專利名稱：人體食源性寄生蟲病四聯(lián)診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種診斷試劑盒，尤其是涉及一種快捷診斷人體食源性寄生蟲病的試劑盒。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)的快速發(fā)展和城市化的加速，人們的飲食習(xí)慣發(fā)生了較大變化，同時(shí)由于烹調(diào)等方面的因素，人體食源性寄生蟲病的發(fā)病率有所上升，要求作寄生蟲病檢查的人數(shù)也隨之增加，一份血清需要做多項(xiàng)寄生蟲病檢測(cè)的已屢見(jiàn)不鮮?，F(xiàn)有技術(shù)的診斷試劑盒只能做單項(xiàng)檢測(cè)，不能多項(xiàng)同時(shí)進(jìn)行，且化時(shí)較長(zhǎng)，既造成資源浪費(fèi)又不利病人早期診斷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是解決現(xiàn)有檢測(cè)方法化時(shí)較長(zhǎng)僅限于單項(xiàng)檢測(cè)，既造成資源浪費(fèi)又不利病人早期診斷等技術(shù)問(wèn)題。
本發(fā)明的上述技術(shù)問(wèn)題主要是通過(guò)下述技術(shù)方案得以解決的包含反應(yīng)板、抗原固相膜、金標(biāo)顯色系統(tǒng)、緩沖系統(tǒng)；所述的抗原是肺吸蟲成蟲抗原，肝吸蟲成蟲抗原，弓形蟲速殖子抗原，豬囊尾蚴粗抗原；所述的固相膜為混合纖維素膜；所述的顯色系統(tǒng)為氯金酸標(biāo)記葡萄球菌A蛋白(SPA)；所述的緩沖系統(tǒng)包括磷酸鹽緩沖液(PBS)和含小牛血清白蛋白(BSA)及tween-20的Tris緩沖液(TBS)。
作為優(yōu)選，所述的混合纖維素膜為硝酸、醋酸混合纖維素膜，孔徑為0.65μm；所述的肺吸蟲抗原為1％成蟲可溶性抗原，肝吸蟲成蟲抗原為成蟲粗抗原經(jīng)25％飽和硫酸銨部分純化而成，弓形蟲抗原為速殖子外膜抗原，豬囊尾蚴粗抗原由囊尾蚴的囊液制作而成；所述的磷酸鹽緩沖液的PH值為7.2，濃度為0.02mol/L，Tris緩沖液PH值為8.2，濃度為0.02mol/L，小牛血清白蛋白(BSA)的含量為1-5％，tween-20的濃度為0.5-1％。
因此，本發(fā)明用一份待檢血清，可以檢測(cè)四種寄生蟲病，具有敏感、特異、快捷、簡(jiǎn)便，幾分鐘內(nèi)就可以得出結(jié)果的特點(diǎn)，適合于體檢、流行病學(xué)調(diào)查和臨床使用。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說(shuō)明。
反應(yīng)裝置包括三個(gè)部分一是小扁盒，分盒底和盒蓋，盒蓋上有一直徑0.3-0.5cm的圓孔，二是吸水填料，系市售吸水紙折疊而成，三是硝酸、醋酸纖維素混合膜。
固相點(diǎn)樣膜的制備將硝酸、醋酸混合纖維素膜切成直徑1cm的圓片，在圓片中央加箭頭形質(zhì)控點(diǎn)(采用1∶10人血清1.5μl點(diǎn)樣)，在箭頭上下左右按順時(shí)針?lè)较蛞来渭?μl肺吸蟲成蟲抗原，肝吸蟲成蟲抗原，弓形蟲速殖子抗原，豬囊尾蚴粗抗原，涼干后置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 顯色系統(tǒng)氯金酸標(biāo)記葡萄球菌A蛋白的制備0.01％氯金酸水溶液100ml加熱煮沸，在磁力攪拌下迅速加入1％檸檬酸三納水溶液3ml，繼續(xù)加熱至溶液呈橙紅色，如此制得的膠體金溶液直徑為15nm，冷卻后以每升0.1mol/L k2co3調(diào)PH至5.8，按每ml膠體金中加入8μl SPA的比例兩者均勻混合，5分鐘后加入1％聚乙二醇(PEG)超速離心而成。
測(cè)定方法1、在膜上加100μl含1-5％BSA和0.5-1％Teen-20 PH8.2、0.02mol/L的Tris緩沖液封閉，待滲入；2、加入待測(cè)血清50μl，待滲入；3、加PBS 100μl，待滲入；4、加SPA膠體金100μl，待滲入；5、加PBS 100μl，洗去未結(jié)合的SPA膠體金。
觀察結(jié)果3分鐘內(nèi)若在膜上相應(yīng)的抗原點(diǎn)處出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為陽(yáng)性，否則為陰性；膜中央的質(zhì)控點(diǎn)(箭頭)為試驗(yàn)有效標(biāo)志，無(wú)論是陰性或陽(yáng)性結(jié)果質(zhì)控點(diǎn)均應(yīng)顯示紅色。
權(quán)利要求
1.一種人體食源性寄生蟲病四聯(lián)診斷試劑盒，包含反應(yīng)板、抗原固相膜、金標(biāo)顯色系統(tǒng)、緩沖系統(tǒng)，其特征在于a.所述的抗原是肺吸蟲成蟲抗原，肝吸蟲成蟲抗原，弓形蟲速殖子抗原，豬囊尾蚴粗抗原；b.所述的固相膜為混合纖維素膜，c.所述的顯色系統(tǒng)為氯金酸標(biāo)記葡萄球菌A蛋白(SPA)；d.所述的緩沖系統(tǒng)包括磷酸鹽緩沖液(PBS)和含小牛血清白蛋白(BSA)及tween-20的Tris緩沖液(TBS)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體食源性寄生蟲病四聯(lián)診斷試劑盒，其特征在于a.所述的混合纖維素膜為硝酸和醋酸混合纖維素膜，孔徑0.65μm；b.所述的肺吸蟲抗原為1％成蟲可溶性抗原，肝吸蟲成蟲抗原為成蟲粗抗原經(jīng)25％飽和硫酸銨部分純化而成，弓形蟲抗原為速殖子外膜抗原，豬囊尾蚴粗抗原由囊尾蚴的囊液制備；c.所述的磷酸鹽緩沖液的PH值為7.2，濃度為0.02mol/L，Tris緩沖液PH值為8.2，小牛血清白蛋白(BSA)的含量為1-5％，tween-20的濃度為0.5-1％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多聯(lián)快速診斷試劑盒，包含反應(yīng)板、抗原固相膜、金標(biāo)顯色系統(tǒng)、緩沖系統(tǒng)；抗原是1％肺吸蟲成蟲可溶性抗原、由成蟲粗抗原經(jīng)25％飽和硫酸銨部分純化而成的肝吸蟲成蟲抗原、弓形蟲速殖子外膜抗原、由囊尾蚴囊液制作而成的豬囊尾蚴粗抗原；固相膜為硝酸、醋酸混合纖維素膜，孔徑0.65μm；顯色系統(tǒng)為氯金酸標(biāo)記葡萄球菌A蛋白；緩沖系統(tǒng)包括pH值為7.2，濃度為0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)和含量1－5％小牛血清白蛋白(BSA)及0.5－1％tween－20，pH值為8.2的Tris緩沖液(TBS)。
文檔編號(hào)G01N33/543GK1465979SQ0216016
公開(kāi)日2004年1月7日 申請(qǐng)日期2002年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
發(fā)明者林怡, 林 怡 申請(qǐng)人:林怡, 林 怡