專利名稱：醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，涉及檢化驗測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在醬油調(diào)味品生產(chǎn)企業(yè)中，過去只生產(chǎn)發(fā)酵醬油，在發(fā)酵醬油中不存在無機酸，同時發(fā)酵醬油的高溫生產(chǎn)條件幾乎不生成乙酰丙酸(果糖酸)。所以，醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定從分析技術(shù)到測定結(jié)果都是一項空白。隨著GB18186-2000釀造醬油、SB10336-2000配制醬油、SB10338-2000酸水解植物蛋白調(diào)味液等一系列調(diào)味品的國家最新標準的頒布，在產(chǎn)品標簽上必須明示釀造醬油或配制醬油的要求，以及嚴令禁止在醬油中添加酸水解動物蛋白調(diào)味液政令的執(zhí)行；如何按照國家最新標準有效地區(qū)分各種醬油調(diào)味品產(chǎn)品，是一直沒有解決的技術(shù)問題。申請人就是在長期研究試驗基礎(chǔ)上，尋找到乙酰丙酸(果糖酸)是區(qū)分各種醬油調(diào)味品的敏感指標，從而也試驗研究成功了醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法。申請人通過從中國重大科技成果數(shù)據(jù)庫(STAC)、中國科技成果數(shù)據(jù)庫(CSTAD)、中國專利數(shù)據(jù)庫(PATENT)、中國學術(shù)會議論文數(shù)據(jù)庫(CAPC)、中文科技期刊篇名數(shù)據(jù)庫(PSTP)、中國學位論文數(shù)據(jù)庫(CDDB)、全國科技成果交易信息數(shù)據(jù)庫(NDSTRTI)、中國新產(chǎn)品庫(XCP)、中國95-96重要成果數(shù)據(jù)庫(ZYCG)、中國科技論文統(tǒng)計數(shù)據(jù)庫(CSTP)、中國科技論文引文分析數(shù)據(jù)庫(CSTY)、98-99年國家科技獎勵項目初評結(jié)果庫(CP98，CP99)、國家級授獎項目庫(SJXMK)、火炬項目庫(HJJH)、中國機械工程文摘數(shù)據(jù)庫(JLXIE)、中國化工文摘數(shù)據(jù)庫(HGWZ)、中國農(nóng)業(yè)科技文獻數(shù)據(jù)庫(NY)、中國畜牧文獻庫(XUMU)、中國糧油食品科技文獻庫(LS)、中國科研機構(gòu)數(shù)據(jù)庫(CSI)、中國企業(yè)公司及產(chǎn)品數(shù)據(jù)庫(CECDB)、百萬商務(wù)(CBM)、中國高新技術(shù)企業(yè)數(shù)據(jù)庫(CNHEDB)等進行檢索查新，均未檢出與本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法相關(guān)的文獻資料以及相關(guān)的專利文獻資料。目前，國內(nèi)外尚無與本發(fā)明相近似的研究項目報告。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法。通過這種方法1、根據(jù)國家最新頒布的GB 18186-2000釀造醬油、SB10336-2000配制醬油、SB10338-2000酸水解植物蛋白調(diào)味液等調(diào)味品標準，以乙酰丙酸(果糖酸)這一敏感指標，作為區(qū)分上述三類調(diào)味品的直觀、準確、行之有效的技術(shù)依據(jù)。
2、根據(jù)必須在調(diào)味品產(chǎn)品標簽上明示釀造醬油或配制醬油的要求，應(yīng)用本發(fā)明對產(chǎn)品標簽上未作出明示的調(diào)味品進行有效地區(qū)分，從而在有效的規(guī)范市場前提下，促進企業(yè)的公平競爭及行業(yè)的健康發(fā)展。
3、根據(jù)嚴禁在醬油中添加酸水解動物蛋白調(diào)味液的政令，應(yīng)用本發(fā)明對市場上的調(diào)味品進行監(jiān)督檢驗、打擊假冒偽劣，有效地保護消費者的合法利益，保護人民群眾的身心健康。
本發(fā)明可達到預期的目的。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所提供的技術(shù)方案為一種醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，包括氣相色譜內(nèi)標法的用帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行檢測，以內(nèi)標法進行定量，配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)，樣品經(jīng)樣品處理后獲得樣品提取液，在樣品提取液中加入配制內(nèi)標物獲得混合液，混合液經(jīng)濃縮后獲得濃縮液，濃縮液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后獲得內(nèi)標物波峰、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
所述配制雙溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得B液，分別由A液2毫升與B液5毫升、A液3毫升與B液4毫升、A液4毫升與B液3毫升、A液5毫升與B液2毫升、A液6毫升與B液1毫升混勻獲得五種配比的配制雙溶液，所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)是將五種配比的配制雙溶液依次在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后依次分別獲得A液、B液各五個波峰，依次分別獲得A液、B液各五個波峰面積，依次分別以同組A液波峰面積比B液波峰面積的五個比值作為縱坐標，依次分別以同組的A液容積比B液容積的五個比值作為橫坐標，在坐標上依次找出同組A、B液波峰面積比與同組A、B液容積比的五個交匯點，將五個交匯點連線而制定標準曲線，制定出標準曲線后計算出標準曲線的斜率，標準曲線斜率的計算就是相對表現(xiàn)系數(shù)的計算，其計算公式為 或 從而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)。
所述配制內(nèi)標物是由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容后而獲得的配制內(nèi)標物。
所述樣品為釀造醬油、或配制醬油、或酸水解植物蛋白調(diào)味液、或酸水解動物蛋白調(diào)味液，所述樣品處理是取樣品10毫升滴入數(shù)滴濃鹽酸調(diào)PH值為1至2，再加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，重復兩次加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，將上述三次提取的混合萃取液合并獲得樣品提取液，所述混合液是在樣品提取液中加入1毫升配制內(nèi)標物而獲得混合液，所述濃縮液是在漏斗中塞入在棉球、并在棉球上放有無水硫酸鈉、而后使混合液通過漏斗后、置于40℃±2℃條件下濃縮至2毫升而獲得的濃縮液。
所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測，儀器檢測所使用的儀器是帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀，儀器條件是氣相色譜儀的載氣為高純氮氣、分流毛細管柱的分流比為1∶100、壓力為411894Pa，氣相色譜儀帶有的氫火焰離子化檢測器的檢測溫度為270℃、氫氣壓力為58842Pa、空氣壓力為58842Pa，所述儀器檢測的檢測過程是取配制雙溶液、或濃縮液1微升進樣，儀器在一分鐘內(nèi)升至120℃的初始溫度，儀器以每分鐘升8℃的速度繼續(xù)連續(xù)升溫，儀器升溫至230℃時維持4分鐘再自動降溫至120℃的初始溫度，重復對每個配制雙溶液、或濃縮液的檢測，當儀器溫度從120℃升至190℃時配制雙溶液中的B液、濃縮液中的配制內(nèi)標物溶液出波峰，當儀器溫度從120℃升至210℃時配制雙溶液中的A液、濃縮液中的乙酰丙酸(果糖酸)出波峰。
所述根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的計算公式為樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝ 從而獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
由于采用了本發(fā)明的技術(shù)方案，使得本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法具有如下有益效果1、由于本發(fā)明研究設(shè)置的配制雙溶液在所設(shè)置的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)，以及樣品、樣品處理、樣品提取液加配制內(nèi)標物、混合液、濃縮液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測，根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量等一套完整的科學方法。從而獲得了填補醬油中乙酰丙酸(果糖酸)測定方法空白的有益效果；同時獲得了方法穩(wěn)定可靠、再現(xiàn)性強、便于推廣應(yīng)用、可作為國家標準經(jīng)批準后予以頒布執(zhí)行的有益效果。
2、由于本發(fā)明所設(shè)置的樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量，是釀造醬油、配制醬油、酸水解植物蛋白調(diào)味液、酸水解動物蛋白調(diào)味液中的敏感指標，從而獲得了可直觀、準確、有效區(qū)分上述各種產(chǎn)品的有益效果；同時，還獲得了規(guī)范市場、促使企業(yè)公平競爭、促進行業(yè)健康發(fā)展、打擊假冒偽劣、保護消費者利益、保證人民群眾身心健康的有益效果。
說明書附1為本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法的操作流程窗口示意圖；以圖中所示，在使用虛線箭頭時，雙虛線箭頭斷開而不用；以圖中所示，在使用雙虛線箭頭時，虛線箭頭斷開而不用。
圖2為本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法的儀器測定的波峰譜；該圖是波峰譜之一，是波峰譜中的例圖。
圖3為本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法的標準曲線圖；該圖是標準曲線圖之一，是標準曲線圖中的例圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合說明書附圖，對本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法作詳細描述，正如說明書附圖所示一種醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，包括氣相色譜內(nèi)標法的用帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行檢測，以內(nèi)標法進行定量，配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)，樣品經(jīng)樣品處理后獲得樣品提取液，在樣品提取液中加入配制內(nèi)標物獲得混合液，混合液經(jīng)濃縮后獲得濃縮液，濃縮液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后獲得內(nèi)標物波峰、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
所述配制雙溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得B液，分別由A液2毫升與B液5毫升、A液3毫升與B液4毫升、A液4毫升與B液3毫升、A液5毫升與B液2毫升、A液6毫升與B液1毫升混勻獲得五種配比的配制雙溶液，所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)是將五種配比的配制雙溶液依次在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后依次分別獲得A液、B液各五個波峰，依次分別得出A液、B液各五個波峰面積，依次分別以同組A液波峰面積比B液波峰面積的五個比值作為縱坐標，依次分別以同組的A液容積比B液容積的五個比值作為橫坐標，在坐標上依次找出同組A、B液波峰面積比與同組A、B液容積比的五個交匯點，將五個交匯點連線而制定標準曲線，制定出標準曲線后計算出標準曲線的斜率，標準曲線斜率的計算就是相對表現(xiàn)系數(shù)的計算，其計算公式為 或 從而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)。
所述配制內(nèi)標物是由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容后而獲得的配制內(nèi)標物。
所述樣品為釀造醬油、或配制醬油、或酸水解植物蛋白調(diào)味液、或酸水解動物蛋白調(diào)味液，所述樣品處理是取樣品10毫升滴入數(shù)滴濃鹽酸調(diào)PH值為1至2，再加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，重復兩次加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，將上述三次提取的混合萃取液合并獲得樣品提取液，所述混合液是在樣品提取液中加入1毫升配制內(nèi)標物而獲得混合液，所述濃縮液是在漏斗中塞入在棉球、并在棉球上放有無水硫酸鈉、而后使混合液通過漏斗后、置于40℃±2℃條件下濃縮至2毫升而獲得的濃縮液。
所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測，儀器檢測所使用的儀器是帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀，儀器條件是氣相色譜儀的載氣為高純氮氣、分流毛細管柱的分流比為1∶100、壓力為411894Pa，氣相色譜儀帶有的氫火焰離子化檢測器的檢測溫度為270℃、氫氣壓力為58842Pa、空氣壓力為58842Pa，所述儀器檢測的檢測過程是取配制雙溶液、或濃縮液1微升進樣，儀器在一分鐘內(nèi)升至120℃的初始溫度，儀器以每分鐘升8℃的速度繼續(xù)連續(xù)升溫，儀器升溫至230℃時維持4分鐘再自動降溫至120℃的初始溫度，重復對每個配制雙溶液、或濃縮液的檢測，當儀器溫度從120℃升至190℃時配制雙溶液中的B液、濃縮液中的配制內(nèi)標物溶液出波峰，當儀器溫度從120℃升至210℃時配制雙溶液中的A液、濃縮液中的乙酰丙酸(果糖酸)出波峰。
所述根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的計算公式為樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝ 從而獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
實施例1正如說明書附

圖1所示，采用氣相色譜內(nèi)標法。用帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行檢測，以內(nèi)標法進行定量。儀器條件是氣相色譜儀的載氣為高純氮氣、分流毛細管柱的分流比為1∶100、壓力為411900Pa，氣相色譜儀帶有的氫火焰離子化檢測器的檢測溫度為270℃、氫氣壓力為58800Pa、空氣壓力為58800Pa。
實施例2正如說明書附圖1所示，配制雙溶液由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得A液；由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得B液；A液2毫升與B液5毫升獲雙溶液1、A液3毫升與B液4毫升獲雙溶液2、A液4毫升與B液3毫升獲雙溶液3、A液5毫升與B液2毫升獲雙溶液4、A液6毫升與B液1毫升獲雙溶液5，共配制五個雙溶液。
實施例3正如說明書附圖1所示，配制內(nèi)標物由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容而獲得配制的內(nèi)標物。
實施例4正如說明書附圖1所示，取低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油10毫升為樣品，進行樣品處理。即在樣品中加入數(shù)滴濃鹽酸調(diào)PH值為1至2，再加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，再重復兩次加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，將上述三次提取的混合萃取液合并而獲得樣品提取液。在樣品提取液中加入1毫升如實施例3所述的內(nèi)標物而獲得混合液。在漏斗中塞入棉球、并在棉球上放有無水硫酸鈉、而后使混合液通過漏斗后、置于40℃±2℃條件下濃縮至2毫升，從而獲得濃縮液1。
重復上述操作；但不是取低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油為樣品，而是取高鹽稀發(fā)酵醬油為樣品；從而獲得濃縮液2。
重復上述操作；而是取澆淋(固稀)發(fā)酵醬油為樣品；從而獲得濃縮液3。
重復上述操作；而是取以低鹽固發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油為樣品；從而獲得濃縮液4。
重復上述操作；而是取以高鹽稀發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油為樣品；從而獲得濃縮液5。
重復上述操作；而是取以澆淋(固稀)發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油為樣品；從而獲得濃縮液6。
重復上述操作；而是取以低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油、高鹽稀發(fā)酵醬油、澆淋(固稀)發(fā)酵醬油的混合醬油為基料，加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油為樣品；從而獲得濃縮液7。
重復上述操作；而是取酸水解植物蛋白調(diào)味液為樣品；從而獲得濃縮液8。
重復上述操作；而是取酸水解動物蛋白調(diào)味液為樣品；從而獲得濃縮液9。
實施例5正如說明書附圖1、2、3所示，進行儀器檢測按照實施例1所述的儀器條件，將儀器在一分鐘內(nèi)升至120℃的初始溫度。將實施例2所述的雙溶液1向儀器進樣1微升。使儀器進行程序升溫，即儀器以每分鐘8℃的速度連續(xù)升溫，儀器升溫至230℃時維持4分鐘后再自動降溫至120℃的初始溫度。當儀器溫度從120℃升至190℃時，雙溶液1中的B液(即庚酸)出波峰；當儀器溫度從120℃升至210℃時，雙溶液1中的A液(即乙酰丙酸)出波峰。
在上述條件下，以雙溶液2進樣1微升，重復上述操作，獲雙溶液2中B液、A液波峰。
在上述條件下，以雙溶液3進樣1微升，重復上述操作，獲雙溶液3中B液、A液波峰。
在上述條件下，以雙溶液4進樣1微升，重復上述操作，獲雙溶液4中B液、A液波峰。
在上述條件下，以雙溶液5進樣1微升，重復上述操作，獲雙溶液5中B液、A液波峰。
至此，依次分別獲得了雙溶液1、2、3、4、5的B、A液波峰。該波峰類似于說明書附圖2所示的波峰。
在上述條件下，以濃縮液1進樣1微升，重復上述操作，獲得濃縮液1中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。該波峰類似于說明書附圖2所示意的波峰。
重復濃縮液1的操作，但濃縮液1改為濃縮液2，獲得濃縮液2中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液3，獲得濃縮液3中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液4，獲得濃縮液4中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液5，獲得濃縮液5中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液6，獲得濃縮液6中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液7，獲得濃縮液7中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液8，獲得濃縮液8中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
重復濃縮液1的操作；但濃縮液1改為濃縮液9，獲得濃縮液9中內(nèi)標物(庚酸)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。
實施例6正如說明書附圖1、2、3所示。對9種樣品中各自的乙酰丙酸(果糖酸)含量進行計算(1)制定標準曲線以實施例5所述而獲得的雙溶液1、2、3、4、5中A、B液波峰為基礎(chǔ)，獲得各自的波峰面積；依次分別以同組的A液波峰面積/B液波峰面積的五個比值為縱坐標。依次分別以同組的A液容積/B液容積的五個比值為橫坐標。在坐標上依次找出同組A、B液波峰面積比值與同組A、B液容積比值的五個交匯點，將五個交匯點連線而制定出標準曲線。該標準曲線類似于說明書附圖3所示的標準曲線圖。
根據(jù)以上所述，得出雙溶液1的A液(乙酰丙酸)波峰面積為1212，雙溶液1的B液(庚酸)波峰面積為4988，二者的比值為0.2430；雙溶液2的A液(乙酰丙酸)波峰面積為1550；雙溶液2的B液(庚酸)波峰面積為3456，二者的比值為0.4485；雙溶液3的A液(乙酰丙酸)波峰面積為2148，雙溶液3的B液(庚酸)波峰面積為2697，二者的比值為0.7964；雙溶液4的A液(乙酰丙酸)波峰面積為3016，雙溶液4的B液(庚酸)波峰面積為1983，二者的比值為1.5209；雙溶液5的A液(乙酰丙酸)波峰面積為3567，雙溶液5的B液(庚酸)波峰面積為1004，二者的比值為3.5528；至此，在雙溶液1、2、3、4、5中A、B液的波峰面積基礎(chǔ)上，分別得出雙溶液1、2、3、4、5中A、B液波峰面積的比值，根據(jù)這五個比值，制定出標準曲線的縱坐標。
根據(jù)以上所述，得出雙溶液1的A液(乙酰丙酸)容積為2，雙溶液1的B液(庚酸)容積為5，二者的比值為0.4；雙溶液2的A液(乙酰丙酸)容積為3，雙溶液1的B液(庚酸)容積為4，二者的比值為0.75；雙溶液3的A液(乙酰丙酸)容積為4，雙溶液3的B液(庚酸)容積為3，二者的比值為1.33；雙溶液4的A液(乙酰丙酸)容積為5，雙溶液4的B液(庚酸)容積為2，二者的比值為2.5；雙溶液5的A液(乙酰丙酸)容積為6，雙溶液5的B液(庚酸)容積為1，二者的比值為6；至此，在雙溶液1、2、3、4、5中A、B液的容積基礎(chǔ)上，分別得出雙溶液1、2、3、4、5中A、B液容積的比值，根據(jù)這五個比值，制定出標準曲線的橫坐標。
通過標準曲線的縱坐標和橫坐標，點出雙溶液1的A、B液波峰面積比值0.2430與雙溶液1的A、B液容積比值0.4的交匯點，依次點出雙溶液2的A、B液波峰面積比值0.4585與雙溶液1的A、B液容積比值0.75的交匯點，點出雙溶液3的A、B波峰面積比值0.7965與雙溶液3的A、B液容積比值1.33的交匯點，點出雙溶液4的A、B液波峰面積比值1.5209與雙溶液4的A、B液容積比值2.5的交匯點，點出雙溶液5的A、B液波峰面積比值3.5528與雙溶液5的A、B容積比值6的交匯點。
至此，在座標中獲得五個交匯點，將五個交匯點連線而制定出標準曲線。該標準曲線類似于說明書附圖3的標準曲線。
(2)、計算出相對表現(xiàn)系數(shù)制定出標準曲線后，計算出標準曲線斜率，標準曲線斜率的計算就是相對表現(xiàn)系數(shù)的計算，其計算公式為 或
按上述第一公式計算，即將(1)中所述的有關(guān)數(shù)據(jù)代入第一公式，從而得出A、將雙溶液1的有關(guān)數(shù)據(jù)代入公式 B、將雙溶液2的有關(guān)數(shù)據(jù)代入公式 C、將雙溶液3的有關(guān)數(shù)據(jù)代入公式 D、將雙溶液4的有關(guān)數(shù)據(jù)代入公式 E、將雙溶液5的有關(guān)數(shù)據(jù)代入公式 至此，通過五個雙溶液的有關(guān)數(shù)據(jù)分別代入第一公式計算，均得出了標準曲線的斜率為0.6，從而也就得出了相對表現(xiàn)系數(shù)為0.6；同樣，將五個雙溶液的有關(guān)數(shù)據(jù)分別代入第二公式計算，也得出了相對表現(xiàn)系數(shù)為0.6的結(jié)果。
(3)、樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的計算根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積，計算樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的含量，計算公式為樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的含量(g/100ml)＝ 均以已知的相對表現(xiàn)系數(shù)為0.6、內(nèi)標物(庚酸)濃度為0.5依次代入公式，那么再將獲得的濃縮液1中內(nèi)標物(庚酸)的波峰面積7256、低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰面積276代入公式，從而獲得低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝2760.6×0.57256÷10=0.003;]]>再將獲得的濃縮液2中的內(nèi)標物(庚酸)的波峰面積6567、高鹽稀發(fā)酵醬油樣品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰面積71代入公式，從而獲得高鹽稀發(fā)酵醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.009g/100ml；以此類推，再將濃縮液3中的內(nèi)標物波峰面積2091、樣品中乙酰丙酸波峰面積109代入公式，從而獲得澆淋(固稀)發(fā)酵醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.004g/100ml；以此類推，再將濃縮液4中的內(nèi)標物波峰面積4157、樣品中乙酰丙酸波峰面積5480代入公式，從而獲得以低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.11g/100ml；以此類推，再將濃縮液5中的內(nèi)標物波峰面積2279、樣品中乙酰丙酸波峰面積6592代入公式，從而獲得以高鹽固態(tài)發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.24g/100ml；以此類推，再將濃縮液6中的內(nèi)標物波峰面積1846、樣品中乙酰丙酸波峰面積3190代入公式，從而獲得以澆淋(固稀)發(fā)酵醬油為基料加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.14g/100ml；以此類推，再將濃縮液7中的內(nèi)標物波峰面積3343、樣品中乙酰丙酸波峰面積7320代入公式，從而獲得以低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油、高鹽稀發(fā)發(fā)酵醬油、澆淋(固稀)發(fā)酵醬油的混合醬油為基料，加入酸水解植物蛋白調(diào)味液而制作的配制醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為0.18g/100ml；以此類推，再將濃縮液8中的內(nèi)標物波峰面積7594、樣品中乙酰丙酸波峰面積124991代入公式，從而獲得酸水解植物蛋白調(diào)味液中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為1.37g/100ml；以此類推，再將濃縮液9中的內(nèi)標物波峰面積380、樣品中乙酰丙酸波峰面積6351代入公式，從而獲得酸水解動物蛋白調(diào)味液中乙酰丙酸(果糖酸)的含量為1.39g/100ml；
至此，九種樣品中的乙酰丙酸(果糖酸)含量均已測出。
應(yīng)用本發(fā)明，對諸多樣品進行檢測，均收到了預期的良好效果。
通過對多批諸多樣品的檢測，通過對事先加入定量的乙酰丙酸(果糖酸)樣品進行驗證性檢測，均收到了預期的良好效果，同時驗證了兩個問題1、本方法精確、穩(wěn)定、直觀、快速、有效、可操作性強。
2、醬油中乙酰丙酸(果糖酸)是區(qū)分釀造醬油、配制醬油、酸水解液(含植物蛋白酸水解液與動物蛋白水解液)的敏感指標。因為凡乙酰丙酸(果糖酸)含量在0.01g/100ml以下時均為釀造醬油、含量在0.01g/100ml以上時均為配制醬油，這樣就對釀造醬油、配制醬油進行了明確有效地區(qū)分；同時，酸水解植物蛋白調(diào)味液、酸水解動物蛋白調(diào)味液均存在一種固有的味道而不可能直接上市；從而可起到靜化市場、促使企業(yè)公平競爭、促進行業(yè)健康發(fā)展、保護消費者合法利益的良好作用。
實施例7本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法評價試驗1、精密度(平行性試驗)抽取具有代表性的樣品2份，No.1，No.2(No.1醬油；No.2酸水解植物蛋白液)，分別進行8次平行處理分析，并依據(jù)下列計算公式計算其標準偏差和變異系數(shù)，結(jié)果列于表一。S=Σ(x-x‾)2n-1]]>CV=SX‾×100%]]>S標準偏差X任何一次測定結(jié)果Xn次測定結(jié)果的平均值CV差異系數(shù)表一平行性試驗結(jié)果(三次測定的平均值) 由表中數(shù)據(jù)可以看出，兩組平行的變異系數(shù)分別為3.97％、1.73％，說明該方法有良好的平行性和穩(wěn)定性。
2、準確性(回收率試驗)取醬油樣品一式3份，分別做回收試驗，結(jié)果列于下表二。 表二回收率試驗結(jié)果(三次測定平均值) 注加標量添加內(nèi)標準溶液的量為1毫升；相當于乙酰丙酸(果糖酸)0.4586克，其濃度為0.04586％。樣品回收率94-97％，平均回收率為94.91％。
綜上所述，通過精密度(平行性試驗)和準確性(回收率試驗)試驗可以看出，本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法具有良好的平行性、穩(wěn)定性、準確性。
權(quán)利要求
1.一種醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，包括氣相色譜內(nèi)標法的用帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行檢測，以內(nèi)標法進行定量，其特征在于配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)，樣品經(jīng)樣品處理后獲得樣品提取液，在樣品提取液中加入配制內(nèi)標物獲得混合液，混合液經(jīng)濃縮后獲得濃縮液，濃縮液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后獲得內(nèi)標物波峰、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，其特征在于所述配制雙溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容獲得B液，分別由A液2毫升與B液5毫升、A液3毫升與B液4毫升、A液4毫升與B液3毫升、A液5毫升與B液2毫升、A液6毫升與B液1毫升混勻獲得五種配比的配制雙溶液，所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)是將五種配比的配制雙溶液依次在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測后依次分別獲得A液、B液各五個波峰，依次分別得出A液、B液各五個波峰面積，依次分別以同組A液波峰面積比B液波峰面積的五個比值作為縱坐標，依次分別以同組的A液容積比B液容積的五個比值作為橫坐標，在坐標上依次找出同組A、B液波峰面積比與同組A、B液容積比的五個交匯點，將五個交匯點連線而制定標準曲線，制定出標準曲線后計算出標準曲線的斜率，標準曲線斜率的計算就是相對表現(xiàn)系數(shù)的計算，其計算公式為 或 從而獲得相對表現(xiàn)系數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，其特征在于所述配制內(nèi)標物是由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液經(jīng)定容后而獲得的配制內(nèi)標物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，其特征在于所述樣品為釀造醬油、或配制醬油、或酸水解植物蛋白調(diào)味液、或酸水解動物蛋白調(diào)味液，所述樣品處理是取樣品10毫升滴入數(shù)滴濃鹽酸調(diào)PH值為1至2，再加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，重復兩次加入乙醚振搖后使其分層并提取樣品與乙醚的混合萃取液，將上述三次提取的混合萃取液合并獲得樣品提取液，所述混合液是在樣品提取液中加入1毫升配制內(nèi)標物而獲得混合液，所述濃縮液是在漏斗中塞入在棉球、并在棉球上放有無水硫酸鈉、而后使混合液通過漏斗后、置于40℃±2℃條件下濃縮至2毫升而獲得的濃縮液。
5根據(jù)權(quán)利要求1所述的醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，其特征在于所述配制雙溶液在設(shè)定的儀器條件下進行儀器檢測，儀器檢測所使用的儀器是帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀，儀器條件是氣相色譜儀的載氣為高純氮氣、分流毛細管柱的分流比為1∶100、壓力為411894Pa，氣相色譜儀帶有的氫火焰離子化檢測器的檢測溫度為270℃、氫氣壓力為58842Pa、空氣壓力為58842Pa，所述儀器檢測的檢測過程是取配制雙溶液、或濃縮液1微升進樣，儀器在一分鐘內(nèi)升至120℃的初始溫度，儀器以每分鐘升8℃的速度繼續(xù)連續(xù)升溫，儀器升溫至230℃時維持4分鐘再自動降溫至120℃的初始溫度，重復對每個配制雙溶液、或濃縮液的檢測，當儀器溫度從120℃升至190℃時配制雙溶液中的B液、濃縮液中的配制內(nèi)標物溶液出波峰，當儀器溫度從120℃升至210℃時配制雙溶液中的A液、濃縮液中的乙酰丙酸(果糖酸)出波峰。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法，其特征在于所述根據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的計算公式為樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝ 從而獲得樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。
全文摘要
本發(fā)明醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的測定方法涉及檢化驗技術(shù)領(lǐng)域。包括帶有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行檢測、以內(nèi)標法定量。配制雙溶液在設(shè)定儀器條件下進行儀器檢測后制定標準曲線而獲相對表現(xiàn)系數(shù)。樣品經(jīng)處理獲樣品提取液加內(nèi)標物獲混合液、經(jīng)濃縮獲濃縮液，濃縮液在設(shè)定儀器條件下經(jīng)儀器檢測后獲內(nèi)標物波峰、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰。據(jù)相對表現(xiàn)系數(shù)、濃縮液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面積、內(nèi)標物濃度、內(nèi)標物波峰面積經(jīng)計算獲樣品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。用于醬油中乙酰丙酸(果糖酸)的檢測。方法科學、穩(wěn)定、可靠，結(jié)果直觀、準確、有效?？稍卺勗灬u油、配制醬油區(qū)分中應(yīng)用推廣。
文檔編號G01N30/00GK1419122SQ0215644
公開日2003年5月21日 申請日期2002年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月16日
發(fā)明者董勝利, 徐開生, 吳鳴, 司京成, 王之琳, 白燕, 楊桂菊, 趙偉, 梁斌 申請人:北京市食品釀造研究所