專利名稱：在分析用載體上沉積和分布試劑用的掩模片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在分析用載體上沉積和分布一種或多種試劑用的掩模片，具體而言，所述分析用載體為一種用于電泳的載體，例如瓊脂糖凝膠。
本發(fā)明對于常規(guī)分析來說是有利的，特別是對于在上下文中的臨床分析類型是有利的。
本發(fā)明還涉及一種掩模片，旨在使一種或多種試劑沉積并分布在分析用載體上。該掩模片與一種具有定位裝置的設(shè)備結(jié)合使用，當(dāng)所述掩模片被用來沉積并分布所述試劑時(shí)，該定位裝置允許所述掩模片在所述載體附近相對于分析用載體進(jìn)行定位。
這些定位裝置也可以與導(dǎo)向裝置結(jié)合使用，或可以包括導(dǎo)向裝置，用于當(dāng)掩模片被定位在分析用載體附近時(shí)移動所述掩模片，并允許試劑被分布于載體上的限定區(qū)域上，該限定區(qū)域包括被指定用于培養(yǎng)試劑和樣本成分的區(qū)域。
本發(fā)明的所述設(shè)備允許人工對試劑進(jìn)行沉積和分布。也可以配置成對這些試劑進(jìn)行自動沉積，并可選擇地進(jìn)行分布。
在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，將試劑裝入掩模片中的步驟也可以以人工或自動方式實(shí)施。有利的是，本發(fā)明的掩模片比現(xiàn)有的掩模片更加易于裝載。
另一方面，本發(fā)明提供了一種用于將試劑沉積并分布于分析用載體上的方法。
在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，該方法被用于對試劑進(jìn)行沉積和分布，以實(shí)施免疫固定，通過該方法檢測或者確定一種生物樣本中含有的特定成分的量，所述成分已經(jīng)通過電泳法分離在載體例如瓊脂糖凝膠上。
本發(fā)明還涉及一種應(yīng)用所述掩模片的免疫固定方法。
另一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，包括按照本發(fā)明的掩模片。
按照本發(fā)明的一種試劑盒有利地適合于實(shí)施一種使用本發(fā)明的掩模片的免疫固定。
本發(fā)明也涉及用于對所述掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置。
應(yīng)當(dāng)記得，免疫固定是一種特別是在臨床分析實(shí)驗(yàn)室中廣泛采用的常規(guī)分析，該方法可以對生物樣本進(jìn)行以對其中所含有的病變蛋白進(jìn)行以分型為目的分析。
結(jié)合電泳法使用，在電泳凝膠體上形成沉淀物的這種技術(shù)在很長一段時(shí)間里是公知的。具體地，該技術(shù)已經(jīng)在Alper CA和Johnson AM Vox.Sang.17445(1969)，Cawley LP et al.，Clin.Chem.221262(1976)，RitchieRF和Smith R Clin.Chem.22497，1735，1982(1976)中被公開。這種技術(shù)允許在不同生物樣本特別是在生物液體例如血清，尿或腦脊髓液中辨別異常。
這種技術(shù)主要包括以下步驟(1)利用電泳法從試驗(yàn)血清或液體中將蛋白質(zhì)成分分離在一種載體上，這種載體例如是凝膠體，這種凝膠體例如是瓊脂糖凝膠；(2)與分離蛋白的特異抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)；(3)對形成的免疫合成物進(jìn)行顯色。
實(shí)施這些步驟的條件已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中公開。
使用的設(shè)備也包括在相同的電泳載體上產(chǎn)生基準(zhǔn)狹道(軌跡)等的可能性，具體是在相同的凝膠體上，通過使用蛋白質(zhì)固定劑對存在于樣本上的所有分離蛋白質(zhì)進(jìn)行固定而獲得，所述蛋白質(zhì)固定劑例如包括多價(jià)抗血清。
用于對待分析的生物樣本進(jìn)行的、且用于在控制的溫度下的遷移并用于沉積試劑(例如包括抗血清和固定劑)的新的半自動技術(shù)允許免疫固定的輪廓小型化，并保持理想的敏感度和分辨率。這種小型化允許在同一電泳載體上特別是在同一凝膠體上承載大量待分析的樣本。
這樣，我們已經(jīng)用幾年時(shí)間在單個(gè)8×10cm的電泳凝膠體上從進(jìn)行一個(gè)免疫固定發(fā)展到進(jìn)行9個(gè)免疫固定(例如，使用SEBIA出售的商標(biāo)為Hydragel9 IF的免疫固定試劑盒)。這就節(jié)約了分析時(shí)間，并減小了試劑的消耗，從而降低了分析的成本。
為了在這種條件下進(jìn)行免疫固定從而使試劑沉積的目的，例如歐洲專利EP-B1-0 526 271公開了一種用于分配試劑、通常具體為抗血清和固定劑的掩模片或裝置，其能夠克服現(xiàn)有技術(shù)的裝置或掩模片所產(chǎn)生的問題，且更安全和易于使用。從而，例如使用在EP-B1-0 526 271中所描述的掩模片，在三個(gè)樣本的三行中的同一電泳凝膠體上進(jìn)行9個(gè)免疫固定，對于每一個(gè)樣本，必須移出6種試劑(固定劑，抗-IgG抗血清，抗-IgA抗血清，抗-IgM抗血清，抗-k抗血清和抗-O抗血清)，即總共54次移液操作。
這些手動移液操作證明是長時(shí)間且困難的，即使使用重復(fù)劑量移液器也是這樣的。
在第一方面中，本發(fā)明提供一種用于將試劑沉積和分布在分析用載體上的掩模片，這種設(shè)計(jì)考慮了其應(yīng)用，所述應(yīng)用包括將其移動，以進(jìn)行將試劑分布到分析用載體的預(yù)定區(qū)域上的步驟。因此本發(fā)明的掩模片可以被認(rèn)為是一種使用中可移動的掩模片。
本發(fā)明還限制了試劑的消耗，特別是昂貴的抗血清和免疫固定反應(yīng)情況下的固定劑的消耗，因此降低了所進(jìn)行的分析的成本。它還有利于將試劑加載到掩模片中，特別是通過限制移液操作的次數(shù)和/或通過使掩模片被自動加樣。
另外，在改善的或甚至簡化的操作條件下，所述掩模片確保了恒定的結(jié)果質(zhì)量。尤其是，在使用本發(fā)明的裝置培養(yǎng)被分布的試劑階段之后，不再必須去掉留在凝膠體和掩模片之間的多余試劑，這和使用EP-B1-0 526271中提出的掩模片時(shí)的情況相同。
使用本發(fā)明的掩模片，在分散和分布試劑之后，在掩模片和分析用載體之間不再有自由的試劑，這是由于，起初被引入的所有試劑已經(jīng)沉積在分析用載體上。因此，不必泵去可能存在于分析用載體上的任何多余試劑。
因此，本發(fā)明提供了一種將試劑沉積和分布在一種用于分析生物樣本的分析用載體上的掩模片，包括——一個(gè)下表面和一個(gè)上表面，它們至少局部地相互平行，它們隔開構(gòu)成掩模片厚度的距離；——一個(gè)或多個(gè)劃定的區(qū)域(狹道)，它們位于掩模片下表面的水平面上，并包括一個(gè)從掩模片下表面凸出的元件(凸出元件)，各凸出元件包括構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面的一部分；——與一狹道相連的一個(gè)開口，該開口在掩模片的整個(gè)厚度上從掩模片上表面的一個(gè)上部孔到一個(gè)下部孔橫過所述掩模片，所述下部孔位于狹道斜面的最低點(diǎn)附近的狹道中；所述掩模片是這樣的，即其包含的一個(gè)或多個(gè)狹道能夠通過毛細(xì)作用將加載入每個(gè)開口并要沉積在分析用載體上的試劑保持在所述狹道和所述分析用載體的表面之間，所述掩模片朝向該表面放置。
用在本發(fā)明中的術(shù)語“掩模片”通常表示一塊板，該板被設(shè)計(jì)成允許對準(zhǔn)分析用載體上的劃定區(qū)域定位，如果必須與相關(guān)的裝置相結(jié)合，其中當(dāng)試劑被加載到掩模片中并與劃定區(qū)域接觸時(shí)，試劑必須被沉積并分布。
本發(fā)明的掩模片的尺寸是這樣的，即，當(dāng)操作時(shí)掩模片與分析用載體緊鄰時(shí)，其不會覆蓋分析用載體的整個(gè)表面，加載在掩模片上的試劑被沉積并分布于載體上。特別是掩模片的寬度(包括其狹道的長度)小于分析用載體的電泳遷移狹道的長度，這是由于掩模片的狹道的長度小于分析用載體的電泳遷移狹道的長度。試劑在這些狹道上的分布是由于此后所述的掩模片在分析用載體上的移動引起的，而且是由于試劑在所述載體上的移動而引起的——這是作為掩模片狹道結(jié)構(gòu)所可以產(chǎn)生的結(jié)果。
本發(fā)明的掩模片可以在分析用載體上方移動，為的是分布試劑。
所述開口被指定為“與各狹道相連”，在本發(fā)明的上下文中這指的是如此設(shè)定其下部孔，以便將加載到掩模片的開口中的試劑供給到狹道的斜面上，以允許試劑被沉積到分析用載體上，并且以便通過毛細(xì)作用而將試劑保持在載體和狹道之間，并在掩模片移動期間將試劑分布在分析用載體上。
所述開口例如是一個(gè)垂直于掩模片上表面的孔，從一側(cè)到另一側(cè)橫穿掩模片。所述開口的下部孔優(yōu)選地位于鄰近斜面的最低點(diǎn)處的斜面中。通過位于狹道斜面——相對于水平面——的最低點(diǎn)的“附近”，當(dāng)試劑沿狹道上升時(shí)，所述開口的下部孔使得液體試劑分布在狹道中。
所述開口的上部孔可以垂直于所述下部孔?；蛘呤牵淇梢员谎刂鄬τ谠摯怪泵鎯A斜的平面定位，假定其允許所述試劑在與試劑沉積和分布在分析用載體上相匹配的條件下被供給所述下部孔。
有利的是，與狹道相連的開口由掩模片上表面中的一個(gè)圓形孔開口形成，所述開口由一個(gè)垂直于掩模片的上表面并從一側(cè)到另一側(cè)橫穿掩模片的孔構(gòu)成，其由一個(gè)例如圓柱部開口中的截頭圓錐端部延伸到所述掩模片的下表面中，經(jīng)由位于斜面的最低點(diǎn)附近的狹道中的孔。在通向下部孔中的圓柱部開口可以分配壓力，所述壓力是當(dāng)加載試劑時(shí)由例如移液器施加在下部孔的邊緣上的，這樣就提高了掩模片的強(qiáng)度。
有利的是，所述截錐開口引導(dǎo)一填充移液器，當(dāng)將試劑注入所述狹道和所述分析用載體之間時(shí)在移液器的端部和所述掩模片之間提供密封。
如果需要，上述開口可以被改為所述圓錐部分經(jīng)由具有圓形截面的圓柱形部分而延伸到所述開口的上部孔。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例，被公開的所述開口也可以這樣的，即，上部孔大于開口的下部孔，例如如果所述孔為圓形則上部孔的直徑大于下部孔的直徑。
如上所述的特定掩模片適合于將試劑分布在用于生物樣本的分析用載體上，該掩模片可以被限定為包括
——一個(gè)下表面和一個(gè)上表面，它們至少局部地相互平行，它們隔開一構(gòu)成掩模片厚度的距離；——一個(gè)或多個(gè)狹道，其中每個(gè)包括一從掩模片的下表面向下凸起的細(xì)長形狀的凸出元件，所述凸出元件包括構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面的一部分；——與每一狹道相連的一個(gè)開口，該開口在掩模片的整個(gè)厚度上從掩模片上表面的一個(gè)上部孔到一個(gè)下部孔橫過所述掩模片，所述下部孔位于狹道斜面的最低點(diǎn)附近的狹道中；所述掩模片是這樣的，即其包含的一個(gè)或多個(gè)狹道能夠通過毛細(xì)作用將加載入每個(gè)開口并沉積在分析用載體上的試劑保持在所述狹道和分析用載體的表面之間，所述掩模片朝向該表面放置。
掩模片的狹道呈細(xì)長形狀和被稱為斜面形。它們的所有斜面均沿相同方向傾斜。
所述斜面旨在借助如上文所指出的毛細(xì)作用保持試劑，并保證試劑被送到斜面的最低點(diǎn)，以便當(dāng)掩模片移動時(shí)對試劑進(jìn)行分布。
如上所述的本發(fā)明的另一種特別優(yōu)選的掩模片包括——一個(gè)下表面和一個(gè)上表面，它們至少局部地相互平行，它們隔開一構(gòu)成掩模片厚度的距離；——一個(gè)或多個(gè)狹道，其中每個(gè)包括一從掩模片的下表面向下凸起的凸出元件，所述凸出元件由一呈截頭平行六面體形狀的隆起構(gòu)成，且所述凸出元件包括構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面的一部分；——與每一狹道相連的一個(gè)開口，該開口在掩模片的整個(gè)厚度上從掩模片上表面的一個(gè)上部孔到一個(gè)下部孔橫過所述掩模片，所述下部孔位于狹道斜面的最低點(diǎn)附近的狹道中；所述掩模片是這樣的，即其包含的一個(gè)或多個(gè)狹道能夠通過毛細(xì)作用將加載入每個(gè)開口并沉積在分析用載體上的試劑保持在所述狹道和分析用載體的表面之間，所述掩模片朝向該表面放置。
當(dāng)所述凸出元件由一呈細(xì)長形狀的元件構(gòu)成或由呈截頭平行六面體形狀的隆起構(gòu)成時(shí)，所述凸出元件具有上表面，該上表面與掩模片的下表面的部分相重合，所述凸出元件從所述的掩模片的下表面的部分凸出，所述凸出元件還具有一下表面，該下表面與沿著至少一相對于水平面的斜面的上表面相分離，位于每個(gè)狹道的開口的所述下部孔附近的所述斜面的最低點(diǎn)為最靠近與其相面對的分析用載體的點(diǎn)，且該點(diǎn)位于當(dāng)處于使用位置時(shí)其被帶到的位置附近。
包括一從掩模片的下表面凸出的斜面的所述凸出元件能夠通過使掩模片沿著分析用載體的一個(gè)區(qū)域移動，而使載入掩模片中的試劑有利地沉積和分布，其中所述區(qū)域在相對于此載體水平的平面中朝向掩模片的一個(gè)或多個(gè)狹道。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述掩模片具有一個(gè)或多個(gè)狹道，每個(gè)狹道包括一個(gè)從其下表面凸出的凸出元件，所述凸出元件包括一空心球體，其空腔用于接收試劑，其尺寸適應(yīng)于必須由試劑覆蓋的分析用載體的區(qū)域的寬度，當(dāng)所述掩模片被移動時(shí)，經(jīng)由形成在所述球體中的一孔，所述試劑由毛細(xì)作用保持在球體空腔中，且被分布在分析用載體上。這種掩模片也具有上文限定的細(xì)長形狀的凸出元件的特征。
在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，所述掩模片的下表面和上表面彼此完全平行，并遠(yuǎn)離構(gòu)成狹道的區(qū)域，即遠(yuǎn)離構(gòu)成狹道的斜面的區(qū)域。
在如上所述的本發(fā)明的實(shí)施例中，在掩模片的每個(gè)狹道處所述斜面與狹道相符合，而不考慮凸起元件的形狀。
或者是，所述斜面可僅延伸過所述狹道的一部分。一個(gè)例子是，在其斜面的最低點(diǎn)處包括一下部孔的所述狹道可以延伸超過所述斜面，例如處于水平面中。在另外的變化中，所述斜面可以由多個(gè)斜面構(gòu)成。
當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的掩模片與用于分析生物樣本——例如一種電泳凝膠體——的載體結(jié)合使用時(shí)，該掩模片被置于分析用載體的“附近”這意味著所述掩模片不與載體的其上沉積并分布試劑的區(qū)域(試劑培養(yǎng)區(qū)域)相接觸，且被沉積在所述載體上的一種或多種試劑由掩模片狹道和所述分析用載體之間的毛細(xì)作用保持在所述載體上，這就允許它們被分布在該分析用載體的預(yù)定區(qū)域上，在掩模片于載體上平行于分析用載體移動期間，所述預(yù)定區(qū)域位于面對掩模片的狹道的位置。在本發(fā)明的特定實(shí)施例中，上述不接觸狀態(tài)更具體的是這種不接觸狀態(tài)允許試劑減少的開始就使其沉積在分析用載體上，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例，這種減少實(shí)際上引起了與分析用載體暫時(shí)地接觸，這將在下文中描述和舉例說明。
形成在每個(gè)掩模片狹道的凸出元件處的斜面是這樣的，即其被稱為是最低點(diǎn)的點(diǎn)是最靠近由位于使用位置的分析用載體構(gòu)成的水平平面的點(diǎn)。結(jié)果是，所述狹道的斜面的被稱為是最高點(diǎn)的點(diǎn)是最遠(yuǎn)離由位于該操作位置的分析用載體構(gòu)成的水平平面的點(diǎn)。掩模片的面對載體的每個(gè)狹道的下表面相對于所述水平面傾斜。
在沉積于所述分析用載體上的試劑分布期間，所述狹道相對于分析用載體的水平平面的位置和與每個(gè)狹道相連的開口的下部孔的位置保證了試劑達(dá)到狹道的斜面的最下點(diǎn)，在該點(diǎn)，施加在所述試劑上的毛細(xì)作用力達(dá)到最大。
構(gòu)成所述試劑的液體可以分布在整個(gè)狹道上，或僅分布在所述狹道的一部分上。
所述一種或多種試劑可使用本發(fā)明的掩模片以一種控制的方式被沉積或分布在分析用載體的限定區(qū)域上，而不在掩模片的狹道和分析用載體之間建立任何接觸。
遠(yuǎn)離分析用載體的在使用期間與掩模片的狹道排齊的區(qū)域，由于移動，可以在所述掩模片和分析用載體之間建立接觸，所述掩模片可以沿著該載體平行于分析用載體地滑動，而不將其損壞。
在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，在使用期間沒有掩模片的點(diǎn)與分析用載體接觸，但也有掩模片的可能例外的區(qū)域——其被定位在分析用載體的附近。
優(yōu)選的是，當(dāng)掩模片必須被支撐以便將其定位在靠近分析用載體處時(shí)，這在遠(yuǎn)離所述分析用載體處完成，例如安放所述載體的平面(或板)上完成。
當(dāng)考慮所述掩模片、狹道或斜面的上表面和下表面時(shí)，這些概念被認(rèn)為是參照掩模片在分析用載體上的位置而作出的，其本身位于水平的位置。換言之，當(dāng)掩模片處于使用位置中時(shí)，掩模片的下表面和每個(gè)狹道或每個(gè)斜面的下表面面對分析用載體的表面。這樣相對于其限定凸出元件的斜面的水平面可以是分析用載體在其處于水平位置時(shí)被應(yīng)用的水平面。
本發(fā)明還涉及一掩模片，其將試劑沉積并分布于分析用載體上的應(yīng)用體現(xiàn)本發(fā)明的原理，即利用限定在掩模片中的斜面和面對所述狹道的分析用載體的區(qū)域之間的毛細(xì)作用來保持試劑，所述掩模片區(qū)別于上述掩模片之處在于，構(gòu)成掩模片的每個(gè)狹道的斜面由在其使用過程中賦予掩模片相對于分析用載體的傾斜形成。在這種情況中，掩模片的下表面平行于與分析用載體相對的凸出元件的下表面，所述斜面是由掩模片的傾斜位置相對于分析用載體的傾斜而產(chǎn)生的。
在該特定實(shí)施例中，對掩模片限定的狹道的特征是，其中當(dāng)斜面通過使用相對于分析用載體傾斜的掩模片構(gòu)成時(shí)，斜面與狹道成為一體并可換位。
當(dāng)狹道成細(xì)長形狀時(shí)，其可以具有平行立面體形狀，其形狀限定了借助毛細(xì)作用而將試劑保持在狹道和分析用載體之間的區(qū)域。在使用過程中，橫過掩模片的開口位于靠近斜面的最低點(diǎn)的狹道上的一處，所述斜面由相對于分析用載體傾斜的掩模片形成。
本發(fā)明的掩模片具有這樣的尺寸，即與分析用載體的尺寸相匹配，其中試劑將被沉積和分布在分析用載體上，而且此掩模片的狹道具有和液體試劑的容積以及分析用載體上的所述限定區(qū)域的形狀和尺寸相匹配的形狀和尺寸，其中所述試劑將被沉積和分布在分析用載體上，例如為了使用生物樣本的成分培養(yǎng)試劑的目的。
為了在掩模片和分析用載體被設(shè)置成彼此平行時(shí)，將一種或多種試劑沉積并分布在生物樣本分析用載體上，所述掩模片被從分析用載體的區(qū)域設(shè)置到一處于分析用載體平面之上的水平平面上，在該平面的高度掩模片被最初定位，且該平面與試劑的最初沉積點(diǎn)相對應(yīng)，以便將試劑分布在分析用載體的與掩模片狹道相對的區(qū)域上。
為了將一種或多種試劑沉積并分布在樣本分析用載體上，當(dāng)所述掩模片的狹道的斜面不是由狹道的結(jié)構(gòu)而形成的，而是由在掩模片上形成的相對于分析用載體的傾斜而形成的時(shí)(反之亦然)，所述掩模片被移動到一特定傾斜的平面上，其采用如下特征，即與所描述的其中狹道在其結(jié)構(gòu)中包括一斜面的掩模片的特征相同。
每次移動都允許掩模片在分析用載體的用于接收試劑的全部限定區(qū)域之上通過，這種移動被稱為“掃移”(sweep)。例如第一掃移可以從與電泳載體的陽極相對應(yīng)的區(qū)域朝向與該載體的陰極相對應(yīng)的區(qū)域進(jìn)行，或者可以沿著相反的方向即從陰極到陽極的方向進(jìn)行，以便覆蓋整個(gè)必須接收試劑的限定區(qū)域，在電泳載體(例如一種凝膠體)的情況下，這些區(qū)域與電泳遷移狹道相對應(yīng)。在下文段落中，根據(jù)上述指示，當(dāng)所提到的陽極是為了使試劑的沉積定位或使掩模片相對于分析用載體的移動方向定位時(shí)，必須理解這種定位或這種移動能夠從陰極開始相面對地實(shí)施。
在將試劑加載到與狹道相連的開口中之后的掃移分析用載體的預(yù)定表面的移位期間，本發(fā)明的掩模片可將所述試劑沉積并分布到分析用載體上的全部預(yù)定區(qū)域上，因?yàn)樗械脑囼?yàn)生物樣本位于掩模片移位的方向。
這樣就不必對每個(gè)待處理的樣本進(jìn)行試劑的多重移液操作。當(dāng)掩模片的所有狹道被使用時(shí)，所需進(jìn)行的移液操作的次數(shù)與必須沉積到分析用載體的一行上的試劑的數(shù)量相對應(yīng)，從而通常與設(shè)置在掩模片中的開口數(shù)相對應(yīng)。
此外，每種加載入掩模片中的試劑的量與當(dāng)每種試劑必須被加載于分析用載體上的每個(gè)樣本時(shí)通常使用的每種試劑的量相比較可以明顯地減少。
借助示例，如果本發(fā)明的掩模片旨在沉積和分布試劑，以進(jìn)行免疫固定，從而檢測已由電泳所分析的生物樣本的特定組分，當(dāng)對每個(gè)測試樣本(即，通常為一種能夠固定樣本中的組分的固定劑，從而在電泳載體上產(chǎn)生一基準(zhǔn)輪廓，具體為抗-IgG、IgA、IgM、N和O抗血清)使用6個(gè)試劑時(shí)，每個(gè)加載入掩模片中的試劑的量與當(dāng)使用固定的掩模片例如在EP-B1-0526271中所描述的掩模片時(shí)而為每個(gè)待處理的樣本所加載的量相比較被減少4.5倍。
每個(gè)加載在掩模片的每個(gè)狹道上的試劑的量由使用該試劑所覆蓋的培養(yǎng)區(qū)域的尺寸的函數(shù)確定，例如由在掩模片的移位方向上建立的樣本的行數(shù)的函數(shù)確定。當(dāng)掩模片被用于為了免疫固定而進(jìn)行沉積和分布時(shí)，所述培養(yǎng)區(qū)域包括電泳載體的區(qū)域或與電泳載體的區(qū)域相同，該電泳載體的區(qū)域包括用于待分析的樣本的電泳輪廓。
借助示例，包括三組在一行上的六個(gè)狹道的掩模片可以被用于進(jìn)行九個(gè)樣本的免疫固定，或甚至是12或18個(gè)樣本(例如，這樣分布，即以三個(gè)不同樣本成行，每個(gè)樣本占據(jù)掩模片的用于電泳的分析用載體的6個(gè)狹道)的免疫固定。
有利的是，所述掩模片被載入一定量的試劑，從而在一次掃移中，必須被分配試劑的分析用載體上的每個(gè)預(yù)定區(qū)域已經(jīng)被試劑均勻覆蓋，為了確定每個(gè)試劑的加載量，我們考慮分析用載體的每次掃移的掩模片路徑和被覆蓋在分析用載體上的區(qū)域的寬度。通常，每次加載的試劑的量在4μl到15μl之間變化，例如試劑的量為15，10，8，6或4μl。
借助示例，我們發(fā)現(xiàn)，4μl試劑的量足以以均勻的方式覆蓋175mm2的分析用載體表面，相應(yīng)地，在分析用載體上分布試劑0.02μl/mm2。
優(yōu)選的是，本發(fā)明的掩模片是剛性掩模片，或者被加固裝置加固，例如所述加固裝置可以參與掩模片的定位和/或?qū)颉?br> 用于制造掩模片的材料的選擇理論上沒有限制。
例如，該掩模片可以由一種能夠被模制以形成光滑表面的材料制造，特別是一種塑料材料。
該材料可以是透明的或半透明的；材料的例子例如有聚碳酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚乙烯，結(jié)晶聚苯乙烯和有機(jī)玻璃。
本發(fā)明的掩模片可以是一次性使用的。
當(dāng)連入適合的定位裝置和適當(dāng)?shù)膶?dǎo)向裝置時(shí)，例如可以是搭扣配合，賦予掩模片的剛度可以使其沿著預(yù)定平面移位，這種移動相對于分析用載體可以是水平的或傾斜的。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，具有由上述所限定的性質(zhì)的掩模片包括許多相互平行的狹道，所述狹道分布在掩模片的整個(gè)長度上。
當(dāng)所述掩模片包括許多相互平行的狹道時(shí)，這種情況是非常頻繁發(fā)生的，狹道之間的距離(狹道相互之間的距離)由掩模片上的狹道的數(shù)量的函數(shù)確定，且需要防止試劑之間特別是固定劑和抗血清之間的任何相互作用。
有利的是，不同平行狹道之間的距離是恒定的。該距離可以較小，例如小于3mm，具體是約為2.5mm，最好是2mm或更大，特別是防止相鄰狹道的固定劑和抗血清之間的相互作用。
用于分布每種試劑的分析用載體的區(qū)域的寬度至少等于面對該區(qū)域的掩模片狹道的寬度。
借助示例，可與分析用載體上的電泳輪廓的分布相對應(yīng)的狹道的寬度和培養(yǎng)表面的寬度相近似，且約為2.5mm。在另外的一個(gè)示例中，寬度為3.5mm。
為了防止相鄰試劑之間的相互作用，還可以配置掩模片的狹道，以防止用于沉積試劑的不同區(qū)域之間的重疊或防止用于沉積在分析用載體上的試劑的任何可能擴(kuò)散的區(qū)域之間的重疊，或者是能夠以可防止可能發(fā)生的相互作用的方式進(jìn)行試劑的加載和使試劑下降到分析用載體上。在下文中對試劑的加載和下降的實(shí)施例進(jìn)行了描述，包括例如但并不是必須的是一位于分析用載體外側(cè)的加載步驟，其能夠避免這種類型的相互作用，但允許保持狹道平行且對齊。
關(guān)于上述的相互作用，它是特別適合的，以保證為了產(chǎn)生每個(gè)樣本的參考輪廓的試劑不會與特定試劑(具體是抗血清)相互作用，這種相互作用可能使樣本的特定組分的檢測發(fā)生錯(cuò)誤。
為此目的，當(dāng)特定裝置存在于掩模片的結(jié)構(gòu)中時(shí)，掩模片的第一實(shí)施例包括許多相互平行的狹道，這些狹道分布在掩模片的整個(gè)長度上，且相互之間具有恒定間隙，且包括分布在掩模片的整個(gè)長度上的相互平行的狹道的第一序列，和平行于所述第一序列狹道的相互平行的狹道的第二序列，其中下部孔位于相同的水平平面上，所述第二狹道序列形成一準(zhǔn)線，其相對于由第一狹道序列形成的準(zhǔn)線偏移。
在一種改變了的掩模片中，第二狹道序列的偏移準(zhǔn)線由通過增加所述第一序列的所述狹道和所述第二序列的另一狹道之間的間隙而代替。
與第一系列的狹道相比較第二狹道序列的偏移或該狹道序列的間隙是為了防止第二狹道序列的試劑與其它狹道的試劑在沉積在分析用載體上期間發(fā)生的相互作用。通常，這些偏移狹道或更大間隙的狹道是為了接收用于免疫固定的固定劑，所述固定劑能夠固定電泳輪廓的蛋白質(zhì)，以便產(chǎn)生一參考輪廓。
當(dāng)所述掩模片不包含一序列偏移狹道或一序列與其它狹道相比具有不同間隙的狹道，所討論的試劑之間的相互作用可以被避免，條件是例如必須在兩次掃移中將這些試劑分別加載和沉積在分析用載體上。
作為一個(gè)例子，固定劑被沉積在電泳載體的陽極側(cè)，然后在加載抗血清之前通過掃移而被分配在例如從陽極偏移的位置上，例如相對于第一加載過程的位置而進(jìn)一步朝向陰極約5mm的位置。或者是，抗血清可以被加載在陰極位置上。
然而并不總需要借助兩個(gè)階段的加載，特別是當(dāng)試劑的加載過程不會導(dǎo)致試劑之間的煩人的相互作用時(shí)。即使所有的試劑被同時(shí)加載到分析用載體的表面之外，這種相互作用也可以被防止，而且當(dāng)所有試劑的同時(shí)下降可在分析用載體上完成時(shí)，也不產(chǎn)生煩人的相互作用。
當(dāng)掩模片這樣形成時(shí)，即狹道的斜面由掩模片相對于分析用載體的傾斜而形成而不是由狹道的結(jié)構(gòu)形成時(shí)，狹道和狹道組不需要偏移，且所述試劑可根據(jù)它們的性質(zhì)在若干個(gè)階段被加載并沉積。
本發(fā)明的掩模片可以這樣制造，使得狹道被組成若干組，每組例如由一相對于其它彼此對齊的狹道以偏移方式定位的狹道組成，并由在下一個(gè)偏移狹道之前被對齊的狹道組成，此外，本發(fā)明的掩模片結(jié)構(gòu)是這樣的，其結(jié)構(gòu)以及如果需要其使用條件允許試劑的沉積和分布，而不會使沉積在分析用載體的不同區(qū)域上的不同試劑之間發(fā)生相互作用。
特別是對于最初沉積在分析用載體上的試劑，可發(fā)現(xiàn)在試劑的分布之前，所述試劑在分析用載體上發(fā)生局部擴(kuò)散的現(xiàn)象。
關(guān)于試劑的沉積，為了避免任何局部擴(kuò)散現(xiàn)象的后果，有利的是選擇遠(yuǎn)離對可攜帶待檢測的樣本成分的分析用載體的區(qū)域的掩模片，即例如遠(yuǎn)離包含電泳輪廓的區(qū)域的掩模片來沉積試劑。
在免疫固定的情況下，所述試劑被沉積在例如一區(qū)域中——該區(qū)域遠(yuǎn)離與電泳輪廓相對應(yīng)的區(qū)域，例如沉積在相對于這些輪廓的載體陽極一側(cè)。
有利的是，本發(fā)明的掩模片是這樣的，即從一側(cè)到另一側(cè)橫過該掩模片的開口垂直于該掩模片的上表面和下表面。
該掩模片的開口的形狀必須允許足夠量的試劑被沉積于其中，從而允許試劑沉積并分布在分析用載體的整個(gè)預(yù)定區(qū)域上，而不需為掩模片再加載試劑。
此外，該開口的形狀和位置與借助毛細(xì)作用將一定量的試劑保持在掩模片的狹道和分析用載體之間相適合，直到在用于將試劑分布在分析用載體上的操作過程中引入的量用盡為止。
當(dāng)將試劑沉積到分析用載體上時(shí)，當(dāng)掩模片被加載到分析用載體之上時(shí)，伴隨著在加載試劑過程中對狹道進(jìn)行填充，適當(dāng)?shù)氖窃谘谀Ｆ鸵埔浩鞯亩瞬炕蛴糜趯⒃噭┘虞d到掩模片之中的任何其它裝置之間設(shè)置一密封。
開口的容積可以被設(shè)計(jì)成允許在分析用載體的外部加載試劑，在這種情況下，試劑必須借助毛細(xì)作用被保持在開口的整體部分中，直到它們被沉積到分析用載體之上。在這種情況下，掩模片被定位以保證其所容納的試劑在分析用載體上的沉積。這種定位必須保證在液體和分析用載體之間建立接觸，可能應(yīng)用特定特征來保證這種接觸。
有利的是，在每條狹道中，所述開口可以接收多于反應(yīng)所需量的試劑。
本發(fā)明的掩模片可以使用較少的試劑量，例如大約15μl或10μl。然而，橫過掩模片和為了接收這些試劑的開口尺寸可以被確定，以允許多于有效使用量的試劑量可以被接受。例如，開口容積可接收高達(dá)約30μl的試劑量。
掩模片的幾何特征，特別是適應(yīng)于沉積物的數(shù)量，它們的寬度和這些沉積物的間距的、在所述分析用載體上成行地形成的狹道的數(shù)量和狹道之間的距離(狹道間距)。本發(fā)明的掩模片具有足夠的長度，以包括形成在一行中的幾條狹道，和相對于操作中掩模片被放置時(shí)于該狹道面對的分析用載體的培養(yǎng)表面的電泳遷移狹道的長度的限定寬度(較小)。
可以理解，這就成為本裝置的一個(gè)特點(diǎn)，即同一掩模片可以被用來在同一凝膠體上產(chǎn)生具有相同數(shù)量和尺寸特征的若干行沉淀物。這些已在分析用載體上成行地產(chǎn)生的沉淀物行相互平行，且垂直于電泳遷移的方向。
有利的是，當(dāng)掩模片和分析用載體之間的距離為2mm或更小時(shí)，優(yōu)選是在0.1到1.5mm之間的范圍內(nèi)，本發(fā)明的掩模片的幾何結(jié)構(gòu)允許借助毛細(xì)作用將試劑沉積并保持在掩模片的每條狹道和分析用載體之間。掩模片和分析用載體之間的這個(gè)距離根據(jù)所考慮的掩模片上的點(diǎn)而變化；特別是，該距離在掩模片上的最靠近載體的點(diǎn)(對應(yīng)于狹道的斜面或掩模片的斜面上的最低點(diǎn))處最好約為0.1到0.5mm，而在掩模片上最遠(yuǎn)離分析用載體的點(diǎn)處，該距離最好小于2mm，有利的是小于1.5mm或更小。
在這些限制中，所述斜面的傾斜必須是這樣的，即掩模片與分析用載體的間隙與用于將試劑保持在狹道和分析用載體之間的毛細(xì)力相適合。
借助示例，本發(fā)明的掩模片被這樣制成，即狹道彼此間隔1.5mm或更大的距離。優(yōu)選的是，狹道之間的間隙為2.5mm。狹道寬度優(yōu)選是2.5mm。
為存放固定劑的掩模片也可以偏移；例如，當(dāng)掩模片位于使用位置時(shí)，其可以位于較其它狹道更靠近陽極的位置，在由電泳凝膠體組成的分析用載體附近。
一種特定的掩模片的特征在于，用于固定劑的狹道不與其它狹道對齊，且與由其它狹道形成的準(zhǔn)線相比偏移5mm的距離，優(yōu)選是6到7mm的距離。
一種適合于本發(fā)明的特定的掩模片，且特別是一種掩模片——其適合于與一種10cm長、約8cm寬(在陰極和陽極之間)的電泳凝膠體一起使用，所述掩模片的每條狹道具有以下的尺寸——長度3到15mm；——寬度1到10mm；——斜面的傾斜度從水平傾斜1°到10°。
一種適合于與上述凝膠體一起使用的特別優(yōu)選的掩模片，其每條狹道具有以下尺寸——長度7mm；——寬度2.5mm；——斜面的傾斜度從水平傾斜5°。
在這些特定實(shí)施例中，上述掩模片的其它特征可與上述的特定特征當(dāng)然相關(guān)。具體是，狹道間距有利的是2.5mm，和/或用于特定試劑的狹道準(zhǔn)線和用于固定劑的狹道準(zhǔn)線之間的偏移為6到7mm。
而且，在本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施例中，掩模片是這樣的，即橫過其的開口具有上述特征，即考慮具有一形成約50°角的圓錐狀部分。
在本發(fā)明的不同實(shí)施例中，掩模片的厚度有利的是在1到10mm的范圍內(nèi)。
當(dāng)本發(fā)明的掩模片被用于將試劑沉積并分布在電泳載體上，其特征還在于，其可以與在電泳載體上分散的生物樣本的定位特征相適應(yīng)；特別是，所述掩模片可以——將掩模片上的狹道的行對齊，垂直于電泳遷移的方向；——將掩模片定位在分析用載體附近，以借助毛細(xì)作用將試劑保持在掩模片的狹道和分析用載體之間；——對掩模片進(jìn)行定位，使其橫過電泳遷移方向，以允許發(fā)生在分析用載體上的電泳遷移的行與掩模片狹道的行對齊。
為了與不同的分析用載體一起使用，借助示例，根據(jù)本發(fā)明的一種掩模片可以包括范圍為1到24條狹道，優(yōu)選的是在6到24條狹道的范圍內(nèi)，特別是6，9，12，15或18條狹道。
如果為了用于電泳分離之后的免疫固定反應(yīng)，對于占據(jù)電泳載體的同一行的三種不同樣本，和對于給定樣本的行數(shù)(例如2或更多，特別是3或4)，一包括18條狹道的掩模片對于每個(gè)樣本可以沉積一種用于產(chǎn)生參考輪廓的固定劑和5種特定的試劑例如抗血清，特別是抗-IgG，抗-IgA，抗-IgM，抗-IgN和抗-IgO。采用相同特征，還可以制造具有6或12條狹道的掩模片。
本發(fā)明還涉及一種如上限定的掩模片，該掩模片與定位裝置相聯(lián)，所述定位裝置旨在將掩模片的狹道的下表面保持在分析用載體的表面附近，在分析用載體的表面附近，所述掩模片將試劑沉積并分布在分析用載體上。
適合的定位裝置可以由支座構(gòu)成，所述支座可以被放置在分析用載體上遠(yuǎn)離包括生物樣本的培養(yǎng)表面的位置，這些支座的尺寸是這樣的，即掩模片不與在其與試劑的培養(yǎng)表面相對應(yīng)的部分之上的分析用載體相接觸。
根據(jù)上文，所述定位裝置也可以與用于對掩模片進(jìn)行導(dǎo)向的裝置結(jié)合使用，以允許其以一種被控制的方式被放置在分析用載體上。
這樣，另一方面，本發(fā)明提供一種裝置，其用于將一種或多種試劑沉積并分布在用于生物樣本的分析用載體上，包括a)一種如上所限定的掩模片；b)用于對掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置，其使掩模片定位，從而將掩模片保持在分析用載體的表面附近，并可對掩模片進(jìn)行導(dǎo)向使其在平行于所述載體表面的水平面上掃移分析用載體的表面，以便可將試劑沉積并分布在分析用載體的每個(gè)沿著掩模片狹道排列的預(yù)定區(qū)域上。
在本發(fā)明的一個(gè)變型中，使用的掩模片是這樣的，即狹道的斜面是由掩模片相對于分析用載體的傾斜形成的。在這種情況下，本發(fā)明提供一種裝置，用于將一種或多種試劑沉積并分布在用于生物樣本的分析用載體上，包括a)一種如上所限定的掩模片；b)用于對掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置，其可使掩模片定位，從而將掩模片被保持在分析用載體的表面附近，并可對掩模片進(jìn)行導(dǎo)向使其在傾斜于所述載體表面的預(yù)定平面上掃移分析用載體的表面，以便可將試劑沉積并分布在分析用載體的每個(gè)沿著掩模片狹道排列的預(yù)定區(qū)域上。
在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，如上限定的裝置是這樣的，即用于對掩模片定位和導(dǎo)向的裝置能夠在分析用載體和掩模片上最靠近所述載體的點(diǎn)(與斜面的最低點(diǎn)相應(yīng))之間建立一個(gè)距離，該距離在0.1mm到0.5mm的范圍內(nèi)，并在距掩模片的最遠(yuǎn)點(diǎn)(相應(yīng)于斜面的最高點(diǎn))和載體之間建立一個(gè)距離，該距離小于2mm，最好是1.5mm或更小。
分析用載體和最靠近所述載體的掩模片上的點(diǎn)之間的距離優(yōu)選是0.5mm。
如果能夠適當(dāng)?shù)卮嬖谟陔娪驹O(shè)備中，本發(fā)明的用于對掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置可以是任何適合的裝置。例如一路徑限制器(course limiter)可以是一擋止件。
有利的是，所述導(dǎo)向裝置包括一路徑限制器，以限制掩模片移位路徑。
在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，所述定位和導(dǎo)向裝置可允許掩模片沿著分析用載體自動移位。然而，如果通過多次往返移位是適合的，本發(fā)明的掩模片易于手動放置，以便通過掃移來將包含在掩模片中的試劑覆蓋在分析用載體上的整個(gè)預(yù)定區(qū)域。
本發(fā)明還涉及一種用于將一種或多種試劑沉積并分布在包含生物樣本的分析用載體上的方法，該方法包括以下步驟——將如上文限定的掩模片或如上限定的裝置定位在分析用載體的附近；——將一種或多種試劑加載在掩模片上，以將一種或多種試劑沉積在分析用載體上，借助毛細(xì)作用將所述試劑保持在所述載體和所述掩模片的狹道之間；——通過掃移分析用載體使掩模片移位，以允許將一種或多種試劑分布在分析用載體上的限定區(qū)域中，所分布的一種或多種試劑的量足以使其與存在于所述分析用載體上的生物樣本的成分相互反應(yīng)。
當(dāng)掩模片的狹道包括斜面部分時(shí)，所述掩模片被放置在相對于分析用載體的平面的水平平面上，并位于載體之上且平行于所述載體。
當(dāng)掩模片的狹道不包括斜面時(shí)，并因此以相對于分析用載體傾斜的方式被定位以形成所述斜面，該掩模片平行于分析用載體的平面移位，如果掩模片傾斜則所述載體自身處于水平位置。
當(dāng)掩模片被定位在分析用載體附近時(shí)，且一旦試劑與分析用載體接觸時(shí)，其可立即通過掃移將試劑放置在所述分析用載體之上。
當(dāng)試劑被分布在分析用載體的預(yù)定區(qū)域上時(shí)，例如分布在與生物樣本的電泳遷移狹道相對應(yīng)的區(qū)域上時(shí)，這些區(qū)域構(gòu)成了所述試劑與樣本成分的培養(yǎng)區(qū)域。
使用本發(fā)明的掩模片的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于這樣一個(gè)事實(shí)，即當(dāng)分布結(jié)束時(shí)，且載入掩模片中的試劑的量用盡時(shí)，掩模片可以迅速地從構(gòu)成分析用載體的培養(yǎng)區(qū)域的限定區(qū)域上移走。
與本發(fā)明的掩模片的應(yīng)用相聯(lián)系的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，允許使試劑均勻分布在培養(yǎng)區(qū)域上。
有利的是，使用超過需要用來覆蓋分析用載體的在樣本組分和試劑之間發(fā)生培養(yǎng)的區(qū)域的試劑量的試劑。一種過多的試劑量為大于在分析用載體上掃移速率約2cm/s的情況下，借助一次通過(一次掃移)分配的試劑量。
留在分析用載體的被掃移表面的每單位區(qū)域上的試劑量取決于表面區(qū)域特別是掃移長度。其隨著掃移速率的減小而升高。
掩模片相對于分析用載體移位的速率通常在0.5到2cm/s的范圍內(nèi)。
借助示例，為了將試劑分布在陽極和陰極之間的寬度(與掃移長度對應(yīng))為8cm的電泳載體上，可以實(shí)現(xiàn)分別包括一個(gè)外移和回移的行程的兩個(gè)位移，每個(gè)位移需要約3秒。在這種情況中，在每條狹道上可以沉積6μl到10μl的試劑量。
在低速——即約0.5cm每秒時(shí)，而且對于2.5mm的狹道寬度，被導(dǎo)入狹道下的劑量為3-4μl的試劑將在70mm的行程后被耗盡。
與分析用載體相比較，對于2.5mm寬的狹道和對于70mm的掩模片掃移路徑，使用的試劑容量優(yōu)選的為8到10μl/狹道。
當(dāng)已進(jìn)行第一掃移后，即使移位較慢-例如在0.5cm/s時(shí)，一些試劑會被留在狹道下方，而且特別是如果在2cm/s的平均速度下移位時(shí)會是這樣。
其它掃移將必須完全耗盡被導(dǎo)入的試劑。掃移次數(shù)可以作為被導(dǎo)入各狹道的試劑的容量的函數(shù)而變化。
實(shí)際上，使用的各試劑的容積是這樣的，以便4次掃移就足以耗盡所述試劑。
對于加載到各開口中的10μl試劑量，掩模片然后例如經(jīng)過兩次往返行程從而掃移70mm的長度。一旦所有試劑已經(jīng)在這四次過往之后被分布到該表面上，抽出掩模片，而不會發(fā)生不希望的分布的風(fēng)險(xiǎn)，且培養(yǎng)階段正好開始。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例，兩次掃移(一次XXX往返移位)將試劑分布在載體上。即使在掃移之后，在分析用載體上仍然殘留有少量試劑，在培養(yǎng)之前不必將其去除。掩模片的操作條件確保了一種均勻的分布。
如果減小掃移長度，可以有利地減少分布在每個(gè)狹道上的試劑量。
如上所述，上面我們已經(jīng)指出，用于實(shí)現(xiàn)將一種或多種試劑沉積和分布在分析用載體上的方法的掩模片優(yōu)選的是這樣一種掩模片，其中，用于固定劑且能夠固定生物樣本的成分以產(chǎn)生一參考輪廓的狹道相對于其它狹道偏移。
在固定劑狹道和例如用于特殊抗血清的狹道之間的偏移避免了當(dāng)試劑被沉積在分析用載體上時(shí)它們之間的相互反應(yīng)。當(dāng)所有試劑被加載到掩模片上并一起被沉積時(shí)，該偏移被特定地調(diào)節(jié)。
或者是，例如當(dāng)用于固定劑的狹道不偏移時(shí)，掩模片在兩次行程中被加載，以首先沉積抗血清其次沉積固定劑。這種兩步加載或者可以通過首先加載并沉積固定劑然后加載并沉積特定試劑而進(jìn)行。
或者是，如果用于試劑在分析用載體上沉積的條件是這樣的，即，它們不會導(dǎo)致試劑間的相互反應(yīng)，特別是在特定試劑和固定劑之間(如果有任何固定劑的話)的相互反應(yīng)，所述加載可以一步完成。
當(dāng)掩模片是這樣的，即它已經(jīng)被用在一種傾斜位置中，以在狹道中產(chǎn)生與分析用載體相對的斜面，狹道彼此沒有偏移，但是，加載必須是不可相互反應(yīng)的試劑(例如固定劑和抗血清)，要么分兩步進(jìn)行初次加載的試劑通過掃移而先于在第二步中加載的試劑(例如抗血清)進(jìn)行，要么在將試劑沉積在分析用載體上時(shí)在可避免干擾的相互反應(yīng)的條件下進(jìn)行。
在一種特定的執(zhí)行過程中，這樣進(jìn)行本發(fā)明的沉積和分布方法，以便在遠(yuǎn)離包括生物樣本的分析用載體表面的區(qū)域處給掩模片加載試劑。
當(dāng)進(jìn)行這種加載時(shí)其中加載需要一定量的時(shí)間(30秒到2分鐘)，由于擴(kuò)散，在此位置由試劑覆蓋的分析用載體的區(qū)域比狹道本身寬。如果這種加載垂直于一包括要被顯示出來的樣本成分的輪廓的區(qū)域來進(jìn)行，這種擴(kuò)散可引起輪廓的非正常增加——其在試劑與生物樣本成分的培養(yǎng)之后被顯示出來。
如果遠(yuǎn)離包括樣本成分的分析用載體表面的區(qū)域?qū)ρ谀Ｆ虞d時(shí)，由試劑從沉積區(qū)域的擴(kuò)散所引起的缺點(diǎn)就不會出現(xiàn)。
當(dāng)分析用載體的表面尺寸允許時(shí)，所述加載可以在所述樣本的電泳遷移輪廓所在的區(qū)域之外的所述陽極部分實(shí)施?；蛘呤羌虞d可以在所述樣本的電泳遷移輪廓所述的區(qū)域之外的陰極部分實(shí)施。
當(dāng)分析用載體的表面尺寸不允許在包含樣品電泳遷移輪廓的區(qū)域之外進(jìn)行的這種沉積，可以在載體表面外側(cè)對掩模片加載，例如，在一塑料薄膜片上，該膜片與分析用載體接觸且位于此載體的表面平面中，但延伸超過此表面。
本發(fā)明還涉及一種用于將一種或多種試劑沉積和分布在包括生物樣本的分析用載體上的方法，所述方法包括下述步驟——將一種或多種試劑加載在掩模片上，以將一種或多種試劑沉積在分析用載體上，借助毛細(xì)作用將所述試劑保持在所述載體和所述掩模片的狹道之間；——將如上文限定的掩模片或如上文限定的裝置定位在分析用載體附近；
——通過掃移分析用載體使掩模片移位，以將一種或多種試劑分布在分析用載體上的限定區(qū)域中，所分布的一種或多種試劑的量足以使其與存在于所述分析用載體上的生物樣本的成分相互反應(yīng)。
如上所示的實(shí)施沉積和分布的特征在這種情況下也可以應(yīng)用。
在將可動掩模片設(shè)置在分析用載體上之前對其加載的過程中，所有試劑已經(jīng)被導(dǎo)入與掩模片的各狹道相連的開口的上部孔中，為此掩模片然后用作儲存裝置。盡管各開口都存在著較低的孔，但是這些試劑由于毛細(xì)作用而被保持在它們中。
在上述結(jié)構(gòu)中，當(dāng)掩模片被加載在分析用載體上時(shí)，試劑被直接導(dǎo)入掩模片的狹道和分析用載體之間，其中所述掩模片已經(jīng)被放置在距離所述載體的預(yù)定距離處(相對較低的點(diǎn)約為0.5mm)。
為此，在排出已經(jīng)被保持在移液器的頂部中的試劑的過程期間，在此頂端和掩模片的上部孔之間設(shè)置一個(gè)密封，例如通過將移液器保持在垂直位置，同時(shí)在靠近開口下部孔的圓錐部分中，移液器的頂部輕輕抵靠掩模片開口的底部。當(dāng)此較低的圓錐部分由一柱狀部分延伸時(shí)，所述柱狀部分的直徑(例如0.8mm)不允許移液器頂部通過。這就保證了試劑經(jīng)與狹道相連的開口的下部孔“被強(qiáng)迫”排出，從此下部孔流出的液滴與位于其附近(0.5mm)的分析用載體接觸并且通過毛細(xì)作用將自身分布在狹道和載體之間。當(dāng)沒有實(shí)現(xiàn)移液器的頂部/上部孔密封時(shí)，試劑殘留在上部孔中并且不會落在分析用載體上。
當(dāng)提供密封但是下部孔沒有位于分析用載體表面附近時(shí)，即當(dāng)遠(yuǎn)離分析用載體進(jìn)行加載時(shí)，肯定會出現(xiàn)這種情況。
在這些條件下，當(dāng)通過移走移液器而破壞了“頂部/上部孔接觸”時(shí)，已經(jīng)流出(但是由于其具有10-15μl的非常小的容積而還沒有落下)并且已經(jīng)通過毛細(xì)作用留在下部孔附近的液滴上升到由上部孔構(gòu)成的穴中。
在將掩模片設(shè)置在分析用載體上之前對掩模片進(jìn)行的這種加載具有下述優(yōu)點(diǎn)，即能自動進(jìn)行例如通過Hydraplus SEBIA自動設(shè)備，消除了任何人工移液的需要并且進(jìn)一步簡化了對掩模片的加載。
加載有被分布在上部孔中的試劑的掩模片用作一種儲存容器，在使用之前該掩模片可被保存在潮濕的室中一段時(shí)間，所述時(shí)間為幾分鐘到幾小時(shí)。
可以采用不同的方法來將加載到掩模片中的試劑沉積在分析用載體上。
在第一實(shí)施例中，通過將掩模片和掩模片保持器組件連接到一個(gè)導(dǎo)軌上并使其抵靠在陽極位置中，裝載有不同試劑的掩模片和掩模片保持器組件(掩模片保持器構(gòu)成用于定位掩模片的一種裝置)位于分析用載體上。掩模片組件被覆蓋有一個(gè)小室(圖3)，該室覆蓋所用的上部孔且承載在掩模片的邊緣上(一個(gè)平面密封抵靠一個(gè)平面)。該室設(shè)有一個(gè)裝置，通過該裝置可以迅速噴入(例如使用注射器)少量的空氣——50到200μl。這種密封室中的壓力增加使各試劑流出到掩模片狹道下方而且然后這些試劑接觸凝膠體。在與分析用載體接觸之后，它們通過毛細(xì)作用被同時(shí)分布在掩模片的狹道和分析用載體之間。然后分析用載體的表面變濕了。
在另一實(shí)施例中，通過將保持器組件連接到導(dǎo)軌上并使其抵靠在陽極位置中，已經(jīng)被加載的掩模片和掩模片保持器組件位于分析用載體上。
通過使用垂直進(jìn)入每個(gè)上部孔的直徑小于掩模片的下部孔(例如0.5mm)的由具有吸水性材料構(gòu)成的圓柱桿，并直到該桿與分析用載體相接觸，所述試劑被從起貯存器作用的掩模片的上部孔中落在分析用載體上。
該桿在引入到上部孔中的液體和分析用載體之間建立一個(gè)連接。然后，被引入的所有液體借助毛細(xì)作用沿著所述桿下降，并分布在狹道和分析用載體之間。
可通過將一桿垂直并同時(shí)引入掩模片的每個(gè)上部孔中來實(shí)現(xiàn)所有試劑同時(shí)下降到分析用載體上，這些具有相同長度(5到10mm)的桿彼此整體地形成，例如通過插入一與掩模片具有相同尺寸和幾何結(jié)構(gòu)的矩形有機(jī)玻璃板中，這樣就精確地再現(xiàn)掩模片的孔的分布。當(dāng)所有的試劑已經(jīng)被分布在掩模片的狹道和分析用載體之間時(shí)，所述具有桿的有機(jī)玻璃板被抽出，且所述掩模片掃過所述凝膠體表面。
在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施例中，提供了第三種方法，這種方法允許所有的試劑同時(shí)滴落在凝膠體上，所述方法包括，在將掩模片止擋定位于所述分析用載體上(特別是在陽極和陰極附近)之后，對所述掩模片施加一機(jī)械沖擊。所述沖擊可以例如通過將加載的掩模片壓扣配合于掩模片支架中而獲得。
這種沖擊借助慣性可以將一滴一直由毛細(xì)作用保持在掩模片的貯存器中的試劑噴射在分析用載體上，這樣就在位于狹道的下部孔處的掩模片狹道的最低點(diǎn)和分析用載體之間建立了一個(gè)連接，從而所有位于貯存器中的試劑借助毛細(xì)作用被分配在掩模片狹道和分析用載體之間，然后可掃移所述凝膠體表面。
在又一個(gè)實(shí)施例中，在將試劑分布于上部孔中并將掩模片安裝在分析用載體之上之后，當(dāng)在遠(yuǎn)離分析用載體處掩模片被加載時(shí)，使掩模片在狹道斜面的最低點(diǎn)處暫時(shí)與分析用載體接觸。這種接觸的目的是在分布開始之前允許所有試劑落在分析用載體之上。
在上述一個(gè)實(shí)施例中，一旦被加載的掩模片處于工作位置中時(shí)，即，當(dāng)每個(gè)狹道已經(jīng)接收了預(yù)定量的試劑，借助導(dǎo)向裝置，所述掩模片沿著電泳遷移的方向平行于分析用載體放置。通過掃移與掩模片的狹道排成一行的分析用載體的表面，這種移位的結(jié)果是將液體輸送到掩模片的狹道和分析用載體之間。借助毛細(xì)作用被保持在掩模片和分析用載體之間的液體借助狹道的斜面而被輸送，所述狹道斜面可以在移位過程中使試劑到達(dá)其最低點(diǎn)，從而一定量的試劑就被沉積在分析用載體上，所述試劑滲透并保持在該分析用載體中。隨著掃移的進(jìn)行，包含在狹道之下的液體的量由于滲透進(jìn)入分析用載體而被消耗并減少。
本發(fā)明還涉及一種用于將試劑沉積并分布于分析用載體之上的方法，其中將試劑加載到掩模片的步驟是自動的。
在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施例中，移動掩模片以掃移分析用載體的的步驟是自動的。
本發(fā)明的方法被有利地實(shí)施，以在借助電泳遷移而被分離之前檢測生物樣本的成分，這種檢測可能會涉及免疫固定，在這種情況下，試劑為特定的抗血清且優(yōu)選是一種固定劑，以形成一參考電泳輪廓。
本發(fā)明的這種方法可以在電泳和免疫固定技術(shù)的通常條件下實(shí)施。所使用的試劑為普通試劑，但有利的是本發(fā)明所使用的試劑的量小于通常使用的試劑的量。
本發(fā)明還提供一種借助免疫固定來檢測一種或多種生物樣本的成分的方法，包括——進(jìn)行一種或多種生物樣本的電泳，以分離成分；——實(shí)施按照本發(fā)明的用于將試劑沉積并分布在電泳載體(優(yōu)選是瓊脂糖凝膠)上的方法；——對借助電泳分離的生物樣本與分布的一種或多種試劑進(jìn)行培養(yǎng)，以實(shí)現(xiàn)免疫固定。
這種檢測方法的特征還在于，其還包括一個(gè)步驟，即使免疫固定的生物樣本成分顯色，且如果合適，還包括對顯色組分進(jìn)行定量的步驟。
這些顯色和量化步驟可以使用公知的裝置實(shí)施。
優(yōu)選的是，在本發(fā)明中，上述限定的方法可以分別使用具有18，12或6個(gè)分析狹道的掩模片，同時(shí)分別分析3n，2n或n個(gè)生物樣本，其中n為表示沉積物的行數(shù)的整數(shù)，優(yōu)選的是n為2，3或4。
然而，理論上，對掩模片上的狹道數(shù)沒有限制。
由于掩模片的結(jié)構(gòu)和其使用的特征的原因，加載在掩模片的每個(gè)狹道上的每種試劑的量，即，引入每條狹道的每個(gè)開口中并由毛細(xì)作用保持在每條狹道下面的試劑量可以有利地被減少，且例如小于15μl/狹道。優(yōu)選的是，該量為10μl/狹道或更少。
當(dāng)試劑被沉積在分析用載體上時(shí)，它們?yōu)橐簯B(tài)。這樣，本發(fā)明涉及采用液體試劑加載掩模片。本發(fā)明還涉及由液體試劑加載的掩模片的應(yīng)用，然后所述掩模片被冷凍干燥，從而包含在掩模片的開口中的試劑被冷凍干燥，直到掩模片被用于要讓試劑為液態(tài)的沉積步驟。
另一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，包括——至少一個(gè)如上所限定的掩模片；——至少一個(gè)分析用載體，特別是一種電泳載體。
例如一種試劑盒還可以包括——用于對由電泳分離的樣本的成分進(jìn)行免疫固定的試劑；——用于對由電泳分離的成分的全體的每種樣本進(jìn)行固定的固定劑。
該試劑盒還可以包括至少一個(gè)梳狀件，用于將試劑沉積到分析用載體上。
如果掩模片不得不在遠(yuǎn)離電泳載體的位置被加載，所述試劑盒可以包括例如如上文所述的裝置，用于使試劑從掩模片中的開口落在分析用載體上。
這種試劑盒有利的是適合于使用具有18狹道的掩模片同時(shí)在每個(gè)電泳載體上分離9或甚至12個(gè)樣本。
優(yōu)選的是，這種試劑盒還可以同時(shí)在每種電泳載體上分離18個(gè)樣本。
根據(jù)本發(fā)明的一種試劑盒，還可以包括使用本發(fā)明的掩模片的指示，例如以使用說明的形式存在，包括關(guān)于被加載到掩模片上的試劑的量的信息和/或移動掩模片的條件，例如掃移速度或建議的掃移次數(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的試劑盒的一種特定實(shí)施例，如果需要，所述掩模片不與所述的可單獨(dú)獲得的分析用載體一起包裝。
本發(fā)明的掩模片可以有利地被加載試劑。
此外，本發(fā)明涉及一種用于免疫固定的且用于分離3行3樣本布置的至少9個(gè)生物樣本的電泳載體，所述載體包括至少18個(gè)遷移狹道，所述狹道彼此間隔2mm的距離，且為3mm寬，所述遷移狹道的總長度為至少63mm。
圖9導(dǎo)向部件的頂視圖，允許將掩模片定位在電泳載體上，并使掩模片在載體(凝膠體)上沿預(yù)定方向且以給定行程移動；

圖10借助滑座49被安裝在導(dǎo)軌14上的滑架的頂視圖和底視圖。該滑架具有四個(gè)分布在定位有電泳凝膠體的平面上的底座30。所述底座30可以在該平面上滑動。
圖11借助槽口43和彈簧28接受并保持掩模片的掩模片保持裝置的頂視圖和底視圖。該掩模片保持裝置包括一承載區(qū)域46，壓力被施加在該區(qū)域上以移動掩模片與凝膠體接觸。
圖12滑架和掩模片保持裝置的組件，所述滑架和掩模片保持裝置由借助鉚釘48保持的兩個(gè)彈簧片47連接。當(dāng)借助滑座49被安裝到導(dǎo)軌14上時(shí)，該組件允許將掩模片保持與凝膠體平行，且位于凝膠體附近但不與其接觸。
為了使加載入掩模片凹穴中的試劑可以下落，在掩模片保持裝置上施加一個(gè)壓力。這使得彈簧片47彎曲，且狹道的最低部分即填充導(dǎo)管34的下部孔與凝膠體相接觸(一支座系統(tǒng)，允許限制彎曲，以便不損傷凝膠體)通過釋放承載區(qū)域46的壓力，允許掩模片向上移動，并返回其最初位置，且包含在導(dǎo)管36中的試劑借助毛細(xì)力被分布于狹道的下部和凝膠體之間。
然后借助手柄26，掩模片向前和向后移動。
圖13所述組件的頂視圖，包括滑架，掩模片保持裝置和掩模片。
圖14到17表示掩模片和安裝在電泳板上的定位桿50上的結(jié)束掃移位置處的導(dǎo)向組件。
滑動件16在平行于電泳遷移方向的該板的一邊緣上延伸，并且包括兩個(gè)橫向槽18，槽中是由另一個(gè)滑動件21承載的嚙合中空銷20，滑動件21與板的所述邊緣成一體，銷中的孔套入從遷移板(未示出)凸出的栓中，并與用于調(diào)節(jié)滑動件16和掩模片10相對于所述板和分析用載體的橫向位置的螺釘22相連。此滑動件還包括在調(diào)節(jié)后鎖定此滑動件的螺釘24。
導(dǎo)軌14平行于電泳遷移方向延伸并且在臂16的一端接合在相應(yīng)的槽中。該端承載一個(gè)用于沿一個(gè)方向或另一方向在導(dǎo)軌14上平移的手柄或桿26。
在一種變型中，機(jī)動裝置可以設(shè)置在滑動件16上，用于臂12的自動位移，例如一個(gè)電動馬達(dá)被連接到臂12上，馬達(dá)驅(qū)動軸支撐在分布與鏈或帶配合的齒輪或滑輪上。
使用任何合適的裝置例如在28處所示的彈性夾固件，將掩模片10固定在臂12上，而且掩模片10由基本呈矩形的一個(gè)平的細(xì)長板形成，該板橫向延伸，即垂直于電泳遷移的方向延伸。
通過凸出銷或塊30將此板固定在分析用載體上方的預(yù)定距離處，銷或塊30形成在或固定到臂12的下表面上，而且旨在靠在上述板的邊緣上。
掩模片10的下表面包括一系列傾斜的狹道(或斜面)32，它們互相平行并且所示例中以交錯(cuò)的方式相互偏移而設(shè)置成橫向兩排。這些狹道(或斜面)32平行于電泳遷移的方向延伸并且向相同的方向傾斜。它們的最低端包括一個(gè)用于將試劑沉積在分析用載體上的孔34。該孔34是在其整個(gè)厚度上橫過掩模片10的導(dǎo)管或通道的較低孔，并且該孔經(jīng)過一個(gè)孔36通入掩模片的上表面，孔36的直徑比所述較低孔34的直徑大得多。
在圖4到6所示的本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，這些孔34和36具有環(huán)形截面的小圓柱狀管道的端部，且經(jīng)由一截頭圓錐導(dǎo)管38被彼此連接起來。
掩模片保持裝置12和被夾固的掩模片10被連接到導(dǎo)軌14上，而且因此使用螺釘22的橫向調(diào)節(jié)可以使掩模片的斜面與樣本遷移狹道垂直地對準(zhǔn)，這可以通過將一種適合的染料例如溴苯酚藍(lán)加入被沉積的樣本中而被觀察到。
使用手柄26或上述機(jī)動裝置可以使掩模片人工地掃過分析用載體的頂部。
如圖3中示意性示出，一蓋可以被放置在掩模片10上并固定于其上，用于以基本密封的方式封閉形成在掩模片10中的管道34，36，38。蓋40上的一個(gè)管42開在這些管道的上部孔36上方并且允許在掩模片和所述蓋之間噴入少量空氣，以在保護(hù)在掩模片的管道中的試劑上施加壓力，并且使它們落入管道中以使它們與分析用載體接觸。
所述試劑可以被沉積在掩模片10的管道中，這些管道可以以基本密封的方式由蓋40封閉，在使用試劑之前，掩模片10/蓋40組件可以被輸送并放置在分析用載體上方。
圖7和8示意性示出了掩模片10的兩種變型——圖7包括18個(gè)設(shè)置成兩排的橫向管道，這兩排互相平行且以交錯(cuò)的方向偏置；——圖8包括兩組6個(gè)橫向管道，這兩組在掩模片的整個(gè)長度上對齊并且各包括5個(gè)對齊的管道，1個(gè)偏置的管道。
使用本發(fā)明的掩模片的例子例1使用一個(gè)可移動的具有18個(gè)狹道的掩模片同時(shí)免疫固定9個(gè)樣本(圖4)使用SEBIA’s Hydrasys電泳裝置在一種凝膠體上進(jìn)行操作，以在0.7×83×101mm的尺寸上進(jìn)行免疫固定。
為了將樣本沉積在電泳載體上，我們使用涂布器(法國專利FR-A-2671290和歐洲專利EP-A-0 493 996)，包括彼此隔開2mm的18×3mm的齒。每個(gè)樣本被沉積在6個(gè)連續(xù)的齒上，而且因此各涂布器能夠在電泳凝膠上沉積3種不同樣本，而且3個(gè)涂布器能被用于獲得9個(gè)用于分析的樣本。在分別距離凝膠的陰極邊緣18、38和58mm的位置處的3個(gè)平行的行中，使用Hydrasys裝置在凝膠上進(jìn)行這種沉積。在20℃的控制溫度和20W的恒定功率下以及一定的時(shí)間下進(jìn)行電泳遷移，以便累計(jì)31伏特小時(shí)。
一旦遷移完成，就建立了具有下述幾何特征并具有18個(gè)狹道的本發(fā)明的可移動掩模片狹道寬度2.5mm，狹道長度7mm，狹道間距2.5mm，狹道傾斜角5°。一排三個(gè)狹道(用于固定劑的)相對于15個(gè)狹道(用于抗血清的)的行偏置5.5mm。
導(dǎo)軌的銷20中的中空部位于兩個(gè)承載在Hydrasys裝置上的栓上。
18狹道掩模片被夾固到掩模片保持裝置12中，保持裝置12本身已經(jīng)被連接到導(dǎo)軌上。掩模片及其掩模片保持裝置抵靠在高的位置處，即靠在凝膠的陽極側(cè)上。包含在沉積到凝膠上的樣本中的一種染料(溴苯酚藍(lán))允許分析用載體上的電泳狹道位置被觀察到。使用橫向調(diào)節(jié)裝置20、22，掩模片的狹道或斜面與樣本的遷移狹道垂直對準(zhǔn)。
然后通過經(jīng)狹道(36)的上部孔導(dǎo)入的用于免疫固定所需的不同試劑，給掩模片加載，每狹道上的試劑量為10微升(μl)并且以通常的順序固定劑，抗IgG，抗IgA，抗IgM，抗K和抗λ。所述固定劑被導(dǎo)入3個(gè)偏置陽極側(cè)狹道的下面。
一旦被導(dǎo)入狹道和凝膠體之間，這些10微升(μl)的試劑加載量被分布在陽極一側(cè)，被顯示出來的每個(gè)狹道下面大約5-6mm以外的區(qū)域上。
一旦掩模片已經(jīng)被加載，使用通過沿導(dǎo)軌滑動的手柄(26)使掩模片移動。這種掃移在沒有跳動的近似恒定的速度下被平滑地從膠體的高位置(陽極側(cè))到低位置(陰極側(cè))進(jìn)行，經(jīng)過63mm的路徑。這種掃移約進(jìn)行3秒。
一旦掩模片已經(jīng)抵達(dá)與陰極位置相抵靠位置，就在相同的條件下沿相反的方向進(jìn)行掃移。這兩次掃移又被重復(fù)一遍。起初導(dǎo)入狹道下方的所有試劑已經(jīng)被沉積在電泳遷移上方的凝膠上。在用于在凝膠體上培養(yǎng)試劑的步驟之前可以抽出所述掩模片，所述培養(yǎng)在20℃下進(jìn)行5分鐘。
然后我們使用通常的免疫固定方案進(jìn)行泵送，干燥，清洗，著色，脫色和干燥步驟。
例2使用具有18狹道的可移動掩模片同時(shí)對12個(gè)樣本進(jìn)行免疫固定(圖4)重復(fù)前述例子中的步驟，但是4個(gè)具有18齒的涂布器的每個(gè)涂布器都被裝載有三個(gè)樣品。使用Hydrasys裝置，在4個(gè)分別距離凝膠的陰極邊緣18、33、48和63mm位置處的平行的行中在凝膠上進(jìn)行沉積。在20℃下20W的恒定功率下進(jìn)行遷移28伏特小時(shí)。然后所述方法如前述例中所述。
例3使用具有12狹道的可移動掩模片同時(shí)對4個(gè)樣本進(jìn)行免疫固定(圖8)使用具有間隔2mm的15×4mm寬度齒的涂布器將樣本沉積在凝膠體上，所述涂布器的加載量為每個(gè)涂布器上兩個(gè)樣本(樣本n°1，齒2到7；樣本n°2，齒9到14)。
使用Hydrasys裝置在凝膠體上產(chǎn)生2行彼此平行定位且分別距凝膠體的陰極邊緣23和53mm的沉積物。
在控制溫度20℃下20W的恒定功率下進(jìn)行遷移直到達(dá)到累計(jì)42伏特小時(shí)。
一旦遷移完成，本發(fā)明的具有以下幾何特征的有12狹道的移動掩模片就被安裝狹道寬度3.5mm，狹道長度7mm，狹道間距2.5mm，狹道傾斜角5°。一排2個(gè)狹道(用于加載固定劑)相對于10個(gè)狹道(用于抗血清的)的行偏置5.5mm。
導(dǎo)軌的銷20中的中空部位于兩個(gè)承載在Hyd所述asys裝置上的栓上。該12狹道掩模片被夾固到掩模片保持裝置12中，保持裝置12本身已經(jīng)被連接到導(dǎo)軌上。所述組件已經(jīng)被抵靠在高的位置處。
使用橫向調(diào)節(jié)裝置，(如例1所述)掩模片的狹道與樣本的電泳遷移狹道對準(zhǔn)。
通過對每個(gè)狹道導(dǎo)入14μl試劑而對掩模片加載。
如前述例子所述，通過進(jìn)行4次掩模片的掃移，試劑被分布。
在全部試劑量已被沉積在凝膠體表面上后，掩模片被抽出。
然后我們繼續(xù)使用通常的免疫固定方案進(jìn)行泵送，干燥，清洗，染色，脫色和干燥步驟。
例4使用18狹道可移動掩模片實(shí)施36IF penta技術(shù)(例4)IF penta技術(shù)通常用于檢測被分析樣本中單細(xì)胞系或少突無性繁殖系免疫球蛋白染色體帶形式的病變蛋白的存在。
這種技術(shù)是這樣實(shí)現(xiàn)的，即通過使用一種五價(jià)的抗血清，即，具有抗IgG，抗IgA，抗IgM，抗Igκ(Kappa)和，抗Igλ特性的抗血清進(jìn)行免疫固定，而對每個(gè)分析全部蛋白輪廓和所有免疫球蛋白輪廓的樣本并排顯色。
在該例中，使用SEBIA’s Hydrasys電泳裝置在一種瓊脂糖凝膠體上進(jìn)行操作，以在0.7×83×101mm的尺寸上進(jìn)行免疫固定。使用18×3mm的齒間距為2mm的梳狀部件。每個(gè)用于分析的樣本被并排沉積兩次，即，每個(gè)涂布器9個(gè)樣本。
4個(gè)涂布器用于36個(gè)樣本。
使用Hydrasys裝置在凝膠體上沉積4行彼此平行的分別距凝膠體的陰極邊緣18，33，48和63mm的沉積物。在控制溫度20℃下20W的恒定功率下進(jìn)行遷移直到達(dá)到累計(jì)28伏特小時(shí)。然后圖4所示的本發(fā)明的18狹道可移動掩模片被安裝。
該掩模片這樣構(gòu)成，即2行每行9狹道，且彼此偏置5.5mm。9個(gè)更靠近陽極的狹道旨在接收固定劑，另外9個(gè)狹道旨在接收五價(jià)抗血清。每個(gè)狹道寬2.5mm，長7mm，狹道間距2.5mm，斜面傾斜度5°。
該掩模片被夾固在掩模片保持部件中，并被置于較高的陽極側(cè)位置附近。
導(dǎo)入的試劑量為10μl/狹道。
然后進(jìn)行例1到3的步驟。
權(quán)利要求
1.一種掩模片，用于將試劑沉積并分布于一用于生物樣本的分析用載體上，其包括——至少部分相互平行的一下表面和一上表面，彼此間隔開一構(gòu)成所述掩模片厚度的距離；——位于所述掩模片下表面水平上的一個(gè)或多個(gè)限定區(qū)域(狹道)，其包括一從所述掩模片的下表面凸出的部件(32)(凸出部件)，每個(gè)凸出部件包括一部分——其構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面；——與一狹道相連的一開口，其從所述掩模片的上表面上的一上部孔(36)穿過所述掩模片的整個(gè)厚度通到一下部孔(34)，所述下部孔位于所述狹道中，在所述狹道斜面的最低點(diǎn)附近；所述掩模片是這樣的，其包括的一個(gè)或多個(gè)狹道可以將載入每個(gè)開口中的且借助毛細(xì)作用沉積在所述分析用載體上的試劑保持在所述狹道和所述分析用載體的表面之間，朝著所述表面放置著所述掩模片。
2.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其適合于將試劑分布于一用于生物樣本的分析用載體上，其包括——至少部分相互平行的一下表面和一上表面，彼此間隔開一構(gòu)成所述掩模片厚度的距離；——一個(gè)或多個(gè)狹道，每個(gè)狹道包括一從所述掩模片下表面之下凸出的細(xì)長形狀的凸出部件(32)，所述凸出部件包括一部分——其構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面；——一開口，其與一狹道相連，并從所述掩模片的上表面上的一上部孔(36)穿過所述掩模片的整個(gè)厚度通到一下部孔(34)，所述下部孔位于所述狹道中，在所述狹道斜面的最低點(diǎn)附近；所述掩模片是這樣的，其包括的一個(gè)或多個(gè)狹道可以將載入每個(gè)開口中的且借助于毛細(xì)作用沉積在所述分析用載體上的試劑保持在所述狹道和所述分析用載體的表面之間，朝著所述表面放置著所述掩模片。
3.如權(quán)利要求1的掩模片，其適合于將試劑分布于一用于生物樣本的分析用載體上，其包括——至少部分相互平行的一下表面和一上表面，彼此間隔開一構(gòu)成所述掩模片厚度的距離；——一個(gè)或多個(gè)狹道，每個(gè)狹道包括一從所述掩模片的下表面之下突起的凸出部件(32)，所述凸出部件由一呈截頭平行六面體形狀的隆起構(gòu)成，所述凸出部件包括一部分——其構(gòu)成相對于水平面傾斜的斜面；——一開口，其與一狹道相關(guān)聯(lián)，并從所述掩模片的上表面上的一上部孔(36)穿過所述掩模片的整個(gè)厚度通到一下部孔(34)，所述下部孔位于所述狹道中，在所述狹道斜面的最低點(diǎn)附近；所述掩模片是這樣的，其包括的一個(gè)或多個(gè)狹道可以將載入每個(gè)開口中的且借助于毛細(xì)作用沉積在所述分析用載體上的試劑保持在所述狹道和所述分析用載體的表面之間，朝著所述表面放置著所述掩模片。
4.一種適合于將試劑沉積并分布于一用于生物樣本的分析用載體上的掩模片，其包括——至少部分相互平行的一下表面和一上表面，彼此間隔開一構(gòu)成所述掩模片厚度的距離；——位于所述掩模片下表面中的一個(gè)或多個(gè)限定區(qū)域(狹道)，并且其包括一從所述掩模片的下表面凸出的部件(32)(凸出部件)，每個(gè)凸出部件包括一下表面和一上表面，它們相互平行且平行于所述掩模片的下表面和上表面；——一開口，其與每一狹道相連，并從所述掩模片的上表面上的一上部孔(36)穿過所述掩模片的整個(gè)厚度通到一下部孔(34)，所述下部孔位于所述狹道中，在所述狹道斜面的最低點(diǎn)附近，所述狹道斜面通過相對于所述的處于使用位置的分析用載體使所述掩模片傾斜而形成；所述掩模片是這樣的，其包括的一個(gè)或多個(gè)狹道可以將載入每個(gè)開口中的且借助于毛細(xì)作用沉積在所述分析用載體上的試劑保持在所述狹道和所述分析用載體的表面之間，朝著所述表面放置著所述掩模片。
5.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片是剛性的或增強(qiáng)的。
6.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片是剛性的或增強(qiáng)的。
7.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述開口的容積空間構(gòu)成被加載的試劑的貯存器。
8.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，所述開口的容積空間構(gòu)成被加載的試劑的貯存器。
9.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，每個(gè)狹道的開口垂直地穿過包括所述凸起部件(32)的厚度在內(nèi)的所述掩模片厚度，所述開口包括呈截頭圓錐體形狀的一部分(38)，所述部分以一圓柱形下部孔(34)收尾。
10.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，所述開口的容積空間構(gòu)成被加載的試劑的貯存器。
11.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片包括若干分布于所述掩模片的整個(gè)長度上的相互平行的狹道。
12.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片包括若干分布于所述掩模片的整個(gè)長度上的相互平行的狹道。
13.如權(quán)利要求11所述的掩模片，其包括——設(shè)置于第一準(zhǔn)線上的相互平行的第一系列狹道；——平行于所述第一系列狹道的、相互平行的第二系列狹道，并形成相對于所述第一準(zhǔn)線偏置的第二準(zhǔn)線。
14.如權(quán)利要求12所述的掩模片，其包括——設(shè)置于第一準(zhǔn)線上的相互平行的第一系列狹道；——平行于所述第一系列狹道的、相互平行的第二系列狹道，并形成相對于所述第一準(zhǔn)線偏置的第二準(zhǔn)線。
15.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，每個(gè)狹道斜面的長度與該狹道的長度一致。
16.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，每個(gè)狹道斜面的長度與該狹道的長度一致。
17.如權(quán)利要求1所述的掩模片，當(dāng)所述掩模片這樣布置時(shí)——其距離所述分析用載體最遠(yuǎn)的點(diǎn)到所述分析用載體的距離為2mm或更小并且其距離分析用載體最近的點(diǎn)到所述分析用載體的距離等于或在0.1到0.5mm的范圍內(nèi)，所述掩模片將等于或在4到15μl范圍內(nèi)的量的試劑沉積在所述掩模片的每個(gè)開口中，并借助毛細(xì)作用將所述試劑保持在所述掩模片的狹道和所述分析用載體之間。
18.如權(quán)利要求4所述的掩模片，當(dāng)所述掩模片這樣布置時(shí)——其距離所述分析用載體最遠(yuǎn)的點(diǎn)到所述分析用載體的距離為2mm或更小并且其距離分析用載體最近的點(diǎn)到所述分析用載體的距離等于或在0.1到0.5mm的范圍內(nèi)，所述掩模片將等于或在4到15μl范圍內(nèi)的量的試劑沉積在所述掩模片的每個(gè)開口中，并借助毛細(xì)作用將所述試劑保持在所述掩模片的狹道和所述分析用載體之間。
19.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述狹道彼此間隔1.5mm或更大的距離。
20.如權(quán)利要求4所述的掩模片，其特征在于，所述狹道彼此間隔1.5mm或更大的距離。
21.如權(quán)利要求1或4所述的掩模片，其特征在于，所述狹道及其間距的尺寸是這樣的，即在試劑沉積或分布在所述分析用載體上期間，通過毛細(xì)作用由所述狹道保持在所述掩模片和所述分析用載體之間的試劑不相互作用。
22.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述狹道寬度為2.5mm。
23.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求4至19所述的掩模片，其特征在于，每個(gè)狹道的長度在6到7mm的范圍內(nèi)。
24.如權(quán)利要求1或4所述的掩模片，其特征在于，用于所述固定劑的狹道相對于相鄰的第一狹道被偏置5到7mm的距離。
25.如權(quán)利要求1或4所述的掩模片，其特征在于，每個(gè)狹道的斜面相對于水平面的角度在1°到10°的范圍內(nèi)。
26.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片的每個(gè)狹道具有以下尺寸——長度3到15mm；——寬度1到10mm；——斜面的傾斜度相對于水平面1°到10°。
27.如權(quán)利要求1或4所述的掩模片，其特征在于，所述掩模片與定位裝置相連，所述定位裝置旨在將所述掩模片保持在所述分析用載體的表面附近，在所述分析用載體表面附近，所述掩模片將試劑沉積并分布在所述分析用載體上。
28.一種用于將一種或多種試劑沉積并分布在用于生物樣本的分析用載體上的裝置，包括a)如權(quán)利要求1所述的掩模片(10)；b)用于對所述掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置(12，14，16)，其允許所述掩模片被定位，從而所述掩模片被保持在所述分析用載體的表面附近，且允許所述掩模片被導(dǎo)引，以便在一平行于所述載體表面的水平面中掃過所述分析用載體的表面，從而允許將試劑沉積并分布在按所述掩模片的狹道排列的所述分析用載體的每個(gè)預(yù)定區(qū)域上。
29.一種用于將一種或多種試劑沉積并分布在用于生物樣本的分析用載體上的裝置，包括a)如權(quán)利要求1所述的掩模片(10)；b)用于對所述掩模片進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置(12，14，16)，其允許所述掩模片被定位，從而所述掩模片被保持在所述分析用載體的表面附近，且允許所述掩模片被導(dǎo)引，以便在一相對于所述載體的表面傾斜的平面中掃過所述分析用載體的表面，從而允許將試劑沉積并分布在按所述掩模片的狹道排列的所述分析用載體的每個(gè)預(yù)定區(qū)域上。
30.如權(quán)利要求28或29所述的裝置，其特征在于，所述用于對所述掩模片(10)進(jìn)行定位和導(dǎo)向的裝置可以在所述分析用載體和所述掩模片上的最靠近所述載體的點(diǎn)之間建立一個(gè)距離，該距離在0.1mm到0.5mm范圍內(nèi)。
31.如權(quán)利要求28或29所述的裝置，其特征在于，所述定位和導(dǎo)向裝置允許所述掩模片(10)沿著所述分析用載體自動移位。
32.一種用于將一種或多種試劑沉積并分布在包含生物樣本的分析用載體上的方法，該方法包括以下步驟——將如權(quán)利要求1所述的掩模片(10)定位在分析用載體的附近，以將所述一種或多種試劑沉積在所述分析用載體上，并借助毛細(xì)作用將它們保持在所述載體和所述掩模片的一個(gè)或多個(gè)狹道的斜面之間；——將所述一種或多種試劑加載到所述掩模片(10)上，以將所述一種或多種試劑沉積在所述分析用載體上，并借助毛細(xì)作用將它們保持在所述載體和所述掩模片的一個(gè)或多個(gè)斜面之間；——按掃過所述分析用載體表面的方式來移動所述掩模片(10)，以將一種或多種試劑分布在所述分析用載體上的所述載體的劃定區(qū)域(被稱為培養(yǎng)區(qū)域)中，被分布的一種或多種試劑的量足以使它們與存在于所述分析用載體上的生物樣本的成分相互反應(yīng)。
33.一種用于將一種或多種試劑沉積并分布在包含生物樣本的分析用載體上的方法，該方法包括以下步驟——將所述一種或多種試劑加載到掩模片(10)上，以將所述一種或多種試劑沉積在所述分析用載體上，并借助毛細(xì)作用將它們保持在所述載體和所述掩模片的一個(gè)或多個(gè)狹道的斜面之間；——將如權(quán)利要求1所述的掩模片(10)定位在所述分析用載體的附近，以將所述一種或多種試劑沉積在分析用載體上，并借助毛細(xì)作用將它們保持在所述載體和所述掩模片的一個(gè)或多個(gè)狹道的斜面之間；——按掃過所述分析用載體表面的方式來移動所述掩模片(10)，以將一種或多種試劑分布在所述分析用載體上的所述載體的劃定區(qū)域(被稱為培養(yǎng)區(qū)域)中，被分布的一種或多種試劑的量足以使它們與存在于所述分析用載體上的生物樣本的成分相互反應(yīng)。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，在遠(yuǎn)離包含生物樣本成分的分析用載體的表面區(qū)域處為所述掩模片加載一種或多種試劑。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，在將所述掩模片定位于所述分析用載體附近的步驟之前，為所述掩模片加載一種或多種試劑；并且在由氣壓產(chǎn)生的沖擊被施加在所述掩模片上之后，或通過所述試劑和所述分析用載體之間的機(jī)械接觸之后，或通過將所述試劑噴射在所述載體上之后，或通過在狹道斜面的最低點(diǎn)處使所述掩模片與所述分析用載體短暫接觸之后，所述試劑被沉積在所述分析用載體上。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，為所述掩模片(10)加載一種或多種試劑、和/或掩模片的移位是以自動的方式完成的。
37.如權(quán)利要求32或33所述的方法，其特征在于，所述分析用載體為一種電泳載體，其上的一種或多種生物樣本的成分已通過電泳遷移分離。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述一種或多種試劑是為了使被電泳分離的生物樣本的成分被免疫固定。
39.一種通過免疫固定來檢測一種或多種生物樣本的成分的方法，其包括以下步驟——在一種或多種生物樣本的一電泳載體上進(jìn)行電泳，以將所述成分分離出來；——使用如權(quán)利要求32或33到44所述的方法之一，將一種或多種試劑沉積并分布于所述電泳載體上；——將由電泳分離的所述生物樣本與所述的一種或多種試劑一起培養(yǎng)，以使它們免疫固定。
40.一種試劑盒，其包括——至少一個(gè)如權(quán)利要求1所述的掩模片；——至少一個(gè)分析用載體。
41.如權(quán)利要求40所述的試劑盒，其還包括——試劑，其用于使由電泳分離的樣本的成分免疫固定；——固定劑，其用于固定由電泳分離的成分組的每種樣本。
42.如權(quán)利要求1所述的掩模片，其特征在于，所述試劑以冷凍干燥的形態(tài)被加載入所述掩模片中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于將一種或多種試劑分布于一種分析用載體上的掩模片，所述分析用載體具體為一種電泳載體，例如電泳凝膠體。被保持在一掩模片保持裝置12中的掩模片(10)(稱為可移動掩模片)被設(shè)計(jì)成在分析用載體上的預(yù)定區(qū)域上移動，且包括用于將試劑分布于分析用載體上的橫向孔36。本發(fā)明應(yīng)用于例如對存在于生物樣本中的成分進(jìn)行檢測和鑒定的領(lǐng)域。特別是，檢測可以通過免疫固定而完成。
文檔編號G01N33/558GK1445542SQ03122610
公開日2003年10月1日 申請日期2003年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月6日
發(fā)明者弗蘭克·貝隆 申請人:莎碧亞公司