專利名稱：：基于nr2肽診斷和治療腦血管事件的方法基于NR2肽診斷和治療腦血管事件的方法與在先申請(qǐng)的關(guān)系根據(jù)35U.S.C.§119(e)，本申請(qǐng)要求于2005年6月13日提出的美國(guó)專利臨時(shí)申請(qǐng)第60/689,806號(hào)的優(yōu)先權(quán)。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及基于在生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的檢測(cè)和定量，診斷和治療腦血管事件和用于界定事件的時(shí)間和解剖定位的方法和試劑盒。所述方法任選與神經(jīng)病學(xué)評(píng)分和神經(jīng)成像聯(lián)合實(shí)施，其涉及在急診室和初級(jí)監(jiān)護(hù)設(shè)置的急救基礎(chǔ)上對(duì)TIA和卒中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、預(yù)后、診斷和治療。發(fā)明背景腦血管意外和短暫缺血性發(fā)作短暫缺血性發(fā)作預(yù)示著顯著的未來(lái)卒中風(fēng)險(xiǎn)和其關(guān)聯(lián)的發(fā)病率和死亡率。需要進(jìn)一步評(píng)估短暫缺血性發(fā)作患者以評(píng)定任何可能可逆的潛在疾病進(jìn)程。盡管該疾病進(jìn)程有顯著影響，但關(guān)于對(duì)在急診科就診的這樣的患者的早期評(píng)估和處理仍沒(méi)有權(quán)威性的指導(dǎo)。美國(guó)'"臟學(xué)會(huì)卒中委員會(huì)聲明，關(guān)于TIA患者轉(zhuǎn)為住院病人的評(píng)價(jià)理由沒(méi)有預(yù)期的數(shù)據(jù)。他們議定"關(guān)于患者是否住院的決定應(yīng)視該患者的個(gè)體詳情而定。，，在初步評(píng)價(jià)這樣的患者為住院病人還是門診病人的基本原則方面，存在相當(dāng)多的地方實(shí)踐變化。對(duì)住院病人護(hù)理的基本原則是迅速得到診斷研究、評(píng)估未來(lái)事件的風(fēng)險(xiǎn)、監(jiān)拉患者復(fù)發(fā)或惡化的癥狀并開(kāi)始任何所需的干預(yù)，包括手術(shù)治療。目前對(duì)TIA患者的評(píng)估和治療建議已有充分闡述。工作指南提出了一套實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和輻射學(xué)研究，連同關(guān)于醫(yī)藥治療和手術(shù)治療的建議。出現(xiàn)在急診科、具有提示TIA的癥狀的某些患者亞群似乎在短期內(nèi)有很大的完全性卒中風(fēng)險(xiǎn)。在最近基于急診科、包括1707位出現(xiàn)提示TIA的癥狀的患者的群組觀察研究中，10.5%的患者在90天內(nèi)發(fā)生卒中。值得注意的是，那些患者中有一半是在最初2天內(nèi)發(fā)生卒中。Johnston等回顧性地確定了90天內(nèi)卒中的5個(gè)獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因子(年齡〉60、糖尿病、癥狀持續(xù)時(shí)間>10分鐘、肢體無(wú)力、言語(yǔ)功能障礙(speechimpairement)。通過(guò)綜合所述獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因子，確定了在短期內(nèi)卒中的最低(0%)到最高(34%)風(fēng)險(xiǎn)亞群。作為門診病人，這樣的高風(fēng)險(xiǎn)患者不可能在短于48小時(shí)內(nèi)受到完全的診斷評(píng)估并執(zhí)行合適的治療方案(醫(yī)藥或手術(shù))。另外，對(duì)疑似TIA的病人的診斷確定性的程度使決定過(guò)程進(jìn)一步復(fù)雜。短暫缺血性發(fā)作是一種臨床診斷，關(guān)于該診斷的觀察者間可靠性通常很差。因此，在很多醫(yī)療機(jī)構(gòu)的現(xiàn)行實(shí)踐模式設(shè)置中，某些沒(méi)有真正神經(jīng)科疾病的患者和其他可能應(yīng)當(dāng)接受門診病人評(píng)估的患者一起被納入。哨兵TIA(sentinelTIA)的辨別在數(shù)天內(nèi)發(fā)生完全性卒中之患者的一系列風(fēng)險(xiǎn)因子的預(yù)測(cè)性確認(rèn)，將使得可得出臨床預(yù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。這使得可以辨別在近期內(nèi)處于高風(fēng)險(xiǎn)需要入院的患者，以及可安全放走以作為門診病人評(píng)估的患者。這樣的"卒中風(fēng)險(xiǎn)分層"將允許對(duì)有最高短期風(fēng)險(xiǎn)的患者進(jìn)行更強(qiáng)的干預(yù)。目前可選擇的卒中診斷方法醫(yī)療界有幾種技術(shù)來(lái)診斷卒中。盡管有很多技術(shù)，但這些技術(shù)中沒(méi)有一個(gè)能夠預(yù)測(cè)卒中或直接診斷心腦血管異?；騎IA/卒中。在卒中治療領(lǐng)域，所有醫(yī)師賴以為生的^f各言是"時(shí)間就是大腦"。美國(guó)國(guó)家神經(jīng)疾病和卒中研究院(TheNationalInstituteofNeurologicalDisordersandStroke,NINDS)推薦以下用于管理缺血性卒中的時(shí)間工作指南從進(jìn)門到醫(yī)師從進(jìn)門到神經(jīng)科會(huì)診從進(jìn)門到CT完成/解釋從進(jìn)門到溶血栓治療從進(jìn)門到神經(jīng)外科會(huì)診10分鐘15分鐘45分鐘60分鐘2小時(shí)大醫(yī)院急診科有多種用于i貪斷卒中的選擇。超過(guò)90%的擁有200個(gè)床位以上的醫(yī)院能夠使用CT掃描儀，使其能夠快速(<15分鐘)評(píng)價(jià)潛在的卒中患者以排除出血性卒中和類卒中(strokemimics)。理論上CT能夠肯定地確定100%的軟組織和85-97%的蛛網(wǎng)膜下出血，然而，識(shí)別缺血性和出血性的總準(zhǔn)確度被詮釋為67-83%。大部分醫(yī)院現(xiàn)在都有磁共4展成像(MRI)能力。然而，MRI掃描需要較長(zhǎng)的時(shí)間窗成像。目前MRI并不能在6小時(shí)之前很容易地辨別出血性卒中，因此并不被認(rèn)為是主要的診斷形式。一種相對(duì)新的技術(shù)-彌散加權(quán)磁共振成像(DWI)，可迅速檢測(cè)高TIA風(fēng)險(xiǎn)患者的灌注降低。初始數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)DWI預(yù)測(cè)短于10分鐘的缺血性變化。在30-60秒的掃描儀時(shí)間內(nèi)可得到掃描結(jié)果。盡管這些成像技術(shù)很有效，但每一種都受到高資本成本和高保養(yǎng)需求的限制。另外，它們需要經(jīng)過(guò)專門訓(xùn)練的技術(shù)人員來(lái)操作和解釋結(jié)果。其它技術(shù)，包括多普勒超聲診斷儀、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)、氙計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)、CT血管造影和MR灌注成像，因其缺乏整體診斷方法或由于其為當(dāng)前技術(shù)的早期階段而一直被忽略。在急診科，目前沒(méi)有通過(guò)it斷急性腦血管意外、TIA和缺血性卒中和排除類卒中來(lái)符合這些未滿足的診斷需求的可用的血液檢測(cè)。作為TIA/卒中的生物標(biāo)志物的腦NR2肽和抗體大部分涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)標(biāo)記物的研究來(lái)自腦損傷或心胸文獻(xiàn)。然而，腦局部缺血最重要的標(biāo)記物是NMDA受體，其涉及成為腦缺血基礎(chǔ)的神經(jīng)毒性級(jí)聯(lián)。，興奮性氨基酸(EAA)在卒中期間起著重要作用。腦缺血誘導(dǎo)谷氨酸釋放，并激活EAA受體。業(yè)已報(bào)道阻斷谷氨酸釋放或阻斷其與EAA受體的相互作用可減輕腦損傷。N-曱基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)是配體-門控EAA離子通道復(fù)合物的成員，其含有NR1、NR2和NR3亞單位。在這些亞單位中，業(yè)已報(bào)道NR2涉及幾種神經(jīng)疾病，包括局部缺血和缺氧。NR2亞單位由4個(gè)不同亞型(NR2A-2D)組成，其由不同基因編碼。在大腦皮層和海馬中發(fā)現(xiàn)NR2A和NR2B二者，而NR1在位于大腦和周圍器官的所有NMDAR復(fù)合物中普遍存在。在局部缺血期間過(guò)度刺激谷氨酸受體誘導(dǎo)過(guò)多的Ca^流入，激活凝血酶活化的絲氨酸蛋白酶，其促進(jìn)細(xì)胞膜上的NMDAR的外部N-末端區(qū)裂解。通過(guò)受損的血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到血流的NMDAR之N-末端肽片段，可能起"外源，，抗原的作用，從而啟動(dòng)免疫應(yīng)答，在血液中產(chǎn)生抗體。然而，血液中NR2肽/抗體的時(shí)程和腦中NR2mRNA表達(dá)之間的相互作用尚不清楚。最近，業(yè)已提議將NMDAR肽和其抗體用于治療卒中和癲癇癥(During等，Science,2000,287:1453-60),并作為構(gòu)成腦缺血和卒中基礎(chǔ)的神經(jīng)毒性的生物標(biāo)志物(DambinovaSA等，Stroke2002;33:181-1182;Dambi麗aSA等,ClinChem2003;49:1752-1762)。隨著神經(jīng)元死亡或局部缺血，NMDA受體的NR2肽片段脫落并出現(xiàn)在血流中，產(chǎn)生抗體應(yīng)答。Dambmova等業(yè)已報(bào)道在血液樣品中可檢測(cè)到所述肽片段和抗體二者(DambinovaSA等，Stroke2002)。他們進(jìn)一步報(bào)道，已患急性缺血性卒中的成年患者具有高血液NR2肽/Ab水平，該水平與通過(guò)腦掃描(MRI)和神經(jīng)認(rèn)知檢測(cè)所顯示的腦損傷程度相關(guān)(DambinovaSA等，ClinChem2003;49:1752-1762)。在急性管理腦血管意外、TIA和卒中患者中，NR2肽和抗體可具有診斷以及預(yù)測(cè)效用。評(píng)估在急性環(huán)境中是否存在這樣的標(biāo)記物可改發(fā)明目的在全面卒中管理中，醫(yī)療界面臨幾種主要的診斷挑戰(zhàn)，包括將缺血性腦發(fā)作與出血和卒中樣疾病區(qū)別開(kāi)，以及評(píng)估卒中或其它并發(fā)因子的風(fēng)險(xiǎn)。在本發(fā)明中，開(kāi)發(fā)了用于檢測(cè)結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的血液測(cè)定法，其用于將腦血管意外(例如TIA和卒中)與腦出血和類卒中區(qū)分開(kāi)。因此，本發(fā)明的目的是檢測(cè)未結(jié)合NR2肽，以評(píng)估如DWI/MRI所界定的急性腦血管意外和TIA/卒中，以便更好地診斷、管理和治療。本發(fā)明的另一目的是檢測(cè)結(jié)合NR2肽或總NR2肽，以便結(jié)合NIHSS評(píng)價(jià)和神經(jīng)成像，準(zhǔn)確診斷慢性TIA和卒中，排除卒中樣病癥。本發(fā)明的再一目的是通過(guò)測(cè)量高于群體標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的增加濃度，來(lái)區(qū)別由DWI界定的新舊腦病變區(qū)和腔隙性卒中。本發(fā)明的再一目的晃基于未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽的濃度，幫助預(yù)測(cè)導(dǎo)致進(jìn)展為完全性卒中的繼發(fā)腦血管意外是否可能發(fā)生。本發(fā)明的再一目的是根據(jù)未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽的濃度，幫助評(píng)估潛在TIA提示癥狀的嚴(yán)重程度。本發(fā)明的另一目的是基于DWI/JV[RI和未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽的濃度/比率評(píng)價(jià)梗死區(qū)。本發(fā)明的另一目的是提供用于實(shí)時(shí)評(píng)估NR2肽和抗體和比率的方法，以及用于確定及時(shí)神經(jīng)保護(hù)治療在患有腦血管意外或TIA7卒中的患者中的治療窗的方法。本發(fā)明的再一目的是提供在鑒別處于近期內(nèi)繼發(fā)完全性卒中的高風(fēng)險(xiǎn)的患者中作為除神經(jīng)觀察和神經(jīng)成像外的另外工具的診斷測(cè)定，其用于檢測(cè)未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽。發(fā)明概述業(yè)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與免疫球蛋白、白蛋白和血液中其它肽載體結(jié)合的循環(huán)NR2肽(下文為"結(jié)合NR2肽")的水平(其不能用常規(guī)NR2檢測(cè)試劑盒或檢測(cè)方案檢測(cè))，提供供臨床醫(yī)生評(píng)估TIA和卒中和卒中樣病癥和作為這些腦血管事件之基礎(chǔ)的腦損傷的有用診斷信息。這些結(jié)合NR2肽的檢測(cè)和定量可用于診斷由血液循環(huán)不足或微栓子事件產(chǎn)生的腦病變的存在，可大大提高診斷的準(zhǔn)確性和隨后治療的有效性，尤其是當(dāng)其與其它診斷檢測(cè)例如對(duì)未結(jié)合NR2肽的檢測(cè)、NIHSS評(píng)分和神經(jīng)成像聯(lián)合使用時(shí)。在急診室環(huán)境快速評(píng)估這些腦標(biāo)記物將大大提高醫(yī)師識(shí)別正患有急性腦血管事件例如TIA或卒中的患者的能力，幫助醫(yī)師確定腦血管事件為缺血性事件、出血性卒中還是卒中樣病癥。在急診室和每位醫(yī)生的辦公室里，應(yīng)用腦標(biāo)記物將有助于識(shí)別有缺血性卒中風(fēng)險(xiǎn)的患者，并幫助制定出神經(jīng)保護(hù)方案。業(yè)已用經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定，大于約2.0ng/ml的總NR2肽濃度(即結(jié)合的和未結(jié)合的肽)高于健康個(gè)體標(biāo)準(zhǔn)，預(yù)示不健康的腦血管狀態(tài)，尤其是當(dāng)其與高于健康個(gè)體標(biāo)準(zhǔn)的未結(jié)合NR2肽水平(即大于約0.5-0.6ng/ml)結(jié)合時(shí)。當(dāng)評(píng)估患有神經(jīng)功能障礙(neurologicaldeficit)的患者時(shí)，比較總肽濃度和未結(jié)合肽濃度具有顯著的診斷能力，確定作為基礎(chǔ)的局部缺血是復(fù)發(fā)還是慢性病突發(fā)，或患者是否正在經(jīng)歷原發(fā)性腦血管意外。特別是，(l)總肽濃度大于約2.0ng/ml和(2)總肽:未結(jié)合肽比率大于約2:1的組合，與復(fù)發(fā)事件有很好的關(guān)聯(lián)性，尤其是當(dāng)與未結(jié)合肽濃度小于約2.0、1.0、0.8、0.6或0.5ng/ml組合時(shí)。相比之下，(l)未結(jié)合肽濃度大于約1.0ng/ml和(2)總肽:未結(jié)合肽比率小于約2:1的組合，與原發(fā)事件有很好的關(guān)聯(lián)性，尤其是當(dāng)與總肽濃度小于約3.0或2.0ng/ml組合時(shí)。再者，這些相關(guān)性可廣泛用于選擇急救治療，例如在短時(shí)間期限內(nèi)抗血d、板治療或神經(jīng)保護(hù)治療。所述生物標(biāo)志物分布型(profile)提供實(shí)時(shí)腦血管意外證據(jù)，循環(huán)總NR2肽濃度的降低與所選治療的積極效果有很好的相關(guān)性。當(dāng)評(píng)估腦血管意外或TIA時(shí)以及在識(shí)別近期內(nèi)有繼發(fā)TIA或完全性卒中的高風(fēng)險(xiǎn)的患者時(shí)，在初級(jí)監(jiān)護(hù)環(huán)境中也可采用本發(fā)明方法。另外，可基于顯示患TIA或卒中風(fēng)險(xiǎn)增加的結(jié)果，給予預(yù)防治療，并用本發(fā)明方法監(jiān)測(cè)治療的效力。本發(fā)明另外的優(yōu)勢(shì)將部分在以下的說(shuō)明中提出，部分根據(jù)所述說(shuō)明中將顯而易見(jiàn)，或可通過(guò)實(shí)行本發(fā)明而得知。借助在所附權(quán)利要求書(shū)中具體指出的要素和組合，將實(shí)現(xiàn)并獲得本發(fā)明優(yōu)勢(shì)。應(yīng)該理解，前文的概述和下文的詳述皆僅為舉例和解釋性的，并非限制所要求保護(hù)的發(fā)明。和說(shuō)明書(shū)結(jié)合在一起并構(gòu)成本說(shuō)明書(shū)部分的附圖闡明了本發(fā)明的幾種實(shí)施方案，其連同說(shuō)明用于解釋本發(fā)明的原理。圖1為本發(fā)明實(shí)施例中所研究患者(n-40)的血漿中未結(jié)合NR2肽的分布圖示。圖2為本發(fā)明實(shí)施例中所研究患者(n二40)的血漿中總NR2肽的分布圖示。圖3為用圖解法表示在急診室環(huán)境中對(duì)出現(xiàn)TIA和/或卒中癥狀的患者建"i義的標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理的流程圖。圖4為當(dāng)診斷卒中發(fā)生和嚴(yán)重程度時(shí)用美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(theNationalInstitutesofHealthStrokeScale,"NIHSS")得到的各種因素和神經(jīng)功能障礙的圖表。發(fā)明詳述通過(guò)參考以下對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案和其中包括的實(shí)施例的詳細(xì)說(shuō)明，可更容易地理解本發(fā)明。定義和術(shù)語(yǔ)使用除非上下文另外明確指出，否則在本說(shuō)明書(shū)和以下權(quán)利要求書(shū)中所用的單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"該"包括復(fù)數(shù)指示物。因此，舉例而言，提及"一個(gè)片段"時(shí)包括片段的混合物，提及"一種cDNA寡核苷酸"時(shí)包括不止一種寡核普酸，等等。"多肽"、"蛋白質(zhì)"和"肽"在本文可互換使用，其包括通過(guò)肽鍵連接的氨基酸分子鏈。該等術(shù)語(yǔ)并不指特定長(zhǎng)度的產(chǎn)物。因此，"肽"、"寡肽"和"蛋白質(zhì)"包括在多肽定義范圍內(nèi)。該等術(shù)語(yǔ)包括多肽的翻譯后修飾物(同種型(isoform)),例如糖基化物、乙?；铩⒘姿峄?、螯合物等等。另外，蛋白片段、類似物、突變型或變異型蛋白、嵌合肽等等包括在多肽舍義內(nèi)。多肽、蛋白質(zhì)和肽可呈環(huán)狀形式，或其可呈線狀形式。NMDA受體或NMDAR為配體門控離子通道家族的一員，其優(yōu)先結(jié)合N-甲基-D-天冬氨酸并在腦中介導(dǎo)絕大部分興奮性神經(jīng)傳遞(DingledineR.等PharmacolRev.1999Mar;51(1):7-6L)。受體包括在文獻(xiàn)中報(bào)道為NR1、NR2A、NR2B、NR2C、NR2D、NR3A和NR3B的亞單位，執(zhí)行獨(dú)特的藥理學(xué)功能。業(yè)已報(bào)道NR1(X58633)、NR2A(U09002)和NR2B(U28861)的GenEMBL登記號(hào)，其闡述于Dambmova的WO02/12892中。NMDA受體肽指全長(zhǎng)NMDA受體蛋白、天然存在或合成的全長(zhǎng)NMDA受體的肽片段、或其類似物或同種型。因此，除了其片段、類似物和衍生物外，NR2肽還包括全長(zhǎng)NR2A、NR2B、NR2C和NR2D亞單位。同樣地，NR2A、NR2B、NR2C或NR2D肽意即全長(zhǎng)天然存在的NR2A、NR2B、NR2C或NR2D亞單位或其片段、其類似物或其衍生物。NMDA肽的N-末端區(qū)指全長(zhǎng)肽的氨基酸N-末端區(qū)片段或其片段、其類似物或其衍生物，通常長(zhǎng)約40或50個(gè)氨基酸，但可多達(dá)長(zhǎng)150、200或300個(gè)氨基酸，如Dambinova的WO02/12892所闡述。肽的"類似物"意即含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或重排的肽。舉例而言，在蛋白質(zhì)生物化學(xué)領(lǐng)域眾所周知，屬于一組具有特定大小或特性(例如電荷、疏水性和親水性)的氨基酸的一種氨基酸通?？杀蝗〈鸀榱硪环N氨基酸，而不改變?cè)摰鞍踪|(zhì)的活性，尤其是在該蛋白質(zhì)中與生物活性的不直接相關(guān)的區(qū)域中。因此，若NMDA肽類似物在多個(gè)位點(diǎn)包括氨基酸取代、缺失、添加或重排而使得針對(duì)該類似物所產(chǎn)生的抗體仍特異性針對(duì)NMDAR肽，則該NMDA肽類似物可用于本發(fā)明。除非指出與此相反，否則本文所用的NMDAR類似物或突變體指與天然存在的NMDA有至少80%氨基酸同一性的序列，盡管也可含有至少85%、90%或95°/。的同一性。通過(guò)在類似物或突變體和天然存在的NMDA之間進(jìn)行類似物比較來(lái)確定氨基酸同一性。將兩種氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，使沿其序列長(zhǎng)度的共有氨基酸數(shù)目最大化；在序列比對(duì)時(shí)允許在任一個(gè)或二個(gè)序列中出現(xiàn)空位，以便使共有氨基酸數(shù)目最大化。氨基酸同一性百分比為以下兩個(gè)數(shù)字中較大的一個(gè)(l)所述兩種肽比對(duì)時(shí)共有的氨基酸數(shù)目除以NMDA類似物中的氨基酸數(shù)目，再乘以100;或(2)兩種肽比對(duì)時(shí)共有的氨基酸數(shù)目除以天然NMDA肽中的氨基酸數(shù)目，再乘以100。不考慮在分析中添加到末端的氨基酸。NMDA衍生物包括可于一個(gè)或多個(gè)組成氨基酸被化學(xué)或酶促衍化的天然NMDA和NMDA類似物和其片段，包括側(cè)鏈修飾物、主鏈修飾物和N-末端修飾物和C-末端修飾物，所述衍化例如通過(guò)乙酰化、鞋基化、甲基化、氨基化、磷酸化或糖基化來(lái)進(jìn)行。術(shù)語(yǔ)也包括NMDA鹽例如NMDA鋅和NMDA銨。術(shù)語(yǔ)"抗體"與"免疫球蛋白"同義。本文所用術(shù)語(yǔ)"抗體"既包括天然抗體、單克隆產(chǎn)生的抗體、多克隆產(chǎn)生的抗體、重組DNA抗體又包括抗體的生物活性衍生物，例如Fab'、F(ab')2或Fv以及單結(jié)構(gòu)域(single-domam)和單鏈抗體。只要抗體的生物活性衍生物保留結(jié)合指定抗原的能力，其就包括在該定義范圍內(nèi)。因此，特異性結(jié)合NR2肽的NR2抗體具有結(jié)合至少一種NR2肽的能力。術(shù)語(yǔ)"NR2"肽指所表達(dá)的NMDA受體的NR2亞家族中的任何肽，包括全長(zhǎng)NR2A、NR2B、NR2C和NR2D亞單位、其片段和其重組片段。用于實(shí)行本發(fā)明的優(yōu)選NR2肽由NR2A和NR2B亞單位或其類似物中的序列重組。所述序列優(yōu)選自身抗原，并優(yōu)選來(lái)源于所述NMDA受體亞型的N末端域。所述肽優(yōu)選長(zhǎng)度小于約40個(gè)氨基酸并大于約15個(gè)氨基酸。當(dāng)然，不言而喻，這樣的序列的類似物也可以重組肽出現(xiàn)。優(yōu)選的NR2肽為重組NR2A/NR2B肽，具有以下核普酸序列NGMIGEVVYQRAVMAVGSLTIKRIVTEKTD31"蛋白去垢劑，，指能夠在人血流中讓NR2肽從循環(huán)復(fù)合物釋放的任何化合物，包括通常為本領(lǐng)域所知的各種離子型表面活性劑和兩性分子。實(shí)例包括十二烷基硫酸鈉(也稱為月桂基硫酸鈉)、牛黃膽酸鈉、膽酸鈉、CTAB、LDAO、CHAPS、Tween20、Thesit、TritonX-100、NP40、正辛基蔗糖、正十二烷基蔗糖、正十二烷基麥芽糖苷、辛基葡糖苷、辛基硫葡糖苷、正己基葡糖苷和正十二烷基葡糖苷?？傉摫旧暾?qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容闡述了因腦中NMDA受體合成的遺傳性或偶然增加反映了缺血性神經(jīng)功能障礙這一認(rèn)識(shí)而產(chǎn)生的診斷和治療應(yīng)用，其可用于快速診斷卒中或TIA并與其它卒中樣疾病相區(qū)別。在腦中異常表達(dá)的NMDA受體很快代謝，在滲透血腦屏障后，這些代謝破壞的產(chǎn)物進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)將這些肽和蛋白片段認(rèn)作外來(lái)抗原，通過(guò)產(chǎn)生抗體和免疫復(fù)合物而應(yīng)答。這些肽一旦結(jié)合到這些免疫復(fù)合物和血流中的其它凝聚物例如白蛋白復(fù)合物中，則在常規(guī)檢驗(yàn)方案中多半;f企測(cè)不到這些肽。在本發(fā)明中，當(dāng)評(píng)估腦血管意外、TIA和卒中以及未來(lái)腦血管意外、TIA和卒中的風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，評(píng)估結(jié)合NR2肽(結(jié)合的抗原)或總NR2肽和任選未結(jié)合NR2肽(游離的抗原)的含量，作為用于其預(yù)后/診斷值的腦生物標(biāo)志物。因此，本發(fā)明一方面提供用于診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，其包括測(cè)量生物樣品中結(jié)合NR2肽或總NR2肽或NMDA受體片段的量和任選測(cè)量未結(jié)合NR2肽。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于測(cè)定神經(jīng)功能障礙的病理起源的方法，其包括(a)提供患有神經(jīng)功能障礙的患者；(b)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽，以得到結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量；和(c)將所述結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量與明顯健康的(apparentlyhealthy)人類對(duì)象的所述生物流體中的結(jié)合NR2肽或總NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括(a)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的未結(jié)合NR2肽，以得到未結(jié)合NR2肽的量；和(b)將所述未結(jié)合NR2肽的量與明顯健康的人類對(duì)象的所迷生物流體中的未結(jié)合NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比4交。'升高水平的NR2肽對(duì)于腦損傷而言是特異性的，其以高于其它NMDA受體的速率在缺血性腦組織中表達(dá)，并罔此獨(dú)特地適于評(píng)估腦缺血性卒中、TIA和卒中。用于測(cè)定所測(cè)量的未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽的濃度是否升高并由此指示中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基線水平，可從群體標(biāo)準(zhǔn)獲得，或優(yōu)選來(lái)自患者自己的檢驗(yàn)史。盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它分析技術(shù)例如HPLC也可用到，但免疫測(cè)定技術(shù)通常優(yōu)選用于測(cè)量本發(fā)明蛋白或肽。然而，當(dāng)用免疫測(cè)定法時(shí)，業(yè)已發(fā)現(xiàn)抗原決定簇集中于NR2型NMDA受體的N-末端區(qū)，為了最佳檢驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)該采用針對(duì)N-末端區(qū)和其片段產(chǎn)生的抗體。優(yōu)選通過(guò)用免疫測(cè)定技術(shù)，采用針對(duì)生物標(biāo)志物產(chǎn)生的抗體，通過(guò)直接ELISA，或通過(guò)定量技術(shù)例如HPLC，直接測(cè)量所選生物樣品中的未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽的濃度，來(lái)實(shí)施本發(fā)明方法。若測(cè)量未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽，優(yōu)選用NR2肽的一種或多種抗原片段作為抗體的靶子，而不是用整個(gè)NR2型NMDA受體，來(lái)測(cè)量所述NR2肽。健康人通常具有小于約2.0、1.0、0.8、0.6或0.5ng/ml的未結(jié)合NR2肽血液濃度和小于約3.0、2.0或1.5ng/m的總NR2肽血液濃度。可用其中表達(dá)或發(fā)現(xiàn)循環(huán)腦NMDA受體或這種受體標(biāo)記物的幾乎任何生物流體實(shí)施本發(fā)明方法，所述生物流體包括血液、尿液、血漿、血清、腦脊髓液、唾液、汗液或腦組織。在優(yōu)選實(shí)施方案中，生物流體為血漿或血清，在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，將血漿或血清稀釋到約1:50的比率。急診室診斷和康復(fù)預(yù)后如上所述，本發(fā)明方法尤其很好地適于在急診室環(huán)境中使用，因?yàn)镹R2肽或NMDA受體片段水平在缺血性事件的早期很快升高，因此提供了對(duì)腦損傷的實(shí)時(shí)指示，尤其是當(dāng)與NIHSS和CT或DWI//MRI聯(lián)合測(cè)量時(shí)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)缺血性事件正在發(fā)生時(shí)對(duì)患者進(jìn)行評(píng)估，優(yōu)選及時(shí)進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)治療干預(yù)。因此，例如可當(dāng)正經(jīng)歷神經(jīng)功能障礙時(shí)，對(duì)患者進(jìn)行評(píng)估。或者，可在卒中樣癥狀初始發(fā)作后約6、5、4、3、2小時(shí)或更短時(shí)間內(nèi)對(duì)患者進(jìn)行評(píng)估。因此，在一個(gè)樣癥狀發(fā)作3小時(shí)內(nèi)從人體取生物樣品來(lái)評(píng)估中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病例如腦血管意外、TIA或卒中是否存在的方法。當(dāng)適合膠乳凝集測(cè)定時(shí)，本發(fā)明方法在急診室環(huán)境也尤其有用，因?yàn)槔帽景l(fā)明方法，可快速而方便地使用膠乳凝集方法。在床邊用膠乳凝集法，護(hù)理者通常在不到10分鐘內(nèi)可得到血液檢驗(yàn)結(jié)果。因此，使用本發(fā)明方法，即使是在運(yùn)送患者期間在"戰(zhàn)場(chǎng)"上也可得到實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)，其將提供更大的用于神經(jīng)保護(hù)治療的時(shí)間窗。因此，在本發(fā)明的再一實(shí)施方案中，在從受治療者取出生物樣品與檢測(cè)或測(cè)量未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽或NMDA受體片段是否存在或量之間流逝的時(shí)間不到30分鐘。本發(fā)明最顯著的優(yōu)勢(shì)之一是能夠?qū)⑷毖宰渲欣缱渲信c其它卒中樣疾病，例如腦腫瘤、外傷性腦損傷、膿腫、氣栓塞、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、膠原血管病性疾病、代i射異常、貝爾麻痹(Bell，spalsy)、迷路炎或脫髓鞘疾病區(qū)別開(kāi)。無(wú)論所檢測(cè)的肽是結(jié)合的還是未結(jié)合的，該優(yōu)勢(shì)都可得到，無(wú)論所檢測(cè)的肽是結(jié)合的或未結(jié)合的，或是否檢測(cè)兩種肽，都可應(yīng)用本發(fā)明該方面。特別是，若懷疑卒中，則該方法將幫助診斷卒中是缺血性損害還是出血性損害，并指導(dǎo)從業(yè)者采用適于所診斷的卒中類型的神經(jīng)保護(hù)治療。因此，在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于診斷腦血管病、TIA或卒中是否存在的方法，當(dāng)診斷確認(rèn)為卒中時(shí)，所迷方法進(jìn)一步根據(jù)未結(jié)合NR2肽和/或結(jié)合NR2肽或總NR2肽或NMDA受體片段的濃度評(píng)估該卒中是缺血性還是出血性，并在合適時(shí)給予缺血性或出血性卒中治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，所考慮的治療為組織纖溶酶原激活劑(tPA)，本發(fā)明提供用于診斷和治療腦缺血的方法，其包括(a)提供患有神經(jīng)功能障礙的患者；(b)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的NR2肽(結(jié)合的和/或未結(jié)合的)，以得到NR2肽的第一量；和(c)將所述NR2肽的第一量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較；(d)若所述NR2肽的所述第一量高于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則將tPA給予所述患者；和(e)若所述NR2肽的所述的量低于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則不將tPA給予所述患者。在優(yōu)選實(shí)施方案中，分別檢測(cè)和定量結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽，以得到結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的量，將所述結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的所迷量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NJl2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。在另外的實(shí)施方案中，通過(guò)以下步驟來(lái)實(shí)施所述方法(a)評(píng)估所述患者的急性面癱、上肢下移(armdrift)、談話(speech)異?；蚱渌窠?jīng)功能障礙；(b)若觀察到所述急性面癱、上肢下移或言語(yǔ)功能障礙，并所述NR2肽的所述量高于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則將tPA給予所述患者；和(c)若未觀察到所述急性面癱、上肢下移或言語(yǔ)功能障礙，并所述NR2肽的所述量低于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則不將tPA給予所述患者。此外，可以定期重復(fù)該程序，以提供對(duì)患者狀態(tài)的連續(xù)監(jiān)測(cè)，作為對(duì)所述治療的隨訪，或監(jiān)測(cè)特定治療方案的功效。在該實(shí)施方案中，優(yōu)選所述哺乳動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行該疾病的治療。更優(yōu)選以約20分鐘到約1個(gè)月的間隔采集樣品。甚至更優(yōu)選間隔為約20分鐘到約2小時(shí)。最優(yōu)選以約30分鐘的間隔采集樣品。因此，在再一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于診斷腦血管病、TIA或卒中進(jìn)展的方法，其包括以小于約6小時(shí)的頻率再一次或多次測(cè)量生物樣品中未結(jié)合NR2肽和結(jié)合NR2肽或總NR2肽和/或NMDA受體片段的存在和量。再者，該檢測(cè)優(yōu)選與NIHSS評(píng)估和神經(jīng)成像聯(lián)合實(shí)施。換句話說(shuō)，在再一實(shí)施方案中，第二次檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的NR2肽，以得到NR2肽的第二量；將NR2肽的所述第二量與所述第一量比較；若第二量大于第一量，則將tPA第二次給予所述患者；若第二量不大于第一量，則不將tPA第二次給予所述患者。初級(jí)護(hù)理醫(yī)生環(huán)境在另外的應(yīng)用中，所述方法可用于臨床環(huán)境，以識(shí)別近期有患有卒中高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體，或監(jiān)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)降低治療的效力?？舍娪枚喾N療法來(lái)降低個(gè)體卒中的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于有卒中風(fēng)險(xiǎn)的患者，使用抗血小板藥物尤其是阿司匹林是一種標(biāo)準(zhǔn)的治療。可給心房顫動(dòng)(不規(guī)則的心跳)的人開(kāi)抗凝血?jiǎng)┧幏?。?dāng)開(kāi)治療藥方時(shí)，所述方法提供用于測(cè)定治療功效的新穎的方法。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供評(píng)估個(gè)體的TIA或卒中風(fēng)險(xiǎn)的方法，其包括測(cè)量來(lái)自所述個(gè)體的生物樣品中結(jié)合NR2肽或總(和任選未結(jié)合的)NR2肽和/或其NMDA受體片段的水平，并將所測(cè)濃度與基線水平比較。在一個(gè)實(shí)施方案中，基線水平得自群體平均值。在另外的實(shí)施方案中，基線水平根據(jù)個(gè)體自己的醫(yī)療史并結(jié)合NIHSS和DWL/MRI數(shù)據(jù)而得到。在另外的實(shí)施方案中，不止一次實(shí)施所述方法，以監(jiān)測(cè)卒中或TIA風(fēng)險(xiǎn)的降低或增加，任選聯(lián)合給予降風(fēng)險(xiǎn)治療(神經(jīng)保護(hù)策略)。在一個(gè)實(shí)施方案中，以每周一次到約6個(gè)月一次的頻率實(shí)施所述方法。在另外的實(shí)施方案中，以每月一次到約3個(gè)月一次的頻率實(shí)施所述方法。手術(shù)前風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估在再一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于幫助在手術(shù)前評(píng)估表面健康的受治療者卒中風(fēng)險(xiǎn)的方法。當(dāng)對(duì)患者進(jìn)行檢驗(yàn)并發(fā)現(xiàn)在其血流中有危險(xiǎn)水平的結(jié)合NR2肽或總NR2肽時(shí)，優(yōu)選在手術(shù)前和手術(shù)期間多次對(duì)患者進(jìn)行檢驗(yàn)。另外，因?yàn)榛颊咄ǔ５绞中g(shù)后不久才遭受不利的神經(jīng)病學(xué)事件，所以優(yōu)選在手術(shù)后的一個(gè)或多個(gè)以下時(shí)間周期內(nèi)對(duì)這些患者再進(jìn)行一次或多次檢驗(yàn)1小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天或30天。可在計(jì)劃手術(shù)的成人或兒童中實(shí)施所述方法，當(dāng)評(píng)估已有患神經(jīng)病學(xué)事件傾向的患者(例如有糖尿病病史、動(dòng)脈粥樣硬化病史、高血壓病史或過(guò)去懷疑或確診TIA或卒中病史的患者)時(shí)尤其有用。該等方法也可在手術(shù)前與MMSA檢驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用，以預(yù)測(cè)不利的神經(jīng)病學(xué)事件的風(fēng)險(xiǎn)。術(shù)前方位感、注意力和回憶等MMSA組成評(píng)分降低業(yè)已與術(shù)后不久的意識(shí)混濁和腦血管事件相關(guān)聯(lián)?？捎帽景l(fā)明預(yù)測(cè)的神經(jīng)病學(xué)事件的類型通常為由腦缺血引起的事件，尤其是因?qū)δX供氧不足引起的缺血性事件(與當(dāng)腦中血管破裂時(shí)發(fā)生的出血性事件相反)。這些事件可集中于腦的特定區(qū)域(如在卒中或TIA中發(fā)生的)或全部腦(如在精神錯(cuò)亂中發(fā)生的)。因此，不利的神經(jīng)病學(xué)事件的特征可為意識(shí)混濁(confusion)，或可被診斷為TIA或缺血性卒中。氧供應(yīng)可能因患者的健康狀態(tài)(如在某些血液病例如貧血癥中)而受損，但更常見(jiàn)的應(yīng)是由手術(shù)事件引起。若在手術(shù)期間或手術(shù)完成后30天內(nèi)(盡管若需要，產(chǎn)生的不利事件也可在7天、3天、2天或1天期限內(nèi)確定)發(fā)生不利的神經(jīng)病學(xué)事件，則說(shuō)其"來(lái)自，，手術(shù)。盡管一過(guò)性減慢或中斷供腦氧氣流的創(chuàng)傷性手術(shù)受益最大，但本而言，所述方法應(yīng)該在閉塞或阻滯正常血液循環(huán)的任何心臟血管手術(shù)之前實(shí)施，這樣的手術(shù)導(dǎo)致手術(shù)中微栓子或大栓子、異常腦血流灌注、再灌注損傷或炎性反應(yīng)或神經(jīng)體液反應(yīng)。當(dāng)實(shí)施心肺旁路時(shí)，本發(fā)明在預(yù)測(cè)不利的神經(jīng)病學(xué)事件發(fā)生方面尤其有用。診斷平臺(tái)測(cè)量結(jié)合NR2肽或總NR2肽的診斷方法通常需要將結(jié)合肽從血流中所述肽存在于其中的任何復(fù)合物(例如免疫球蛋白和白蛋白復(fù)合物)上剝離下來(lái)。這種剝離通常通過(guò)使用蛋白去垢劑來(lái)完成。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于檢測(cè)和定量生物樣品中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的檢驗(yàn)試劑盒，其包括(a)包含能特異性結(jié)合受試樣品中的NR2肽的抗體的抗體試劑；(b)蛋白去垢劑；和(c)指示劑試劑。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于檢測(cè)和定量生物樣品中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的方法，其包括(a)讓生物樣品與蛋白去垢劑接觸，得到變性的生物樣品；(b)讓所述變性的生物樣品與包含能特異性結(jié)合受試樣品中的NR2肽的抗體的抗體試劑接觸足夠的時(shí)間，以使所述NR2肽和所述抗體之間形成結(jié)合復(fù)合物；和(c)檢測(cè)和定量所述結(jié)合復(fù)合物。可用任何數(shù)量的已知診斷技術(shù)來(lái)實(shí)施本發(fā)明診斷方法，所迷診斷技術(shù)包括直接或間接ELISA、RIA、免疫斑點(diǎn)、免疫印跡法、膠乳凝集、側(cè)流免疫層析法(lateralflow)、熒光偏振和微陣列。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，本發(fā)明用捕獲和測(cè)量NMDAR肽標(biāo)記物用的固定化固相來(lái)實(shí)施。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括(a)讓來(lái)自患者的生物樣品與包含NMDAR肽或抗體的固定化固相接觸足夠的時(shí)間，以在所述NMDAR肽或抗體與所述生物樣品中的NMDAR抗體或肽之間形成復(fù)合物；(c)讓所述復(fù)合物與連接有產(chǎn)生信號(hào)的化合物的指示劑試劑接觸，以產(chǎn)生信號(hào)；和(d)測(cè)量所產(chǎn)生的信號(hào)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，指示劑試劑包含連接有辣根過(guò)氧化物酶的雞抗人或抗人IgG。在優(yōu)選實(shí)施方案中，固相為聚合物基質(zhì)。更優(yōu)選聚合物基質(zhì)為聚丙烯酸酯、聚苯乙烯或聚丙烯。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，固相為微孔板。在其它優(yōu)選實(shí)施方案中，固相為硝酸纖維素膜或帶電荷的尼龍膜。在另外的實(shí)施方案中，用凝集來(lái)實(shí)施所述方法。因此，在再一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括(a)讓來(lái)自患者的生物樣品與包含NMDAR肽或抗體的凝集載體接觸足夠的時(shí)間，以在所述NMDAR肽或抗體與所述生物樣品中的NMDAR抗體或肽之間形成凝集復(fù)合物；(c)從凝集產(chǎn)生信號(hào)；(d)在所述信號(hào)與NMDAR肽或抗體的一種或多種標(biāo)記物的所述水平之間建立關(guān)聯(lián)性。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述"足夠時(shí)間"為小于30、20、15或甚至IO分鐘。膠乳凝集測(cè)定法業(yè)已闡述于Beltz,G.A.等MolecularProbes:TechniquesandMedicalApplications,A.Albertini等編輯，RavenPress,NewYork,1989中，其在此引作參考。在膠乳凝集測(cè)定中，將針對(duì)特定生物標(biāo)志物產(chǎn)生的抗體固定在膠乳微粒上。將一滴膠乳微粒加入到適當(dāng)稀釋的待檢血清中，通過(guò)輕輕搖動(dòng)卡片來(lái)混合。對(duì)于缺乏足夠水平的生物標(biāo)志物的樣品，膠乳微粒保持懸浮，保持光滑乳白色的外觀。然而，若存在與抗體反應(yīng)的生物標(biāo)志物，則膠乳微粒凝集為肉眼可檢測(cè)的凝集物。也可使用凝集測(cè)定來(lái)檢測(cè)生物標(biāo)志物，其中相應(yīng)的抗體固定在除膠乳珠粒以外的合適微粒上，例如固定在明膠、紅細(xì)胞、尼龍、脂質(zhì)體、金粒等等上。測(cè)定中存在抗體則引起與沉淀反應(yīng)相似的凝集，然后可通過(guò)諸如比濁法、渾濁度、紅外光譜、目測(cè)檢測(cè)、比色法等等技術(shù)來(lái)一全測(cè)。本文通常采用術(shù)語(yǔ)膠乳凝集來(lái)指基于形成可檢測(cè)的凝集的任何方法，其不限于使用膠乳作為免疫吸附基質(zhì)。盡管用于凝集的優(yōu)選基質(zhì)為基于膠乳的，例如聚苯乙烯和聚丙烯，尤其是聚苯乙烯，但其它眾所周知的基質(zhì)包括由玻璃、紙、右旋糖酐和尼龍制成的珠粒。通過(guò)例如經(jīng)由酰胺鍵或酯鍵的共價(jià)結(jié)合、離子吸引或通過(guò)吸附等技術(shù)，可將固定化抗體共價(jià)結(jié)合、離子結(jié)合或物理結(jié)合到固相免疫吸附劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知曉很多用于結(jié)合抗體的其它合適載體，或應(yīng)該能夠用常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定這樣的載體。可使用常規(guī)方法制備用于本發(fā)明的抗體。舉例而言，通過(guò)使用NMDA蛋白的肽，用標(biāo)準(zhǔn)方法可制備多克隆抗血清或單克隆抗體。可物(例如小鼠、倉(cāng)鼠或兔子)。使肽具有免疫原性的技術(shù)包括與載體綴合或?yàn)楸绢I(lǐng)域所熟知的其它技術(shù)。例如，可在佐劑存在下給予肽。通過(guò)檢測(cè)血漿或血清中的抗體效價(jià)可監(jiān)測(cè)免疫進(jìn)展。以免疫原為抗原可使用ELISA或其它免疫測(cè)定方法來(lái)評(píng)估抗體水平。免疫后，可給予抗血清，若需要可從血清分離多克隆抗體。為了生產(chǎn)單克隆抗體，可/人免疫動(dòng)物收獲抗體生成細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的體細(xì)胞融合方法與骨髓瘤細(xì)胞融合，由此使這些細(xì)胞無(wú)限增殖化并產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞。這樣的技術(shù)在本領(lǐng)域眾所周知，例如最初由Kohler和Milstein(Nature256，495-497(1975》開(kāi)發(fā)的雜交瘤技術(shù)以及其它技術(shù)例如人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor等Immunol.Today4,72(1983))、生產(chǎn)人單克隆抗體的EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等MonoclonalAntibodiesinCancerTherapy(1985)AllenR.Bliss,Inc.,pages77-96)和組合抗體庫(kù)篩選(Huse等Science246，1275(1989))。為了生產(chǎn)特異性與所述肽反應(yīng)的抗體，可經(jīng)免疫化學(xué)法篩選雜交瘤細(xì)胞，并可分離單克隆抗體。因此，本發(fā)明也涵蓋分泌對(duì)本文所述NMDAR蛋白或片段有特異性的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，用已在生產(chǎn)廠校準(zhǔn)了的試劑盒基于從人血液純化的抗體實(shí)施所述方法。因此，在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明在以下條件下實(shí)施(a)用診斷試劑盒測(cè)量所述生物流體中NMDAR抗體水平；(b)所述診斷試劑盒包含結(jié)合NMDAR肽；和(c)所述試劑盒針對(duì)包含從人血液純化的免疫球蛋白G的級(jí)分的抗體標(biāo)準(zhǔn)來(lái)制備。另外，該方法可用市購(gòu)化學(xué)發(fā)光技術(shù)來(lái)實(shí)施。舉例而言，該方法可采用用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)、用恒定量的兩種單克隆抗體的雙位點(diǎn)夾心免疫測(cè)定法。在流體試劑中的第一抗體可為對(duì)該肽的第一部分有特異性的吖啶錄酯標(biāo)記的單克隆小鼠抗人NMDA受體肽BNP(F(ab')2片段。固相中的第二抗體可為對(duì)該肽的另一部分有特異性的生物素化單克隆小鼠抗人抗體，其可偶聯(lián)到鏈親合素磁性微粒。通過(guò)將患者樣品與這兩種抗體混合可形成免疫復(fù)合物。在洗掉所有未結(jié)合的抗體綴合物后，可用發(fā)光計(jì)測(cè)量免疫復(fù)合物信號(hào)的化學(xué)發(fā)光。當(dāng)通過(guò)測(cè)量NMDA受體的cDNA表達(dá)可問(wèn)接檢測(cè)NMDA受體時(shí)，通過(guò)常規(guī)PCR測(cè)定，例如cDNA雜交、RNA印跡或DNA印跡，可實(shí)施本發(fā)明中的測(cè)量步驟。用編碼本發(fā)明多肽抗原的寡核苷酸可實(shí)施這些方法。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括通過(guò)讓從生物樣品中分離的總DNA與連接到固相的寡核苷酸引物接觸足夠的時(shí)間，來(lái)測(cè)量NMDARcDNA表達(dá)的增加。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案，通過(guò)讓結(jié)合到固態(tài)基質(zhì)的總DNA陣列與現(xiàn)成可用的含有寡核苷酸引物的試劑混合物接觸足夠的時(shí)間，來(lái)測(cè)量NMDARcDNA表達(dá)。所迷cDNA與指示劑試劑(其包含連接到信號(hào)產(chǎn)生化合物的所述cDNA的寡核苷酸配對(duì)物)復(fù)合，則揭示表達(dá)的NMDARcDNA。優(yōu)選信號(hào)產(chǎn)生化合物選自辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、尿激酶(urinase)和非酶試劑。最優(yōu)選信號(hào)產(chǎn)生化合物為非酶試劑。用于測(cè)量自身抗體水平的本發(fā)明免疫吸附劑可如下產(chǎn)生。將受體蛋白片段固定(優(yōu)選通過(guò)共價(jià)鍵.或離子鍵固定)到合適的載體例如聚苯乙烯或硝酸纖維素。若采用免疫檢測(cè)用的標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯板，則首先要對(duì)其進(jìn)行硝化處理，藉此在板表面形成游離硝基，將其還原為氨基并用戊二醛作為連接子活化。為了化學(xué)固定受體蛋白的相應(yīng)免疫原性片段，接下來(lái)讓由此活化的板在足以確保固定的時(shí)間和溫度(即4。C約16小時(shí))下與約2-50nM的目標(biāo)肽溫育。其也可如下實(shí)施通過(guò)借助離子作用使受體蛋白的相應(yīng)片段固定在硝酸纖維素條上來(lái)產(chǎn)生免疫吸附劑。將從哺乳動(dòng)物腦分離的受體蛋白質(zhì)的相應(yīng)片段上樣到硝酸纖維素上，于37。C溫育15分鐘。然后用0.5%Tween-20溶液洗滌硝酸纖維素，將得到的免疫吸附劑在室溫晾干，在干燥處存貯一年。實(shí)施例提出以下實(shí)施例是為了給本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供有關(guān)如何制備和評(píng)價(jià)本文所要求保護(hù)的化合物的全面的內(nèi)容和說(shuō)明，其意欲僅僅舉例說(shuō)明本發(fā)明，并非意欲限制本發(fā)明人認(rèn)作其發(fā)明的范圍。關(guān)于數(shù)字(例如量、溫度等等)業(yè)已努力確保準(zhǔn)確，但應(yīng)該說(shuō)明可能有某些錯(cuò)誤和偏差。除非另有所指，否則份數(shù)為重量份，溫度為。C或室溫，壓力為大氣壓或接近大氣壓。實(shí)施例1.所研究的患者群評(píng)估了41名具有提示可能短暫缺血性卒中的癥狀和處于近期完全性卒中高風(fēng)險(xiǎn)(表1)中的成年患者。排除標(biāo)準(zhǔn)包括用葡萄糖治療后癥狀消除和可能患有低血糖癥的那些患者。在患者常規(guī)評(píng)估期間，評(píng)估醫(yī)師核實(shí)了5種因素的存在與否，其包括年齡>60、糖尿病、TIA癥狀〉10分鐘、肢體無(wú)力、言語(yǔ)功能障礙。在經(jīng)告知同意后，于入院當(dāng)天從所有受治療者采集血液樣品。就診(presentation)后通過(guò)電話、私人會(huì)面或回顧病歷對(duì)患者進(jìn)行大約90天的隨訪，以評(píng)估復(fù)發(fā)性TIA或卒中。若在初次評(píng)估后卯天內(nèi)患者發(fā)展為持久性神經(jīng)功能障礙，或出現(xiàn)與患者癥狀發(fā)作有關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)梗死的新X光照相術(shù)(CT或MRI)證據(jù)，則定義為已發(fā)生卒中。在癥狀發(fā)作后24小時(shí)內(nèi)作為一個(gè)時(shí)期(asasinglesession)實(shí)施多順序MR成像方案，包括DWI、T2WI和MRA。記錄以下CT成像數(shù)據(jù)出血位置、出血量和心室內(nèi)血液或質(zhì)量影響的存在。測(cè)定上述患者和年齡相配的健康志愿者組(n-0)血漿中未結(jié)合NR2肽的量。在顯示出基底神經(jīng)節(jié)發(fā)育和診斷為腦腫瘤后排除了一名患者(表1)。42%患者在癥狀發(fā)作后3小時(shí)內(nèi)經(jīng)受MRI檢查，79%患者在癥狀發(fā)作后3小時(shí)內(nèi)經(jīng)受CT掃描。表l.患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例2.未結(jié)合NR2肽作為新的腦病變的標(biāo)記物通過(guò)直接ELISA得到血液中未結(jié)合NR2肽的濃度，如表2所示。圖1中所描繪的未結(jié)合NR2肽的分布顯示，未結(jié)合NR2肽值低于1.0ng/inl的患者(n-16)沒(méi)有經(jīng)CT/MRI確定的損傷區(qū)域(表1)。健康人群血漿的未結(jié)合NR2肽濃度范閨為0.3-0.5ng/ml。表2.所研究患者血漿中的未結(jié)合NR2肽<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>在腦皮層、基底神經(jīng)節(jié)、小腦和丘腦中有經(jīng)DWI/MRI確定的新的缺血性損傷的患者(n-14)血漿中，檢測(cè)到高于1.0ng/ml的未結(jié)合NR2肽濃度(表2)。在三名缺血性卒中(IS)患者中未結(jié)合NR2肽濃度異常升高，因此診斷為腔隙性梗死，并隨后經(jīng)DWI確定。實(shí)施例3.總NR2肽作為舊的腦病變的標(biāo)記物分析了來(lái)自40名提示TIA的患者的血清樣品中的總NR2肽量(表3)。表3.研究的患者血清中總NR2肽的量<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，大部分患者的總NR2肽濃度低于2.0ng/ml(圖2)。健康人群的總NR2肽濃度為1.0-1.5ngZml?；颊叩纳窠?jīng)成像表明除了ICH外沒(méi)有異常。有腦缺血先前病史和經(jīng)MRI確定有舊梗死區(qū)的患者的總NR2肽濃度為〉2.4ng/ml(表3)。40名患者中有9名臨床診斷為具有復(fù)發(fā)性TIA或卒中。實(shí)施例4.TIA/卒中(原發(fā)性和復(fù)發(fā)性癥狀)患者的未結(jié)合NR2肽和總NR2肽同時(shí)檢測(cè)未結(jié)合NR2肽和總NR2肽使得可以將復(fù)發(fā)性TIA/卒中患者與有新的梗死區(qū)的患者區(qū)別開(kāi)來(lái)。表3的結(jié)果基于CT/MR1/DWI并比較其總NR2肽水平和未結(jié)合NR2肽水平為患者給出臨床診斷。MRI/DWI上有梗死區(qū)的患者(nH4)具有"舊，，病變區(qū)，其未結(jié)合肽:總肽比率小于l:2(表3中的病例3、13、16、21)。表3.所研究患者的未結(jié)合NR2肽/總NR2肽<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>對(duì)于在血漿中未結(jié)合NR2肽顯著增加的患者，其總肽濃度都低于2.0mg/ml,都患有經(jīng)MR1/DWI確定的具新病變區(qū)的急性卒中(表3中的病例32、35)。在這兩名患者中未結(jié)合NR2肽:總NR2肽的比率都大于2:1。實(shí)施例5.未結(jié)合NR2肽/總NR2肽與NIHSS的相關(guān)性入院時(shí)在40名患者中評(píng)估NIHSS評(píng)分，這40名患者然后被再分為兩個(gè)組-NIHSS評(píng)分低于或等于3的組和NIHSS評(píng)分大于3的組(表4)。在所有患者中完成MRA;40名患者中的24名有血流異常證據(jù)。在NIHSSS3和NIHSS〉3組別之間，在3小時(shí)內(nèi)有CT或MRI癥狀發(fā)作的患者比例方面或卒中半球方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。表4.<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>24名患者中僅5名患者的NIHSS評(píng)分小于或等于3。這5名患者中沒(méi)有一個(gè)有提示腔隙綜合征的癥狀。這5名患者中的4名有DWI變化證據(jù)。在3名患者血漿中;f全測(cè)到高于1.0ng/ml截至值的未結(jié)合NR2肽(表5)，而診斷有TIA的所有人的總NR2肽保持低于2.0ng/ml的截止值。表5.NIHSSS3+原發(fā)性TIA的5名患者的細(xì)目分類<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>24名患者中的其余19名的NIHSS大于3,且在基線時(shí)有DWI病變證據(jù)。在該組內(nèi)5名患者診斷患有慢性TIA,余下的14名患者診斷為患有急性IS。在NIHSS評(píng)分和未結(jié)合NR2肽/總NR2肽值之間有顯著的相關(guān)性(is-0.92)。后來(lái)被診斷為急性IS且NfflSS評(píng)分為11-20的患者0=9)的未結(jié)合NR2肽水平，是在對(duì)照對(duì)象中觀察到的水平的大約3-44倍。對(duì)于患有慢性TIA和復(fù)發(fā)性IS的患者(r^14)，總NR2肽水平和NIHSS評(píng)分中值具有顯著的相關(guān)性(rs4.89)。實(shí)施例6.患卒中樣疾病的患者的未結(jié)合NR2肽/總NR2肽在經(jīng)評(píng)價(jià)表示出TIA樣癥狀的人群組(n—6)中，2名患者被診斷為貝爾麻痹和橈神經(jīng)麻痹，3名患者被診斷為腦內(nèi)出血(ICH)。在那些患者中，未結(jié)合NR2肽低于1.0ng/ml截止值，總NR2肽低于2.0ng/ml截止值(表6)。病例34^皮初步診斷為腦血管疾病，但在NR2肽檢驗(yàn)和另外的CT測(cè)定之后，該診斷被改變?yōu)槟X內(nèi)出血。表6.患卒中樣疾病患者中的未結(jié)合NR2肽/總NR2肽<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>病例27顯示出未結(jié)合NR2肽/總NR2肽低于對(duì)應(yīng)截止值，但在DWI顯示丘腦腔隙性梗死區(qū)后將初步診斷"貝爾麻痹"改變?yōu)?TIA"。病例8最初鑒別為嚴(yán)重偏頭痛，但基于總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的檢驗(yàn)結(jié)果改為缺血性卒中。DWI成像檢測(cè)到腦內(nèi)腔隙性病變，確證急性IS的診斷。實(shí)施例7.纖溶酶原激活劑治療在入院后24小時(shí)內(nèi)用纖溶酶原激活劑(tPA)治療總共13名患有原發(fā)性/慢性TIA和新的/復(fù)發(fā)性卒中的患者(表7)。2名患者的NIHSS評(píng)分小于3，診斷為原發(fā)性TIA，在入院后24小時(shí)內(nèi)沒(méi)有接受溶栓治療就恢復(fù)了。3名患者在最初24小時(shí)內(nèi)其NIHSS評(píng)分惡化1-2分后接受66mg劑量的tPA(病例19、36、38)。在tPA治療后未結(jié)合NR2肽水平顯著降低(表8)。以下評(píng)估表明在3個(gè)月時(shí)改良Rankin量表上為自主性(independency)(表7)。表7.用tPA治療的患者<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>經(jīng)DWI確定具有病變區(qū)并在入院3小時(shí)內(nèi)未顯示癥狀改善的慢性TIA患者，接受靜脈內(nèi)tPA(66mg),該給予促進(jìn)NIHSS評(píng)分改善(表7)。臨床改善伴隨總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的濃度降低(表8)。NIHSS評(píng)分的最顯著改善與總NR2肽濃度降低的關(guān)聯(lián)性比與未結(jié)合NR2肽濃度降低的關(guān)聯(lián)性更大。病例11在3個(gè)月內(nèi)癥狀復(fù)發(fā)。表8.給予tPA后未結(jié)合NR2肽/總NR2肽的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>在新卒中患者(病例32、35)中及時(shí)給予(在癥狀出現(xiàn)后3小時(shí)內(nèi))tPA顯著降低了未結(jié)合NR2肽(38-47%)，患者在3個(gè)月改良Rankin量表上為自主性(表7)。對(duì)于病例10,盡管在入院后6小時(shí)內(nèi)給予tPA(69mg)其NIHSS評(píng)分最初有改進(jìn)，并且未結(jié)合NR2肽/總NR2肽的濃度略有降低，但該患者隨后在接下來(lái)的2個(gè)內(nèi)惡化(表7、8)。在病例25中溶栓治療使未結(jié)合NR2肽濃度降低了高達(dá)90%。實(shí)施例8.總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的檢測(cè)測(cè)定和性能特性ELISA板的包被用存于100〖iL15mM碳酸鈉、35mM碳酸氫鈉(pH9.6)中的0.2|Lig雞抗NR2IgY包被NuncMaxiSorp板(FisherSci)。讓板溫育過(guò)夜，然后用200pL1M乙醇胺(pH8-9)處理1小時(shí)。用PBS緩沖液漂洗后，將板貯存于+4。C。血液樣品的制備用無(wú)菌一次性試管從各個(gè)個(gè)體通過(guò)靜脈穿刺采集血液(lml)。應(yīng)將每個(gè)lml血液樣品平均分到EDTA試管(血漿)和促凝結(jié)(dot-activator)試管(血清)中。對(duì)于血漿，讓試管于4。C以4000g離心5分鐘。對(duì)于血清，使血液在試管中凝結(jié)20分鐘，然后以1000rpm離心10分鐘。收集的血漿和血清應(yīng)^存于-70。C。樣品預(yù)稀釋精確吸取20pL各個(gè)血清樣品到2-3ml體積的試管中，加入980pL含有0.05%Tween20、pH7.4的50mM磷酸鹽緩沖液(PBS-T)(用于測(cè)定未結(jié)合肽)或用PBS-T制備的0.卜0.5o/。的十二烷基硫酸鈉溶液(或KC1)(用于測(cè)定總肽)，充分混合10-30分鐘。用于檢測(cè)肽的直接ELISA:對(duì)于每一種測(cè)定，應(yīng)該用PBS-T洗滌板5分鐘。然后一式兩份加入校準(zhǔn)物、對(duì)照或樣品(100pL)，在室溫(RT)溫育60分鐘。在將板洗滌3次15分鐘后，應(yīng)該加入100pL人IgG(6嗎/孔)，在RT再溫育60分鐘。用緩沖液洗滌后，加入蛋白A-HRP(100]Lil;1:1，000稀釋)達(dá)1小時(shí)。在加入另外的洗滌后，通過(guò)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物溶液來(lái)顯示反應(yīng)物。顯色反應(yīng)進(jìn)行5分4中，用酸溶液(50pl)終止，在酶標(biāo)儀(micr叩latereader)上以雙波長(zhǎng)450nm/630nm監(jiān)測(cè)。每個(gè)測(cè)定也包括樣品緩沖液作為空白以計(jì)算零單位值。用微孔板孔中的NR2肽吸光度單位對(duì)濃度作校準(zhǔn)曲線來(lái)確定血清中的NR2肽濃度。實(shí)施例9.未結(jié)合NR2肽/總NR2肽測(cè)定的性能特性未結(jié)合NR2肽在表9中以2x2格式來(lái)描繪未結(jié)合NR2肽的工作特性。在1.0ng/ml截止值時(shí)計(jì)算出敏感度和特異性為90%和95%。選擇特定截止值點(diǎn)的預(yù)測(cè)值和或然率以接近敏感度90%。用于TIA/卒中診斷的1.0ng/ml截止值時(shí)，達(dá)到95%的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，其導(dǎo)致高水平NR2肽患者的TIA后神經(jīng)并發(fā)癥增加至18倍(95%CI，10.8-25.4)。90%的陰性預(yù)測(cè)值和0.05的陰性或然率使得僅在5。/。的卒中樣癥狀病例中誤診為TIA/卒中。將未結(jié)合NR2肽值與DWI/MRI數(shù)據(jù)結(jié)合起來(lái)，應(yīng)該可以100%確定月齒缺血。表9.未結(jié)合NR2肽的性能<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>總NR2肽表10中以2x2版式給出總NR2肽的工作特性。與未結(jié)合肽測(cè)試比較，對(duì)于總NR2測(cè)定，在2.0ng/ml截止值時(shí)計(jì)算出敏感度較低(82%),特異性大約相同(約96%)。在對(duì)于TLV卒中診斷最佳的2.0ng/ml截止值時(shí)，達(dá)到93%的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，其導(dǎo)致具高水平總NR2肽的患者的神經(jīng)并發(fā)癥提高至20.5倍。88%的陰性預(yù)測(cè)值和0.18的陰性或然率使得僅在18%的卒中樣癥狀病例中誤診為TIA/卒中。將同時(shí)檢測(cè)未結(jié)合NR2肽和總NR2肽與DWI/MRI數(shù)據(jù)結(jié)合起來(lái)，應(yīng)該可以100%確定腦缺血，并將病例細(xì)分為新的和復(fù)發(fā)性的缺血性事件病例。表IO.總NR2肽的性能<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>在本申請(qǐng)全文中引用了各種出版物。這些出版物的內(nèi)容以其整體在此引入本申請(qǐng)作為參考，以更全面地闡述本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)狀況。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，在不偏離本發(fā)明范圍或精神的情況下在本發(fā)明內(nèi)可進(jìn)行各種修改和改變。從本文揭示的本發(fā)明說(shuō)明書(shū)和實(shí)施來(lái)考慮，本發(fā)明的其它實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。本說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例意欲僅作為例示來(lái)考慮，本發(fā)明真正的范圍和精神由以下所附的權(quán)利要求書(shū)來(lái)指出。權(quán)利要求1.用于測(cè)定神經(jīng)功能障礙的病理起源的方法，其包括a)提供患有神經(jīng)功能障礙的患者；b)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽，以得到結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量；和c)將所述結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。2.權(quán)利要求l的方法，其中血液中所迷總NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)為約2.0ng/ml或更低。3.權(quán)利要求l的方法，其進(jìn)一步包括a)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中未結(jié)合NR2肽，以得到未結(jié)合NR2肽的量；和b)將所述未結(jié)合NR2肽的量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中未結(jié)合NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。4.權(quán)利要求3的方法，其中血液中所述未結(jié)合NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)小于約1.0ng/ml。5.權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步包括a)通過(guò)用所迷總NR2肽的所述量除以所述未結(jié)合NR2肽的所迷量，來(lái)計(jì)算總NR2肽:未結(jié)合NR2肽的比率；b)使總NR2肽:未結(jié)合NR2肽的比率小于2:1并且未結(jié)合NR2肽的量大于l.Ong/ml與原發(fā)性神經(jīng)血管事件相關(guān)聯(lián)；和c)使總NR2肽:未結(jié)合NR2肽的比率大于2:1并且總NR2肽的量大于2.0ng/ml與復(fù)發(fā)性神經(jīng)血管事件相關(guān)聯(lián)。6.權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步包括使小于2.0ng/ml的總NR2肽的量和小于l.Ong/ml的未結(jié)合NR2肽的量與腦血管系統(tǒng)中不存在缺血性事件相關(guān)聯(lián)。7.權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步包括再實(shí)施一次或多次實(shí)施步驟(b)和(c),并且將所述未結(jié)合NR2肽的量的變化與神經(jīng)病學(xué)事件不存在神經(jīng)病學(xué)事件相關(guān)聯(lián)。8.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步包括通過(guò)計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)或磁共振/彌散加權(quán)成像對(duì)所述患者大腦進(jìn)行神經(jīng)成像。9.權(quán)利要求l的方法，其中所述生物流體為血液、尿液、血漿、血清、腦脊髓液、唾液、汗液或腦組織或其書(shū)f生物。10.用于預(yù)測(cè)腦血管事件或然性的方法，其包括a)提供有患腦血管事件風(fēng)險(xiǎn)的患者；b)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽，以得到結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量；和c)將所述結(jié)合NR2肽或總NR2肽的量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。11.權(quán)利要求10的方法，其中血液中的所述總NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)為約2.0ng/ml或更低。12.權(quán)利要求10的方法，其進(jìn)一步包括a)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的未結(jié)合NR2肽，以得到未結(jié)合NR2肽的量；和b)將未結(jié)合NR2肽的所述量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中未結(jié)合NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。13.權(quán)利要求12的方法，其中血液中所述未結(jié)合NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)小于約1.0ng/ml。14.權(quán)利要求10的方法，其中所述患者辨定進(jìn)行外科手術(shù)。15.用于檢測(cè)和定量生物樣品中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的檢測(cè)試劑盒，其包括a)包含能特異性結(jié)合測(cè)試樣品中NR2肽的抗體的抗體試劑；b)蛋白去垢劑；和c)指示劑試劑。16.權(quán)利要求15的檢測(cè)試劑盒，其進(jìn)一步包括作為對(duì)照或校準(zhǔn)物的合成NR2肽。17.用于檢測(cè)和定量生物樣品中結(jié)合NR2肽或總NR2肽的方法，其包括a)讓生物樣品與蛋白去垢劑接觸，以得到變性的生物樣品；b)讓所述變性的生物樣品與包含能特異性結(jié)合測(cè)試樣品中NR2肽的抗體的抗體試劑接觸足夠時(shí)間，以使所述NR2肽和所述抗體之間形成結(jié)合復(fù)合物；和c)檢測(cè)和定量所述結(jié)合復(fù)合物。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述生物樣品為稀釋到約1:50比率的血漿。19.權(quán)利要求17的方法，其中所述去垢劑為0.1-0.5%的十二烷基硫酸鈉或KC1。20.權(quán)利要求17的方法，其中a)所述抗體試劑包含綴合有凝集載體的抗體；和b)基于凝集程度檢測(cè)和測(cè)量所述復(fù)合物。21.權(quán)利要求17的方法，其中所述足夠時(shí)間為5分鐘或更短。22.權(quán)利要求17的方法，其通過(guò)直接ELISA、RIA、免疫斑點(diǎn)、免疫印跡法、膠乳凝集、側(cè)流免疫層析法、熒光偏振測(cè)定法或微陣列來(lái)實(shí)施。23.權(quán)利要求17的方法，其中所述檢測(cè)和定量包括a)通過(guò)以下方法由信號(hào)產(chǎn)生化合物產(chǎn)生信號(hào)i)讓所述復(fù)合物與包舍連接有所述信號(hào)產(chǎn)生試劑的IgG的第二抗體試劑接觸，以形成第二復(fù)合物，或ii)讓所述復(fù)合物與包含IgG的第二抗體試劑接觸，形成第二復(fù)合物，隨后將所述信號(hào)產(chǎn)生試劑連接到所述IgG;和b)測(cè)量所產(chǎn)生的信號(hào)；其中所測(cè)量的信號(hào)量與所述樣品中所述NR2的存在情況有相關(guān)性。24.權(quán)利要求17的方法，其中所述IgG包含雞抗人IgG或抗人IgG，所述指示劑試劑包含辣根過(guò)氧化物酶。25.診斷和治療腦缺血的方法，其包括a)提供患有神經(jīng)功能障礙的患者；b)檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的NR2肽，以得到NR2肽的第一量；c)將NR2肽的所述第一量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較；d)若所述NR2肽的所述第一量高于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則將tPA給予所述患者；e)若所述NR2肽的所述量低于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則不將tPA給予所述患者。26.權(quán)利要求25的方法，其中分別檢測(cè)和定量結(jié)合NR2肽和未結(jié)合NR2肽，以得到結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的量，并將所述結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的所述量與明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)比較。27.權(quán)利要求25的方法，其中血液中所述結(jié)合NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)小于約2.0ng/ml。28.權(quán)利要求25的方法，其中血液中所述未結(jié)合NR2肽的所述群體標(biāo)準(zhǔn)小于約1.0ng/ml。29.權(quán)利要求25的方法，其進(jìn)一步包括a)評(píng)估所述患者的急性面癱、上肢下移或言語(yǔ)功能障礙；b)若觀察到所述急性面癱、上肢下移或言語(yǔ)功能障礙，并且所述NR2肽的所述量高于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則將tPA給予所述患者；和c)若未觀察到所迷急性面癱、上肢下移或言語(yǔ)功能障礙，并且所述NR2肽的所述量低于明顯健康的人類對(duì)象的所述生物流體中NR2肽的群體標(biāo)準(zhǔn)，則不將tPA給予所述患者。30.權(quán)利要求25的方法，其進(jìn)一步包括a)第二次檢測(cè)和定量來(lái)自所述患者的生物流體中的NR2肽，以得到NR2肽的第二量；b)將所述NR2肽的第二量與所述第一量比較；和c)若所述第二量大于所述第一量，則將tPA第二次給予所述患者；和d)若所述第二量不大于所述第一量，則不將tPA第二次給予所述患者。全文摘要本發(fā)明提供用于診斷和治療腦血管事件和用于界定事件的時(shí)間和解剖定位的方法和試劑盒，其基于在生物流體中檢測(cè)和定量結(jié)合NR2肽或總NR2肽和未結(jié)合NR2肽。所述方法任選與神經(jīng)病學(xué)評(píng)分和神經(jīng)成像聯(lián)合實(shí)施，其涉及在急診室急救基礎(chǔ)上對(duì)TIA和卒中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、預(yù)后、診斷和治療。文檔編號(hào)G01N33/53GK101268370SQ200680029355公開(kāi)日2008年9月17日申請(qǐng)日期2006年6月13日優(yōu)先權(quán)日2005年6月13日發(fā)明者S·A·丹比諾瓦申請(qǐng)人:Cis生物科技公司