專利名稱：治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑及制法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑及制法和質(zhì)量控制方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乳腺增生是婦女常見、多發(fā)病之一，多見于25～45歲女性，其本質(zhì)上是一種生理增生與復舊不全造成的乳腺正常結(jié)構(gòu)的紊亂。在我國，囊性改變少見，多以腺體增生為主，故多稱“乳腺增生癥”。世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)稱“良性乳腺結(jié)構(gòu)不良”。本病惡變的危險性較正常婦女增加2-4倍，臨床癥狀和體征有時與乳癌相混。其主要臨床特征為乳房腫塊和乳房疼痛，一般常于月經(jīng)前期加重，行經(jīng)后減輕。由于乳腺增生病重的一小部分以后有發(fā)展成為乳腺癌的可能性，所以有人認為乳腺增生病為乳腺癌的“癌前病變”。乳腺增生病屬于中醫(yī)的“乳癖”范疇。有關(guān)本病的描述最早見于《中藏經(jīng)》，以后歷代醫(yī)家多有論述，對其病因病機、臨床表現(xiàn)及治療均有詳盡的闡述。“乳癖”是形容氣機不暢，在乳房部出現(xiàn)脹滿疼痛，癥請時緩時劇，疼痛時輕時重等特點?！动兛菩牡录分惺沁@樣描述的“有乳中結(jié)核，形如丸卵，不疼痛，不發(fā)寒熱，皮色不變，其核隨喜怒而消長，此名乳癖……?！敝嗅t(yī)藥治療該癥有獨到之處，其中市售的巖鹿乳康膠囊由巖陀、鹿角霜、鹿銜草構(gòu)成，能軟堅散結(jié)，用于腎陽不足、氣滯血瘀所致的乳腺增生療效較好。但是鹿角霜為鹿角去膠質(zhì)的角塊，有吸濕性，嚼之有粘牙感，導致膠囊劑的內(nèi)容物易粘結(jié)，產(chǎn)品穩(wěn)定性較差，導致療效也受到影響；鑒于這些情況，為了提高藥物的穩(wěn)定性，需要尋找一種治療效果理想、質(zhì)量可靠、劑型合理的有效治療藥物制劑來豐富劑型品種、滿足市場需要；另外現(xiàn)有技術(shù)中對于此類藥品的質(zhì)量控制方法不嚴格且標準比較低，所以往往造成生產(chǎn)者對藥物的質(zhì)量難于定量控制，同時患者也無從了解藥品的具體指標。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)，提供治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑及制法和質(zhì)量控制方法；這種產(chǎn)品具有軟堅散結(jié)的功效，用于治療腎陽不足、氣滯血瘀所致的乳腺增生、療效較好。產(chǎn)品包括具有劑量準確、質(zhì)量穩(wěn)定、便于運輸貯存、成本低廉、能簡化生產(chǎn)工藝、降低成本、攜帶服用方便等特點的片劑；以及具有受食物輸送節(jié)律的影響很小，藥物吸收均勻而有規(guī)則，表面積增大可以提高藥物與胃腸道的接觸面積，使藥物吸收完全，提高生物利用度，同時外形美觀、流動性好、釋藥穩(wěn)定、局部刺激性小，不易吸濕、口感良好等特點的包衣微丸制劑；本發(fā)明還提供了對該藥品的質(zhì)量控制方法，能夠解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑，主要由巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g或用相應(yīng)重量份它們的提取物制作而成的泡騰片、注射液、粉針、凍干粉針、凝膠劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、凝膠劑、口服液體制劑、煎膏劑、浸膏劑或膜劑。優(yōu)選為片劑、顆粒劑或微丸劑。
所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的制備方法，取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，然后分別制成不同的制劑。
所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康片劑是這樣制備的取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纖維素，干燥，粉碎，過篩，壓片，包衣，包衣材料為歐巴代2，用量為6％，即得。
所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康微丸是這樣制備的取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量的淀粉，用70％乙醇和1.2％大豆油制軟材，制好的軟材用微丸機制丸，濕料擠壓過0.8mm篩孔，條狀濕粒切斷滾圓，50～60℃干燥成型，過16～20目篩選丸或者合并上述四種清膏，噴霧干燥，濕粉制粒起模，將模子置于包衣鍋內(nèi)加大成丸，藥粉∶水為1∶1.5，包衣鍋轉(zhuǎn)速為40r/min，蓋面，選丸，包衣，4％80W型歐巴代為包衣材料，包衣液噴入速度為150～180g/min，進風溫度為控制在85～88℃之間，鍋體轉(zhuǎn)速控制在4～6/min，即得。
所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下全部或部分內(nèi)容(1)巖陀、巖白菜素中全部或部分的鑒別測試方法；(2)巖白菜素的含量測試方法。
其中，鑒別方法包括對巖陀、巖白菜素中一種或兩種的鑒別取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，加甲醇或乙醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；取巖陀對照藥材，同法制成對照藥材溶液；取巖白菜素對照品，加甲醇或乙醇溶解，制成對照品溶液，吸取供試品溶液與對照品溶液1～30μl，分別點于同一硅膠GF25薄層板或硅膠G薄層板或硅膠H薄層板上，以氯仿或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸(1～5∶1～4∶0～2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材或?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
具體地說所述制劑的鑒別方法包括對巖陀、巖白菜素中一種或兩種的鑒別取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，從中稱取0.4g，加甲醇3ml，振搖30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；巖陀藥材，同法制成對照藥材溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液照；吸取供試品溶液3μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
所述制劑的含量測定方法為巖白菜素的含量測定取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，混勻，從中取適量精密稱定，加甲醇或乙醇提取，放至室溫，補足損失的甲醇或乙醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇或乙醇制成對照品溶液；用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水(5～30∶60～95)為流動相，檢測波長為190～410nm中的一個或幾個；以標準曲線法或外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康制劑含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康制劑中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于27mg。
優(yōu)選的含量測定方法為取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，混勻，從中取約0.4g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)40分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(18∶82)為流動相，檢測波長為275nm；以外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康制劑含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康制劑中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于54mg。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)，提供巖鹿乳康新制劑，產(chǎn)品具有軟堅散結(jié)的功效，用于治療腎陽不足、氣滯血瘀所致的乳腺增生、療效顯著；產(chǎn)品中包括具有攜帶方便、口感良好等特點的薄膜衣片和顆粒劑，以及具有受食物輸送節(jié)律的影響很小，藥物吸收均勻而有規(guī)則，表面積增大可以提高藥物與胃腸道的接觸面積，使藥物吸收完全，提高生物利用度，同時外形美觀、流動性好、釋藥穩(wěn)定、局部刺激性小，不易吸濕、口感良好等特點的包衣微丸制劑；提供的制備方法和質(zhì)量控制方法能夠比較好的指導企業(yè)工業(yè)化生產(chǎn)；能保證產(chǎn)品質(zhì)量；克服了現(xiàn)有技術(shù)、產(chǎn)品存在的問題；達到了發(fā)明的目的。
本申請人在研究中發(fā)現(xiàn)，由于本方使用的鹿角霜吸濕性很強，常規(guī)方法制成片劑、微丸在放置過程中會出現(xiàn)吸潮現(xiàn)象，影響了產(chǎn)品的穩(wěn)定性和質(zhì)量。于是對產(chǎn)品進行了包衣工藝研究，起到了改善口感和抗?jié)竦哪康摹Ｔ谘芯窟^程中發(fā)現(xiàn)，包衣材料、工藝選擇不當會延緩本發(fā)明產(chǎn)品的崩解和溶散，所以申請人進行了一系列實驗，選擇出最適合本發(fā)明藥物制劑的制備工藝、使用的輔料種類及用量、比例等；保證其科學、合理、可行；得到的制劑具有良好的崩解性能和治療效果。而現(xiàn)有巖鹿乳康制劑的質(zhì)量控制方法較為粗略，難以達到現(xiàn)代藥物質(zhì)量穩(wěn)定可控的要求。因此，需要研究巖鹿乳康制劑質(zhì)量控制的新方法。
實驗例1藥材前處理鹿銜草、鹿角霜粉碎工藝研究鹿銜草和鹿角霜分別粉碎成細粉，過80目，備用。粉碎工藝見下表。
鹿銜草粉碎工藝考察結(jié)果

從上面的數(shù)據(jù)可以看出，三次粉碎的出粉率比較接近，說明該條件是穩(wěn)定的，故鹿銜草粉碎收得率不得低于89.0％。
鹿角霜粉碎工藝考察結(jié)果

經(jīng)過上述試驗的研究可以看出，鹿角霜粉碎后過80目篩的出粉率平均在91.8％，因此確定鹿角霜出粉率不低于91％。
實驗例2提取工藝研究(1)因素選擇中藥提取效果受到溶劑種類、溶劑用量、提取時間、提取次數(shù)等因素的影響?，F(xiàn)有技術(shù)雖對提取時間、提取次數(shù)進行了考察，但是在巖陀藥材提取考察時，選取提取溶劑種類和溶劑用量未做研究。結(jié)合生產(chǎn)成本、能源等方面進行綜合考慮，選擇因素水平。
(2)指標確定選擇浸膏收得率及巖白菜素含量作為評價指標，其原由及測定方法如下①浸膏收得率浸膏是固體制劑發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，其收率高低直接影響制劑工藝，故選擇為提取指標是合理、有效的控制手段。
②含量測定浸膏收得率高低并不能完全反映有效成份提取情況，故同時測定浸膏所含的巖白菜素含量作為巖陀提取篩選指標。
(3)試驗①乙醇用量考察稱取巖陀500g，共3份，分別加入不同量的乙醇，回流提取3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，減壓干燥，稱定干膏重量，同時測定干膏中巖白菜素含量，試驗結(jié)果見下表。
溶劑用量考察結(jié)果表

由上表可知，采用8倍量與采用10倍量所得浸膏量及含量差別不大，說明加8倍量乙醇已經(jīng)可以將藥材充分提取，因此確定加水量的最佳工藝為8倍量。
(4)驗證試驗通過前面一系列的篩選，優(yōu)選出巖陀提取的工藝條件，我們對優(yōu)選后的條件組合后進行驗證試驗，結(jié)果如下表。
巖陀提取條件驗證試驗

從上表可見，巖陀提取條件比較穩(wěn)定(平均出膏率為35.81％)，所得樣品的含量也比較穩(wěn)定，說明經(jīng)過篩選的試驗條件是可行的。
實驗例3成型工藝研究3.1片劑(1)吸濕性考察原工藝中黃柏粉碎成細粉，我們對提取藥膏、藥膏加入鹿銜草和鹿角霜藥粉后的混合物料進行吸濕性考察試驗，結(jié)果見下表。
吸濕性試驗結(jié)果

通過吸濕性試驗考察，認為混合藥膏具有一定的吸濕性。
(2)流動性考察為保證分劑量準確，要求填充物料具良好的流動性，故以測定休止角方法考查混合物料的流動性。
固定漏斗法取3只漏斗串聯(lián)，最底端距水平放置坐標紙1.5cm處，小心地將填充物料沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到最下面漏斗形成的顆粒圓錐體尖端接觸到漏斗下口為止，由坐標紙測出圓錐底部的直徑，計算出休止角(tgα＝H/R/2)，計算結(jié)果見下表。
填充物料的休止角α

由上表可知，混合物料休止角＞40°，即表明混合物料流動性不好，不能滿足分裝要求。
(3)稀釋劑選擇原劑型中選用淀粉作為稀釋劑，考慮到提取的物料性質(zhì)基本相同，因此我們也選用淀粉作為稀釋劑，同時淀粉具有吸水而不潮解的性質(zhì)，可以防止物料吸潮。
(4)助流劑考察從上面的休止角測定結(jié)果可以看出，混合物料的流動性較差，為了保證膠囊填裝時分劑量準確，需要增加填充物料的流動性，為此我們對助流劑篩選。目前常用的助流劑有淀粉、滑石粉和微粉硅膠等，由于混合物料中已經(jīng)使用淀粉作為稀釋劑，故我們不再考慮再添加其用量；滑石粉可以增加潤滑性和流動性，而且具有親水性，不會影響片劑的崩解，因此我們采用滑石粉為助流劑，并對其用量進行考察，試驗結(jié)果見下表。
滑石粉用量考察表

從上面的結(jié)果可以看出，用量在1％時，對混合物料的休止角有所改進，但是還不能滿足要求，用量為4％和7％時可以達到要求，但是滑石粉用量為7％時，休止角下降的幅度不是很明顯，因此我們決定滑石粉用量為4％。
(5)崩解劑選擇經(jīng)過上述試驗的篩選，采用淀粉和滑石粉解決物料吸潮和流動性差的問題，使物料可以具有一定的防潮性和良好的流動性，但是經(jīng)過預試驗我們發(fā)現(xiàn)，壓片后片劑的崩解時間過長，因此我們對崩解劑進行考察，目前常用的崩解劑有淀粉、微晶纖維素等，由于本制劑已經(jīng)采用淀粉作為稀釋劑，同時微晶纖維素和淀粉混合應(yīng)用能加快崩解，因此確定崩解劑用微晶纖維素，并對其用量進行考察，試驗結(jié)果見下表。
崩解劑考察表

從上述試驗可以看出，加入5％或8％的崩解劑可以有效改善片劑的崩解時間，但是8％的崩解劑相對5％的崩解劑來說，崩解時間下降幅度不明顯，為了盡可能少服用輔料，我們選用5％的崩解劑。
(6)包衣條件考察由于中藥提取物具有一定的不良氣味，為了掩蓋不良的氣味，使患者易于吞服，同時使樣品的外觀得到改善，我們決定對素片進行包薄膜衣，經(jīng)過調(diào)研，我們選用歐巴代2進行包衣。
①包衣液選擇為了保證片劑包衣后的質(zhì)量，特對包衣用輔料歐巴代2的用量進行了考察。按照上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司提供的歐巴代2的配制方法，稱取所需要量的歐巴代2固體粉末，在配制容器中加入所需量的水，將攪拌漿放置在容器的中央，并盡量靠近容器的底部。攪拌溶液使其形成一個漩渦，同時避免卷入過多空氣。將歐巴代粉末均勻地加入，同時盡量避免粉末漂浮在液體表面。必要時，可以提高轉(zhuǎn)速以保持適當?shù)匿鰷u，待所有歐巴代全部加入后，降低攪拌速度，使漩渦消失，繼續(xù)攪拌45分鐘即可。
②包薄膜衣素片要求片芯光滑，無卷邊，無細粉，無碎片，硬度在3.5kg～4.5kg，將符合要求的素片放置于包衣鍋內(nèi)，開啟包衣鍋，點動預熱，選擇進風溫度為60℃左右，使片芯溫度預熱到45℃左右。開啟包衣鍋，以3轉(zhuǎn)/分鐘的速度轉(zhuǎn)動，啟動空氣壓縮機，用噴槍噴灑包衣液，1小時后，提高轉(zhuǎn)速至8～10轉(zhuǎn)/分鐘，直到包衣液完全噴完，降低轉(zhuǎn)速，干燥，冷卻即可。
包衣材料用量考察

由上表可見包衣材料用量為6％時，所得薄膜衣均勻、光滑。因此薄膜衣包材用量確定為6％。
3.2微丸劑(1)包衣材料的用量試驗號包衣粉用量 包衣片外觀1 3％包衣片的衣層欠均勻2 4％包衣片的衣層顏色均勻完整3 5％包衣片的衣層均欠均勻(2)包衣工藝的篩選參數(shù) 工藝I 工藝II 工藝III工藝IV流速(g/min)110-140150-180230-250270-300進風溫度(℃) 95-98 85-88 88-85 85-80鍋體轉(zhuǎn)速(r/min)2-44-67-910-12不同工藝微丸質(zhì)量變化工藝平均溶出度(％)平均水分總重(kg)包材利用率(％)工藝I 包衣前95.73.40100包衣后81.42.76102.4 55.80
工藝II包衣前94.33.33100包衣后90.82.26103.259.56工藝III 包衣前94.03.15100包衣后82.62.48102.370.11工藝IV包衣前93.93.03100包衣后67.32.79105.775.15實驗結(jié)果可知，最佳包衣工藝4％80W型歐巴代為包衣材料，包衣液噴入速度為150～180g/min，進風溫度為控制在85～88℃之間，鍋體轉(zhuǎn)速控制在4～6/min，對藥物溶出的影響最小。
(3)加速試驗和常溫留樣檢驗結(jié)果本發(fā)明微劑 膠囊劑崩解時限(min) 外觀鑒別崩解時限(min)外觀鑒別加速試驗1個月26 良好24 良好加速試驗2個月29 良好25 良好加速試驗3個月30 良好29 內(nèi)容物少量吸潮、粘結(jié)常溫貯存2年 30 良好28 吸潮、粘結(jié)實驗例4藥效學實驗取雌性成年未孕大鼠，體重250±20g，經(jīng)連續(xù)陰道脫落細胞涂片3周期檢查，選擇動情周期規(guī)律者進行實驗。
取實驗動物己烯雌酚注射液后肢外側(cè)肌肉注射，每次0.2mg，每天1次，共30天，總劑量為每只6mg。檢查乳房外觀及乳腺病理改變。見造模大鼠乳頭直徑、長度顯著增加。取腹部近尾端3對乳腺進行病理切片檢查，見乳腺導管腔擴大，管腔中充滿分泌物。乳腺腺泡數(shù)目明顯增多。上皮細胞增生，呈復層或假復層狀排列。證明造模成功。
取大鼠70只，隨機分為7組，每組10只，處理如下正常組，蒸餾水灌胃，每只2ml/d；模型組，造模同時每天蒸餾水灌胃1次，每次2ml；巖鹿乳康膠囊組、本發(fā)明產(chǎn)品組，乳腺增生造模同時分別加用相關(guān)藥物灌胃，劑量為成人常規(guī)劑量的10倍，每天1次，每次2ml。各組大鼠連續(xù)灌藥30天，停藥1周后，于動情期間每組隨機抽取7只大鼠乳腺，-70℃液氮凍存，待測雌二醇受體(ER)、孕酮受體(PR)；每組剩余3個乳腺標本，10％中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色，行病理檢查(采用光學顯微鏡)。采用放射配基結(jié)合分析法測定雌孕激素受體，用Lowry法測定樣本蛋白濃度，受體含量以fmol/mg表示。
(1)對乳腺增生模型大鼠乳腺重量指數(shù)的影響給成年大鼠較長期大劑量肌肉注射己烯雌酚造成大鼠乳腺組織增生的模型，對每組隨機抽取的7對乳腺進行重量指數(shù)(mg/100g體重)比較，結(jié)果見下表。
對大鼠乳腺重量指數(shù)的影響

(2)對乳腺增生模型大鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)的影響與正常大鼠乳腺組織比較，模型組全部3只大鼠乳腺標本都有腺泡數(shù)量明顯增加，上皮增生呈假復層現(xiàn)象，嚴重者甚至堵塞導管；導管擴張，內(nèi)含大量分泌物；周圍反應(yīng)性間質(zhì)明顯減少，染色變深，膠原增生，失去疏松狀態(tài)。而加藥各組腺泡有增生，但程度明顯輕于模型組，各加藥組間無明顯差別。
(3)對乳腺增生模型大鼠乳腺雌、孕激素受體的影響具體結(jié)果見下表。表中EcR Bmax表示大鼠乳腺胞漿雌二醇受體數(shù)量，EnR Bmax表示胞核雌二醇受體數(shù)量，EnR/EcR表示胞核/胞漿雌二醇受體比值；PcR Bmax表示大鼠乳腺胞漿孕二醇受體數(shù)量，PnR Bmax表示胞核孕二醇受體數(shù)量，PnR/PcR表示胞核/胞漿孕二醇受體比值；Kd表示受體親和力，Kd值越小，親和力越高。
對乳腺增生模型大鼠乳腺雌激素受體的影響

對乳腺增生模型大鼠乳腺孕激素受體的影響

以上實驗結(jié)果顯示，造模動物在使用巖鹿乳康膠囊、本發(fā)明產(chǎn)品后乳腺重量指數(shù)明顯下降，乳腺組織結(jié)構(gòu)明顯改善；同時，能使雌、孕激素核/漿受體比值均接近正常，從而增強機體平衡自穩(wěn)調(diào)節(jié)系統(tǒng)功能，減弱了大量雌激素造成的不良刺激，維護了機體的平衡穩(wěn)定；且本發(fā)明產(chǎn)品的作用優(yōu)于巖鹿乳康膠囊。
實驗例5片劑中巖白菜素的薄層鑒別本實驗的目的是為了突出巖陀的特征，為排除制劑中與巖陀所含成分類似的其它成分的干擾，試驗者對樣品提取、展開系統(tǒng)、顯色方法等分別進行了比較試驗。經(jīng)過篩選，確定了最佳方法與條件以甲醇為樣品提取溶劑；以硅膠GF254薄層板為固定相，氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)為展開劑；置紫外燈(254nm)下檢視；在此條件下，樣品與對照品均分離清晰，陰性無干擾。實驗中幾種展開系統(tǒng)的展開效果比較見下表片劑中巖陀、巖白菜素的薄層鑒別

實驗例6片劑中巖白菜素的含量測定試驗以巖白菜素為對照品，用Alltech P426高效液相色譜儀，確立了巖鹿乳康片中巖白菜素的含量測定的最佳方法色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(18∶82)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品10片，除去包衣，研細混勻，從中取約0.4g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)40分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于6.0mg。
該方法分別通過了以下1～10項方法學考察試驗1檢測波長的選擇巖白菜素對照品溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，巖白菜素在275nm處有較大吸收，因此選擇275nm作為測定巖鹿乳康片劑中巖白菜素含量的檢測波長。
2系統(tǒng)適應(yīng)性試驗根據(jù)以上儀器條件，得到巖白菜素對照品、樣品色譜圖，其理論塔板數(shù)以巖白菜素計不低于2000。
3陰性干擾排除試驗為考察其它藥材和輔料是否干擾巖白菜素的測定，除巖白菜素外，按處方比例稱取其它藥材和輔料同法制成陰性對照品溶液并測定。結(jié)果表明，陰性樣品對巖白菜素的含量測定無干擾。
4線性關(guān)系的考察精密量取巖白菜素對照品不同濃度的溶液，注入液相色譜儀，提取液照中國藥典公開的高效液相色譜法測定。以巖白菜素的進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標做圖，繪制標準曲線。見下表。
巖白菜素線性關(guān)系

回歸方程Y＝902868X-937.7相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明，巖白菜素在0.3074μg～1.5370μg范圍之內(nèi)線性關(guān)系良好。
5樣品提取時間的選擇取本品10片，除去包衣，研細混勻，從中取約0.4g(共4份)，精密稱定，分置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)20、30、40、50分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。見下表。
樣品提取時間的選擇

結(jié)果表明，超聲處理40min即可提取完全，因此提取時間定為40分鐘。
6精密度試驗精密吸取巖白菜素對照品溶液5μl，注入液相色譜儀，重復測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見下表。
精密度試驗

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
7穩(wěn)定性試驗7.1對照品穩(wěn)定性試驗分別在0、2、6、10、24小時精密吸取同一份巖白菜素對照品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定結(jié)果見下表。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明，對照品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品溶液穩(wěn)定性試驗分別在0、2、6、10、24小時精密吸取同一份供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定結(jié)果見下表。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復性試驗取本品10片，除去包衣，研細混勻，從中取約0.4g(共5份)，精密稱定，按正文供試品溶液制備和測定項下進行操作。結(jié)果見下表。
重復性試驗

結(jié)果表明，重復性良好。
9加樣回收率試驗取重量差異項下本品，研細，從中取約0.2g(共6份)，精密稱定，分置50ml棕色量瓶中；取巖白菜素對照品約3.2mg、4.0mg、4.8mg(各2份)，精密稱定，分置上述50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)40分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。測定結(jié)果見下表。巖鹿乳康片中巖白菜素量19.762mg/g巖白菜素加樣回收率試驗

巖白菜素平均回收率＝97.97％，RSD＝0.95％；10樣品含量測定按正文供試品溶液的制備和測定法項下操作，測定十批樣品，結(jié)果見下表。
十批樣品含量測定結(jié)果


結(jié)論根據(jù)10批樣品含量測定結(jié)果暫定，本品每片含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于6.0mg。本品一日用劑量片劑中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于54mg。
具體的實施方式本發(fā)明的實施例1巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纖維素，干燥，粉碎，過篩，壓片，包衣，包衣材料為歐巴代2，用量為6％，即得片劑，本產(chǎn)品口服，一次3～5片，一日3次；飯后服用。
本發(fā)明的實施例2巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量的淀粉，用70％乙醇和1.2％大豆油制軟材，制好的軟材用微丸機制丸，濕料擠壓過0.8mm篩孔，條狀濕粒切斷滾圓，50～60℃干燥成型，過16～20目篩選丸或者合并上述四種清膏，噴霧干燥，濕粉制粒起模，將模子置于包衣鍋內(nèi)加大成丸，藥粉∶水為1∶1.5，包衣鍋轉(zhuǎn)速為40r/min，蓋面，選丸，包衣，4％80W型歐巴代為包衣材料，包衣液噴入速度為150～180g/min，進風溫度為控制在85～88℃之間，鍋體轉(zhuǎn)速控制在4～6/min，即得微丸劑。
本發(fā)明的實施例3巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入10％碳酸氫鈉、12％枸櫞酸、1％阿司帕坦分別粉碎，與藥粉混合均勻，制粒，干燥，壓片，包衣，包衣材料內(nèi)層使用PVP加鈦白粉、外層使用丙烯酸樹脂II，片床溫度40℃時，噴射速度6.0ml/kg·min，即得泡騰片劑。
本發(fā)明的實施例4巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入蒸餾水，即得口服液。
本發(fā)明的實施例5巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入卡波姆，制成凝膠劑。
本發(fā)明的實施例6巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g取巖陀，加8倍80％乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入羧甲基纖維素鈉，壓片，制成分散片。
本發(fā)明的實施例7膠囊中巖陀、巖白菜素的鑒別取待測巖鹿乳康膠囊內(nèi)容物適量，從中稱取0.5g，加乙醇20ml，超聲10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；巖陀藥材，同法制成對照藥材溶液；另取巖白菜素對照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸丁酯-甲酸(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例8微丸中巖陀的鑒別取待測巖鹿乳康微丸適量，從中稱取0.6g，加甲醇20ml，溫浸10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；巖陀藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸丁酯-乙酸(3∶7∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例9片劑中巖白菜素的鑒別取本品，研細，從中稱取0.4g，加甲醇3ml，振搖30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液3μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例10膠囊劑中巖白菜素的含量測定取待測巖鹿乳康膠囊內(nèi)容物適量，混勻，從中取適量精密稱定，加乙醇回流取，放至室溫，補足損失的乙醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加乙醇制成對照品溶液；用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水(10∶90)為流動相，檢測波長為365nm，以外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康制劑含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康膠囊中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于27mg。
實施例11微丸中巖白菜素的含量測定取待測巖鹿乳康微丸內(nèi)容物適量，混勻，從中取適量精密稱定，加甲醇超聲提取，放至室溫，補足損失的甲醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成對照品溶液；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水(15∶85)為流動相，檢測波長為276nm，以外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康微丸含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康微丸中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于54mg。
實施例12片劑中巖白菜素的含量測定取重量差異項下本品，研細，從中取約0.4g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)40分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；另取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(18∶82)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應(yīng)不低于2000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。以外標一點法進行計算，一日用巖鹿乳康微丸中含巖陀以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于54mg。
權(quán)利要求
1.一種治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑，其特征在于它主要由巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g或用相應(yīng)重量份它們的提取物制作成泡騰片、注射液、粉針、凍干粉針、凝膠劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、凝膠劑、口服液體制劑、煎膏劑、浸膏劑或膜劑。
2.按照權(quán)利要求1所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑，其特征在于所述的制劑是片劑、顆粒劑或微丸劑。
3.如權(quán)利要求1或2所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的制備方法，其特征在于取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，然后分別制成不同的制劑。
4.按照權(quán)利要求3所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的制備方法，其特征在于所述制劑中的片劑這樣制備取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量淀粉、4％滑石粉和5％微晶纖維素，干燥，粉碎，過篩，壓片，包衣，包衣材料為歐巴代2，用量為6％，即得。
5.按照權(quán)利要求3所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的制備方法，其特征在于所述制劑中的微丸劑這樣制備取巖陀，加8倍乙醇回流3次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃時相對密度為1.20的清膏，備用；另取鹿銜草、鹿角霜分別粉碎成細粉，與上述巖陀清膏混勻，加入適量的淀粉，用70％乙醇和1.2％大豆油制軟材，制好的軟材用微丸機制丸，濕料擠壓過0.8mm篩孔，條狀濕粒切斷滾圓，50～60℃干燥成型，過16～20目篩選丸或者合并上述四種清膏，噴霧干燥，濕粉制粒起模，將模子置于包衣鍋內(nèi)加大成丸，藥粉∶水為1∶1.5，包衣鍋轉(zhuǎn)速為40r/min，蓋面，選丸，包衣，4％80W型歐巴代為包衣材料，包衣液噴入速度為150～180g/min，進風溫度為控制在85～88℃之間，鍋體轉(zhuǎn)速控制在4～6/min，即得。
6.如權(quán)利要求1或2所述的治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)巖陀、巖白菜素中全部或部分的鑒別測試方法；(2)巖白菜素的含量測試方法。
7.按權(quán)利要求6所述的巖鹿乳康制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述制劑的鑒別方法包括對巖陀、巖白菜素中一種或兩種的鑒別取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，加甲醇或乙醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；取巖陀對照藥材，同法制成對照藥材溶液；取巖白菜素對照品，加甲醇或乙醇溶解，制成對照品溶液，吸取供試品溶液與對照品溶液1～30μl，分別點于同一硅膠GF25薄層板或硅膠G薄層板或硅膠H薄層板上，以氯仿或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸＝1～5∶1～4∶0～2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材或?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
8.按權(quán)利要求7所述的巖鹿乳康制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述制劑的鑒別方法包括對巖陀、巖白菜素中一種或兩種的鑒別取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，從中稱取0.4g，加甲醇3ml，振搖30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；巖陀藥材，同法制成對照藥材溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液3μl，對照品或?qū)φ账幉娜芤?0μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸＝5∶4∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
9.按權(quán)利要求6所述的巖鹿乳康制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述制劑的含量測定方法為巖白菜素的含量測定取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，混勻，從中取適量精密稱定，加甲醇或乙醇提取，放至室溫，補足損失的甲醇或乙醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇或乙醇制成對照品溶液；用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水＝5～30∶60～95為流動相，檢測波長為190～410nm中的一個或幾個；以標準曲線法或外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康制劑含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康制劑中含巖陀以巖白菜素C14H16O9計，不得少于27mg。
10.按權(quán)利要求9所述的巖鹿乳康制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述制劑的含量測定方法為巖白菜素的含量測定取待測巖鹿乳康制劑內(nèi)容物適量，混勻，從中取約0.4g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量，在功率為250W，頻率為33KHz下超聲處理40分鐘，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密稱取巖白菜素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝18∶82為流動相，檢測波長為275nm；以外標一點法進行計算，待測巖鹿乳康制劑含量限度應(yīng)為一日用巖鹿乳康制劑中含巖陀以巖白菜素C14H1609計，不得少于54mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療乳腺增生的巖鹿乳康藥物制劑及制法和質(zhì)量控制方法，它主要由巖陀445g、鹿銜草62.5g、鹿角霜7.5g或用相應(yīng)重量份它們的提取物制作而成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制劑具有軟堅散結(jié)的功效，用于治療腎陽不足、氣滯血淤所致的乳腺增生、療效顯著；產(chǎn)品中包括具有攜帶方便、口感良好等特點的薄膜衣片和顆粒劑，以及具有吸收均勻而有規(guī)則，吸收完全，生物利用度高，同時外形美觀、流動性好、釋藥穩(wěn)定、局部刺激性小等特點的包衣微丸制劑；提供的制備方法和質(zhì)量控制方法能夠比較好的指導企業(yè)工業(yè)化生產(chǎn)；能保證產(chǎn)品質(zhì)量；克服了現(xiàn)有技術(shù)、產(chǎn)品存在的問題。
文檔編號G01N33/15GK1876000SQ20061020042
公開日2006年12月13日 申請日期2006年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月12日
發(fā)明者周霞 申請人:貴陽云巖西創(chuàng)藥物科技開發(fā)有限公司