專利名稱：：基于熒光偏振的黃曲霉素均相檢測(cè)法的制作方法發(fā)明本景1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及霉菌毒素的檢測(cè)領(lǐng)域。尤其涉及一種均相檢測(cè)法，其通過改變熒光偏振以監(jiān)測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中存在的黃曲霉素。2.相關(guān)文獻(xiàn)描述黃曲霉素是由Aspergillusflavus方式生成的霉菌毒素1。黃曲霉素已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)很長時(shí)間了，但是其致癌作用在19世紀(jì)60年代后期才被首次發(fā)現(xiàn)。不同類型的黃曲霉素，包括B1，B2，G1，和G2以及許多其它類型存在于多種人類食品中，諸如谷類食品、谷粒和花生制品9，11。黃曲霉素B1是所有類型中毒性最大、存在最廣泛的一種。接觸黃曲霉素會(huì)提高原發(fā)性肝細(xì)胞癌癥的發(fā)生率7。由于黃曲霉素的毒性和致癌性，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)出多種定量測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素含量的分析方法1-4，6，8。這些檢測(cè)方法的一個(gè)難題是黃曲霉素的強(qiáng)疏水性，其在水溶劑中溶解度很差。因此，通常采用含水的有機(jī)溶劑混合物提取樣品中的黃曲霉素。另一個(gè)難題是大多數(shù)常用檢測(cè)方法，包括TLC和HPLC10，在提取之后需要進(jìn)一步的清除步驟和衍生化以除去干擾物質(zhì)。ELISA方法檢測(cè)得相對(duì)快，但由于需要多種清洗步驟、液相轉(zhuǎn)移和培養(yǎng)時(shí)間以及清除步驟因而難于定量。因此，需要獲得一種快速測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中的黃曲霉素、便于操作且可以定量分析的檢測(cè)方法。發(fā)明概述本發(fā)明的首要方案在于提供一種測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的均相檢測(cè)法。從樣品中提取黃曲霉素，將提取物與示蹤劑和抗體混合得到一混合物。抗體是黃曲霉素的特異性抗體。示蹤劑包括與熒光團(tuán)共軛的黃曲霉素肟。示蹤劑能夠與抗體結(jié)合而產(chǎn)生可探測(cè)到的熒光偏振變化。測(cè)量混合物的熒光偏振并與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較。本發(fā)明的第二個(gè)主要方案在于提供一種測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的檢測(cè)試劑盒。該檢測(cè)試劑盒包括一種抗體和一種示蹤劑，每個(gè)含量至少適于一次測(cè)試，并適于包裝?？贵w是黃曲霉素的特異性抗體。示蹤劑包括與熒光團(tuán)共軛的黃曲霉素肟。示蹤劑能夠與抗體結(jié)合而產(chǎn)生可探測(cè)到的熒光偏振變化。附圖簡(jiǎn)要說明圖1為一系列濃度的黃曲霉素在一定時(shí)間內(nèi)的熒光偏振變化的曲線圖，其與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案相一致。圖2為不含黃曲霉素的樣品的一系列濃度的甲醇溶液在一定時(shí)間內(nèi)的熒光偏振變化的曲線圖，其利用表1數(shù)據(jù)所繪制，與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案相一致。圖3為黃曲霉素?zé)晒馄駲z測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其利用表2數(shù)據(jù)繪制，與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案相一致。圖4為HPLC測(cè)得的樣品的黃曲霉素濃度相對(duì)于從圖3標(biāo)準(zhǔn)曲線所計(jì)算的黃曲霉素濃度的曲線圖，其與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案相一致。圖5為標(biāo)定的(spiked)黃曲霉素樣品濃度相對(duì)于熒光偏振測(cè)定值所計(jì)算的黃曲霉素濃度的曲線圖，其與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案相一致。圖6為熒光偏振檢測(cè)黃曲霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用該曲線獲得表6和7的數(shù)據(jù)，其與本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案一致。優(yōu)選的實(shí)施方案描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案提供了一種測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的比較簡(jiǎn)單的均相檢測(cè)方法，該方法以熒光偏振的測(cè)量為基礎(chǔ)。熒光偏振技術(shù)已成功地用于多種物質(zhì)的檢測(cè)中，其中包括蛋白質(zhì)、酶、藥物、DNA、激素、肽和抗體。熒光偏振技術(shù)的原理如下具有較低分子量的熒光探針由于其快速旋轉(zhuǎn)而具有較小偏振度，而具有較大分子量的熒光探針由于其慢速旋轉(zhuǎn)而具有較大偏振度。因此，當(dāng)與較大分子結(jié)合時(shí)，熒光團(tuán)的偏振度增大。關(guān)于熒光偏振技術(shù)的進(jìn)一步信息在美國專利號(hào)5,427,960和5,976,820以及Nasir，M.S.和Jolley，M.E.，″FluorescencePolarizationAnanalyticaltoolforhnmunoassayandDrugDiscovery，″CombinatorialChemistry&HighThroughputScreening，1999，2，177-190中有記載，這些文獻(xiàn)在此作為參考而引用。本發(fā)明中，從樣品中提取到的黃曲霉素在單克隆抗體存在下與熒光示蹤劑相競(jìng)爭(zhēng)，由此而引起熒光偏振度的變化，該變化隨黃曲霉素濃度的改變而改變。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案提供了一種黃曲霉素的均相檢測(cè)法，該方法靈敏、快速、簡(jiǎn)單且成本低。該方法也可以進(jìn)行便攜式現(xiàn)場(chǎng)操作(field-portable)且可得到定量結(jié)果。1.材料和方法該研究使用了兩種不同的黃曲霉素單克隆抗體。購自Sigma(catalogno.A-9555)的一種黃曲霉素單克隆抗體用于起初測(cè)試的開發(fā)性工作中，但發(fā)現(xiàn)其對(duì)甲醇敏感。在后期工作中，從美國農(nóng)業(yè)部(Peoria，Illinois)農(nóng)業(yè)研究所的Dr.ChrisMaragos得到的一種單克隆抗體，由于其在甲醇中穩(wěn)定而被采用。這種單克隆抗體的應(yīng)用在ChrisM.Maragos和VickiS.Thompson，″Fiber-opticImmunosensorforMycotoxins，″NaturalToxins7371-376(1999)中已有報(bào)導(dǎo)，將此文獻(xiàn)作為參考而引用。此外，還有很多其它的黃曲霉素單克隆抗體，參見，如美國專利號(hào)為4,835,100的專利。被黃曲霉素天然污染的玉米樣品和沒有被黃曲霉素污染的爆米花(popcorn)都購自TrilogyAnalyticalLaboratory，Inc.(Washington，Missouri)。Trilogy還提供了黃曲霉素B1/B2/G1/G2(7/1/3/1)混合物。純的黃曲霉素B1購自Sigma。熒光偏振測(cè)定在室溫下進(jìn)行，采用單管Sentry-FP熒光偏振儀(DiachemixCorp.)測(cè)定。2.黃曲霉素示蹤劑的制備在裝有磁攪拌器和冷凝器的10ml圓底燒瓶中，加入與1.2ml絕對(duì)乙醇(absoluteethanol)混合的黃曲霉素B1(5mg，0.016mmol，Sigma)和O-羧甲基-羥基氨基半鹽酸(41mg，0.19mmol，Sigma)。一邊攪拌一邊向該溶液中加入230μl的2MNaOH溶液(0.46mmol)，然后使溶液回流3個(gè)小時(shí)。所得溶液再在室溫下攪拌過夜，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，用水稀釋至1.5ml。逐滴加入1NNaOH，調(diào)節(jié)PH至9左右，用乙酸乙酯洗滌溶液(洗滌兩次，每次約3ml)。用6MHCl酸化水層至pH約為2左右，所得混合物在冰箱中于0℃下儲(chǔ)存。分離固體沉積物并干燥。用硅膠TLC，展開相為乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(32∶17∶5)，顯示肟產(chǎn)物的主斑點(diǎn)，其Rf值約為0.5。將上述制備的(黃曲霉素B1)-O-羧甲基肟的20μlTHF溶液與20μl二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的二氯甲烷溶液(10mg/ml)混合于200μl的二氯甲烷中。2-3分鐘后，加入20μl熒光素胺(fluoresceinamine)的THF溶液(異構(gòu)體2，10mg/ml)。在室溫下，使反應(yīng)過夜。在黃曲霉素肟不存在的情況下，進(jìn)行同樣的反應(yīng)作為對(duì)照反應(yīng)。產(chǎn)物的TLC(利用CHCl3∶MeOH∶CH3CO2H，40∶10∶3展開)顯示了多個(gè)斑點(diǎn)。對(duì)照反應(yīng)中缺少Rf～0.7的斑點(diǎn)。收集示蹤劑，并溶于甲醇中，然后用緩沖液稀釋10μl的示蹤劑溶液至1ml，其相對(duì)熒光強(qiáng)度為～400,000單元(unit)。觀察到該示蹤劑可以提供～40mP的穩(wěn)定偏振。加入10μl的1/50稀釋的抗體(Sigma，A-9555)得到最終的稀釋液1/5,000，在5分鐘內(nèi)其偏振度慢速增加至～230mP。為了確認(rèn)其反應(yīng)性，取1ml的緩沖液，并與10μl的抗體和10μl(0.8mg/ml)的黃曲霉素B1相混合?；旌衔镌谑覝叵卤３?分鐘，然后作為空白溶液調(diào)節(jié)FP儀器，再加入10μl的示蹤劑，熒光偏振從～230mP減小至～41mP。用類似反應(yīng)制備各種采用熒光素胺(異構(gòu)體1)作為熒光團(tuán)的黃曲霉素B1示蹤劑。所得示蹤劑的靈敏性低于熒光素胺(異構(gòu)體2)作為熒光團(tuán)的示蹤劑。具體而言，當(dāng)加入抗體時(shí)，起始偏振(～32mP)僅變成～140mP。也可用其它的熒光素胺衍生物作為熒光團(tuán)制備黃曲霉素B1示蹤劑。結(jié)果總結(jié)如下。當(dāng)使用5-氨基乙酰-氨基熒光素(5AAF)作為熒光團(tuán)時(shí)，得到的示蹤劑具有～30mP的熒光偏振，加入抗體時(shí)增至～65mP。當(dāng)使用5-(5-氨基戊基)-硫脲基熒光素(5，5APTF)作為熒光團(tuán)，示蹤劑具有～35mP的熒光偏振，其加入抗體后增至～102mP。也嘗試了熒光素胺基硫脲(FTSC)、4-氨基甲基熒光素和5-氨基甲基熒光素作為熒光團(tuán)，但都沒有得到活性產(chǎn)物，也就是說與抗體結(jié)合后熒光偏振沒有產(chǎn)生顯著變化。因此，從上述研究中可以得出結(jié)論，熒光素胺的異構(gòu)體2與該抗體作用的結(jié)果最好。3.檢測(cè)研究發(fā)展過程將購自Sigma(A-9555)的黃曲霉素抗體用PBSA-BGG(pH～7.5)稀釋(1/150,000)后用于起初的檢測(cè)研究中，該稀釋液為含有1g/l疊氮化鈉和9g/l氯化鈉以及100μg/ml牛γ球蛋白(BGG)的磷酸鹽緩沖液。將1ml的抗體溶液與50μl不含黃曲霉素B1的甲醇/水(70/30)已知濃度的溶液相混合。所用的黃曲霉素B1的濃度從0至40ppb而變化。在空白液測(cè)試完成后，加入10μl稀釋后的示蹤劑，該示蹤劑采用熒光素胺(異構(gòu)體2)作為熒光團(tuán)，根據(jù)上述方法而制備，監(jiān)測(cè)10分鐘熒光偏振的變化。結(jié)果如圖1所示。由于黃曲霉素是用有機(jī)溶劑和水的混合溶劑從農(nóng)產(chǎn)品樣品中提取到的，因此研究了甲醇對(duì)于購自Sigma(A-9555)的黃曲霉素抗體的作用。特異地，將1ml稀釋后的抗體溶液與已知濃度的甲醇相混合?？瞻滓簻y(cè)試后，加入示蹤劑(如上所述的黃曲霉素B1肟-異構(gòu)體2熒光素胺示蹤劑)，測(cè)試一定時(shí)間的熒光偏振。結(jié)果總結(jié)于下列表1與圖2中。表1這些結(jié)果顯示熒光偏振隨甲醇濃度的增加而降低，而且對(duì)于同一甲醇濃度，熒光偏振隨時(shí)間延長而增加。因此，盡管示蹤劑本身在甲醇和相關(guān)的有機(jī)溶劑中能穩(wěn)定存在較長時(shí)間，但這些結(jié)果顯示該抗體對(duì)于甲醇是敏感的。結(jié)果是該抗體在用于基于熒光偏振的黃曲霉素檢測(cè)中具有敏感性，優(yōu)選使用在甲醇中更穩(wěn)定的抗體以獲得更可靠的結(jié)果。從美國農(nóng)業(yè)部(Peoria，Illinois)農(nóng)業(yè)研究所的Dr.ChrisMaragos得到的一種單克隆抗體在甲醇中具有理想的穩(wěn)定性。4.FP檢測(cè)法檢測(cè)被天然污染的玉米樣品中的黃曲霉素天然污染黃曲霉素的玉米樣品購自TrilogyAnalyticalLaboratory，Inc.(Washington，Missouri)。用兩份100ml的甲醇/水(70/30)混合溶劑分別提取兩份20g粉碎的玉米粒樣品中的黃曲霉素，不連續(xù)振搖各樣品約30分鐘。用細(xì)過濾紙過濾提取物并在室溫下儲(chǔ)存于封口瓶中以待分析。用甲醇/水(70/30)稀釋Trilogy提供的黃曲霉素B1/B2/G1/G2(7/1/3/1)制成各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在試管中將40μl每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品混合至1ml抗體溶液(PBSA-BGG緩沖液中1/150,000)。所使用的抗體是Dr.ChrisMaragos提供的耐受甲醇的抗體。每個(gè)樣品作為空白液測(cè)試后，各試管中加入10μl的示蹤劑，在室溫下溫育樣品15分鐘，然后測(cè)試各試管的熒光偏振。使用的示蹤劑為如上所述的黃曲霉素B1肟-異構(gòu)體2熒光素胺示蹤劑。用兩次所得的數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品的熒光偏振數(shù)值在下列表2和圖3中所示。表2然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每個(gè)玉米樣品中的黃曲霉素濃度。結(jié)果總結(jié)于下列表3中。表3同時(shí)用上述熒光偏振法和標(biāo)準(zhǔn)HPLC技術(shù)對(duì)這些樣品進(jìn)行分析，比較兩種技術(shù)測(cè)定的黃曲霉素濃度。除了其中一個(gè)樣品污染有極高濃度的黃曲霉素以外，所有結(jié)果總結(jié)于下列表4和圖4中。結(jié)果顯示了HPLC和FP之間的良好相關(guān)性(r2＝0.97)。表45.爆米花(Popcorn)樣品中黃曲霉素的分析20g不含黃曲霉素的爆米花(popcorn)粉碎樣品采用黃曲霉素B1/B2/G1/G2(7/1/3/1)混合物標(biāo)定(spike)成已知濃度。如上所述對(duì)于每個(gè)提取物進(jìn)行兩次熒光偏振分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，從測(cè)試的熒光偏振平均值計(jì)算每個(gè)樣品的黃曲霉素濃度，并與已知標(biāo)定(spike)的濃度相比較。結(jié)果總結(jié)于下列表5和圖5中。在該研究中，將標(biāo)定的樣品濃度320ppb稀釋1/10以便進(jìn)行熒光偏振測(cè)定。表5這些結(jié)果顯示了理論值和用本發(fā)明的熒光偏振檢測(cè)法獲得的結(jié)果具有良好的相關(guān)性(r2＝0.996)。然而，熒光偏振結(jié)果總是比實(shí)際的黃曲霉素濃度偏低。一種解釋是天然污染的樣品主要含有黃曲霉素B1，和一部分的B2，但不含有G1和G2，而爆米花(popcorn)樣品是用B1/B2/G1/G2的混合物以7/1/3/1比率進(jìn)行標(biāo)定的。為了驗(yàn)證這種解釋，對(duì)于這些黃曲霉素的交互反應(yīng)性進(jìn)行研究。用甲醇/水(70/30)混合物將購自Sigma的黃曲霉素B1，B2，G1和G2分別稀釋為一系列的濃度，即10，25，40，80，和100ppb。按本發(fā)明方法對(duì)于黃曲霉素B1溶液進(jìn)行熒光偏振檢測(cè)，繪制圖6的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表6和表7分別顯示了從圖6的標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算的黃曲霉素G1和G2的結(jié)果。表6表7這些結(jié)果顯示當(dāng)黃曲霉素G1和G2的濃度是從只有黃曲霉素B1制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得時(shí)，其數(shù)值要偏低。具體而言，黃曲霉素G1和G2與單獨(dú)的黃曲霉素B1交互反應(yīng)程度為30-40％。這可以作為標(biāo)定的爆米花(popcorn)樣品的黃曲霉素濃度偏低的解釋。6.檢測(cè)試劑盒本發(fā)明所用的檢測(cè)材料優(yōu)選能以試劑盒的形式獲得。試劑盒優(yōu)選包括一定量的用于從谷粒或其它產(chǎn)品樣品中提取黃曲霉素的提取溶液、示蹤劑和抗體，上述物質(zhì)的量至少適于一次檢測(cè)，以及合適的包裝和使用說明。示蹤劑和抗體可以以溶液、液體分散體(liquiddispersion)或干粉末的形式(如，凍干粉末形式)提供。合適的包裝可以是任何固體基質(zhì)或材料，例如玻璃、塑料、紙、金屬箔及其類似物，能夠在固定的空間內(nèi)分別盛放緩沖液、示蹤劑和抗體。例如，提取溶劑、示蹤劑和單克隆抗體可以是溶液形式，其分別在標(biāo)有標(biāo)簽的玻璃或塑料瓶或小瓶中存放。抗體是黃曲霉素特異性抗體，且優(yōu)選為單克隆抗體。更有選為在提取溶劑中具穩(wěn)定性的單克隆抗體。示蹤劑包括與黃曲霉素肟共軛的熒光團(tuán)，優(yōu)選為(黃曲霉素B1)-O-羧甲基肟。適宜的熒光團(tuán)包括熒光素胺(異構(gòu)體1)，熒光素胺(異構(gòu)體2)，5-氨基乙酰-氨基熒光素(5AAF)，5-(5-氨基戊基)-硫脲基熒光素(5，5APTF)。也可以使用其它的熒光團(tuán)，只要所得示蹤劑能夠與抗體相結(jié)合產(chǎn)生可檢測(cè)到的熒光偏振變化。優(yōu)選的熒光團(tuán)為熒光素胺。最優(yōu)選的熒光團(tuán)為熒光素胺(異構(gòu)體2)。提取溶劑優(yōu)選為有機(jī)溶劑如甲醇或乙腈與水的混合物。最優(yōu)選的提取溶劑是甲醇/水(70/30)的混合物。7.參考文獻(xiàn)(1)Langone，J.J.；Vunakis，H.V.″AflatoxinB1Specificantibodiesandtheiruseinradioimmunoassays.″J.Natl.CancerInst.1976，56，591-595.(2)Sizaret，P.；Malaveille，C.；Montesano，R.；Frayssinet，C.″DetectionofAflatoxinsandrelatedmetabolitesbyradioimmunoassay.″J.Natl.CancerInst.1982，69，1375-1381.(3)Whitaker，T.；Horwitz，W.；Albert，R.；Nesheim，S.″Variabilityassociatedwithanalyticalmethodsusedtomeasureaflatoxininagriculturalcommodities.″J.AOACInt.1996，79，476-485.(4)Wilson，T.J.；Romer，T.R.″MycotoxinsUseofthemycosepmultifunctionalcleanupcolumnforliquidchromatographicdeterminationofAflatoxinsinagriculturalproducts.″J.Assoc.Off.Anal.Chem.1991，74，951-956.(5)Newberne，P.M.；Butler，W.H.CancerRes.1969，29，236-250.(6)Trucksess，M.W.；Stack，M.E.；Nesheim，S.；Page，S.W.；Albert，R.H.；Hansen，T.J.；Donahue，K.F.″Immunoaffinitycolumncoupledwithsolutionfluorometryorliquidchromatographypostcolumnderivatizationfordeterminationofaflatoxinsincom，peanutsandpeanutbutterCollaborativestudy.″J.Assoc.Off.Anal.Chem.1991，74，81-88.(7)Wild，C.P.；Pionneau，F(xiàn).A.；Montesano，R.；Mutiro，C.F.；Chetsanga，C.J.″Aflatoxindetectioninhumanbreastmilkbyimmunoassay.″Int.J.Cancer.1987，40，328-333.(8)Trucksess，M.W.；Stack，M.E.；Nesheim，S.；Albert，R.H.；Romer，T.R.″MultifunctionalcolumncoupledwithliquidchromatographyfordeterminationofaflatoxinsB1，B2，G1andG2incorn，almonds，brazilnuts，peanutsandpistachionutsCollaborativestudy.″J.AOAC.Int.1994，77，1512-1521.(9)Campbell，T.C.；Stoloff，L.″Implicationofmycotoxinsforhumanhealth.″J.Agr.FoodChem.1974，22，1006-1014.(10)Seitz，L.M.″Comparisonofmethodsofaflatoxinanalysisbyhigh-pressureliquidchromatography.″J.Chromatogr.1975，104，81-91.(11)Asao，T.；Buchi，G.；Abdel-kader，M.M.；Chang，S.B.；Wick，E.L.；Wogan，G.N.″ThestructureofAflatoxinsBandG1”J.Am.Chem.Soc.1965，87，882-886.權(quán)利要求1.一種用于測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的均相檢測(cè)法，所述均相檢測(cè)法包括下列步驟從樣品中提取黃曲霉素，得到提取物；將所述提取物與示蹤劑和抗體混合，得到一混合物，所述抗體為黃曲霉素特異性抗體，所述示蹤劑包括與熒光團(tuán)共軛的黃曲霉素肟，所述示蹤劑能夠與所述抗體結(jié)合以產(chǎn)生能夠檢測(cè)的熒光偏振變化；測(cè)量所述混合物的熒光偏振以獲得熒光偏振測(cè)量值；以及將熒光偏振測(cè)量值與特征性熒光偏振數(shù)值相比較，所述特征性熒光偏振數(shù)值與已知黃曲霉素濃度相對(duì)應(yīng)。2.權(quán)利要求1的檢測(cè)法，其中所述從樣品中提取黃曲霉素得到提取物的步驟包括步驟粉碎所述樣品以提供粉碎的樣品；以及將所述粉碎的樣品在提取溶劑中振搖預(yù)定的時(shí)間。3.權(quán)利要求2的檢測(cè)法，其中所述提取溶劑由有機(jī)溶劑和水組成。4.權(quán)利要求3的檢測(cè)法，其中所述有機(jī)溶劑為甲醇。5.權(quán)利要求1的檢測(cè)法，其中所述熒光團(tuán)選自熒光素胺、5氨基乙酰-氨基熒光素或5-(5-氨基戊基)-硫脲基熒光素。6.權(quán)利要求5的檢測(cè)法，其中所述熒光團(tuán)為熒光素胺的異構(gòu)體。7.權(quán)利要求6的檢測(cè)法，其中所述熒光團(tuán)為熒光素胺的異構(gòu)體2。8.權(quán)利要求1的檢測(cè)法，其中所述黃曲霉素肟為(黃曲霉素B1)-O-羧甲基肟。9.權(quán)利要求1的檢測(cè)法，其進(jìn)一步包括下述步驟提供多個(gè)黃曲霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)所述黃曲霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液具有不同的黃曲霉素已知濃度；在每個(gè)所述多個(gè)黃曲霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入所述示蹤劑和所述抗體以提供多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)混合物；以及測(cè)量每個(gè)所述多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)混合物的熒光偏振以提供多個(gè)對(duì)應(yīng)于已知黃曲霉素濃度的標(biāo)準(zhǔn)熒光偏振數(shù)值。10.權(quán)利要求9的檢測(cè)法，其中所述特征性熒光偏振數(shù)值為所述標(biāo)準(zhǔn)熒光偏振數(shù)值之一。11.一種用于測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒包括一種抗體和一種示蹤劑，每種數(shù)量都至少適用于一次檢測(cè)，以及合適的包裝，所述抗體對(duì)于黃曲霉素是特異性的，所述示蹤劑包括與熒光團(tuán)共軛的黃曲霉素肟，所述示蹤劑能夠與所述抗體結(jié)合以產(chǎn)生可檢測(cè)的熒光偏振變化。12.權(quán)利要求11的檢測(cè)試劑盒，其進(jìn)一步包括用于從樣品中提取黃曲霉素的提取溶劑。13.權(quán)利要求12的檢測(cè)試劑盒，其中所述提取溶劑由有機(jī)溶劑和水組成。14.權(quán)利要求13的檢測(cè)試劑盒，其中所述有機(jī)溶劑為甲醇。15.權(quán)利要求11的檢測(cè)試劑盒，其中所述熒光團(tuán)選自熒光素胺、5-氨基乙酰-氨基熒光素或5-(5-氨基戊基)-硫脲基熒光素。16.權(quán)利要求15的檢測(cè)試劑盒，其中所述熒光團(tuán)為熒光素胺。17.權(quán)利要求16的檢測(cè)試劑盒，其中所述熒光團(tuán)為熒光素胺的異構(gòu)體2。18.權(quán)利要求11的檢測(cè)試劑盒，其中所述黃曲霉素肟為(黃曲霉素B1)-O-羧甲基肟。全文摘要一種用于測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的均相檢測(cè)法，該方法使用熒光偏振技術(shù)。使用一種溶劑從農(nóng)產(chǎn)品樣品中提取黃曲霉素。通過將提取物、示蹤劑和黃曲霉素特異性單克隆抗體相混合得到一混合物。示蹤劑能夠與單克隆抗體結(jié)合以產(chǎn)生能夠檢測(cè)的熒光偏振變化。示蹤劑通過適合的熒光團(tuán)與黃曲霉素肟共軛得到。測(cè)量混合物的熒光偏振。通過測(cè)量一系列已知濃度的黃曲霉素溶液的熒光偏振得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算混合物中黃曲霉素的濃度。文檔編號(hào)G01N33/542GK1527942SQ02814111公開日2004年9月8日申請(qǐng)日期2002年7月10日優(yōu)先權(quán)日2001年7月13日發(fā)明者穆罕默德·薩瓦爾·納西爾,邁克爾·E·喬利,E喬利,穆罕默德薩瓦爾納西爾申請(qǐng)人:迪亞科密克斯公司