反應(yīng)時可產(chǎn)生紫色。堿性磷酸酶與二硝基磷酸苯酯反應(yīng)時可產(chǎn)生黃色。e半乳糖苷酶與O-硝基苯基-日-D-半乳糖基吡喃糖苷反應(yīng)可產(chǎn)生紫色。作為酶聯(lián)二抗的另一個非限制性例子，通過檢測結(jié)合的二抗來檢測復(fù)合物可通過覆蓋包含底物的瓊脂溶液來介導(dǎo)，其中底物與酶反應(yīng)后可產(chǎn)生可檢測信號，例如，生成顏色就是一個非限制性的例子。在某些實施方式中，可檢測信號是可見的，例如通過肉眼觀察。信號可以和使用陽性對照(包含可與包被表面結(jié)合的已知抗PRRSV抗體)所觀察到的和/或使用不包含這種抗PRRSV抗體的陰性對照所觀察到的生色反應(yīng)比較。在本發(fā)明的某些實施方式中，特別是本文所述的VIDEA中，收集樣品并用于多孔材料(或者通過多孔材料收集)，例如而不限于濾紙或濾紙盤。作為非限制性的例子，在使用濾紙盤的情況下，濾紙盤平放到可通透屏障上，以使分子從濾紙盤擴散，通過屏障到達包被表面。在表面上，樣品中可結(jié)合本發(fā)明的PRRSV蛋白/抗原的分子(如抗體)與蛋白/抗原形成復(fù)合物。因此，樣品中的分子被固定到包被的表面上。在某些實施方式中，擴散和復(fù)合物形成所需的時間為約2到3小時，在室溫(25t:)或約37°C下進行。復(fù)合物形成以后，去掉可通透屏障。在某些包含瓊脂或瓊脂糖屏障的實施方式中，可剝離掉瓊脂或瓊脂糖層，然后任選洗滌。本發(fā)明方法的根據(jù)是復(fù)合物的形成，其中復(fù)合物包含與本文所述的樣品中的抗PRRSV抗體結(jié)合的PRRSV蛋白/抗原?？梢詸z測抗PRRSV抗體以降低檢測復(fù)合物的難度。在樣品中檢測到PRRSV蛋白/抗原與抗PRRSV抗體形成的復(fù)合物說明對象體內(nèi)存在PRRSV感染，其中樣品取自該對象。本發(fā)明還提供了垂直免疫擴散酶分析(VIDEA)方法，所述方法包括a)提供一個至少一個表面被本文所述的一種或多種PRRSV蛋白和抗原包被的診斷裝置，所述表面被本文所述的可通透屏障覆蓋；b)使屏障的表面與包含抗體的多孔材料接觸，其中抗體包含在對象來源的樣品中；c)孵育所述裝置足夠的時間以使材料從所述樣品擴散到所述一個或多個表面，所述的孵育期任選在去除多孔材料之后進行；以及d)在去除可通透屏障后檢測平皿表面是否存在抗體。在某些實施方式中，多孔材料是紙盤。本發(fā)明還提供了水平免疫擴散酶分析(HIDEA)方法，所述方法包括a)提供一個至少一個表面被本文所述的一種或多種PRRSV蛋白和抗原包被的診斷裝置，所述表面被本文所述的可通透屏障覆蓋，其中所述表面上有一個或多個缺口用于接納樣品；b)使一個或多個缺口與包含抗體的來源于對象的樣品接觸；c)孵育所述裝置足夠的時間以使材料從所述樣品擴散到所述一個或多個表面；以及d)在去除可通透屏障后檢測平皿的表面是否存在抗體。在某些實施方式中，在可通透屏障上打出一個到一組小孔，形成缺口，用作試驗樣品孔?？椎闹睆郊s為l到4mm，穿透瓊脂包被。使用帶7個3mm園孔的模板在每一個HIDEA試驗平皿的瓊脂上打孔是一個非限制性的例子。在VIDEA和HIDEA實施方式中，樣品是血清樣品或全血樣品。方法可用于被PRRSV感染或懷疑被PRRS病毒感染的各種動物和/或?qū)ο髞碓吹臉悠?。診斷裝置可以是培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)板的孔。每一組試驗樣品都要設(shè)陽性對照和陰性對照。相同量的對照血清加到試驗裝置的其他孔內(nèi)。培養(yǎng)板孵育以后，剝?nèi)キ傊z層，洗滌培養(yǎng)板，例如用洗滌緩沖液洗滌，溶于磷酸鹽緩沖液中的吐溫20是洗滌緩沖液的一個非限制性例子。培養(yǎng)板可以用蒸餾水或自來水而非洗滌緩沖液洗滌。洗滌可去除未結(jié)合的抗體(非特異性的)以及其他污染物。VIDEA和HIDEA方法包括利用抗原-抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，利用可與復(fù)合物結(jié)合的檢測劑，例如，第二抗體，檢測復(fù)合物，例如通過結(jié)合復(fù)合物的抗體部分。檢測劑在室溫下與復(fù)合物保持接觸約30分鐘到約2小時。然后洗滌培養(yǎng)板以去除未結(jié)合的連接物，例如，用緩沖液洗滌就是一個非限制性例子。洗滌液可用注射器或移液管從試驗培養(yǎng)板的邊上緩慢加入和移出。這個過程可任選重復(fù)3次或多次。在孵育檢測劑的同時制備瓊脂或瓊脂糖包被。作為非限制性的例子，優(yōu)選溶于磷酸鹽緩沖液中的1%瓊脂溶液，瓊脂融化后加入結(jié)合酶的底物。在某些實施方式中，需要加入催化劑。作為非限制性的例子，如果酶是過氧化物酶，1%瓊脂溶液可以包含約0.05%到1.0%的5-氨基水楊酸作為底物，以及約0.002%到0.01%的過氧化氫作為催化劑。也可以使用約0.08%的底物和約0.005%的催化劑。瓊脂傾注到經(jīng)洗滌的表面上，使其固定。第二抗體的酶之間的生色反應(yīng)可在瓊脂支持層內(nèi)發(fā)生。通過酶-底物反應(yīng)可使反應(yīng)產(chǎn)生可視化的結(jié)果。通過測定HIDEA中的深紫色圓形帶的直徑以及VIDEA中是否存在顏色或顏色的密度可以確定抗體的量。在HIDEA中，產(chǎn)生的顏色形成圓形帶或環(huán)的形式。在底物反應(yīng)的約5到30分鐘內(nèi)，環(huán)的顏色就深到足以測定的程度。隨著反應(yīng)時間的延長，環(huán)的顏色變得更深，但是不會擴大。所形成的環(huán)的直徑與血液中存在的特異性抗體的量有關(guān)(即，病毒中和滴度)。測量深色圓形帶的直徑，并與標準病毒中和試驗抗體值相關(guān)聯(lián)。所確定的值與試驗培養(yǎng)板上樣品孔的直徑以及所使用的樣品的大小有關(guān)。本發(fā)明的每一個裝置或本發(fā)明的每一個試劑盒都帶有一個數(shù)值表和/或代表性環(huán)的說明書。檢測VIDEA和HIDEA裝置內(nèi)的表面上存在的抗體意味著檢測與表面上PRRSV蛋白/抗原結(jié)合的抗體。檢測可利用本文描述的任何方法完成，其中包括利用標記的第二抗體。其他非限制性的方法包括通過酶-底物反應(yīng)顯示抗原-抗體反應(yīng)，如果存在生色反應(yīng)則說明存在抗PRRSV抗體(定性的)，或者通過測定反應(yīng)所產(chǎn)生的顏色密度來確定抗-PRRSV抗體的量(定量或半定量的)。PRRSV蛋白/抗原以及包含蛋白/抗原的組合物、方法和裝置適用于按照大家熟知的方法制備試劑盒。因此，本發(fā)明提供了包含如本文所述的PRRSV蛋白/抗原的試劑盒，或者包含PRRSV蛋白/抗原的組合物或裝置，這些都可用于本文所述的一種或多種方法中。這種試劑盒還可任選包含鑒定說明書或標記物或與其如何用于本發(fā)明的方法中有關(guān)的說明書。這種試劑盒可包含容器，每一個容器都包含方法所使用的一種或多種試劑(一般是濃縮的形式)或裝置。包含本發(fā)明的裝置的試劑盒還可以包含裝置所使用的一種或多種其他試劑或設(shè)備配件，其中的裝置是本發(fā)明的方法所使用的。試劑盒所包含的其他材料的非限制性例子有樣品稀釋溶液、稀釋劑瓶和用于轉(zhuǎn)移樣品的滴管。其他非限制性的例子包括用于VIDEA裝置的多孔材料和第二抗體?，F(xiàn)在己經(jīng)一般性地描述了本發(fā)明，通過參考下面的實施例可以更容易地理解本發(fā)明，下面的實施例是通過說明的方式提供的，并不意味著對本發(fā)明的限制，除非特別說明。實施例實施例l:PRRSV蛋白和平皿的制備PRRSV蛋白可通過如下過程制備利用PRRSV株接種體外或體內(nèi)的易感細胞，在最佳的時間收獲被感染的細胞用于制備與細胞相關(guān)聯(lián)的病毒組分。在體外方法中，通過細胞培養(yǎng)系統(tǒng)或通過使用重組技術(shù)制備抗原。另外，在用PRRSV口鼻接種并洗滌肺(肺灌洗)后可以獲得PRRSV感染的豬肺泡巨噬細胞(PAM)。通過離心使細胞成團，去掉或棄去上清。細胞團還可以經(jīng)過洗滌。將細胞團重懸到0.05M三(羥甲基)氨基甲垸0.025MEDTA緩沖液中，其中包含0.5%曲通X-IOO，緩沖液的體積為濃集細胞的5-10倍?；旌衔镌?'C攪拌2-15小時，10,000g離心1小時。上清用作PRRSV抗原?？乖欠歉腥拘缘?，用途廣泛而沒有導(dǎo)致病毒傳播的風險。通過比較試驗預(yù)先確定用約pH9.6的0.06M碳酸鹽緩沖液稀釋PRRSV蛋白航原。通過在4'C吸附72小時將抗原包被到聚苯乙烯培養(yǎng)皿(直徑60mm)上。倒掉未吸附的抗原，培養(yǎng)皿與溶于磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.2)中的封閉劑(例如，1%牛血清白蛋白，BSA)在37'C共孵育1小時。去掉BSA以后將6ml(對于HIDEA來說)和4ml(對于VIDEA來說訴PBS溶解的0.6%瓊脂糖覆蓋到培養(yǎng)皿上。瓊脂在4'C固定過夜。在HIDEA中，用包含7個3mm圓形孔的模具在每個試驗培養(yǎng)皿的瓊脂上打孔。在VIDEA中，使用不帶孔的培養(yǎng)皿。所有試驗皿在4'C的潮濕容器內(nèi)最多都可儲存4個月。實施例2:VIDEA試驗板通過如下過程制備將病毒抗原包被到培養(yǎng)皿的底部，然后再用上述瓊脂凝膠覆蓋。在使用過程中，濾紙盤用豬的試驗血清浸濕，然后放到試驗板的瓊脂上。平坦的濾紙盤提供了一個近乎二維的起始區(qū)，這樣樣品如血清內(nèi)的物質(zhì)一般以一個方向移動通過瓊脂并到達包被表面。孵育一段時間之后剝?nèi)ツz，培養(yǎng)皿用5-8ml洗滌溶液(包含0.05%吐溫-20(Tween-20^々PBS)洗滌3次。然后加入3ml用PBS稀釋的商品化的過氧化物酶連接的兔抗豬IgG(l-2pg/ml)，在25'C孵育45分鐘。培養(yǎng)皿再用洗滌溶液洗滌3次，然后用5ml溶于PBS中的1%瓊脂覆蓋培養(yǎng)皿，其中分別包含0.08%的底物(5-氨基水楊酸)和0.005%的H202。記錄VIDEA試驗是否產(chǎn)生顏色以及顏色的密度。在一個試驗中，剝?nèi)キ傊笤?5或37匸孵育2到3小時。約5到10分鐘后根據(jù)發(fā)生顏色反應(yīng)的陽性樣品來確定過氧化物酶反應(yīng)的結(jié)果。具有已知ELISAS/P比例或PRRS病毒感染歷史的各種血清樣品與天然動物來源的樣品一起檢測。比較VIDEA與ELISA的敏感性和特異性。下面的表1總結(jié)了各種豬血清的VIDEA結(jié)果和相應(yīng)的ELISAS/P比例的結(jié)果。分析結(jié)果之間的百分一致性顯示在括號內(nèi)。對于ELISA試驗中表現(xiàn)為陰性的豬血清來說，VIDEA也表現(xiàn)出了100%的特異性。在25°C孵育約3小時后，與ELISA比較時所有樣品都表現(xiàn)出了100%的一致性。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>抗原-抗體反應(yīng)持續(xù)2小時以內(nèi)，但是，在抗體滴度較低的情況下更長的時間似乎是有益的，這可從短時間孵育時出現(xiàn)的假陰性結(jié)果中看出。VIDEA與ELISAS/Prations的高度相關(guān)性說明VIDEA作為一個分析方法能夠用于檢測抗PRRS病毒抗體。與<0.4的ELISAS/P比例的相關(guān)性說明VIDEA的敏感性與ELISA相似，<0,4這個數(shù)值是標準閾值。實施例2:HIDEA可使用具有包被表面和可通透屏障的本發(fā)明的裝置，其中屏障材料可加以改造，在屏障表面上形成一個或多個缺口。以瓊脂糖作為非限制性的例子，可在瓊脂糖上鉆出一個或多個孔。每一個孔內(nèi)加入0.015ml試驗血清。裝置在室溫(25T:)下孵育約12到約24小時使抗體擴散，抗原抗體發(fā)生反應(yīng)。該裝置用于其他試驗時可孵育24小時。孵育后剝?nèi)ツz，培養(yǎng)皿用5到8ml洗滌溶液(包含0.05%吐溫-20的PBS)洗滌3次。然后加入3ml用PBS稀釋的商品化的過氧化物酶連接的兔抗豬IgG(l-2嗎/ml)，在25。C孵育45分鐘。培養(yǎng)皿再用洗滌溶液洗滌3次，然后用5ml溶于PBS中的1%瓊脂覆蓋培養(yǎng)皿，其中分別包含0.08%的底物(5-氨基水楊酸)和0.005%的H202。對于HIDEA來說，反應(yīng)進行5到30分鐘后測定深紫色圓形帶的直徑，單位為mm。表2和表3列出了不同條件下的14個被測血清的不同直徑。在HIDEA中，<7mm的直徑被認為是陰性的。某些ELISA陰性血清在HIDEA中表現(xiàn)為陽性結(jié)果說明HIDEA的敏感性更高。表3的結(jié)果說明HIDEA有較高的重復(fù)性。表2.在室溫(25t:)下孵育不同時間時具有不同ELISAS/P比例的豬血清的HIDEA直徑孵育時間被測血清15小時18小時20小時24小時1無PRRS3承642無PRRS46453ELISAS/P比例**0.0678994ELISAS/P比例0.2181010105ELISAS/P比例0.7381111116ELISAS/P比例1.96111314147ELISAS/P比例2.8312141515*HIDEA中的直徑；大于7mm為陽性**ELISAS/P比例大于0.4為陽性表3.在室溫(25t:)下孵育不同時間時具有不同ELISAS/P比例的7份豬血清的<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>*HIDEA中的直徑；大于7mm為陽性**ELISAS/P比例大于0.4為陽性文中引用的所有參考文獻都通過引用全文納入本文，無論是否特地納入本文。在本文中，術(shù)語"一個"、"一種"和"任何"都包含單數(shù)或復(fù)數(shù)形式?，F(xiàn)在已經(jīng)全面描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當清楚的是，只要不偏離本發(fā)明的精神和范圍，無需過多的試驗就可以在一個較寬范圍的等價參數(shù)、濃度和條件下得到相同的結(jié)果。雖然通過聯(lián)系本發(fā)明的特殊實施方式對本發(fā)明做了描述，但是，應(yīng)當理解，本發(fā)明可作進一步修改。根據(jù)本發(fā)明的總體原則，本申請有意涵蓋本發(fā)明的所有變化、用途或應(yīng)用，其中包括進入本發(fā)明所述領(lǐng)域已知的或慣常的實踐中的本公開的這種偏差，這些也適用于上文所描述的基本特征。權(quán)利要求1.一種從PRRS病毒感染細胞中制備PRRS病毒蛋白和抗原的方法，該方法包括a)提供一群被PRRS病毒感染的細胞；b)將無細胞PRRS病毒與所述感染細胞分離以形成包含與細胞相關(guān)聯(lián)的PRRS病毒蛋白和抗原的細胞；以及c)利用含去污劑的溶液從步驟b)分離的細胞中提取或洗脫PRRS病毒蛋白和抗原。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞群已用PRRS病毒感染足夠時間以使上清中產(chǎn)生的病毒量達到低于10^組織培養(yǎng)感染量(TCID)5o/ml。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞群已用PRRS病毒感染足夠時間以觀察早期CPE。4.如權(quán)利要求1或2之一所述的方法，其特征在于，所述包含去污劑的溶液含有0.5。/。曲通X-100。5.如權(quán)利要求l、2、3或4所述的方法，其特征在于，所述提取或洗脫在4'C進行約2至lj15小時。6.如權(quán)利要求l、2、3、4或5所述的方法，其特征在于，所述蛋白和抗原包括PRRS病毒包膜蛋白或N蛋白。7.通過權(quán)利要求l、2、3、4、5或6所述方法制備的PRRS病毒蛋白和抗原。8.—種診斷裝置，其包含至少一個被權(quán)利要求7所述的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原包被的表面。9.一種診斷裝置，其包含至少一個被一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原包被的表面，所述蛋白和抗原用包含去污劑的溶液從PRRS病毒感染的細胞中提取或洗脫。10.如權(quán)利要求8或9所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種PRRSV蛋白和抗原包含PRRS病毒編碼的核殼蛋白和/或包膜蛋白。11.如權(quán)利要求8或9所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種PRRSV蛋白和抗原包含PRRS病毒編碼的糖蛋白。12.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述溶液含有0.5。/。曲通X-100。13.—種垂直免疫擴散酶分析(VIDEA)方法，所述方法包括a)提供一個至少一個表面被權(quán)利要求7所述的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原包被的診斷裝置，在所述至少一個表面上所述表面已被一層瓊脂或瓊脂糖覆蓋；b)使瓊脂或瓊脂糖表面與包含抗體的多孔材料接觸，其中所述抗體包含在對象來源的樣品中；C)孵育所述裝置足夠時間以使材料從所述樣品擴散到所述一個或多個表面，所述孵育期任選在去除多孔材料之后進行；以及d)在去除瓊脂或瓊脂糖后檢測培養(yǎng)皿表面是否存在抗體。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述樣品是血清樣品或全血樣品。15.如權(quán)利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述多孔材料是紙盤。16.如權(quán)利要求13、14或15所述的方法，其特征在于，所述對象被懷疑感染了PRRS病毒。17.—種水平免疫擴散酶分析(HIDEA)方法，所述方法包括a)提供一個至少一個表面被權(quán)利要求7所述的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原包被的診斷裝置，在所述至少一個表面上所述表面已被一層包括一個或多個容納樣品的缺口的瓊脂或瓊脂糖覆蓋；b)使一個或多個缺口與對象來源的包含抗體的樣品接觸；c)孵育所述裝置足夠時間以使材料從所述樣品擴散到所述一個或多個表面；以及d)在去除瓊脂或瓊脂糖后檢測培養(yǎng)皿表面是否存在抗體。18.如權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，其特征在于，所述裝置是培養(yǎng)皿。19.一種用病毒蛋白和抗原包被表面的方法，所述方法包括a)提供包含權(quán)利要求7所述的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原的溶液；以及b)使所述溶液與表面接觸一段時間以使所述蛋白和抗原吸附到所述培養(yǎng)皿的表面上。20.—種用病毒蛋白和抗原包被表面的方法，所述方法包括a)提供包含PRRS病毒感染細胞來源的一種或多種PRRS病毒蛋白和抗原的溶液，所述蛋白和抗原是利用包含去污劑的溶液從所述細胞中提取或洗脫的；以及b)使所述溶液與表面接觸一段時間以使所述蛋白和抗原吸附到所述培養(yǎng)皿的表面上。21.如權(quán)利要求19或20所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)皿是用聚苯乙烯制成的。全文摘要本發(fā)明提供了用于檢測能識別豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的一種或多種蛋白質(zhì)和/或抗原的抗體的試劑盒、裝置和方法。所述抗體可存在于被PRRSV感染或有被PRRSV感染的風險的對象的生物液內(nèi)。本發(fā)明優(yōu)選用于PRRSV感染的診斷和預(yù)防。文檔編號G01N33/569GK101253261SQ200680029448公開日2008年8月27日申請日期2006年6月30日優(yōu)先權(quán)日2005年7月5日發(fā)明者E·P·門德,H·-S·朱申請人:明尼蘇達大學(xué)董事會