專利名稱：一種白芷藥材水提液指紋圖譜及其建立方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種指紋圖譜，特別涉及一種白芷藥材水提液指紋圖譜及其建立方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中藥是多種成分針對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)疊加起作用，而目前的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是以某種特定成分為指標(biāo)，隨著中藥研究的現(xiàn)代化，中藥的質(zhì)量研究逐漸從單一有效成分或指標(biāo)成分的定性定量分析轉(zhuǎn)向有效成分群分析。目前對(duì)白芷的質(zhì)量控制僅限于對(duì)白芷中歐前胡素和異歐前胡素進(jìn)行含量測(cè)定。因此，白芷藥材的質(zhì)量控制，除要建立有效成分歐前胡素、異歐前胡素的含量測(cè)定方法，制定含量測(cè)定限度外，建立指紋圖譜分析方法，更有利于全面掌握藥材的質(zhì)量。中藥指紋圖譜技術(shù)對(duì)增加中藥質(zhì)控含量，提高中藥工業(yè)整體水平，實(shí)現(xiàn)中藥走向世界，具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。
指紋圖譜的作用主要是反應(yīng)復(fù)雜成分的中藥及其制劑內(nèi)在質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。以指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用為中心，促進(jìn)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)代化。國(guó)家藥監(jiān)局已從中藥注射劑開始，要求企業(yè)逐步建立指紋圖譜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并將逐步擴(kuò)大指紋圖譜技術(shù)的應(yīng)用范圍。結(jié)合《中華人民共和國(guó)藥典》(2005年版)，將進(jìn)一步修改和完善中藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，增加中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，體現(xiàn)中藥標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)代化。
目前，白芷藥材水提液指紋圖譜還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種白芷藥材水提液指紋圖譜，對(duì)白芷藥材進(jìn)行質(zhì)量控制。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述白芷藥材水提液指紋圖譜的建立方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供上述白芷藥材水提液指紋圖譜的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種白芷藥材水提液指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟(1)白芷藥材的提取精密稱取10g白芷粉末，加去離子水150ml，煎煮10～15min后過(guò)濾，濾液濃縮至100ml，再經(jīng)0.45um的濾膜過(guò)濾，得到濾液作為供試品溶液，供HPLC(高效液相色譜方法)分析。
(2)白芷藥材指紋圖譜的建立精密吸取供試品溶液20ul，采用高效液相色譜方法進(jìn)行測(cè)定，色譜條件Lichrospher5-C18(250mm×4.6mm)色譜柱，以甲醇-水為流動(dòng)相系統(tǒng)，波長(zhǎng)254nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20ul，得到白芷藥材水提液指紋圖譜。
為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，所述甲醇-水流動(dòng)相系統(tǒng)0～5min，5％～20％甲醇；5～15min，20％甲醇；20～30min，20％～70％甲醇；20～30min，70％甲醇；30～40min，70％～90％甲醇，上述甲醇按體積百分比計(jì)。
一種白芷藥材水提液指紋圖譜就是通過(guò)上述方法得到。
所述白芷藥材水提液指紋圖譜是由11個(gè)共有指紋峰構(gòu)成的。
由于6號(hào)峰與相鄰色譜峰分離較好，峰位較為居中，各樣品中所共有且已鑒定出分子量(分子量為151)，故選取供試品色譜峰中的6號(hào)峰為參照峰。以6號(hào)峰為參照，其色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，制定了白芷藥材水提液指紋圖譜相應(yīng)的技術(shù)參數(shù)，計(jì)算了其相對(duì)保留時(shí)間，相對(duì)峰面積值，并總結(jié)出了每個(gè)共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間范圍，相對(duì)峰面積范圍，作為白芷藥材指紋圖譜分析法的參考數(shù)據(jù)。
所述白芷藥材水提液指紋圖譜的11個(gè)共有指紋峰(特征峰)，各共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.213～0.218；2號(hào)峰0.562～0.565；3號(hào)峰0.713～0.716；4號(hào)峰0.764～0.828；5號(hào)峰0.860～0.0.864；6號(hào)峰1；7號(hào)峰1.904～1.966；8號(hào)峰2.004～2.133；9號(hào)峰2.206～2.222；10號(hào)峰2.288～2.300；11號(hào)峰2.341～2.361。
各共有指紋峰相對(duì)峰面積范圍分別為1號(hào)峰0.742～1.881；2號(hào)峰0.534～1.289；3號(hào)峰0.482～1.609；4號(hào)峰0.485～2.574；5號(hào)峰0.229～1.901；6號(hào)峰1；7號(hào)峰0.354～3.659；8號(hào)峰0.107～1.163；9號(hào)峰0.165～1.824；10號(hào)峰0.064～0.403；11號(hào)峰0.172～2.696。
上述白芷藥材水提液指紋圖譜在白芷藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用?？捎糜趯?duì)白芷進(jìn)行整體的質(zhì)量控制，也可作為測(cè)定白芷中化學(xué)組分的方法和白芷藥材的鑒別。
本發(fā)明所用的白芷藥材為傘形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.et Hook.f或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.var.formosana(Boiss.)Shanet Yuan的干燥根，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿等功效，是臨床常用的解表中藥之一。
本發(fā)明根據(jù)全國(guó)白芷主產(chǎn)區(qū)的13個(gè)不同產(chǎn)地白芷藥材，采用HPLC技術(shù)，首次建立了白芷藥材水提液的指紋圖譜包括白芷藥材的提取，指紋圖譜的建立方法和白芷藥材水提液指紋圖譜的特征。本發(fā)明建立的指紋圖譜重復(fù)性高、穩(wěn)定性好，可用于對(duì)白芷進(jìn)行整體的質(zhì)量控制，也可作為測(cè)定白芷中化學(xué)組分的方法和白芷藥材的鑒別。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果通過(guò)對(duì)13批不同產(chǎn)地白芷藥材進(jìn)行測(cè)定，確定了11個(gè)共有指紋峰。應(yīng)用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)2號(hào)峰，6號(hào)峰，11號(hào)峰進(jìn)行了鑒定。以6號(hào)峰為參照，制定了白芷水提液指紋圖譜相應(yīng)的技術(shù)參數(shù)，計(jì)算了其相對(duì)保留時(shí)間，相對(duì)峰面積值，并總結(jié)出了每個(gè)共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間范圍，相對(duì)峰面積范圍，作為白芷指紋圖譜分析法的參考數(shù)據(jù)。并從白芷藥材整體色譜圖入手，選取特征峰，并大致判斷其峰位和比例關(guān)系，構(gòu)成白芷藥材特有的色譜指紋圖譜全貌，使白芷藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)從原有的某幾個(gè)成份含量的測(cè)定，上升為對(duì)整個(gè)藥品內(nèi)在品質(zhì)的檢測(cè)，避免了單一的化學(xué)成分檢測(cè)的缺陷。


圖1為13個(gè)不同產(chǎn)地白芷水提液指紋圖譜(1-11號(hào)共有指紋峰)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
實(shí)施例1(1)白芷藥材的提取精密稱取10g白芷粉末，加去離子水150ml，煎煮10min，采用普通濾紙過(guò)濾，濾液濃縮至100ml，過(guò)0.45um的濾膜，濾液作為供試品溶液供HPLC分析。分別制得13個(gè)不同產(chǎn)地(見(jiàn)表6)的白芷藥材的供試品溶液。
(2)指紋圖譜的建立精密吸取供試品溶液20ul，采用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定，以甲醇-水為流動(dòng)相系統(tǒng)，柱溫30℃，波長(zhǎng)254nm，0～5min，5％～20％甲醇；5～15min，20％甲醇；20～30min，20％～70％甲醇；20～30min，70％甲醇；30～40min，70％～90％甲醇，上述甲醇按體積百分比計(jì)；流速1ml/min，Lichrospher5-C18(250mm×4.6mm)色譜柱，記錄時(shí)間40min為最佳色譜條件(如表1所示)，建立了13個(gè)不同產(chǎn)地(如表6所示)的白芷藥材水提液的指紋圖譜，確立了11個(gè)共有指紋峰。如圖1所示。
表1 流動(dòng)相梯度

(3)13個(gè)不同產(chǎn)地白芷色譜圖色譜峰自動(dòng)匹配后生成對(duì)照樣品譜圖，然后依此為參考譜圖，比較13個(gè)不同產(chǎn)地白芷譜圖與之的相似度，各產(chǎn)地水提液譜圖之間的相似度根據(jù)全譜圖相關(guān)系數(shù)法在0.81以上，根據(jù)夾角余弦法(全圖譜)相似度均在0.85以上。如表5所示。
以6號(hào)峰為參照，計(jì)算各共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間，相對(duì)峰面積，見(jiàn)表2、表3、表4所示表2 各共有指紋峰相對(duì)峰面積


表3 各共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間值

表4指紋圖譜中共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積范圍


表5 13個(gè)不同產(chǎn)地白芷相似度分析結(jié)果

表6 實(shí)驗(yàn)用樣品來(lái)源及品系

如上所述，可較好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.一種白芷藥材水提液指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟(1)白芷藥材的提取精密稱取10g白芷粉末，加去離子水150ml，煎煮10～15min后過(guò)濾，濾液濃縮至100ml，再經(jīng)0.45um的濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液；(2)白芷藥材指紋圖譜的建立精密吸取供試品溶液20ul，采用高效液相色譜方法進(jìn)行測(cè)定，色譜條件Lichrospher5-C18色譜柱；以甲醇-水為流動(dòng)相系統(tǒng)，波長(zhǎng)254nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20ul，得到白芷藥材水提液指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白芷藥材水提液指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述甲醇-水流動(dòng)相系統(tǒng)0～5min，5％～20％甲醇；5～15min，20％甲醇；20～30min，20％～70％甲醇；20～30min，70％甲醇；30～40min，70％～90％甲醇，上述甲醇按體積百分比計(jì)。
3.一種白芷藥材指紋圖譜通過(guò)權(quán)利要求1或2所述方法得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白芷藥材水提液指紋圖譜，其特征在于，所述白芷藥材水提液指紋圖譜是由11個(gè)共有指紋峰構(gòu)成的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白芷藥材水提液指紋圖譜，其特征在于，所述白芷藥材指紋圖譜的11個(gè)共有指紋峰的各共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.213～0.218；2號(hào)峰0.562～0.565；3號(hào)峰0.713～0.716；4號(hào)峰0.764～0.828；5號(hào)峰0.860～0.0.864；6號(hào)峰1；7號(hào)峰1.904～1.966；8號(hào)峰2.004～2.133；9號(hào)峰2.206～2.222；10號(hào)峰2.288～2.300；11號(hào)峰2.341～2.361；各共有指紋峰相對(duì)峰面積范圍分別為1號(hào)峰0.742～1.881；2號(hào)峰0.534～1.289；3號(hào)峰0.482～1.609；4號(hào)峰0.485～2.574；5號(hào)峰0.229～1.901；6號(hào)峰1；7號(hào)峰0.354～3.659；8號(hào)峰0.107～1.163；9號(hào)峰0.165～1.824；10號(hào)峰0.064～0.403；11號(hào)峰0.172～2.696。
6.權(quán)利要求3所述的白芷藥材水提液指紋圖譜在白芷藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種白芷藥材水提液指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜和應(yīng)用。該方法包括白芷藥材的提取，白芷藥材水提液HPLC指紋圖譜的建立。通過(guò)對(duì)13批不同產(chǎn)地白芷藥材進(jìn)行測(cè)定，確定了11個(gè)共有指紋峰。本發(fā)明建立的白芷藥材水提液指紋圖譜重復(fù)性高，可作為測(cè)定白芷中化學(xué)組分的方法，也可作為白芷藥材的鑒別和質(zhì)量控制方法。
文檔編號(hào)G01N30/00GK1903237SQ200610036858
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月31日
發(fā)明者聶紅, 張慧, 羅勇 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)