專利名稱：檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)指紋圖譜檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及對肝癌血清蛋白指紋圖譜檢測方法。
背景技術(shù)：
肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，死亡率極高，嚴(yán)重危害人們的身體健康。中國每年約有11萬人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45％。早期診斷和早期治療是提高患者成活率的關(guān)鍵。但目前的診斷方法敏感度和特異性均較低，已成為肝癌診療的一個瓶頸。肝癌的高發(fā)病率和高死亡率使得人們不斷地尋求一種有效的早期診斷方法，臨床上僅以AFP一種蛋白作為血清學(xué)診斷指標(biāo)在敏感性和特異性上是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足的，而超聲等影象學(xué)檢測一旦發(fā)現(xiàn)占位病變則已經(jīng)不是很早期了。能夠使疾病在發(fā)生的極早期就能夠得已發(fā)現(xiàn)，并得到控制和治療，進而大大提高治愈率或明顯改善病人的預(yù)后和生活質(zhì)量。蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)的出現(xiàn)使這種需要成為可能。雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)最先被用于臨床蛋白組學(xué)研究，但其對疏水性、強酸性和強鹼性蛋白的分辨率不夠，而且不能檢測低豐度蛋白，故實用價值受限。后來，2D-PAGE與質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合，已被成功地用于腫瘤研究。例如，王征等采用MALDI-TOF-MS肽質(zhì)指紋圖分析結(jié)合2D-PAGE對肝癌血清進行分析，發(fā)現(xiàn)了15個有意義的蛋白點。但因其所采用方法學(xué)所限，該結(jié)果尚不具備臨床實用性和早期診斷價值。
近年來隨著臨床蛋白質(zhì)組學(xué)的開展，使得肝癌的早期發(fā)現(xiàn)成為可能。表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface-enhanced laser-desorption/ionizationtime-of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)技術(shù)是一項近年來新興的臨床蛋白組學(xué)實用技術(shù)，具有優(yōu)于二維電泳和其他質(zhì)譜方法的特點，已被廣泛地用于腫瘤標(biāo)記物的篩查等研究。該技術(shù)具有操作簡便、可直接分析原始生物樣本(如血清、尿液、胸腹水等)、樣本用量小等特點，同時適合多樣品平行檢測和直接進行蛋白質(zhì)全景式的搜索和分析，特別是對小分子量蛋白和低豐度蛋白具有較高的捕獲效果，可以與其他蛋白質(zhì)組學(xué)方法互補，目前已被廣泛地用于腫瘤標(biāo)記物的篩查和臨床檢測。Coombes等采用此技術(shù)從乳腺癌患者的乳頭分泌物中尋找特征蛋白，Schaub等用尿液檢查前列腺癌，Carrette等用腦脊液診斷老年性癡呆，以及Zhang等用于AIDS研究，并均已獲得很好的結(jié)果。但國內(nèi)迄今尚無采用SELDI-TOF-MS技術(shù)獲得檢測肝癌血清特征蛋白的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服已有對肝癌血清檢測技術(shù)的不足之處，提出一種檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型及其制備方法，該模型為早期診斷肝癌提供了新的途徑和方法，并為進一步發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)記物提供了基礎(chǔ)。
本發(fā)明提出的檢測肝癌血清蛋白質(zhì)的質(zhì)譜模型，其特征在于從血清中篩選出6個上調(diào)蛋白和11個下調(diào)蛋白17個作為特征蛋白，選取所述17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型；所述的6個上調(diào)蛋白(指在肝癌患者血清中含量高于正常人血清中含量)的分子量與臨界峰值分別為5073道爾頓(Da)、其臨界峰值為3.544，5317Da、其臨界峰值為4.652，5345Da、其臨界峰值為2.301，5806Da、其臨界峰值為4.810，11472Da、其臨界峰值為0.618和11696Da、其臨界峰值為0.983；所述11個下調(diào)蛋白(指在肝癌患者血清中含量低于正常人血清中含量)，分子量分別為6838Da、其臨界峰值為8.414，6879Da、其臨界峰值為2.252，8563Da、其臨界峰值為23.076，8687Da、其臨界峰值為2.252，8766Da、其臨界峰值為7.784，13752Da、其臨界峰值為9.752，13955Da、其臨界峰值為3.228，17498Da、其臨界峰值為0.968，28222Da、其臨界峰值為0.983，37415Da、其臨界峰值為0.715和80470Da、其臨界峰值為0.111。
本發(fā)明提出上述的檢測肝癌血清蛋白質(zhì)譜模型的制備方法，包括以下步驟1)收集多例經(jīng)病理明確診斷的肝癌患者血清及經(jīng)體檢確定為健康者的血清作為兩組血清標(biāo)本，進行-70℃低溫冷凍備用；2)采用WCX2芯片對所述肝癌患者及正常人的兩組血清標(biāo)本的蛋白進行吸附(吸附方法為常規(guī)通用方法)；3)(采用蛋白飛行時間質(zhì)譜儀(ProteinChipBiology System)(Ciphergen公司生產(chǎn)，型號PBSII-型)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的兩組血清蛋白進行讀取，設(shè)定最高檢測分子量為200kD，優(yōu)化范圍為2kD-20kD，激光強度185-195，檢測敏感度為8-10，由此獲得兩組蛋白圖譜；4)(采用Ciphergen Proteinchip3.1版本的分析軟件、Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System軟件)對所有肝癌患者和正常人血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜進行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并收集數(shù)據(jù)；5)對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，根據(jù)肝癌患者和正常人血清之間蛋白峰值的差異(認(rèn)定P值小于10-4時具有統(tǒng)計學(xué)意義，共得到96個蛋白峰)，檢測出2組血清蛋白指紋圖譜之間有17個穩(wěn)定的差異蛋白，其中有6個差異蛋白穩(wěn)定上調(diào)，即在肝癌患者中高表達(dá)，分子量與臨界峰值分別為5073道爾頓(Da)、其臨界峰值為3.544，5317Da、其臨界峰值為4.652，5345Da、其臨界峰值為2.301，5806Da、其臨界峰值為4.810，11472Da、其臨界峰值為0.618和11696Da、其臨界峰值為0.983；11個差異蛋白穩(wěn)定下調(diào)，即在肝癌患者中低表達(dá)，分子量分別為6838Da、其臨界峰值為8.414，6879Da、其臨界峰值為2.252，8563Da、其臨界峰值為23.076，8687Da、其臨界峰值為2.252，8766Da、其臨界峰值為7.784，13752Da、其臨界峰值為9.752，13955Da、其臨界峰值為3.228，17498Da、其臨界峰值為0.968，28222Da、其臨界峰值為0.983，37415Da、其臨界峰值為0.715和80470Da、其臨界峰值為0.111，將所述17個差異蛋白作為肝癌蛋白質(zhì)譜診斷模型的特征蛋白；6)(由于多個特征蛋白組合起來才可將肝癌與正常人完全分開)選取上述17個特征蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型。
本發(fā)明采用上述分類樹可用于肝癌早期檢測和篩查。
本發(fā)明的特點及效果本發(fā)明與其他肝癌的診斷方法比較，具有以下優(yōu)點第一、本發(fā)明采用肝癌患者與正常人具有差異的多個特征蛋白組合起來進行對肝癌血清的檢測，提供的質(zhì)譜模型是肝癌早期檢測和篩查的新方法和新途徑，并為進一步發(fā)現(xiàn)新的肝癌生物標(biāo)記物提供了基礎(chǔ)；第二、與以往的血清學(xué)檢測方法比較具有較高的敏感性和特異性，是一種在蛋白組學(xué)水平上的診斷，對肝癌的早期診斷提供了新標(biāo)準(zhǔn)；第三、本發(fā)明模型的構(gòu)建方法設(shè)計合理可行，為降低我國肝癌的病死率、提高肝癌的臨床治愈率提供了一種新的篩查方法。
第四、利用本發(fā)明用雙盲法分析了85份血清標(biāo)本(其中有肝癌患者、正常人和其他疾病)，結(jié)果顯示，79例劃分正確，6份劃分錯誤。其中肝癌和正常人均劃分正確。陽性檢出率(敏感性)達(dá)100％，特異性92％。因此本發(fā)明可實現(xiàn)對肝癌進行早期預(yù)警、早期發(fā)現(xiàn)。


圖1為隨機抽取的4個蛋白指紋圖譜(2個肝癌和2個正常人)的曲線。
圖2為本發(fā)明的一種分類樹模型圖。
具體實施例方式
本發(fā)明提出的檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型及其制備方法結(jié)合附圖及具體應(yīng)用實施例作進一步說明，這些實施例僅用于說明目的，而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明提出的檢測肝癌血清蛋白質(zhì)的質(zhì)譜模型，其特征在于從血清中篩選出6個上調(diào)蛋白和11個下調(diào)蛋白17個作為特征蛋白，選取所述17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型；所述的6個上調(diào)蛋白(指在肝癌患者血清中含量高于正常人血清中含量)的分子量與臨界峰值分別為5073道爾頓、其臨界峰值為3.544，5317道爾頓、其臨界峰值為4.652，5345道爾頓、其臨界峰值為2.301，5806道爾頓、其臨界峰值為4.810，11472道爾頓、其臨界峰值為0.618和11696道爾頓、其臨界峰值為0.983；所述11個下調(diào)蛋白(指在肝癌患者血清中含量低于正常人血清中含量)，分子量分別為6838道爾頓(Da)、其臨界峰值為8.414，6879Da、其臨界峰值為2.252，8563Da、其臨界峰值為23.076，8687Da、其臨界峰值為2.252，8766Da、其臨界峰值為7.784，13752Da、其臨界峰值為9.752，13955Da、其臨界峰值為3.228，17498Da、其臨界峰值為0.968，28222Da、其臨界峰值為0.983，37415Da、其臨界峰值為0.715和80470Da、其臨界峰值為0.111。
本發(fā)明提出上述的檢測肝癌血清蛋白質(zhì)譜模型的產(chǎn)生方法，包括以下步驟1)收集多例經(jīng)病理明確診斷的肝癌患者血清及經(jīng)體檢確定為健康者的血清作為兩組血清標(biāo)本，進行低溫(-70℃)冷凍備用；2)采用WCX2芯片對所述肝癌患者及正常人的兩組血清標(biāo)本的蛋白進行吸附，吸附方法為常規(guī)通用方法，具體步驟如下從冰箱(-70C)中取出血清，于4℃，10000rpm離心2min；取3μl血清樣品，加6μl U9處理液(9M尿素，2％CHAPS，1％DTT，50mM Tris-CL，pH9.0)，充分混勻，冰浴振蕩30min后取出，加入108μl結(jié)合緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)，立即混勻；將WCX2芯片裝入bioprocessor中，每孔加入200μl結(jié)合緩沖液，室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干；每孔分別加入100μl樣品混合液，振蕩孵育1h，甩去樣品，用200μl洗脫緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干；再用HPLC H2O洗滌一次，立即甩干；拆開bioprocessor，取出芯片，晾干后，每點點加2次0.5μl SPA，晾干后即可上機測量。
3)(采用蛋白飛行時間質(zhì)譜儀(ProteinChipBiology System)(Ciphergen公司生產(chǎn)，型號PBSII-型)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的兩組血清蛋白進行讀取，設(shè)定最高檢測分子量為200kD，優(yōu)化范圍為2kD-20kD，激光強度185-195，檢測敏感度為8-10，由此獲得兩組蛋白圖譜，圖1顯示隨機抽取的4個蛋白指紋圖譜(2個肝癌和2個正常人)，箭頭所示為分子量在11kD-17kD范圍內(nèi)的幾個特征蛋白，其中11472Da、11696Da為上調(diào)蛋白，13752Da、13955Da為下調(diào)蛋白；4)(采用Ciphergen Proteinchip3.1版本的分析軟件、Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System軟件)對所有肝癌患者和正常人血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜進行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并收集數(shù)據(jù)；5)對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，根據(jù)肝癌患者和正常人血清之間蛋白峰值的差異(認(rèn)定P值小于10-4時具有統(tǒng)計學(xué)意義，共得到96個蛋白峰)，檢測出2組血清蛋白指紋圖譜之間有17個穩(wěn)定的差異蛋白，其中有6個差異蛋白穩(wěn)定上調(diào)，即在肝癌患者中高表達(dá)；11個差異蛋白穩(wěn)定下調(diào)，即在肝癌患者中低表達(dá)，如表1所示表1肝癌患者血清中的特征蛋白

表中向上箭頭“↑”為在患者血清中高表達(dá)的上調(diào)特征蛋白；向下箭頭“↓”為在患者血清中低表達(dá)的下調(diào)特征蛋白；將所述17個差異蛋白作為肝癌蛋白質(zhì)譜診斷模型的特征蛋白；6)(由于多個特征蛋白組合起來才可將肝癌與正常人完全分開)本方法選取上述17個特征蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型。
圖2為本發(fā)明的一種兩級分類樹模型圖，是選取各種分類樹模型中的一個模型對血清進行檢測。圖中，以13752Da特征蛋白為母節(jié)點l，可將所有樣品分成兩組，峰值≤9.752的樣本劃分到左邊的子節(jié)點2中，診斷為肝癌患者；峰值＞9.752的樣本劃分到右邊的終節(jié)點3.1中，診斷為正常人。子節(jié)點2中的樣本繼續(xù)以11472Da特征蛋白劃分，峰值≤0.618的樣本被劃入左邊的終節(jié)點3.2中，重新診斷為正常人；峰值＞0.618的樣本被劃入右邊的終節(jié)點3.3中，診斷為肝癌患者。最終的分析結(jié)果以表格方式表示，見表2。
表2 蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)評價表病理診斷結(jié)果肝癌 正常人合計蛋白指紋 肝癌 311 32圖譜技術(shù) 正常人3 3336合計 343468利用本發(fā)明的檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型及其制備方法構(gòu)成的各種分類樹檢測肝癌血清的實施例說明如下實施例1
抽取待測患者靜脈血2mL，不抗凝。室溫放置30min至1h，于室溫2500轉(zhuǎn)/min離心5分鐘，取血清等量分裝后-70℃冰箱中凍存。實驗時，從-70℃冰箱中取出標(biāo)本，冰中融化，于4℃10000轉(zhuǎn)/min離心2min。取離心后血清樣品3μL，加6μL U9處理液(9M尿素，2％CHAPS，1％DTT，50mM Tris-CL，pH9.0)，充分混勻，冰浴振蕩30min后取出，加入108μl結(jié)合緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)，立即混勻。將WCX2芯片裝入bioprocessor中，每孔加入200μl結(jié)合緩沖液，室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干。每孔分別加入100μl樣品混合液，振蕩孵育1h，甩去樣品，用200μl洗脫緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干；再用HPLC H2O洗滌一次，立即甩干。拆開bioprocessor，取出芯片，晾干后，每點點加2次0.5μl SPA，晾干后即可采用蛋白飛行質(zhì)譜儀(PBSII-C型)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的血清蛋白進行讀取分析。參數(shù)設(shè)定如下最高檢測分子量為200kD，優(yōu)化范圍為2kD-20kD，激光強度185，檢測敏感度為9?？紤]到基質(zhì)峰的存在，將1kD以下的峰濾去，以免基質(zhì)峰對結(jié)果造成干擾。采用Ciphergen Proteinchip3.1版本的分析軟件自動采集數(shù)據(jù)，分析軟件的參數(shù)設(shè)置如下信噪比為5，收集閾值為10％，聚集質(zhì)量為2％。采用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System軟件分析待測患者血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜，用13752Da及11472Da特征蛋白及其臨界峰值構(gòu)成兩級分類樹，查得數(shù)據(jù)中13752Da及11472Da的峰值分別為2.780及4.335，判斷為肝癌患者。
實施例2抽取待測患者靜脈血2mL，不抗凝。室溫放置30min至1h，于室溫2500轉(zhuǎn)/min離心5分鐘，取血清等量分裝后-70℃冰箱中凍存。實驗時，從-70℃冰箱中取出標(biāo)本，冰中融化，于4℃10000轉(zhuǎn)/min離心2min。取離心后血清樣品3μL，加6μL U9處理液(9M尿素，2％CHAPS，1％DTT，50mM Tris-CL，pH9.0)，充分混勻，冰浴振蕩30min后取出，加入108μl結(jié)合緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)，立即混勻。將WCX2芯片裝入bioprocessor中，每孔加入200μl結(jié)合緩沖液，室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干。每孔分別加入100μl樣品混合液，振蕩孵育1h，甩去樣品，用200μl洗脫緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干；再用HPLC H2O洗滌一次，立即甩干。拆開bioprocessor，取出芯片，晾干后，每點點加2次0.5μl SPA，晾干后即可采用蛋白飛行質(zhì)譜儀(PBSII-C型)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的血清蛋白進行讀取分析。參數(shù)設(shè)定如下最高檢測分子量為200kD，優(yōu)化范圍為2kD-20kD，激光強度185，檢測敏感度為9?？紤]到基質(zhì)峰的存在，將1kD以下的峰濾去，以免基質(zhì)峰對結(jié)果造成干擾。采用Ciphergen Proteinchip3.1版本的分析軟件自動采集數(shù)據(jù)，分析軟件的參數(shù)設(shè)置如下信噪比為5，收集閾值為10％，聚集質(zhì)量為2％。采用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System軟件分析待測患者血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜，用13752Da、11472Da及5806Da特征蛋白及其臨界峰值構(gòu)成三級分類樹，所獲得的數(shù)據(jù)中13752Da、11472Da及5806Da的峰值分別為9.642、0.256及3.135，判斷為正常人。
實施例3抽取待測患者靜脈血2mL，不抗凝。37℃孵育20-30min，于室溫2500轉(zhuǎn)/min離心5分鐘，取血清等量分裝后-70℃冰箱中凍存。實驗時，從-70℃冰箱中取出標(biāo)本，冰中融化，于4℃10000轉(zhuǎn)/min離心2min。取離心后血清樣品3μL，加6μL U9處理液(9M尿素，2％CHAPS，1％DTT，50mM Tris-CL，pH9.0)，充分混勻，冰浴振蕩30min后取出，加入108μl結(jié)合緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)，立即混勻。將WCX2芯片裝入bioprocessor中，每孔加入200μl結(jié)合緩沖液，室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干。每孔分別加入100μl樣品混合液，振蕩孵育1h，甩去樣品，用200μl洗脫緩沖液(100mmol/LNaAc，PH4.0)室溫振蕩洗滌2次，每次5min，甩干；再用HPLC H2O洗滌一次，立即甩干。拆開bioprocessor，取出芯片，晾干后，每點點加2次0.5μl SPA，晾干后即可采用蛋白飛行質(zhì)譜儀(PBSII-C型)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的血清蛋白進行讀取分析。參數(shù)設(shè)定如下最高檢測分子量為200kD，優(yōu)化范圍為2kD-20kD，激光強度185，檢測敏感度為9?？紤]到基質(zhì)峰的存在，將1kD以下的峰濾去，以免基質(zhì)峰對結(jié)果造成干擾。采用Ciphergen Proteinchip3.1版本的分析軟件自動采集數(shù)據(jù)，分析軟件的參數(shù)設(shè)置如下信噪比為5，收集閾值為10％，聚集質(zhì)量為2％。采用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System軟件分析待測患者血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜，用11472Da、11696Da、13955Da及8563Da特征蛋白及其臨界峰值構(gòu)成四級分類樹，查得數(shù)據(jù)中11472Da、11696Da、13955Da及8563Da的峰值分別為2.677、3.115、2.069及28.026，判斷為肝癌患者。
權(quán)利要求
1.一種檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型，其特征在于從血清中篩選出6個上調(diào)蛋白和11個下調(diào)蛋白17個作為特征蛋白，選取所述17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型；所述的6個上調(diào)蛋白的分子量與臨界峰值分別為5073道爾頓、其臨界峰值為3.544，5317道爾頓、其臨界峰值為4.652，5345道爾頓、其臨界峰值為2.301，5806道爾頓、其臨界峰值為4.810，11472道爾頓、其臨界峰值為0.618和11696道爾頓、其臨界峰值為0.983；所述11個下調(diào)蛋白，分子量分別為6838道爾頓、其臨界峰值為8.414，6879道爾頓、其臨界峰值為2.252，8563道爾頓、其臨界峰值為23.076，8687道爾頓、其臨界峰值為2.252，、8766道爾頓、其臨界峰值為7.784，13752道爾頓、其臨界峰值為9.752，13955道爾頓、其臨界峰值為3.228，17498道爾頓、其臨界峰值為0.968，28222道爾頓、其臨界峰值為0.983，37415道爾頓、其臨界峰值為0.715和80470道爾頓、其臨界峰值為0.111。
2.一種檢測肝癌血清蛋白質(zhì)譜模型的制備方法，包括以下步驟1)收集多例經(jīng)病理明確診斷的肝癌患者血清及經(jīng)體檢確定為健康者的血清作為兩組血清標(biāo)本，進行低溫冷凍備用；2)采用WCX2芯片對所述肝癌患者及正常人的兩組血清標(biāo)本的蛋白進行吸附；3)對結(jié)合在弱陽離子WCX2芯片上的兩組血清蛋白進行讀取，獲得兩組蛋白圖譜；4)對所有肝癌患者和正常人血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜進行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并收集數(shù)據(jù)；5)對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，根據(jù)肝癌患者和正常人血清之間蛋白峰值的差異，檢測出2組血清蛋白指紋圖譜之間有17個穩(wěn)定的差異蛋白及其臨界峰值，其中有6個差異蛋白穩(wěn)定上調(diào)，其分子量與臨界峰值分別為5073道爾頓、其臨界峰值為3.544，5317道爾頓、其臨界峰值為4.652，5345道爾頓、其臨界峰值為2.301，5806道爾頓、其臨界峰值為4.810，11472道爾頓、其臨界峰值為0.618和11696道爾頓、其臨界峰值為0.983；11個差異蛋白穩(wěn)定下調(diào)分子量分別為6838道爾頓、其臨界峰值為8.414，6879道爾頓、其臨界峰值為2.252，8563道爾頓、其臨界峰值為23.076，8687道爾頓、其臨界峰值為2.252，、8766道爾頓、其臨界峰值為7.784，13752道爾頓、其臨界峰值為9.752，13955道爾頓、其臨界峰值為3.228，17498道爾頓、其臨界峰值為0.968，28222道爾頓、其臨界峰值為0.983，37415道爾頓、其臨界峰值為0.715和80470道爾頓、其臨界峰值為0.111；將所述17個差異蛋白作為肝癌蛋白質(zhì)譜診斷模型的特征蛋白；6)選取所述17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型。
3.一種選取血清17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹用于肝癌早期檢測和篩查。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測肝癌血清特征蛋白的質(zhì)譜模型及其制備方法，屬于蛋白質(zhì)指紋圖譜檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明從血清中篩選出6個上調(diào)蛋白和11個下調(diào)蛋白17個作為特征蛋白，選取所述17個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以該蛋白的臨界峰值建立兩級或兩級以上的分類樹構(gòu)成用于檢測肝癌血清特征蛋白檢測模型；本發(fā)明為進一步發(fā)現(xiàn)新的肝癌生物標(biāo)記物提供了基礎(chǔ)；利用該模型對肝癌診斷的特異性、靈敏度及陽性預(yù)測率均在 90％以上。本發(fā)明對于肝癌的診斷優(yōu)于目前所采用的任何單一診斷方法，為肝癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療提供有一種非侵入性技術(shù)，從而為降低肝癌的病死率、提高肝癌的治愈率，并進一步為高危人群篩查肝癌提供一種新方法。
文檔編號G01N30/00GK1621829SQ20041010356
公開日2005年6月1日 申請日期2004年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月31日
發(fā)明者張建中, 鄭燕華, 馮凱, 鄒德威 申請人:中國人民解放軍第306醫(yī)院