亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

一種抗炎止血中藥組合物及其制備方法

文檔序號(hào):5820194閱讀:730來源:國知局
專利名稱:一種抗炎止血中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域,具體而言,本發(fā)明涉及一種抗炎止血中藥組合物。本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法和檢測(cè)方法。
背景技術(shù)
婦科炎癥和出血是一種常見、多發(fā)病,國內(nèi)、外在治療上述疾病的辦法均是使用大量的抗菌素,如青霉素、外用軟膏、松劑等,也有部分中藥復(fù)方制劑。合成抗菌消炎藥在臨床使用時(shí),只能達(dá)到緩解癥狀的目的,而不能徹底治愈,并且容易復(fù)發(fā)。另外由于大劑量藥物的作用,往往在患者的體內(nèi)產(chǎn)生副作用,使內(nèi)分泌嚴(yán)重失調(diào),使病情加重本發(fā)明的目的是針對(duì)上述已有藥物的缺點(diǎn),研制出一種完全由中草藥配制的口服藥物及其制備方法。本發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)篩選和驗(yàn)證從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種療效確切并且藥味精簡(jiǎn)的婦科抗炎止血中藥組合物。
本發(fā)明的又一目的是提供該藥物的制備工藝。
本發(fā)明藥物是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的賦形劑組成,其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的32~60%、小薊16~30%、廣東紫珠、荷葉各為10~20%。
為了獲得更好的療效,優(yōu)選原料用量為
大薊39~53%、小薊20~27%;廣東紫珠、荷葉各為13~18%。
為了獲得最佳療效,原料用量最佳為大薊46.2%、小薊23.1%;廣東紫珠、荷葉各為15.4%。
其中所述的中藥原料為大薊為菊科植物薊Cirsium japonicum DC.的干燥地上部分或根。
小薊為菊科植物刺兒菜Cirsium setosum(Willd)MB.的干燥地上部分,均為多年生草本,為中醫(yī)治病的常用中藥。均具有涼血止血,祛瘀消腫的功效。用于吐血、尿血、便血、崩漏下血、外傷出血。大薊、小薊主要含有黃銅類、揮發(fā)油等化學(xué)成份。
廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠Gallicarpa kwtungensis Chun.的莖枝及葉,功效為收斂止血,清熱解毒,用于吐血、尿血、便血、崩漏下血、外傷出血。廣東紫珠主要含有黃酮類等化學(xué)成份。
荷葉為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉。能清熱解署,升發(fā)清陽,涼血止血。用于暑熱煩渴,署濕泄瀉,便血崩漏,荷葉主要含有生物堿類等化學(xué)成份。
如果本發(fā)明藥物的有效成分是水提物,優(yōu)選后由以下方法制得將大薊、小薊、廣東紫珠和荷葉加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏。
通過對(duì)本中成藥的制備工藝的藥理實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究,確定取大薊600g、小薊300g、廣東紫珠200g、荷葉200g,加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏。
本發(fā)明藥物的提取物可以與藥學(xué)上可接受的各種賦形劑按照不同劑型制備方法制備成各種劑型如片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、糖漿劑、合劑、口服液劑、膏劑等。
提取工藝的優(yōu)選研究資料1樣品的制備本方藥材中分別含蒙花苷,柳穿魚葉苷,蕓香苷,原兒荼酸、綠原酸,咖啡酸,齊墩果酸,熊果酸,荷葉堿,蓮堿及O-去甲基荷葉堿等,上述化學(xué)成分大多數(shù)以水溶性為主,也含醇溶性成分,因此,我們根據(jù)生產(chǎn)是通常以水煎煮提取和醇回流提取實(shí)際情況,取一個(gè)處方藥材分別煎煮提取和回流提取。
煎煮提取取大薊600g、小薊300g、、荷葉200g廣東紫珠200g加9倍量水煎煮提取2次,每次煎煮提取3小時(shí),濾過,濃縮至每1ml含生藥1mg,作為供試品1。
回流提取取大薊600g、小薊300g、、荷葉200g廣東紫珠200g加5倍量70%乙醇回流提取2次,每次提取3小時(shí),濾過,濃縮至每1ml含生藥1mg,作為供試品2。
2藥效學(xué)預(yù)實(shí)驗(yàn)2.1.剪尾法測(cè)小鼠出血時(shí)間及玻片法測(cè)凝血時(shí)間2.1.1動(dòng)物KM小鼠,雌雄各半共120只,體重15~20g,購自江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
2.1.2實(shí)驗(yàn)器材眼科剪,秒表,大頭針,玻片,脫脂棉球。
3.2.1.3實(shí)驗(yàn)用藥陽性藥為斷血流顆粒(10g/袋,安徽省天康藥業(yè)有限公司批號(hào)030303);受試藥物為薊荷止血片水提液、醇提液。
2.1.4實(shí)驗(yàn)過程
2.1.4.1小鼠按體重隨機(jī)分為空白、陽性藥、薊荷止血片水提液低、中和高劑量、醇提液低、中和高劑量共8組。
2.1.4.2各組動(dòng)物分別灌胃給與生理鹽水和藥物共4天。最后一次給藥后0.5h,用眼科剪剪去鼠尾約3mm,待血液自然流出開始計(jì)時(shí),每隔15秒左右用濾紙輕輕吸去血液,至出血自然止住結(jié)束,此時(shí)間即為出血時(shí)間(結(jié)果見表1)。凝血時(shí)間測(cè)定則是小鼠眼眶采血滴一滴到清潔玻片,血滴直徑約5mm,立即計(jì)時(shí),每隔15秒左右用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)一次,看有無血絲挑起,從采血開始至挑起血絲的時(shí)間即為凝血時(shí)間(結(jié)果見表2)。
表1 薊荷止血片對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響

注與空白組比較,*P<0.01,與陽性組比較,▲P<0.05▲▲P<0.01。下同表2 薊荷止血片對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響

表1結(jié)果表明,各給藥組的止血時(shí)間與空白組均有顯著差異,其中以水提液高劑量組最顯著;與陽性組比較,水提液高劑量組、醇提液高劑量組均有顯著性差異。
表2結(jié)果表明,各給藥組的凝血時(shí)間與空白組均有顯著差異;同樣以水提液高劑量組最顯著;與陽性組比較,水提液高劑量組、醇提液高劑量組均有顯著性差異。
2.2.大鼠血漿復(fù)鈣試驗(yàn)2.2.1動(dòng)物SD大鼠,雌42只、雄性43只,共85只,體重180~200g,購自江西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
2.2.2實(shí)驗(yàn)器材秒表,加樣器,離心機(jī),恒溫水浴鍋。
2.2.3實(shí)驗(yàn)用藥及試劑陽性藥為斷血流顆粒(10g/袋,安徽省天康藥業(yè)有限公司批號(hào)030303);受試藥物為薊荷止血片水提液、醇提液。1.25%CaCl2溶液,枸櫞酸鈉(38mg/ml)。
2.2.4實(shí)驗(yàn)過程2.2.4.1大鼠按體重隨機(jī)分成空白、陽性藥、薊荷止血片水提液低、中和高劑量、醇提液低、中和高劑量共8組。
2.2.4.2各組動(dòng)物分別灌胃給與生理鹽水和藥物共5天。最后一次給藥后0.5h,大鼠靜脈取血4.5ml裝入含有0.5ml枸櫞酸鈉的試管中,混勻。1000rpm離心10min,取血漿備用??瞻自嚬?支,每管分別加入0.1ml血漿和0.1ml生理鹽水,搖勻即放入37℃水浴鍋孵育1min后,再加入0.1ml1.25%CaCl2溶液,混勻。重新放入水浴鍋并立即計(jì)時(shí)直至出現(xiàn)彌漫白色顆粒時(shí)為止,取兩管時(shí)間的平均值,即為大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間(結(jié)果見表3)。
表3 薊荷止血片對(duì)大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間的影響

表3結(jié)果表明,各給藥組的大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間與空白組均有顯著差異;以醇提液的中、高劑量組最顯著;與陽性組比較,水提液的中、高劑量組、醇提液的低、中和高劑量組均有顯著性差異。
3結(jié)論以上3個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果表明水提取與醇回流提取藥液對(duì)小鼠出血時(shí)間、凝血時(shí)間和大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間均有顯著的縮短,說明該藥物有一定的止血功效,但水煎煮和醇回流提取沒有顯著差異,因此擬采用水煎煮提取。
4.水煎煮工藝優(yōu)化研究4.1水煎煮因素和水平設(shè)計(jì)影響水煎煮的主要因素有加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間,因此,我們用正交實(shí)驗(yàn)考察了上述三因素對(duì)提取結(jié)果的影響,用正交表L9(34)進(jìn)行試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)以半個(gè)處方量進(jìn)行,方案見表4,實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果見表5。
表4 水煎煮工藝因素水平安排

4.2檢測(cè)指標(biāo)處方君藥大薊、小薊均含黃酮類化合物,因此,工藝考察以蒙花苷的含量為試驗(yàn)指標(biāo)。
4.3藥材中蒙花苷含量測(cè)定取大薊、小薊藥材照高效液相色譜儀色譜法測(cè)定蒙花苷含量,結(jié)果測(cè)得大薊蒙花苷含量為0.015%,小薊蒙花苷含量為0.81%。
4.4供試品溶液的制備及測(cè)定每組取1個(gè)處方藥材,按表4正交實(shí)驗(yàn)安排工藝煎煮提取,將收集的煎煮液分別量出體積,備用。
蒙花苷含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.2%磷酸(50∶50),為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)326nm;理論板數(shù)按蒙花苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的蒙花苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含50μg的溶液,即得。
供試品溶液的制備取相當(dāng)于2.0g大、小薊藥材的提取液,置50ml量瓶中,加甲醇至刻度,濾過,續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,結(jié)果見表5。
4.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析表5 水煎煮工藝試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果

表6 蒙花苷的方差分析表

F0.05(2,2)=19.0 F0.01(2,2)=99.0以提取物中蒙花苷的含量為考察指標(biāo),方差分析結(jié)果表明因素B的影響有極顯著性意義(P<0.05),表5中極差R值大小顯示,各因素作用的主次為B>A>C;以A3B3C3最佳,根據(jù)B因素K值,因素B2、B3值相近,考慮節(jié)約能源及縮短生產(chǎn)時(shí)間,因此,因素B擬采用B2,因素A、C各水平對(duì)提取結(jié)果無顯著性意義,因此擬采用因素A2C3,即擬加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí)。
本發(fā)明藥物可以采用下列方法加以鑒別鑒別(1)取本品20片,研細(xì),加甲醇25ml,超聲提取30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml使溶解,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用乙醚萃取2次,每次20ml,蒸干,殘?jiān)眉状?.5ml使溶解,作為供試品溶液。取大薊對(duì)照藥材2g,研細(xì),加甲醇25ml,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸對(duì)照藥材溶液、供試品溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素鈉制成的硅膠G薄層板上,以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以3%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2)取本品12片,研細(xì),加甲醇25ml超聲提取30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)盟?5ml使溶解,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用4%NaOH溶液調(diào)pH至10,加入乙醚萃取4次,每次20ml,乙醚液蒸干,殘?jiān)?.5ml甲醇使溶解,作為供試品溶液。另取荷葉堿對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素納制成的硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮-乙醇-氨水(30∶8∶1∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以改良碘化鉍鉀溶液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.2%磷酸(50∶50)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)326nm;理論板數(shù)按蒙花苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的蒙花苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含50μg的溶液,即得。
供試品溶液的制備取片量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),取約1.5g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)45分鐘,取出,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
本品每片含大薊、小薊以蒙花苷(C28H32O14)計(jì),不得少于0.36mg。
實(shí)施例1片劑的制備稱取大薊600g、小薊300g、廣東紫珠200g、荷葉200g,加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏,加入輔料混勻,制粒,干燥,壓片即得。
實(shí)施例2顆粒劑的制備稱取大薊600g、小薊300g、廣東紫珠200g、荷葉200g,加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏,加入輔料混勻,制粒,干燥,即得。
實(shí)施例3膠囊劑的制備稱取大薊600g、小薊300g、廣東紫珠200g、荷葉200g,加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏,加入輔料混勻,制粒,干燥,裝入膠囊,即得。
薊荷止血片藥效學(xué)試驗(yàn)研究資料及文獻(xiàn)資料摘要薊荷止血片高(8g生藥/kg)、中劑量(4g生藥/kg)均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于剪尾所致的小鼠出血有明顯的止血作用;薊荷止血片高(8g生藥/kg)、中(4g生藥/kg)、低(2g生藥/kg)劑量和陽性均可明顯縮短小鼠凝血時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用;薊荷止血片高(6g生藥/kg)、中(3g生藥/kg)、低劑量(1.5g生藥/kg)可明顯縮短大鼠復(fù)鈣時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用;薊荷止血片高、中、低劑量均可明顯縮短小鼠出、凝血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于肝素所致的有出血傾向小鼠出血有明顯的止血作用;薊荷止血片高、中劑量可明顯減少小鼠潰瘍個(gè)數(shù),高劑量還可使出血小鼠的個(gè)數(shù)減少,出血程度減輕,提示薊荷止血片對(duì)于小鼠胃潰瘍出血有一定的止血作用;薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)凝血酶原時(shí)間、部分凝血酶原時(shí)間、血小板數(shù)量均無明顯影響;薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯影響;對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有明顯影響。提示薊荷止血片有一定的抗炎作用。
試驗(yàn)材料1、試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠,17-25g,♀♂兼有,江西醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)021-9602。
SD大鼠,170-230g,♀♂兼有,江西醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)021-9602。
2、藥物與試劑(1)受試藥物薊荷浸膏1.375g生藥/浸膏,1.1g/ml,由江西省振源醫(yī)藥科技有限公司提供,批號(hào)040301。
藥物配制(小鼠用)高劑量8.0g生藥/kg,0.40g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏14.54g,+蒸餾水至50ml,充分?jǐn)噭?;中劑?.0g生藥/kg,0.20g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏7.27g,+蒸餾水至50ml,充分?jǐn)噭?;低劑?.0g生藥/kg,0.10g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏3.64g,+蒸餾水至50ml,充分?jǐn)噭颍淮笫笥酶邉┝?.0g生藥/kg,0.60g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏65.46g,+蒸餾水至150ml,充分?jǐn)噭?;中劑?.0g生藥/kg,0.30g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏32.73g,+蒸餾水至150ml,充分?jǐn)噭颍坏蛣┝?.5g生藥/kg,0.15g生藥/ml,準(zhǔn)確稱取浸膏16.36g,+蒸餾水至150ml,充分?jǐn)噭颍?2)陽性藥斷血流顆粒(10g/袋,安徽省天康藥業(yè)有限公司批號(hào)030303),人臨床用量一次一袋,一日三次。折算成小鼠用量約為6g顆粒/kg體重。方法準(zhǔn)確稱取斷血流顆粒15g,+蒸餾水至50ml,充分?jǐn)噭颉?br> (3)利血平注射液廣東邦民制藥有限公司,批號(hào)040308,規(guī)格1mg/ml。
(4)0.5%福爾馬林溶液。
(5)鹽酸雷尼替丁膠囊,杭州塞諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司,批號(hào)856,一粒含雷尼替丁為0.15g,加蒸餾水至50ml,充分?jǐn)噭颉?br> (6)肝素鈉注射液南京新天生物化學(xué)制藥有限公司,批號(hào)010506,12500單位/ml,配制方法取1ml+生理鹽水至200ml,即62.5單位/ml。
(7)二甲苯南昌洪都試劑化工廠,批號(hào)020121,規(guī)格500ml/瓶。
(8)醋酸潑尼松片天津天藥藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)040512,規(guī)格5mg/片。取60mg,加蒸餾水之100ml,充分?jǐn)噭颉?br> (9)依文思藍(lán)進(jìn)口分裝,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)F20040213,規(guī)格10g/瓶。
(10)冰乙酸上海試劑廠,批號(hào)82-06-03,規(guī)格500ml/瓶。
3、給藥容量小鼠20ml/kg體重,大鼠10ml/kg體重。
4、儀器與設(shè)備Beckman-ACL7000凝血酶原測(cè)定儀,美國Beckman公司產(chǎn)品;Sysmex-XE2100全血儀,日本產(chǎn)品。
5、統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,方差齊同用LSD檢驗(yàn),不齊用Dunnett T3檢驗(yàn)。
試驗(yàn)方法與結(jié)果一、薊荷止血片對(duì)正常小鼠出血時(shí)間的影響(剪尾法)[1]
試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定小鼠剪尾后的出血時(shí)間,了解薊荷止血片的止血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠75只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次給藥30分鐘后,用利剪在距小鼠尾尖部約3mm處剪斷,等有血自然流出開始記時(shí),每30秒用濾紙輕輕擦去血液,至小鼠不再出血為止,此間時(shí)間即為出血時(shí)間。
表1 對(duì)正常小鼠出血時(shí)間的影響

與生理鹽水組比較,△▲P<0.05,▲▲△P<0.01,▲▲▲P<0.001;從表1可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中劑量均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于剪尾所致的小鼠出血有明顯的止血作用。
二、薊荷止血片對(duì)正常小鼠凝血時(shí)間的影響(一)(玻片法)[2]
試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^玻片法觀察小鼠體外凝血時(shí)間,了解薊荷止血片的促凝血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠80只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次30分鐘后,用眼科彎鑷迅速摘去一側(cè)眼球,即有血液流出,于載玻片上滴一滴血,血滴直徑在5mm左右,立即用秒表記時(shí),每隔30秒用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕挑動(dòng)一次,并觀察有無血絲,從采血開始至挑起血絲止,所歷時(shí)間即為凝血時(shí)間。
表2 對(duì)正常小鼠凝血時(shí)間影響

與生理鹽水組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001;從表2可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量和陽性均可明顯縮短小鼠凝血時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用。
(二)(毛細(xì)玻管片法)[2,3]試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^毛細(xì)玻管法觀察小鼠體外凝血時(shí)間,了解薊荷止血片的促凝血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠90只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次用玻璃毛細(xì)管插入小鼠眼內(nèi)眥球后靜脈叢,深約4-5mm,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)再縮回,自血液流入管內(nèi)開始計(jì)時(shí),血液注滿后平放于桌子上,每隔30秒折斷兩端0.5cm,并緩慢向左右拉開,觀察折斷處是否有血凝絲,至血凝絲止,所歷時(shí)間即為凝血時(shí)間。
表3 對(duì)正常小鼠凝血時(shí)間影響

與生理鹽水組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001;從表3可看出,與空白組比較,薊荷止血片中劑量可明顯縮短小鼠凝血時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用。
三、對(duì)大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間的影響[4]試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察加鈣以后血漿凝固所需要的時(shí)間,了解薊荷止血片的促凝血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組SD大鼠,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒10ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次給藥后0.5h,大鼠靜脈取血4.5ml裝入含有0.5ml枸櫞酸鈉試管中,混勻。1000rpm離心10min,取血漿備用。空白試管2支,每管分別加入0.1ml血漿和0.1ml生理鹽水,搖勻即放入37℃水浴鍋孵育1min后,再加入0.1ml1.25%CaCl2溶液,混勻。重放入水浴鍋立即計(jì)時(shí)直至出現(xiàn)彌漫白色顆粒。取兩管時(shí)間的平均值。
表4 對(duì)正常大鼠血漿復(fù)鈣時(shí)間影響

與生理鹽水組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001;從表4可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量可明顯縮短大鼠復(fù)鈣時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用。
四、對(duì)肝素所致出血傾向小鼠出、凝血時(shí)間的影響(一)對(duì)出血時(shí)間的影響[5]
試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定給肝素小鼠剪尾后的出血時(shí)間,了解薊荷止血片對(duì)于有出血傾向小鼠的止血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠80只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為6組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)、模型組和生理鹽水組。
2、除空白組、模型組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次空白組灌胃后30min,尾靜脈注射生理鹽水0.1ml/10g,其他組灌胃后30min,尾靜脈注射62.5單位/ml肝素鈉注射液0.1ml/10g,以上小鼠15min后剪尾法測(cè)其出血時(shí)間。
表5 對(duì)肝素所致出血傾向小鼠出血時(shí)間的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;與模型組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001。
從表5可看出,與空白組比較,模型組小鼠出血時(shí)間明顯延長(zhǎng),說明造模是成功的,薊荷止血片高、中、低劑量均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于肝素所致的有出血傾向小鼠出血有明顯的止血作用。
(二)對(duì)凝血時(shí)間的影響[5]試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定給肝素小鼠凝血時(shí)間,了解薊荷止血片對(duì)于有出血傾向小鼠的促凝血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠72只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為6組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)、模型組和生理鹽水組。
2、除空白組、模型組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次空白組灌胃后30min,尾靜脈注射生理鹽水0.1ml/10g,其他組灌胃后30min,尾靜脈注射62.5單位/ml肝素鈉注射液0.1ml/10g,以上小鼠15min后毛細(xì)玻管法測(cè)其凝血時(shí)間。
表6 對(duì)肝素所致出血傾向小鼠凝血時(shí)間的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;與模型組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001。
從表6可看出,與空白組比較,模型組小鼠凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng),說明造模是成功的,薊荷止血片高、中、低劑量均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于肝素所致的有出血傾向小鼠出血有明顯的促凝血作用。
五、對(duì)胃出血模型小鼠的影響[6]試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察用藥后胃出血模型小鼠胃中潰瘍點(diǎn)數(shù)和出血情況,了解薊荷止血片的胃出血的止血作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠72只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為6組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(雷尼替丁膠囊)、模型組和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥三天,每天一次;第四天各組給與相應(yīng)的藥物10ml/kg,給藥后2小時(shí)腹腔注射利血平10mg/kg,之后2小時(shí)再按上述劑量給藥一次。利血平注射后6小時(shí)以0.5%福爾馬林(1ml/只)灌胃固定,30分鐘后拉頸處死,摘取胃觀察胃粘膜潰瘍點(diǎn)數(shù)。
表7 對(duì)胃出血模型小鼠潰瘍個(gè)數(shù)的影響

表8 對(duì)胃出血模型小鼠出血情況的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;與模型組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001。
從表7、8可看出,與模型空白組比較,薊荷止血片高、中劑量可明顯減少小鼠潰瘍個(gè)數(shù),高劑量還可使出血小鼠的個(gè)數(shù)減少,出血程度減輕,提示薊荷止血片對(duì)于小鼠胃潰瘍出血有一定的止血作用。
六、對(duì)凝血酶原時(shí)間和部分凝血酶原時(shí)間的影響試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定大鼠凝血酶原時(shí)間和部分凝血酶原時(shí)間,了解薊荷止血片的對(duì)外凝系統(tǒng)的影響。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組SD大鼠70只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液10ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒10ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次灌胃后一小時(shí)腹腔注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉,剪開胸腔,心臟取血約2ml,送醫(yī)院進(jìn)行凝血活酶和部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定。
表9 對(duì)正常大鼠出血凝血酶原時(shí)間和部分凝血酶原時(shí)間的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;從表9可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)凝血酶原時(shí)間和部分凝血酶原時(shí)間均無明顯影響。
七、薊荷止血片對(duì)正常小鼠血小板數(shù)量的影響試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定給藥后小鼠血液中血小板的數(shù)量,了解薊荷止血片的止血作用是否與血小板有關(guān)。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠75只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(斷血流顆粒)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig斷血流顆粒20ml/kg,連續(xù)給藥四天,每天一次;末次給藥30分鐘后,摘眼球取血送醫(yī)院進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。
表10 對(duì)正常小鼠血小板數(shù)量的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;從表10可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)血小板均無明顯影響。
八、對(duì)小鼠抗炎作用的影響(一)耳廓腫脹法[7]試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察用藥后對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的腫脹度情況,了解薊荷止血片的抗炎作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠75只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(醋酸潑尼松片)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig醋酸潑尼松片20ml/kg,連續(xù)給藥七天,每天一次;末次給藥后1小時(shí),動(dòng)物用乙醚麻醉,在右耳的前后兩面涂布致炎劑二甲苯,每只小鼠0.02ml,左耳不作任何處理。4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,剪下雙耳用8mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片,電子天平稱重。腫脹度按下述公式計(jì)算腫脹度=右耳片重量-左耳片重量。
表11 對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;從表11可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯影響。
(二)對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[8]試驗(yàn)?zāi)康慕o小鼠腹腔內(nèi)注射稀醋酸溶液,在H+的刺激下,腹腔內(nèi)毛細(xì)血管通透性增加,血液內(nèi)液體成分從血管內(nèi)向腹腔滲出,當(dāng)靜脈內(nèi)注射依文思藍(lán),該染料可與血漿蛋白發(fā)生瞬間結(jié)合,而隨體液成分滲入腹腔,測(cè)量腹腔內(nèi)染料量,可代表炎性滲出的多少。本試驗(yàn)通過比較小鼠腹腔滲入之染料量,來衡量藥物的抗炎作用。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1、動(dòng)物分組昆明種小鼠50只,雌雄兼有,按體重隨機(jī)分為5組,即薊荷止血片高、中、低劑量組,陽性藥組(醋酸潑尼松片)和生理鹽水組。
2、除空白組igNS外,高劑量組動(dòng)物ig高濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,低劑量組動(dòng)物ig低濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,中劑量組動(dòng)物ig中濃度薊荷止血片藥液20ml/kg,陽性藥組ig醋酸潑尼松片20ml/kg,連續(xù)給藥七天,每天一次,末次藥后1小時(shí)各鼠iv 0.1ml/10g 1%伊文斯蘭溶液,同時(shí)ip 0.6%醋酸溶液0.2ml/只,20min后處死小鼠,用5ml生理鹽水沖洗小鼠腹腔,收集沖洗液,3000rpm離心15min,取上清液用722分光光度計(jì)于590nm處比色測(cè)定光密度值。
表12 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

與生理鹽水組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;從表12可看出,與空白組比較,薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有明顯影響。
結(jié)論(1)薊荷止血片高、中劑量均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于剪尾所致的小鼠出血有明顯的止血作用。
(2)薊荷止血片高、中、低劑量和陽性均可明顯縮短小鼠凝血時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用。
(3)薊荷止血片高、中、低劑量可明顯縮短大鼠復(fù)鈣時(shí)間,提示薊荷止血片有一定的促凝作用。
(4)薊荷止血片高、中、低劑量均可明顯縮短小鼠出、凝血時(shí)間,提示薊荷止血片對(duì)于肝素所致的有出血傾向小鼠出血有明顯的止血作用。
(5)薊荷止血片高、中劑量可明顯減少小鼠潰瘍個(gè)數(shù),高劑量還可使出血小鼠的個(gè)數(shù)減少,出血程度減輕,提示薊荷止血片對(duì)于小鼠胃潰瘍出血有一定的止血作用。
(6)薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)凝血酶原時(shí)間、部分凝血酶原時(shí)間、血小板數(shù)量均無明顯影響。
(7)薊荷止血片高、中、低劑量對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯影響;對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有明顯影響。提示薊荷止血片有一定的抗炎作用。
主要參考文獻(xiàn)1、李儀奎主編.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).上??茖W(xué)技術(shù)出版社.1991842、陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社.19934843、吳建華,馬耀茹姜.不同炮制品止血作用實(shí)驗(yàn)研究.陜西中醫(yī)2002;23(5)4494、陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社.19934855、王玲,哈孝賢等.功血寧I號(hào)沖劑對(duì)止血作用的影響.天津中醫(yī).2002;19(5)416、劉保林,劉曉華.三黃瀉心湯治療上消化道出血的實(shí)驗(yàn)研究.中藥藥理與臨床,1998;14(1)147、陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社.1993年第一版3028、陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社.1993年第一版64權(quán)利要求
1.一種抗炎止血中藥組合物及其制備方法,它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的賦形劑組成,其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的大薊32~60%、小薊16~30%、廣東紫珠、荷葉各為10~20%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的大薊39~53%、小薊20~27%;廣東紫珠、荷葉各為13~18%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥組合物,其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的大薊46.2%、小薊23.1%;廣東紫珠、荷葉各為15.4%。
4.權(quán)利要求1、2或3所述的止血中藥組合物的制備方法,它包括將大薊、小薊、廣東紫珠和荷葉加8倍量水煎煮提取二次,每次3小時(shí),濾過,濾液合并,減壓濃縮至相對(duì)密度1.35~1.38(60℃)的稠膏。再與藥學(xué)上可接受的賦形劑制成各種劑型。
5.權(quán)利要求1、2或3所述的止血中藥組合物的檢測(cè)方法,它包括鑒別(1)取本品20片,研細(xì),加甲醇25ml,超聲提取30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml使溶解,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用乙醚萃取2次,每次20ml,蒸干,殘?jiān)眉状?.5ml使溶解,作為供試品溶液。取大薊對(duì)照藥材2g,研細(xì),加甲醇25ml,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸對(duì)照藥材溶液、供試品溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素鈉制成的硅膠G薄層板上,以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以3%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)取本品12片,研細(xì),加甲醇25ml超聲提取30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)盟?5ml使溶解,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用4%NaOH溶液調(diào)pH至10,加入乙醚萃取4次,每次20ml,乙醚液蒸干,殘?jiān)?.5ml甲醇使溶解,作為供試品溶液。另取荷葉堿對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素納制成的硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮-乙醇-氨水(30∶8∶1∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以改良碘化鉍鉀溶液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.2%磷酸(50∶50)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)326nm;理論板數(shù)按蒙花苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的蒙花苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含50μg的溶液,即得。供試品溶液的制備取片量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),取約1.5g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)45分鐘,取出,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本品每片含大薊、小薊以蒙花苷(C28H32O14)計(jì),不得少于0.36mg。
6.權(quán)利要求1、2或3所述的止血中藥組合物在制備治療婦科陰道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎等婦科炎癥,功能性子宮出血及消化道出血的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗炎止血中藥組合物及其制備方法,它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的賦形劑制成各種劑型,其中所述的有效成分是以中藥材大薊、小薊、廣東紫珠和荷葉為原料,通過水煎煮或醇回流等制備工藝制成的。該藥物具有清熱解毒,涼血止血。用于婦科陰道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎等婦科炎癥,功能性子宮出血及消化道出血。本發(fā)明還公開了該藥物的制備方法和檢測(cè)方法。
文檔編號(hào)G01N30/90GK1981840SQ20051012994
公開日2007年6月20日 申請(qǐng)日期2005年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月13日
發(fā)明者范崔生, 孫繼寅, 呂武清, 褚小蘭 申請(qǐng)人:范崔生, 孫繼寅, 呂武清, 諸小蘭
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1