專利名稱：眼病癥治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及眼科學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。具體地，它涉及改變眼組織的物理和/或化學(xué)性質(zhì)。更具體地，它描述了檢測和/或減少與眼病癥例如黃斑變性相關(guān)的布魯赫膜的增厚和/或改變布魯赫膜的滲透性的方法。甚至更具體地，它考慮給予布魯赫膜鈍化的擴(kuò)散增強性分子，然后通過能量源來激活擴(kuò)散增強性分子。
背景技術(shù)：
與年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)是漸進(jìn)性的眼病癥，影響1000萬美國人之多。AMD是在美國超過60歲的成人之中引起視覺喪失和法定盲的第一位原因。當(dāng)人口老化，“生育高峰時嬰兒(baby-boomer)”長到他們六七十歲時，AMD的實際流行將會盛行。該疾病影響眼睛的黃斑，在那里最敏銳的中央視覺發(fā)生。雖然它很少導(dǎo)致完全失明，但是除最外面的周邊視覺外，它奪走了個體的一切視覺，只留下視覺中央的模糊影像或黑洞。
黃斑變性被分類為干型(萎縮性)或濕型(新生血管性)。干型比濕型更常見，有大約90％的AMD患者被診斷為干型AMD。濕型疾病通常導(dǎo)致更嚴(yán)重的視覺喪失。
在干型中，在黃斑中有視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)的破壞或變薄，因此稱作術(shù)語“萎縮”。這些RPE細(xì)胞對于視網(wǎng)膜的功能是重要的，因為它們代謝地支持覆蓋在上面的光感受器。
萎縮性AMD的臨床標(biāo)志是黃斑玻璃疣的累積，微黃色的沉積物恰好深入于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(“RPE”)?；加形s性AMD的眼睛的組織病理學(xué)檢查揭示了深入于布魯赫膜中RPE的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)物質(zhì)的沉積。在患有AMD的老化的眼睛中，布魯赫膜通常比正常的厚大約3倍。這一增厚被認(rèn)為由脂質(zhì)以及改性的和交聯(lián)的蛋白質(zhì)組成，它們阻礙營養(yǎng)物質(zhì)穿過布魯赫膜從脈絡(luò)膜血管層向外部視網(wǎng)膜的傳輸。這一包含脂質(zhì)和交聯(lián)蛋白的增厚的屏障阻礙營養(yǎng)物質(zhì)穿過布魯赫膜從脈絡(luò)膜血管層向外部視網(wǎng)膜的傳輸。目前，除了應(yīng)用多種維生素和微量營養(yǎng)物之外沒有經(jīng)證明有效的用于干型AMD的治療。
當(dāng)新血管形成且穿過布魯赫膜生長并進(jìn)入RPE下和視網(wǎng)膜下(subretinal)間隙時，濕型AMD發(fā)生。這一新生血管性組織是非常脆弱和高滲透性的。它的出血頻繁導(dǎo)致對覆蓋在上面的視網(wǎng)膜的傷害。當(dāng)血液組織化時，功能性黃斑組織被疤痕組織取代。為了預(yù)防視覺喪失，理想的是在新血管形成發(fā)展之前進(jìn)行治療干預(yù)。
雖然AMD的精確病因?qū)W是未知的，但是若干危險因素似乎是重要的。例如ARMD可以由光對視網(wǎng)膜的長期照射引起。飲食中某些營養(yǎng)素的存在或缺乏，例如抗氧化劑維生素E和C，也會引起一個人對于ARMD的易感性。其它狀況，例如高血壓和吸煙也被認(rèn)為是這一疾病發(fā)展的重要危險因素。
AMD是對患者和醫(yī)生的挑戰(zhàn)性疾病，因為除了抗氧化劑外，只有非常少的治療選擇，且沒有經(jīng)證實的預(yù)防療法。雖然一些人僅經(jīng)歷了黃斑變性的較小的不便，但是許多其他患有更嚴(yán)重形式的黃斑變性的人喪失了能力。目前的包括激光光凝術(shù)、光動力學(xué)療法和抗血管生成療法的療法已經(jīng)具有混合的結(jié)果，并且在某些實例中，已經(jīng)引起了有害的副作用。因此存在對于減少或限制黃斑變性的影響的療法的需求。
激光光凝術(shù)在臨床試驗中是有效的，但是只有少數(shù)患有AMD的患者是治療的良好候選者。此外，甚至在成功地用激光療法切除了脈絡(luò)膜新生血管后，再生的新生血管組織會頻繁地生長。Visudyne(Novartis Ophthalmics；Duluth，GA)—一種光動力學(xué)療法或PDT，利用光活化藥物來潛在地停止或減緩異常細(xì)胞生長。該療法治療特征是脈絡(luò)膜新生血管形成的疾病晚期。簡言之，光敏劑被靜脈內(nèi)給予并粘附在脂蛋白受體上，尤其是在正在快速增殖的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。在施用后不久，用在特定波長預(yù)先計算好劑量的光激活該化合物，導(dǎo)致正常氧轉(zhuǎn)化成自由基單態(tài)氧，其反過來引起新生血管性組織的關(guān)閉。在特定的實施方案中該療法治療血管增殖。然而，由于利用光動力學(xué)療法的對脈絡(luò)膜新生血管形成的治療沒有針對黃斑變性的根本原因，在治療后幾個月內(nèi)通常會再發(fā)生新生血管形成。
美國專利5,756,541涉及了改善視敏度的方法，包括以足以局部化于靶眼組織的量給予光活化化合物，并用來自激光的光線照射靶組織，其中輻射的波長被光活化化合物吸收并且進(jìn)行一段時間且足以改善視敏度的強度的輻射。在具體實施方案中，光活化化合物是綠卟啉。美國專利5,910,510涉及具有特定輻射時間安排的相同方法。
美國專利5,798,349涉及治療以不合需要的新血管系統(tǒng)為特征的眼病癥例如AMD的方法，通過以足以局部化于新血管系統(tǒng)的量和時間給予綠卟啉的脂質(zhì)體制劑，隨后用激光輻射新血管系統(tǒng)，其中通過綠卟啉吸收的光線封閉新血管系統(tǒng)。在相關(guān)的美國專利6,225,303中，輻射度是在約300mW/cm2至約900mW/cm2。
美國專利6,128,525涉及控制光動力學(xué)療法劑量測定的方法和裝置。
美國專利5,935,942涉及在哺乳動物眼中閉合脈管系統(tǒng)的方法，包括靜脈內(nèi)共同施予用熱敏性脂質(zhì)體包封的熒光染料和通過輻射激活的組織反應(yīng)劑。在眼睛中加熱脂質(zhì)體以釋放它們的內(nèi)容物，其中組織反應(yīng)劑仍是非活性的，然后在脈管系統(tǒng)內(nèi)監(jiān)測熒光染料流動。在具有低于正常的血流的脈管系統(tǒng)中激活組織反應(yīng)劑，這樣活化的藥劑化學(xué)地閉合脈管系統(tǒng)。相關(guān)的美國專利6,140,314方法進(jìn)一步包括共同施用能有效地?fù)p害血管生長或再生的組織特異性因子。相關(guān)的美國專利6,248,727涉及相關(guān)的診斷試劑和試劑盒。
因此，雖然存在用于眼睛病癥的另外的方法，但是本發(fā)明提出了在本領(lǐng)域中對于在例如眼組織的新血管形成那個點之前治療病癥的需求，尤其是對于逆轉(zhuǎn)與眼病癥相關(guān)的組織例如布魯赫膜的病理學(xué)的需求。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及改變眼組織的物理和/或化學(xué)性質(zhì)的方法及組合物。在具體實施方案中，它涉及通過或穿過組織的擴(kuò)散的增強、細(xì)胞的靶向破壞，和/或在個體中至少一個眼組織的至少部分的靶向改變。在特定的實施方案中，這可以利用影響受控制的擴(kuò)散增強和/或其它受控制的改變的方法例如光或超聲來完成。本發(fā)明的一些方面涉及在早期階段治療眼病癥，且本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到用于這種目的的本發(fā)明的有用性。
在具體的，也僅是代表性的本發(fā)明的實施方案中，布魯赫膜是靶向的組織。隨著老化并且特別是在黃斑變性中，布魯赫膜發(fā)展了脂質(zhì)和交聯(lián)蛋白質(zhì)屏障。在患有黃斑變性的患者中穿過布魯赫膜的受損的擴(kuò)散促進(jìn)了營養(yǎng)喪失的視網(wǎng)膜釋放血管生成因子。這又引起穿過布魯赫膜的新生血管性組織的生長，隨后是流血、漿液漏出和嚴(yán)重的視力喪失。本發(fā)明的一些方面允許在脈絡(luò)膜新生血管形成發(fā)展之前或脈絡(luò)膜新生血管形成發(fā)展后不久治療/施用。
為了改善穿過布魯赫膜的擴(kuò)散和預(yù)防視力喪失的發(fā)展，理想的是改變與視力喪失有關(guān)的組織的物理化學(xué)性質(zhì)，例如減少隨老化在布魯赫膜中或在患有AMD的患者中累積的脂質(zhì)和交聯(lián)蛋白屏障。本發(fā)明涉及能完成這一點的方法和組合物，利用光或超聲以影響布魯赫膜的受控制的擴(kuò)散的增強和/或部分降解，這樣使得能夠改善在脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜之間的擴(kuò)散轉(zhuǎn)運。能量(有代表性的形式是光或超聲)被用來完成組織改變性物質(zhì)(其也可以被稱作脂質(zhì)和/或蛋白降解物質(zhì))的選擇性激活，因為這一應(yīng)用靶向于改變布魯赫膜，而最低限度地影響臨近的組織。如果全身性地給予活性組織改變性分子，它們對于布魯赫膜將不是選擇性的，但是將潛在地?fù)p害其它組織。為了特定地靶向預(yù)期的組織(例如布魯赫膜)，以非活性的形式給予組織改變性分子，例如通過全身注射或吞下或局部(眼內(nèi)，眼周)注射。在具體實施方案中，該分子是親脂性的。在它被逐步清除前，它以非活性的形式與多個組織結(jié)合。它僅通過能量來源(例如光、超聲或兩者)活化，其被精確地應(yīng)用于眼睛以獲得在布魯赫膜中組織改變性物質(zhì)的優(yōu)先活化。一旦被活化，組織改變性物質(zhì)就改變布魯赫膜中的脂質(zhì)和/或交聯(lián)蛋白，例如改善跨膜擴(kuò)散。在具體的實施方案中，為獲得在活化定位中的精確性，光化學(xué)活化步驟包括雙光子光化學(xué)。
在本發(fā)明的目的中，有治療眼病癥的方法，包括在所述眼睛中增進(jìn)跨布魯赫膜擴(kuò)散的步驟。在具體的實施方案中，增加的擴(kuò)散是減少所述膜的厚度、改變所述膜的組成或兩者的結(jié)果。
在本發(fā)明的另一目的中，有在個體的至少一只眼睛中增加跨布魯赫膜擴(kuò)散的方法，包括以足以形成布魯赫膜/非活性的降解分子復(fù)合物的量給予布魯赫膜非活性形式的降解分子的步驟；和使所述復(fù)合物接觸活化源的步驟，其中所述活化源將所述非活性的降解分子活化成所述降解分子的活性形式，所述活化導(dǎo)致跨所述膜的擴(kuò)散的增加。在具體的實施方案中，擴(kuò)散的增加是減少所述膜的厚度或改變所述膜的組成的結(jié)果。在另一具體實施方案中，擴(kuò)散的增加是膜中脂質(zhì)、交聯(lián)蛋白或兩者的改變的結(jié)果。在另一具體實施方案中，個體患有眼病癥，例如AMD、青少年黃斑變性、Sorby′s fundus營養(yǎng)不良或與黃斑變性無關(guān)的與年齡相關(guān)的視覺功能降低。在具體實施方案中，非活性降解分子直接與膜結(jié)合。
在本發(fā)明的另一具體實施方案中，非活性的降解分子是蛋白質(zhì)、去污劑、表面活性劑(用于籠狀環(huán)糊精)。在另一具體實施方案中，蛋白質(zhì)是酶。在另一具體實施方案中，非活性的酶進(jìn)一步被定義為通過在所述酶的氨基酸側(cè)鏈上整合至少一種光可移去的保護(hù)基團(tuán)而被束縛。在具體實施方案中，保護(hù)基團(tuán)是鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；⑾愣顾鼗?coumarinyl)、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基或它們的組合。在另一具體實施方案中，保護(hù)基團(tuán)是鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基或它們的衍生物。在具體實施方案中，氨基酸是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或它們的組合。在具體實施方案中，去污劑進(jìn)一步被定義為被包含至少一種鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基或均二苯乙烯基基團(tuán)的化合物束縛的。在另一具體實施方案中，蛋白質(zhì)被進(jìn)一步定義為在超聲造影劑中被束縛的。在具體實施方案中，超聲造影劑是微泡或脂質(zhì)體。在另一具體實施方案中，蛋白質(zhì)進(jìn)一步包含蛋白結(jié)合區(qū)域。在另一具體實施方案中，蛋白結(jié)合區(qū)域是異二聚體區(qū)域。在另一具體實施方案中，蛋白結(jié)合區(qū)域是亮氨酸拉鏈區(qū)域、殼多糖結(jié)合區(qū)域或Src同源2(SH2)區(qū)域。
在本發(fā)明的另一具體實施方案中，非活性的降解分子在藥理上可接受的組合物中施用于個體。在另一具體實施方案中，非活性的降解分子在藥理上可接受的組合物中被全身性地給予個體。在另一具體實施方案中，非活性的降解分子在藥理上可接受的組合物中口服、通過注射(例如眼周或眼內(nèi))、直腸地、陰道地或局部地給予個體。在具體實施方案中，酶是基質(zhì)金屬蛋白酶、膽固醇酯酶、脂肪酶、組織蛋白酶、蛋白酶或它們的組合。在具體實施方案中，蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。在具體實施方案中，活化源是能量。在進(jìn)一步的具體實施方案中，能量是光或超聲。在另一具體實施方案中，暴露步驟進(jìn)一步被定義為將所述復(fù)合物暴露于來自聚焦的激光源的光能。在另一具體實施方案中，降解分子是熒光標(biāo)記的。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有在個體的至少一只眼睛中治療與年齡相關(guān)的黃斑變性的方法，所述黃斑變性的特征是增厚的布魯赫膜，包括以足以使所述分子與膜結(jié)合以形成布魯赫膜/非活性的降解分子復(fù)合物的量給予所述個體非活性的降解分子；并且將該膜暴露于活化源，其中在所述暴露步驟后，跨所述眼睛的膜的擴(kuò)散改善。在具體實施方案中，該方法進(jìn)一步包括為了觀察膜以足以與布魯赫膜結(jié)合的量給予個體熒光分子。在具體實施方案中，發(fā)射的熒光的量與所述布魯赫膜中脂質(zhì)的量或改變的蛋白質(zhì)的量成比例。在另一具體實施方案中，由布魯赫膜中脂質(zhì)或改變的蛋白質(zhì)的量以可探測的方式改變需要用來激發(fā)染料的光的波長、由染料發(fā)射的光的波長或染料的壽命。在另一具體實施方案中，非活性的降解分子在藥理上可接受的組合物中被給予。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有裝載在合適的容器中的試劑盒，包含非活性的布魯赫膜降解分子。在具體實施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包含用于活化所述非活性的布魯赫膜降解分子的活化源。在另一具體實施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包含熒光分子。
在本發(fā)明的某些實施方案中，靶向的眼組織在非活性的組織改變性分子活化之前和/或期間是可視的。例如布魯赫膜可以是可視的，通過傳遞靶向布魯赫膜的熒光分子；通過監(jiān)測來自布魯赫膜自身的特征性成分的自身熒光信號，這使其與臨近和周邊組織區(qū)分(通過本領(lǐng)域公知的方法)；和/或通過應(yīng)用OCT多普勒(Dopples)來鑒定膜的具體的機(jī)械性能(也通過本領(lǐng)域公知的方法)。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有在個體的至少一只眼睛中診斷眼病癥的方法，包括在眼中以足以使熒光分子與布魯赫膜結(jié)合的量給予個體熒光分子；使布魯赫膜暴露于輻射以觀察熒光，其中熒光的量是眼病癥嚴(yán)重性的指示。在一個具體實施方案中，眼病癥是黃斑變性。在另一具體實施方案中，輻射是雙光子輻射。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有在個體的至少一只眼睛中診斷眼病癥的方法，基于來自靶向組織例如布魯赫膜的內(nèi)在光散射。具有可見光或紅外光的光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)技術(shù)被用于檢測眼中布魯赫膜的物理或化學(xué)性質(zhì)的改變。OCT不僅可以被用來看眼中的結(jié)構(gòu)，這已經(jīng)被用于人眼的一些先前的工作，也可以被用于通過多普勒OCT研究結(jié)構(gòu)的靈活性和通過結(jié)合OCT與外源性的染料來研究化學(xué)性質(zhì)。在這一實施方案中，OCT和/或它的變體被用于測定具有改變的性質(zhì)的布魯赫膜的性質(zhì)以允許有指導(dǎo)性的治療。治療可以是在布魯赫膜中或布魯赫膜附近的內(nèi)在或外在物質(zhì)的光釋放或光活化或光切除。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有治療個體眼病癥的方法，包括以足以使眼中的布魯赫膜可視的量給予個體顯形分子；以足以形成布魯赫膜/非活性光活化降解分子復(fù)合物的量給予個體非活性形式的光活化降解分子；和將所述復(fù)合物暴露于活化源，其中所述活化源將所述非活性的光活化降解分子活化成為所述光活化擴(kuò)散增強性分子的活性形式，所述活化導(dǎo)致跨布魯赫膜的擴(kuò)散的增加，跨布魯赫膜的組成的改變或兩者。在具體實施方案中，顯形分子是熒光分子。在另一具體實施方案中，熒光分子被結(jié)合入光活化分子的非活性形式。在另一實施方案中，該膜通過它的特征自熒光性質(zhì)或通過OCT多普勒方法是可視的。在另一具體實施方案中，非活性的光活化分子與布魯赫膜中的脂質(zhì)結(jié)合。
在本發(fā)明的一個實施方案中，有改變個體眼組織的方法，包括以足以使分子靶向組織的量給予眼組織非活性形式的組織改變性分子；和使分子暴露于活化源，其中活化源將非活性的組織改變性分子活化成活性形式的組織改變性分子，該活化導(dǎo)致至少部分眼組織的改變。在具體實施方案中，該方法提供對于所述個體眼病癥的療法。在另一具體實施方案中，眼病癥是與年齡相關(guān)的黃斑變性、青少年黃斑變性、Sorby′s fundus營養(yǎng)不良、與黃斑變性無關(guān)的視覺功能年齡相關(guān)性降低，或青光眼。在具體實施方案中，非活性的組織改變性分子在藥理上可接受的組合物中施用于個體。在另一具體實施方案中，非活性的組織改變性分子在藥理上可接受的組合物中被全身性地給予個體。在另一具體實施方案中，非活性的降解分子在藥理上可接受的組合物中通過口服、注射、直腸地、陰道地或局部地給予個體。如果施用是通過注射，注射可以是眼內(nèi)或眼周，盡管其它途徑是可接受的。
在具體實施方案中，光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)被用于在靶向的組織或細(xì)胞中檢測，例如檢測組成的改變(例如用特定藥劑散射或標(biāo)記)或組織的結(jié)構(gòu)，其中一個例子是布魯赫膜。多普勒OCT提供為了用釋放劑激活它們的有益的信息，例如關(guān)于靶向組織中的散射體的運動性和/或關(guān)于固定區(qū)域的靶向(例如化學(xué)改變的區(qū)域等)。
附圖簡述

圖1是在本發(fā)明有代表性的實施方案中，布魯赫膜脂質(zhì)的靶向的光誘導(dǎo)的組織改變。其顯示在全身性施用之后，被束縛的擴(kuò)散增強性分子從脈絡(luò)膜血管層擴(kuò)散入布魯赫膜。雙光子輻射精確地脫保護(hù)功能基團(tuán)，并且在布魯赫膜內(nèi)擴(kuò)散增強性分子被特異性地活化。
例證性實施方案的說明對于本領(lǐng)域技術(shù)人員非常顯而易見的是在不偏離本發(fā)明的范圍和精神的情況下，可以對本文描述的本發(fā)明做出各種替換和改變。
I.定義在本文說明書中采用時，“a”或者“an”可以指一個或多個。在本文權(quán)利要求中采用時，當(dāng)與詞語“包含”連接使用時，詞語“a”或者“an”可以指一個或多于一個。本文采用的“另一個”可以指至少是第二個或更多。
本文采用的術(shù)語“與年齡有關(guān)的黃斑變性(AMD)”指在年齡超過大約50歲的個體上的黃斑變性。在一個具體實施方案中，它與導(dǎo)致下降的中央視覺和晚期的病例導(dǎo)致法定盲的視網(wǎng)膜中黃斑區(qū)的光感受器的破壞和喪失有關(guān)。在具體實施方案中，其它變性也包括在該術(shù)語范圍內(nèi)，例如Sorsby′s fundus營養(yǎng)不良。
本文采用的術(shù)語“布魯赫膜”指從RPE分開脈絡(luò)膜血管層的五層結(jié)構(gòu)。
本文采用的術(shù)語“被束縛的”指組織改變性分子的功能基團(tuán)被另一分子/部分保護(hù)。在具體實施方案中，該術(shù)語指維持組織改變性分子的非活性形式，而沒有活化源。
本文采用的術(shù)語“玻璃疣”指深入于布魯赫膜內(nèi)部的RPE中的微黃色沉積物。
本文采用的術(shù)語“眼病癥”指與個體的至少一只眼睛相關(guān)的具有低于正常健康的病癥。在優(yōu)選的實施方案中，眼病癥包括增厚的布魯赫膜。在具體實施方案中，布魯赫膜厚到大約是其正常厚度的兩倍。在另一具體實施方案中，該膜厚到大約是其正常厚度的三倍至十倍。其中布魯赫膜異常增厚的具體眼病癥至少包括與年齡相關(guān)的黃斑變性、青少年黃斑變性、Sorsby′s fundus營養(yǎng)不良或具有對黑暗的減少的適應(yīng)能力的正常老化。其它眼病癥可能不是以增厚的布魯赫膜為特征，但是可能通過眼組織的改變而受益，例如改變小梁網(wǎng)以增加青光眼的流出容易性。利用雙光子輻射的靶向組織改變也可以被用于治療糖尿病性眼疾病中的微血管異常情況，包括糖尿病性黃斑水腫和新血管生成。在全身性或局部施用后非活性藥物的選擇性的雙光子輻射和釋放可以被用于使藥物效應(yīng)靶向眼中的特定組織。選擇性釋放的這一形式可以被用于眼外組織中以獲得選擇性效應(yīng)。
本文采用的術(shù)語“黃斑”指視網(wǎng)膜的中央?yún)^(qū)域，包括視網(wǎng)膜中央?yún)^(qū)域的感光細(xì)胞。
本文采用的術(shù)語“黃斑變性”指視網(wǎng)膜中央部分—黃斑的衰退。
本文采用的術(shù)語“視網(wǎng)膜”指在眼后部的神經(jīng)學(xué)組織，包括桿細(xì)胞和錐細(xì)胞，它們接受光線并將其轉(zhuǎn)化成電信號用于經(jīng)由視神經(jīng)傳到腦。
本文采用的術(shù)語“組織改變劑”指改變組織的物理、化學(xué)或兩者性質(zhì)的至少一種分子。在具體實施方案中，該術(shù)語指至少部分地改變組織從而改善穿過或跨過的擴(kuò)散的藥劑。在其它具體實施方案中，該術(shù)語指能夠至少(至少部分是不合需要的)部分地降解組織的成分的藥劑。在另外的具體實施方案中，該術(shù)語指能夠減少組織例如布魯赫膜中脂質(zhì)和/或交聯(lián)蛋白的藥劑。在具體實施方案中，該術(shù)語涉及降解其成分中的一種或多種。在其它具體實施方案中，組織改變性分子是去污劑，其能夠從組織例如布魯赫膜內(nèi)提取脂質(zhì)和非脂質(zhì)沉積物。
本文采用的術(shù)語“超聲造影劑”指攜帶外源性造影劑的顯微結(jié)構(gòu)。這些顯微結(jié)構(gòu)可以通過聚焦應(yīng)用超聲輻射被斷裂。例子包括微泡(懸浮液中的很小的氣泡，其可強有力地散射超聲)或脂質(zhì)體。
II.本發(fā)明本發(fā)明涉及眼病癥的治療，尤其是通過影響改變與病癥相關(guān)的眼組織。只要是改變組織，這一改變可以是任何種類的，但是在特定實施方案中，其指利用本文描述的方法和組合物促進(jìn)組織的擴(kuò)散。在具體實施方案中，該方法和組合物影響布魯赫膜以改善眼病癥。
眼病癥可以是任何類型，但是在具體實施方案中，眼病癥是AMD或其它黃斑變性，例如Sorsby′s fundus營養(yǎng)不良或任何導(dǎo)致布魯赫膜增厚的病癥。在另一具體實施方案中，治療甚至不存在黃斑變性的年齡相關(guān)性增厚。在中年以后的人中的增厚是年齡相關(guān)性視覺改變的原因，例如在暗適應(yīng)中的困難。因此，本發(fā)明的方法和組合物涉及改變眼組織的物理和/或化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且在具體實施方案中組織是布魯赫膜，以改善患有或未患AMD(和非年老的患者，例如患有青少年黃斑變性)的年老患者的視覺功能。在具體實施方案中，本發(fā)明涉及局部施用至少一種組織改變劑來治療青光眼。這種治療對于青光眼是有用的，例如用于減輕在青光眼發(fā)病機(jī)理中的阻塞的小梁網(wǎng)的特定實施方案。
在另一具體實施方案中，本發(fā)明涉及治療干型或濕型的黃斑變性。技術(shù)人員認(rèn)識到可以用本發(fā)明的方法治療濕型AMD，假定在通過目前已知的方法治療濕型黃斑變性后，該癥狀通常復(fù)發(fā)(復(fù)發(fā)的脈絡(luò)膜新生血管形成)。在另一具體實施方案中，本文描述的治療預(yù)防這種復(fù)發(fā)并且可以限制存在的脈絡(luò)膜新生血管形成的程度(生長)，因此維持較好的視力。在本發(fā)明的具體實施方案中，通過增加對視網(wǎng)膜的營養(yǎng)輸送，該治療引起存在的脈絡(luò)膜新生血管形成的消退。
因此本發(fā)明的目標(biāo)在于通過集中于與多種眼病癥相關(guān)的增厚的布魯赫膜治療眼病癥，例如黃斑變性。這一增厚是脂質(zhì)和交聯(lián)蛋白質(zhì)異常沉積的結(jié)果并且早于穿過布魯赫膜的新血管形成，接下來是隨后的流血、漿液漏出和嚴(yán)重的視覺喪失。如本文所描述，實現(xiàn)了跨布魯赫膜的擴(kuò)散的改善，因此減少在患有眼病癥的個體內(nèi)累積的脂質(zhì)和交聯(lián)蛋白屏障，以防止視覺喪失的發(fā)展。在具體實施方案中，改變膜的化學(xué)組成。例如，去污劑洗掉了膜中的脂質(zhì)。酶降解膜內(nèi)的蛋白質(zhì)。在具體實施方案中，本發(fā)明的方法導(dǎo)致跨布魯赫膜的導(dǎo)水率的增加和/或大分子的增加和/或布魯赫膜的氧滲透性的增加。
通常，例如全身性地或局部地給予有老化的布魯赫膜病征或癥狀的個體非活性組織改變性分子。在一些實施方案中，該非活性分子在活化前是可視的，例如通過被熒光化。在足以用于足夠的分布非活性分子的時間后，分子在包括布魯赫膜在內(nèi)的多組織內(nèi)累積。一旦在布魯赫膜達(dá)到了足夠的量，該分子的可視性就被用于用能量源例如光或超聲精確地靶向布魯赫膜，該能量源選擇性地活化組織改變性分子。
在具體實施方案中，本發(fā)明可用于布魯赫膜的顯像，例如用于診斷技術(shù)。即非活性的熒光化合物被給予與布魯赫膜有關(guān)的個體，例如通過與布魯赫膜中的脂質(zhì)結(jié)合。能量，例如以光或更具體的雙光子輻射的形式，集中在非活性光活化化合物/布魯赫膜復(fù)合物上，然后非活性光活化化合物被活化。從光活化化合物發(fā)射的能，例如光，使得布魯赫膜可視。在具體實施方案中，發(fā)射的光的量與布魯赫膜中脂質(zhì)的量成比例。如果熒光分子被整合入被束縛的組織改變劑，在布魯赫膜可視后通過活化降解物質(zhì)可以影響布魯赫膜的受控制的部分降解后布魯赫膜。在選擇性地實施方案中，可視化通過布魯赫膜的組分的自身熒光活性發(fā)生和/或通過OCT多普勒方法發(fā)生。
III.組織改變性分子在用于眼睛治療的具體實施方案中本發(fā)明利用組織改變性分子向眼組織傳遞。該組織改變性分子可以是增強擴(kuò)散的、降解的或兩者，并且其優(yōu)選地改變組織的物理、化學(xué)或兩種性質(zhì)。擴(kuò)散增強性分子用于增加跨布魯赫膜的擴(kuò)散，這通過a)減少膜自身的厚度；和/或b)減少布魯赫膜內(nèi)沉積物的量，和/或通過改變布魯赫膜的化學(xué)性質(zhì)而實現(xiàn)。其優(yōu)選地在給予個體時是非活性的且一旦暴露于能量源時則是活性的。在具體實施方案中，組織改變性分子是被束縛的。在其它具體實施方案中，組織改變性分子是降解酶，例如膽固醇酯酶、脂肪酶、基質(zhì)金屬蛋白酶或尤其是例如能夠增加跨布魯赫膜擴(kuò)散的，優(yōu)選通過降解一種或多種其組分而增加跨布魯赫膜擴(kuò)散的任何酶或蛋白質(zhì)。在其它具體實施方案中，組織改變性分子是去污劑，它能夠從布魯赫膜內(nèi)提取脂質(zhì)和非脂質(zhì)沉積物，其將增加跨布魯赫膜擴(kuò)散。
一些組織改變性分子包含至少一種氨基酸殘基和通過束縛呈非活性形式，其中至少一個氨基酸側(cè)鏈，例如來自半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或它們的組合，包含光可除去保護(hù)基團(tuán)，例如至少一種香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、和/或均二苯乙烯基基團(tuán)。在另一實施方案中，組織改變性分子是通過束縛在超聲造影劑中非活化的，例如微泡或脂質(zhì)體。有其它不含本領(lǐng)域已知的氨基酸殘基的組織改變性分子，例如表面活性劑。
制造組織改變性分子以便在預(yù)期的組織中提供有效的濃度。盡管在一些實施方案中組織改變性分子在未受影響的組織中累積，但是這對于個體不是問題，因為活化能量源對于布魯赫膜的精確靶向致使在膜內(nèi)選擇性地活化。被束縛的組織改變性分子累積的其它區(qū)域不用活化能量處理；因此，被束縛的組織改變性分子保持非活性并且經(jīng)由腎和/或肝被除去。在具體實施方案中，被束縛的分子是以任何方式都無害或無毒的，并且盡管如此可以從機(jī)體排泄，優(yōu)選小于在施用后約48小時，并且更優(yōu)選在施用后約24小時。
在一些實施方案中，組織改變性分子與特定的結(jié)合配體偶聯(lián)，該配體可以與布魯赫膜內(nèi)的特定靶向分子結(jié)合。靶向分子對于布魯赫膜可以是內(nèi)源性的，或可以通過應(yīng)用雙光子輻射交聯(lián)靶向分子選擇性地傳遞給布魯赫膜。在這些實施方案中，組織改變性分子將以較高的濃度傳遞給靶組織。在具體實施方案中，各種蛋白結(jié)合域例如亮氨酸拉鏈域是與組織改變性分子結(jié)合的。
IV.制劑制造組織改變性分子以便在預(yù)期的組織中提供有效的濃度。盡管在一些實施方案中組織改變性分子在未受影響的組織中累積，但是這對于個體不是問題，因為活化能量源對于布魯赫膜的精確靶向致使在該組織內(nèi)選擇性地活化。被束縛的組織改變性分子累積的其它區(qū)域不用活化能量治療；因此，被束縛的組織改變性分子保持非活性并且經(jīng)由腎和/或肝除去。在一些實施方案中，組織改變性分子與可以與靶布魯赫膜的特定表面組分結(jié)合的特定結(jié)合配體偶聯(lián)，或，如果需要，通過與向靶組織輸送較高濃度的載體一起制備。在具體實施方案中，各種蛋白結(jié)合域例如亮氨酸拉鏈區(qū)域與組織改變性分子結(jié)合。
制劑的性質(zhì)將部分地取決于給藥的形式和選擇的降解分子的性質(zhì)?？梢圆捎眠m合于特定組織改變性化合物的任何可藥用賦形劑或它們的組合。因此，該化合物可以作為含水組合物、作為局部組合物、作為經(jīng)膜或經(jīng)皮組合物、以口服制劑或靜脈內(nèi)制劑、以局部注射(例如眼周或眼內(nèi))或其組合的形式施用。該制劑也可以包括脂質(zhì)體。
V.施用和劑量組織改變性分子化合物可以以任何廣泛的方式施用，例如口服、腸胃外或直腸或該化合物可以直接放置在眼睛中，例如局部地或通過眼周注射。腸胃外給藥，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下是有用的。靜脈內(nèi)、眼周和眼內(nèi)注射是輸送本發(fā)明或其組分的特定實施方案。
組織改變性分子的劑量可以廣泛地取決于如下而變化給藥方式；其中攜帶該分子的藥劑，例如以脂質(zhì)體形式；或其是否與靶特異性配體偶聯(lián)，例如抗體或免疫活性片段。如通常所認(rèn)識的，在組織改變性分子類型、制劑、給藥方式和劑量水平之間有聯(lián)系。調(diào)整這些參數(shù)以適合特定的組合是可能和常規(guī)的。
VI.能量源能量源包括致使組織改變性分子活化的任何刺激物。其優(yōu)選地導(dǎo)致非活性組織改變性分子的活化。雖然能量源在本領(lǐng)域中是公知的，但是能量源的示例性的例子包括光或超聲。在具體實施方案中，使用雙光子光化學(xué)。在具體實施方案中，使用單色光。
在本發(fā)明中用于有效的、選擇性的光活化組織改變性分子的各種參數(shù)是相關(guān)的。因此，劑量也應(yīng)該就其他參數(shù)被調(diào)整，例如能流、輻照度、治療持續(xù)時間和施用劑型和治療輻射之間的時間間隔。應(yīng)該調(diào)整所有這些參數(shù)以產(chǎn)生增強的視覺功能而無對眼組織的顯著的損害，本領(lǐng)域技術(shù)人員能很好的理解到如何去做。
與雙光子吸收相關(guān)的組合物和方法在本領(lǐng)域中是公知的，盡管在美國專利6,267,913、美國專利6,472,541和WO 00/31588中描述了示例性的方法，它們都以全文引入作為參考。
VII.生成具有帶有光可除去保護(hù)基團(tuán)的側(cè)鏈的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)可以應(yīng)用多種策略來束縛。束縛可以通過用束縛基團(tuán)的反應(yīng)性前體來處理天然的、未束縛的分子來完成。例如氨基酸半胱氨酸的側(cè)鏈可以用光可除去的鄰硝基芐基基團(tuán)來束縛，這通過用鄰硝基芐基溴化物來處理包含半胱氨酸的蛋白質(zhì)而實現(xiàn)。束縛蛋白質(zhì)的選擇性策略包括蛋白質(zhì)的化學(xué)合成，其利用從合適的被束縛的氨基酸起始的固相肽合成，通過利用基于無義抑制的方法直接翻譯整合入蛋白質(zhì)，或通過用被束縛的氨基酸補充細(xì)菌營養(yǎng)缺陷的菌株而實現(xiàn)。
在具體實施方案中，在定位于布魯赫膜之前組織改變性分子被束縛以使其失活，并在暴露于能量源時活化。在具體實施方案中，組織改變性分子是具有氨基酸側(cè)鏈的蛋白質(zhì)。它們可用保護(hù)基團(tuán)來修飾，例如光可除去的保護(hù)基團(tuán)，包括半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸。光可除去的保護(hù)基團(tuán)的例子包括鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基基團(tuán)和/或它們的衍生物。這些保護(hù)基團(tuán)被加入如本文別處描述的側(cè)鏈。
VIII.黃斑變性光線通過眼睛的透明的前表面(角膜)進(jìn)入，穿過瞳孔的口，通過晶狀體，最終被眼睛后部的視網(wǎng)膜感知。視網(wǎng)膜是位于眼球內(nèi)側(cè)的多層結(jié)構(gòu)。它由專門的細(xì)胞構(gòu)成，其將光線轉(zhuǎn)化成電脈沖，該電脈沖傳到大腦中并產(chǎn)生視覺。
在視網(wǎng)膜中央，有一個很小、極專門化的區(qū)域叫做黃斑。它的直徑大約是1/8英寸，大約是字母“O”的大小。該黃斑具有最密集填充的光感受器，它們是收集光的細(xì)胞。它們由桿細(xì)胞和錐細(xì)胞構(gòu)成，它們也感知顏色。黃斑被提供有滋養(yǎng)細(xì)胞的富含氧的血液。
如果黃斑是完整的，個體能看到直接在其面前的任何東西的細(xì)微的細(xì)節(jié)。黃斑變性包括這一很小結(jié)構(gòu)的衰退或破壞。中央視覺變得模糊或消失，且直線看起來有波浪或斷裂。影像的邊緣可見，但是影像的中間不可見。其時，因為錐細(xì)胞被損壞，顏色的感覺被減弱。然而，患者不經(jīng)歷完全失明，并且?guī)缀蹩偸怯兄苓呉曈X環(huán)。
IX.玻璃疣萎縮性AMD的主要特征是黃斑玻璃疣的累積，即布魯赫膜的局部化增厚。布魯赫膜的擴(kuò)散增厚(基底的線性沉積物)是脈絡(luò)膜新生血管形成的最好的組織病理學(xué)預(yù)報因子。玻璃疣主要由泡狀的物質(zhì)(脂質(zhì))和交聯(lián)蛋白質(zhì)組成。
玻璃疣的存在是黃斑變性的常見特征。在具體實施方案中，用本文描述的方法治療至少一只眼睛有玻璃疣或增厚的布魯赫膜的個體。
實施例通過舉例的方式提供下述實施例，并不是為了以任何方式限制本實施例1被束縛的組織改變性分子利用光可除去的保護(hù)基團(tuán)通過在蛋白質(zhì)內(nèi)掩蔽各種氨基酸側(cè)鏈來構(gòu)建被束縛的組織改變性酶。這種基團(tuán)的例子是鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基基團(tuán)和它們的衍生物。這些基團(tuán)通過總化學(xué)合成(包括天然化學(xué)連接)、無義抑制方法或翻譯后修飾被引入蛋白質(zhì)?；谝阎牟剪敽漳さ幕|(zhì)成分，膽固醇酯酶、脂肪酶、基質(zhì)金屬蛋白酶來降解部分布魯赫膜和改善跨膜擴(kuò)散。“束縛”這些酶是使它們失活。因此，在全身性施用之后，它們循環(huán)、與組織結(jié)合，然后以它們的非活性的形式被消除。精確聚焦的光能對布魯赫膜的應(yīng)用(雙光子光化學(xué))使得能除去“束縛保護(hù)基團(tuán)”和在布魯赫膜內(nèi)選擇性地活化酶。一旦被活化，受控制的降解就發(fā)生且促進(jìn)跨膜擴(kuò)散。這減少了發(fā)展脈絡(luò)膜新生血管形成的可能性。它也可以改善患有增厚的布魯赫膜的年老個體的暗適應(yīng)和夜間視覺。它也可以引起建立的脈絡(luò)膜新生血管形成的衰退。
或者，利用基團(tuán)例如鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂酰基、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基和/或均二苯乙烯基部分和它們的衍生物“束縛”溫和的去污劑分子(例如表面活性劑)，并同樣地通過輻射活化(例如，通過雙光子輻射)來影響布魯赫膜的選擇性的生化修飾。與酶治療相似，這些活化的去污劑分子改變老化的布魯赫膜的擴(kuò)散屏障以減小視力喪失的可能性和/或改善視覺功能。
實施例2選擇性的失活實施方案降解酶(基質(zhì)金屬蛋白酶，膽固醇酯酶，脂肪酶，絲氨酸蛋白酶)也可以被整合入超聲造影劑例如微泡和脂質(zhì)體。攜帶在這些造影劑內(nèi)，降解分子是非活性的。超聲能量對布魯赫膜的精確應(yīng)用引起造影劑的空化作用且將降解酶釋放入布魯赫膜。與上述實施例相似，酶釋放促進(jìn)跨膜擴(kuò)散和潛在地改善視覺功能。未被超聲活化的、維持眼外被囊化的非活性酶從體內(nèi)排除而不引起伴隨的組織改變。
實施例3靶向改善在前面實施例中給予的許多酶都存在于布魯赫膜和/或RPE中。此外，它們存在于循環(huán)中。為了增加這些酶在布魯赫膜內(nèi)的局部濃集，這些酶被融合入各種蛋白結(jié)合域，例如亮氨酸拉鏈域、殼多糖結(jié)合域或Src同源2(SH2)區(qū)域。技術(shù)人員認(rèn)識到異二聚體拉鏈包括酸性和堿性配偶體并且可以自我聚集入作為二聚體和高級聚集體存在的卷曲螺旋。因此，在一些實施方案中，酸性(堿性)亮氨酸拉鏈域可以經(jīng)由通過雙光子輻射啟動的光交聯(lián)選擇性地傳遞至布魯赫膜。在具體實施方案中，酶與堿性(酸性)亮氨酸拉鏈域融合并例如全身性地(例如口服或靜脈內(nèi))或通過注射(例如眼內(nèi)和/或眼周注射)施用并分布至包括布魯赫膜在內(nèi)的細(xì)胞外組織。布魯赫膜內(nèi)異二聚體的形成增加了降解酶的局部濃集且隨后增進(jìn)了跨膜擴(kuò)散性質(zhì)。因為這些降解酶的濃度將在其它組織中維持較低，所以沒有不合需要的伴隨的組織改變。此外，利用在實施例1中列出的方法可以生產(chǎn)包含光活性基團(tuán)(例如benzophenoyl、疊氮基苯、三氟甲基苯基diazirinyl)的酶。全的酶。全身性施用這些酶，然后選擇性輻射布魯赫膜啟動酶和布魯赫膜之間的光交聯(lián)，增加降解酶的濃度。在其它實施方案中，蛋白結(jié)合域促進(jìn)靶向組織改變性分子與被靶向的組織的結(jié)合，例如通過將蛋白質(zhì)結(jié)合在組織上或組織內(nèi)。
實施例4治療眼病癥給予患有眼病癥例如萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性(示例性的實施方案)在光活化時能夠改變布魯赫膜的被束縛的、非活性的酶。在具體實施方案中，施用是全身性的(例如靜脈內(nèi)或口服)或通過注射(例如眼內(nèi)和/或眼周注射)。在其它具體實施方案中，該被束縛的、非活性的酶是標(biāo)記的，如利用熒光標(biāo)記的，雖然在選擇性地實施方案中，該被束縛的、非活性的酶是未標(biāo)記的。
僅出于說明的目的，該被束縛的非活性的分子是熒光的。在施用后數(shù)分鐘，通過雙光子輻射在黃斑布魯赫膜中觀察熒光的、被束縛的降解復(fù)合物。在聚焦于黃斑布魯赫膜中的熒光標(biāo)記后，較高劑量的雙光子輻射被應(yīng)用于釋放酶和啟動布魯赫膜的部分降解。全身分布的非輻射的束縛酶以它們的非活性形式被排泄。在對眼結(jié)構(gòu)無毒性的水平進(jìn)行標(biāo)記的布魯赫膜的雙光子輻射觀察和降解物質(zhì)的光活化。
或者，熒光標(biāo)記不附著于全身施用的束縛的降解酶復(fù)合物。在大約十至六十分鐘以后，給予束縛的降解分子復(fù)合物。約五分鐘后，通過雙光子輻射熒光標(biāo)記使布魯赫膜可見。然后使用較高劑量的雙光子輻射來活化束縛的降解分子復(fù)合物。
在另一實施方案中，熒光標(biāo)記不附著于全身施用的束縛的降解酶復(fù)合物。在大約十至六十分鐘以后，使用雙光子輻射來使布魯赫膜中熒光的量可見。熒光的定量是萎縮性黃斑變性嚴(yán)重性的診斷指示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，有基于從靶組織例如布魯赫膜散射的內(nèi)在光鑒定將要被處理的組織的方法。具有可見光或紅外光的光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)被用于檢測眼中布魯赫膜的物理或化學(xué)性質(zhì)的改變。OCT不僅可以被用于觀察中的結(jié)構(gòu)，也可以被用于通過多普勒OCT觀察結(jié)構(gòu)的靈活性和通過合并OCT與外源性的染料來觀察化學(xué)性質(zhì)。在這一實施方案中，OCT和/或它的變體被用于測定具有改變的性質(zhì)的布魯赫膜的性質(zhì)以允許引導(dǎo)的治療。治療可以是在布魯赫膜中或布魯赫膜附近的內(nèi)在或外在物質(zhì)的光釋放或光活化或光切除。
靶向布魯赫膜的示例性的實施方案描述在圖1中。
參考文獻(xiàn)在本說明書中提及的所有專利和出版物都表明與本發(fā)明有關(guān)的本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平。所有專利和出版物都在此引入作為參考，其程度上與具體和單獨將每一單獨的出版物在此引入作為參考的程度相同。
美國專利No.5,756,541美國專利No.5,798,349美國專利No.5,910,510美國專利No.5,935,942美國專利No.6,128,525美國專利No.6,140,314美國專利No.6,225,303美國專利No.6,248,727美國專利No.6,267,913美國專利No.6,472,541WO 00/31588
權(quán)利要求
1.治療眼病癥的方法，包括增加所述眼中的跨布魯赫膜擴(kuò)散的步驟。
2.權(quán)利要求1的方法，其中增加的擴(kuò)散是減小所述膜的厚度、改變其組成或兩者的結(jié)果。
3.在個體的至少一只眼睛中增加跨布魯赫膜擴(kuò)散的方法，包括步驟以足以形成布魯赫膜/非活性擴(kuò)散增強性分子復(fù)合物的量給予布魯赫膜非活性形式的擴(kuò)散增強性分子；和使所述復(fù)合物暴露于活化源，其中所述活化源將所述非活性擴(kuò)散-增強性分子活化成所述擴(kuò)散增強性分子的活性形式，所述活化導(dǎo)致跨所述膜的擴(kuò)散的增加。
4.權(quán)利要求3的方法，其中擴(kuò)散的增加是減小膜厚度、改變膜組成或兩者的結(jié)果。
5.權(quán)利要求3的方法，其中所述擴(kuò)散的增加是改變膜中脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或兩者的結(jié)果。
6.權(quán)利要求3的方法，其中個體具有眼病癥。
7.權(quán)利要求6的方法，其中眼病癥是與年齡相關(guān)的黃斑變性、青少年黃斑變性、Sorby′s fundus營養(yǎng)不良，或與黃斑變性無關(guān)的年齡相關(guān)性視覺功能降低。
8.權(quán)利要求3的方法，其中非活性的擴(kuò)散增強性分子直接與膜結(jié)合。
9.權(quán)利要求3的方法，其中非活性的擴(kuò)散增強性分子是蛋白質(zhì)、去污劑或表面活性劑。
10.權(quán)利要求9的方法，其中蛋白質(zhì)是酶。
11.權(quán)利要求10的方法，其中非活性的酶進(jìn)一步被定義為是在所述酶的氨基酸側(cè)鏈上被至少一個光可除去的保護(hù)基團(tuán)束縛的。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述保護(hù)基團(tuán)是鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基基團(tuán)或它們的組合。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述保護(hù)基團(tuán)是鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂酰基、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基、均二苯乙烯基基團(tuán)或它們的衍生物。
14.權(quán)利要求11的方法，其中氨基酸是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或它們的組合。
15.權(quán)利要求9的方法，其中去污劑被進(jìn)一步定義為被包含至少一個鄰硝基芐基、二苯乙酮基、苯甲酰甲基、反式鄰肉桂?；?、香豆素基、喹啉-2-only、呫噸基、硫代呫噸基、硒基呫噸基和蒽基或均二苯乙烯基基團(tuán)的化合物束縛。
16.權(quán)利要求9的方法，其中蛋白質(zhì)進(jìn)一步被定義為被超聲造影劑束縛。
17.權(quán)利要求16的方法，其中超聲造影劑是微泡或脂質(zhì)體。
18.權(quán)利要求9的方法，其中蛋白質(zhì)進(jìn)一步包含蛋白結(jié)合域。
19.權(quán)利要求18的方法，其中蛋白結(jié)合域是異二聚體域。
20.權(quán)利要求18的方法，其中蛋白結(jié)合域是亮氨酸拉鏈域、殼多糖結(jié)合域或Src同源2(SH2)域。
21.權(quán)利要求3的方法，其中非活性擴(kuò)散增強性分子在藥理上可接受的組合物中被給予個體。
22.權(quán)利要求21的方法，其中非活性擴(kuò)散增強性分子在藥理上可接受的組合物中被全身性地給予個體。
23.權(quán)利要求21的方法，其中非活性擴(kuò)散增強性分子在藥理上可接受的組合物中被口服、經(jīng)注射、直腸、陰道或局部給予個體。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述注射是眼內(nèi)的或眼周的。
25.權(quán)利要求10的方法，其中所述酶是基質(zhì)金屬蛋白酶、膽固醇酯酶、脂肪酶、組織蛋白酶、蛋白酶或它們的組合。
26.權(quán)利要求25的方法，其中蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。
27.權(quán)利要求3的方法，其中所述活化源是能量。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述能量是光或超聲。
29.權(quán)利要求3的方法，其中所述活化源是雙光子輻射。
30.權(quán)利要求3的方法，其中所述暴露步驟進(jìn)一步被定義為將所述復(fù)合物暴露于來自聚焦的激光光源的光能。
31.權(quán)利要求3的方法，其中擴(kuò)散增強性分子用熒光分子標(biāo)記。
32.權(quán)利要求3的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括使所述膜可視的步驟。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述膜可視是通過傳遞用于膜的靶向熒光標(biāo)記物、通過鑒別膜的固有自身熒光或通過光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)多普勒。
34.治療個體的至少一只眼睛中的與年齡相關(guān)的黃斑變性的方法，所述黃斑變性以增厚的布魯赫膜為特征，包括以足以使所述分子與膜結(jié)合以形成布魯赫膜/非活性擴(kuò)散增強性分子復(fù)合物的量給予所述個體非活性形式的擴(kuò)散增強性分子，其中所述非活性的擴(kuò)散增強性分子在藥理上可接受的組合物中被給予；和使所述復(fù)合物暴露于活化源，其中在所述暴露步驟后，跨所述眼睛膜的擴(kuò)散增加。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述布魯赫膜是可視的。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述可視被定義為以用于使膜可視的足以與布魯赫膜結(jié)合的量給予個體熒光分子。
37.權(quán)利要求35的方法，其中所述可視被定義為鑒別膜自身熒光。
38.權(quán)利要求35的方法，其中所述可視是通過光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)多普勒。
39.權(quán)利要求36的方法，其中發(fā)射的熒光的量與在所述布魯赫膜中的脂質(zhì)的量成比例。
40.權(quán)利要求35的方法，其中所述可視被定義為給予個體可見光或紅外光。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述給予可見光或紅外光包括應(yīng)用光相干性X射線斷層術(shù)。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括給予外源性染料。
43.試劑盒，其裝在合適的容器中，包含非活性的布魯赫膜擴(kuò)散增強性分子。
44.權(quán)利要求43的試劑盒，進(jìn)一步包含用于活化所述非活性的布魯赫膜降解分子的活化源。
45.權(quán)利要求43的試劑盒，進(jìn)一步包含熒光分子。
46.診斷個體的至少一只眼中的眼病癥的方法，包括以足以使熒光分子與眼中布魯赫膜結(jié)合的量給予個體熒光分子；將布魯赫膜暴露于輻射以觀察熒光，其中熒光的量是眼病癥嚴(yán)重性的指示。
47.權(quán)利要求46的方法，其中所述方法進(jìn)一步包含使所述膜可視的步驟。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述膜可視是通過傳遞用于膜的靶向熒光標(biāo)記物、通過鑒別膜的固有自身熒光或通過光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)多普勒。
49.權(quán)利要求46的方法，其中眼病癥是黃斑變性。
50.權(quán)利要求46的方法，其中輻射是雙光子輻射。
51.治療個體眼病癥的方法，包括使眼中的布魯赫膜可視；以足以形成布魯赫膜/非活性光活化擴(kuò)散增強性分子復(fù)合物的量給予個體非活性形式的光活性擴(kuò)散增強性分子；使所述復(fù)合物暴露于活化源，其中所述活化源將所述非活性光活化擴(kuò)散增強性分子活化成所述光活化擴(kuò)散增強性分子的活性形式，所述活化導(dǎo)致跨玻璃膜的擴(kuò)散的增加、組成的改變或兩者。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述膜可視是通過傳遞用于膜的靶向熒光標(biāo)記物、通過鑒別膜的固有自身熒光或通過光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)多普勒。
53.權(quán)利要求52的方法，其中熒光標(biāo)記物與光活化分子的非活性形式相連。
54.權(quán)利要求51的方法，其中非活性光活化分子與布魯赫膜中的脂質(zhì)相連。
55.改變個體的眼組織的方法，包括步驟以足以使所述分子靶向所述組織的量給予眼組織非活性形式的組織改變性分子；使所述分子暴露于活化源，其中所述活化源將所述非活性組織改變性分子活化成所述組織改變性分子的活性形式，所述活化導(dǎo)致所述眼組織的至少部分的改變。
56.權(quán)利要求55的方法，其中該方法提供對于所述個體眼病癥的治療。
57.權(quán)利要求3的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括使所述組織可視的步驟。
58.權(quán)利要求32的方法，其中所述膜可視是通過傳遞用于膜的靶向熒光標(biāo)記物、通過鑒別膜的固有自身熒光或通過光相干性X射線斷層術(shù)(OCT)多普勒。
59.權(quán)利要求56的方法，其中眼病癥是年齡相關(guān)性黃斑變性、青少年黃斑變性、Sorby′s fundus營養(yǎng)不良，或與黃斑變性無關(guān)的年齡相關(guān)性視覺功能降低或青光眼。
60.權(quán)利要求55的方法，其中非活性的組織改變性分子在藥理上可接受的組合物中被給予個體。
61.權(quán)利要求55的方法，其中非活性的組織改變性分子在藥理上可接受的組合物中被全身性地給予個體。
62.權(quán)利要求55的方法，其中非活性組織改變性分子在藥理上可接受的組合物中被口服地、通過注射、直腸、陰道或局部地給予個體。
63.權(quán)利要求62的方法，其中所述注射是眼內(nèi)的或眼周的。
全文摘要
本發(fā)明涉及改變眼中至少一個組織的至少部分的物理和/或化學(xué)性質(zhì)。在具體實施方案中，它涉及任何眼病癥的治療，雖然尤其是在個體具有增厚的布魯赫膜的實施方案中?；罨芰吭幢挥脕碛绊懯芸刂频臄U(kuò)散增強和/或布魯赫膜的降解，這使得在脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜之間有改善的擴(kuò)散轉(zhuǎn)運。給予個體非活性的擴(kuò)散增強性分子，其變得與膜結(jié)合，然后使其精確地暴露于活化能量源，例如光或超聲。
文檔編號G01N21/64GK1678342SQ03820811
公開日2005年10月5日 申請日期2003年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月2日
發(fā)明者D·M·施瓦茨, S·弗雷澤, R·H·格魯布斯, J·P·加利文, 喻長軍 申請人:加州大學(xué)評議會, 加利福尼亞科技學(xué)院