專利名稱：預(yù)測(cè)馬的損傷表現(xiàn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過測(cè)量生物學(xué)液體內(nèi)的免疫球蛋白檢測(cè)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或感染的方法；更具體地，本發(fā)明涉及測(cè)量馬的唾液IgA和/或IgG以確定疲勞、損傷表現(xiàn)或出現(xiàn)損傷表現(xiàn)的危險(xiǎn)性、差的表現(xiàn)潛能和/或感染。
背景技術(shù)：
在人中存在一個(gè)巨大的數(shù)據(jù)庫(kù)，它以互動(dòng)方式將唾液IgA水平和運(yùn)動(dòng)員的損傷表現(xiàn)聯(lián)系在一起。近來的數(shù)據(jù)顯示，基本上所有優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員都在B細(xì)胞基因組中整合有EBV病毒DNA；并且對(duì)于有低IgA水平的運(yùn)動(dòng)員，不適當(dāng)?shù)母哌\(yùn)動(dòng)量可激活EBV外排導(dǎo)致疲勞和損傷表現(xiàn)。對(duì)于開發(fā)測(cè)定方法來監(jiān)測(cè)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或感染，還沒有在任何其他動(dòng)物模型上進(jìn)行過研究。目前還不知道不同生物學(xué)液體中的免疫球蛋白水平能否用于監(jiān)測(cè)或評(píng)價(jià)其他物種的損傷表現(xiàn)(EBV僅特異針對(duì)有限數(shù)量的動(dòng)物種類)。更具體地，EBV并不感染馬。
賽馬和參加其他運(yùn)動(dòng)(例如馬球和類似運(yùn)動(dòng))的馬暴露于嚴(yán)峻的比賽壓力和訓(xùn)練/練習(xí)壓力。監(jiān)測(cè)練習(xí)水平和比賽壓力將是重要的，這使得能夠在適當(dāng)時(shí)間按需要實(shí)施適當(dāng)?shù)挠?xùn)練和休息方案。
因此需要一個(gè)合適的試驗(yàn)，以便在馬暴露于身體或其他壓力時(shí)監(jiān)測(cè)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或預(yù)測(cè)對(duì)感染的易感性，或者評(píng)價(jià)出現(xiàn)表現(xiàn)遜色的危險(xiǎn)性或表現(xiàn)潛能；以使得能夠改變訓(xùn)練方案或者在適當(dāng)時(shí)候使用介入治療。
本發(fā)明的一個(gè)目的是克服或改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，或者提供一個(gè)有用的可選擇方案。
發(fā)明概述已經(jīng)證明，人體內(nèi)IgA的測(cè)量在評(píng)價(jià)壓力誘導(dǎo)的疲勞和/或感染易感性是一個(gè)有價(jià)值的工具。意外的發(fā)現(xiàn)是，對(duì)于暴露于身體壓力(例如訓(xùn)練或比賽)的馬，唾液免疫球蛋白，尤其是IgA和/或IgG的水平可以作為疲勞和/或感染易感性或差表現(xiàn)潛能的指針。
另外，如果在暴露于壓力之后發(fā)生的IgA和/或IgG水平的降低沒有快速恢復(fù)，這些免疫球蛋白水平的長(zhǎng)時(shí)間降低將導(dǎo)致易發(fā)生感染和/或疲勞以及由此造成表現(xiàn)下降。如上面提到的，降低的IgA和/或IgG水平不但是疲勞而且是感染易感性的指針。因此，IgA和/或IgG水平的恢復(fù)速度也是感染易感性或者差表現(xiàn)潛能的一個(gè)很好的指針。
根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)馬在暴露于壓力下的表現(xiàn)潛能、損傷表現(xiàn)、疲勞和/或?qū)Ω腥镜臐撛谝赘行缘姆椒ǎ?a)測(cè)定訓(xùn)練期的免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白G(IgG)的水平；和(b)通過將訓(xùn)練期的IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或感染易感性。
根據(jù)第二方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)和/或監(jiān)測(cè)一個(gè)馬體格訓(xùn)練方案的適宜性的方法，包括(a)在訓(xùn)練期前測(cè)定IgA和/或IgG水平；(b)在訓(xùn)練期內(nèi)每隔一段時(shí)間測(cè)定IgA和/或IgG水平一次；和(c)對(duì)訓(xùn)練期內(nèi)的IgA水平和訓(xùn)練期前的IgA和/或IgG水平進(jìn)行比較，并以此評(píng)價(jià)這個(gè)體格訓(xùn)練方案的適宜性。
根據(jù)第三方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)壓力對(duì)如本文所定義的馬的表現(xiàn)和/或疲勞水平的影響的方法，包括(a)測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，和(b)通過將所述IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，評(píng)價(jià)壓力對(duì)馬的表現(xiàn)和/或疲勞水平的影響。
根據(jù)第四方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)馬對(duì)呼吸道感染的潛在易感性的方法，包括(a)在訓(xùn)練早期測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(b)通過將訓(xùn)練早期的唾液IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)馬對(duì)呼吸道感染的潛在易感性。
根據(jù)第五方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)馬對(duì)疲勞/感染的潛在易感性、馬的損傷表現(xiàn)或表現(xiàn)潛能的方法，包括(a)在暴露于壓力之后，測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)給予一個(gè)如本文所定義的恢復(fù)期，(c)在恢復(fù)期后測(cè)定IgA和/或IgG水平，(d)通過將上述步驟(a)中的IgA和/或IgG水平與上述步驟(c)中的IgA和/或IgG水平相比較，預(yù)測(cè)對(duì)疲勞/感染的潛在易感性或者損傷表現(xiàn)。
根據(jù)第六方面，本發(fā)明提供了設(shè)計(jì)訓(xùn)馬方案的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(c)在最佳訓(xùn)練期和/或在比賽或承受嚴(yán)峻身體壓力的期間，測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(d)用來自步驟(a)到(c)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，以設(shè)計(jì)維持穩(wěn)定水平的IgA和/或IgG的訓(xùn)練方案。
根據(jù)第七方面，本發(fā)明提供了設(shè)計(jì)訓(xùn)馬方案的方法，其中包括在選自如下的一個(gè)或多個(gè)時(shí)期，測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平(a)訓(xùn)練開始前，(b)訓(xùn)練早期，(c)最佳訓(xùn)練期和/或比賽或承受嚴(yán)峻身體壓力的期間。
根據(jù)第八方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)潛能的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白G(IgG)的水平，和(b)通過將此IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)差的表現(xiàn)潛能。
根據(jù)第九方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)潛能的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定IgA和/或IgG水平，(c)用來自步驟(a)到(b)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，使用該分布圖通過將IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)差的表現(xiàn)潛能。
根據(jù)第十方面，本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)馬完成訓(xùn)練方案的能力的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定IgA和/或IgG水平，(c)用來自步驟(a)到(b)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，并利用所述分布圖，通過將IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)馬完成訓(xùn)練方案的能力。
本發(fā)明的方法優(yōu)選與訓(xùn)馬師的評(píng)價(jià)結(jié)合使用。
優(yōu)選測(cè)定唾液中的免疫球蛋白水平，因?yàn)檫@有最小的侵入性，但也可以用其他的生物學(xué)液體，如血液、眼淚、生殖道和呼吸道液體等。還應(yīng)明白，IgA和/或IgG亞類的水平在評(píng)價(jià)疲勞和/或感染中也可以是有用的。也可以使用免疫球蛋白亞類。
優(yōu)選地，閾值是個(gè)體內(nèi)部閾值，在馬將接受訓(xùn)練或者將暴露于身體壓力的情況下，通常獲自休息期間或訓(xùn)練之前。這使得可以建立個(gè)體分布圖并用于評(píng)價(jià)潛在的表現(xiàn)能力和設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)挠?xùn)練方案。然而，在一些應(yīng)用中和一些情況下，正常閾值可以從來自正常馬的樣品來確定或從正常馬的IgA和/或IgG水平的公布數(shù)據(jù)來確定。
優(yōu)選地，唾液免疫球蛋白來自整個(gè)未受刺激的唾液樣品，并且最優(yōu)選地，該唾液樣品不是空腹時(shí)的樣品。
優(yōu)選地，馬是賽馬或其他比賽用馬。
優(yōu)選地，壓力是已知能影響免疫系統(tǒng)效能的壓力。
優(yōu)選地，馬暴露于身體和/或生理壓力。優(yōu)選地，該身體和/或生理壓力是長(zhǎng)時(shí)間的體格訓(xùn)練、過度訓(xùn)練或比賽。
優(yōu)選地，用ELISA或類似的免疫測(cè)定方法測(cè)定免疫球蛋白水平。優(yōu)選地，通過試驗(yàn)裝置或系統(tǒng)與馬唾液的接觸，原位分析唾液中的免疫球蛋白含量。
在本發(fā)明上下文中，“壓力”一詞其含義包括，但并不限于身體、生理、心理和營(yíng)養(yǎng)壓力，包括疲勞。
在本發(fā)明上下文中，“表現(xiàn)”一詞其含義包括與其他馬相比而言的表現(xiàn)，或者與個(gè)體表現(xiàn)水平或表現(xiàn)潛能相比而言的表現(xiàn)。類似地，術(shù)語(yǔ)“疲勞”其含義包括與其他馬相比而言的疲勞或者與個(gè)體疲勞水平相比而言的疲勞。
雖然本發(fā)明通過與暴露于身體壓力的馬有關(guān)的實(shí)施例來舉例說明；但本領(lǐng)域技術(shù)人員明白類似的對(duì)疲勞和/或感染易感性的評(píng)價(jià)也可用于其他產(chǎn)生壓力的活動(dòng)。
在本發(fā)明上下文中，術(shù)語(yǔ)“恢復(fù)期”包括暴露于壓力之后的休息期?；謴?fù)期的適宜長(zhǎng)度可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，并且這個(gè)值因壓力類型和馬種類的不同而不同。
盡管本發(fā)明主要在評(píng)價(jià)損傷表現(xiàn)和疲勞方面進(jìn)行描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，同樣的原理可以應(yīng)用于評(píng)價(jià)感染易感性(包括潛在感染的激活)和表現(xiàn)潛能。
附圖簡(jiǎn)述

圖1唾液IgA水平與馬的表現(xiàn)間的關(guān)系圖2(A，B，C)沒有完成8周訓(xùn)練的馬(即，由于表現(xiàn)差和/或受傷而中斷訓(xùn)練(spell)的馬)的IgA水平和平均視覺模擬評(píng)分(VAS)(柱上方)。
圖3(A，B，C)完成8周訓(xùn)練方案的馬的IgA水平和平均VAS(柱上方)。
確定每匹馬的唾液IgA水平(柱形圖)和訓(xùn)馬師給出的表現(xiàn)指數(shù)(顯示于柱形圖的頂部)。IgA水平用ELISA測(cè)定，結(jié)果用每ml ELISA單位(EU)來表示。表現(xiàn)分?jǐn)?shù)如下1-1.5，差；2-2.5，一般；3-3.5，好；4-4.5，非常好；5，優(yōu)異。用圖框中顯示的代號(hào)標(biāo)識(shí)每匹馬。
優(yōu)選方案描述為了便于馬IgA的測(cè)量，已經(jīng)開發(fā)了ELISA測(cè)定方法來檢測(cè)馬唾液中的IgA量。使用此測(cè)定方法能對(duì)馬唾液IgA水平進(jìn)行測(cè)定，因此提供了評(píng)價(jià)訓(xùn)練后果和疲勞以及損傷表現(xiàn)開始的方法。疲勞也可能是由身體壓力造成的感染的后果，因此這個(gè)測(cè)定方法也可以用于評(píng)價(jià)馬對(duì)經(jīng)常遇到的感染的易感性和易患性，所述感染是例如與馬流感、馬鏈球菌(streptococcusequi)、馬皰疹病毒有關(guān)的呼吸道感染。
為了舉例說明本發(fā)明，本測(cè)定方法已用于測(cè)量來自休息后和練習(xí)/訓(xùn)練后的馬的唾液。在一個(gè)大的馬球比賽的中途測(cè)定29匹馬球用馬的唾液IgA水平，此時(shí)這些馬所受的壓力不同。這些健康馬的IgA水平有顯著的不同(1.69到579ELISA單位(EU))。這樣的寬范圍已超出了針對(duì)同質(zhì)群體所預(yù)期的范圍。因此，它很可能反映了壓力反應(yīng)，IgA的低水平指示有出現(xiàn)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或感染易感性的危險(xiǎn)性。
為獲得能用于評(píng)價(jià)表現(xiàn)和設(shè)計(jì)適宜的訓(xùn)練方案的數(shù)據(jù)，用同樣的方法還對(duì)賽馬進(jìn)行了研究。
現(xiàn)通過參考具體但非限定性的實(shí)施例，更具體地描述本發(fā)明。
2.把套管的所有內(nèi)容物放入1.5ml Eppendorf管中，然后5000rpm離心20秒。
3.吸取到一個(gè)Eppendorf管中，收集0.2-0.5ml唾液液體。置于冰上，然后在試驗(yàn)之前-70℃凍存。
用改進(jìn)方法收集唾液為了收集大量的唾液，用棉球在馬的口腔各處擦拭。然后把浸透唾液的棉球放入20ml注射器針筒內(nèi)，加上柱塞把棉球中的唾液擠入無菌收集管中。用這個(gè)方法可收集總量為0.25-1.5ml的馬唾液。離心除去碎屑后，在試驗(yàn)之前-20℃凍存唾液。
實(shí)施例2IgA和IgG的ELISA試驗(yàn)1.用硼酸鈉緩沖液(pH8)中1∶1000稀釋的兔抗-IgG或抗-IgA(BethylLaboratories，Sydney NSW)包被96孔微量滴定板的孔，4℃過夜。
2.用含1％Tween20的PBS洗滌，之后在室溫下用含2％BSA(100μl)的PBS封閉孔1小時(shí)。
3.除去封閉緩沖液，在PBS/Tween中洗滌小孔，用紙巾小心除去過剩的緩沖液。
4.把在PBS/Tween中1∶2000-1∶5000稀釋的馬唾液分成100μl等分試樣并加入每個(gè)孔中，在室溫下溫育1小時(shí)。加入馬血清(HunterAntisera，Newcastle，NSW)作為IgA和IgG的校準(zhǔn)物。
5.用PBS/Tween洗滌小孔之后，把結(jié)合有過氧化物酶的羊抗-IgA或抗-IgG(ICN Biomedicals，Seven Hills，NSW)的100μl等分試樣加入每個(gè)孔中。
6.溫育1小時(shí)后，用PBS/Tween洗滌小孔，之后在每個(gè)孔中加入酶底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液的100μl等分試樣。
7.溫育20分鐘后，加入2M H2SO4溶液終止顏色反應(yīng)，用ELISA平板讀數(shù)器在450nm讀取吸光度。
結(jié)果用ELISA單位(EU)表示，其是從標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分通過內(nèi)插法獲得的測(cè)試樣品的吸光度，其中所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是采用具有1,000EU IgA的標(biāo)準(zhǔn)馬血清的稀釋物構(gòu)建的。
可以以多種不同形式使用此ELISA測(cè)定方法，例如，可視讀出類型、測(cè)量尺等，這全是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。也可以使用其他適宜的免疫測(cè)定方法，這也是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
實(shí)施例3馬的唾液免疫球蛋白水平來自練習(xí)或馬球比賽之后的28匹“休息”的純種馬的唾液IgA和IgG濃度范圍顯示于表1中。IgA濃度范圍(一匹馬除外)顯著地高于IgG(p＜0.011)，這表明存在局部產(chǎn)生和IgA的活躍分泌運(yùn)輸。
表1馬唾液IgA和IgGIgA EU/mL IgG EU/mL46.0 3.8038.1 9.70340.0 15.6016.4 2.50542.0 7.6014.8 11.20118.5 6.8011.1 3.8443.2 6.916.98.2043.4 3.2018.3 3.50170.0 14.0012.7 1.905.11.2320.6 8.8043.0 8.10125.0 13.8022.7 4.6035.5 20.10579.0 57.5019.6 4.407.84.6019.2 8.7023.9 2.9026.3 5.6022.0 2.708.223.50平均值±SEM 84.97±28.69.47±2.1(n＝28)(n＝28)
唾液IgA的較低水平可能反映了在收集唾液樣品的當(dāng)天，從訓(xùn)練或馬球比賽后的影響中恢復(fù)緩慢。來自人類研究的證據(jù)表明，劇烈練習(xí)和過度訓(xùn)練會(huì)引起優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員出現(xiàn)免疫抑制(特征為唾液IgA水平更緩慢恢復(fù)和對(duì)感染的易感性)。由壓力引起的類似效應(yīng)可在訓(xùn)練或比賽后的馬中出現(xiàn)。
實(shí)施例4唾液IgA水平和馬的表現(xiàn)之間的關(guān)系收集另外一組馬的唾液IgA，并用如下從1(最低)到5(最高)的視覺模擬尺度(visua analogue scale)來評(píng)價(jià)它們的表現(xiàn)1＝差，2＝好，3＝非常好，4＝極好，5＝優(yōu)秀，對(duì)表現(xiàn)的評(píng)判是相對(duì)于特定動(dòng)物的預(yù)期表現(xiàn)來進(jìn)行的。
數(shù)據(jù)見下表2。表中數(shù)字代表唾液IgA水平，單位是EU/ml。適當(dāng)時(shí)為了數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，將4和5得分組合并，與組1比較。
表2表現(xiàn)得分與唾液IgA水平的關(guān)系

高分對(duì)低分分析(對(duì)Elisa單位的非配對(duì)t檢驗(yàn))

Elisa單位的分組信息

圖1以圖解形式顯示了總結(jié)的數(shù)據(jù)。
此數(shù)據(jù)表明，可以使用一個(gè)特定的唾液IgA截?cái)嘀?，例如在本?shí)施例10中使用100EU/ml來鑒定需要特別注意的全部或大部分的差表現(xiàn)者。
另外，良好表現(xiàn)者的唾液IgA高水平，例如400EU/ml或更高，表明可能實(shí)施了最佳訓(xùn)練方案，但也可以考慮增加訓(xùn)練。另一方面，表現(xiàn)不是如此好的馬的唾液IgA高水平可能表明需要增加或優(yōu)化訓(xùn)練方案。特別有用的是，使用進(jìn)程數(shù)據(jù)，例如每周或每月評(píng)價(jià)以檢測(cè)趨勢(shì)(下降、穩(wěn)定或上升)，這可以與訓(xùn)練方案結(jié)合。
類似地，良好表現(xiàn)者的唾液IgA低水平，例如小于150EU/ml可能表明這個(gè)動(dòng)物有表現(xiàn)失利的危險(xiǎn)性或差的表現(xiàn)潛能，因此必需細(xì)心對(duì)待這個(gè)動(dòng)物?？赡苄枰薷幕驎和Ｓ?xùn)練并密切監(jiān)測(cè)唾液IgA水平。差表現(xiàn)者的低IgA水平可能表明需要立即注意并考慮給其一個(gè)長(zhǎng)的休息期。可以監(jiān)測(cè)唾液IgA水平以指導(dǎo)恢復(fù)。
中間的唾液IgA水平可能需要更密切地監(jiān)測(cè)以確立如上所討論的趨勢(shì)。不管什么樣的表現(xiàn)水平，都應(yīng)監(jiān)測(cè)IgA水平以確定個(gè)體分布圖。
實(shí)施例5IgA水平與高強(qiáng)度訓(xùn)練后賽馬的表現(xiàn)評(píng)價(jià)來自悉尼兩個(gè)頂級(jí)馬廄的43匹純種馬的表現(xiàn)和IgA水平，為期8周，在訓(xùn)練期這些馬每天在賽馬道上進(jìn)行高強(qiáng)度訓(xùn)練。在訓(xùn)練前(第1周)和訓(xùn)練期(第2-8周)，每周收集每匹馬的唾液樣品。
在與進(jìn)行IgA試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室人員互不通信息的情況下，由兩名訓(xùn)馬師評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)并且進(jìn)行記錄，反之亦然。在8周結(jié)束時(shí)，用如上所描述的ELISA試驗(yàn)對(duì)所有唾液樣品進(jìn)行測(cè)量以得到馬的IgA水平。然后將唾液IgA水平及來自兩名訓(xùn)馬師的從1到5的平均表現(xiàn)指數(shù)與每匹馬相匹配。
如圖2A、2B和2C所示，評(píng)價(jià)的43匹馬中22匹因?yàn)橹袛?疲勞、不活躍、身體受傷)未能完成訓(xùn)練方案，其中13匹馬(例如馬GW001、GW005、GW011、GW012、GW024、GW025、GW032、GW024)未能按照訓(xùn)練方案進(jìn)行超過4周。大多數(shù)情況下，與訓(xùn)練前或訓(xùn)練中的IgA水平相比，它們的IgA水平在撤離訓(xùn)練方案時(shí)達(dá)到最低值。盡管隨著訓(xùn)練，IgA水平出現(xiàn)升降，但與之前的閾水平相比，不能完成8周訓(xùn)練方案的馬(例如GW002、GW006、GW018、GW014、GW037、GW014、GW028、GW030)的唾液IgA水平恢復(fù)很差。明顯不同的是，完成訓(xùn)練方案的21匹馬不僅有較高的IgA水平(例如馬GW010、GW003、RQ015、GW016、GW019、GW044、GW045、GW042、GW048、GW046)、在高強(qiáng)度訓(xùn)練后唾液IgA水平有更好的恢復(fù)，而且如訓(xùn)馬師所評(píng)價(jià)的有上佳表現(xiàn)(圖3A、3B和3C)。此數(shù)據(jù)綜合起來為基于測(cè)定唾液IgA水平評(píng)價(jià)壓力影響的方法提供了第一手證據(jù)，這些壓力影響是指例如高強(qiáng)度訓(xùn)練對(duì)馬的表現(xiàn)或疲勞水平或表現(xiàn)潛能的影響。
另外，監(jiān)測(cè)訓(xùn)練期間唾液IgA或IgG水平的下降，之后監(jiān)測(cè)經(jīng)過一個(gè)特定時(shí)段后唾液中這些免疫球蛋白的恢復(fù)，這對(duì)馬是否能完成訓(xùn)練方案以及在訓(xùn)練中馬需要怎樣管理才可取得最佳表現(xiàn)是一個(gè)有用的預(yù)測(cè)方法。
同樣，IgA的起始水平也是穩(wěn)定表現(xiàn)和/或特定訓(xùn)練方案的適宜性的很好指標(biāo)。
初步分析為如何使用研究中得到的數(shù)據(jù)提供了例子。例如，這些IgA數(shù)據(jù)說明·可以預(yù)測(cè)馬能否成功地通過訓(xùn)練方案(注意大約第7-8周的高VA分?jǐn)?shù))-即，21/22匹馬有≥3.5的VSA。VAS＜3.5的那匹馬在坐標(biāo)零時(shí)有低(＜50EU/ml)IgA水平。訓(xùn)練方案的前半部分的VAS并不能預(yù)示結(jié)果。
·初始(訓(xùn)練前)IgA水平與結(jié)果有關(guān)
IgA＜50EU ＜25EU未完成訓(xùn)練的(i)低水平(21)(TNC) 12 10完成訓(xùn)練的(22)(TC) 9 7＞100EU＞100EU(+第2周＞50)未完成訓(xùn)練的(ii)高水平 (21)(TNC) 3 0完成訓(xùn)練的(22)(TC) 9 7**在第二周具有＜50EU的兩匹馬后來出現(xiàn)反彈，然后維持IgA的水平。
·IgA的分布圖也同樣有用，例如，不能成功完成訓(xùn)練但維持了大多數(shù)時(shí)間的訓(xùn)練的那些馬沒有一個(gè)維持了IgA的水平(特別是高于50EU的水平)(7個(gè)對(duì)象)。然而，在那些順利完成訓(xùn)練的馬中，22匹中18匹維持了高水平的唾液IgA。在那些最終不能完成訓(xùn)練的馬中，出現(xiàn)連續(xù)每周＜50EU IgA的恢復(fù)的頻率增加3倍。
實(shí)施例6如何使用IgA監(jiān)測(cè)訓(xùn)練的實(shí)施例IgA的絕對(duì)值對(duì)本實(shí)施例的目的并不是至關(guān)重要的，截?cái)嘀抵皇且粋€(gè)指導(dǎo)。(I)訓(xùn)練開始及訓(xùn)練一周后(IgA水平以EU形式給出)·＞100EU，并且一周后靜息(resting)水平＞50EU-有非常高的機(jī)率完成沒有修改的標(biāo)準(zhǔn)訓(xùn)練(即經(jīng)過8周)。(II)·連續(xù)每周＜50EU的水平表明有出現(xiàn)損傷表現(xiàn)的高危險(xiǎn)性。
·不能維持水平(特別是＞50EU的水平)，特別是在訓(xùn)練的后半段，預(yù)示著損傷表現(xiàn)。(III)·個(gè)體低水平(＜50EU)，例如，對(duì)于＜50EU的值

*全部測(cè)量的百分?jǐn)?shù)·在收集樣品時(shí)，VAS＜3.0的機(jī)會(huì)加倍；但如果馬屬于“不能完成訓(xùn)練”組，則為三倍。(IV)個(gè)體高水平(＞100EU)·總體上，有三倍的機(jī)會(huì)出現(xiàn)VAS＞3.0(在“完成組”中，是四倍)。因此，個(gè)體測(cè)量在評(píng)價(jià)危險(xiǎn)性時(shí)是有用的。
訓(xùn)馬師在特定點(diǎn)的評(píng)價(jià)并不能很好地對(duì)訓(xùn)練方案的完成作出預(yù)測(cè)(特別是在方案的前半部分)。
從此研究中獲得的數(shù)據(jù)包括了其他重要的發(fā)現(xiàn)，這些將是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然明了的，而且傳統(tǒng)統(tǒng)計(jì)方法(計(jì)算機(jī)輔助或者沒有計(jì)算機(jī)輔助)能用于它的分析。
因此，在高強(qiáng)度訓(xùn)練期間有規(guī)律地分析訓(xùn)練后恢復(fù)期的唾液IgA水平，對(duì)監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)賽馬的訓(xùn)練強(qiáng)度是有價(jià)值的。無規(guī)律的、下降的和不穩(wěn)定的水平(即，降低至比如50EU以下)最好地預(yù)示了這些馬可能不能完成訓(xùn)練。
基于靜息IgA水平可以評(píng)價(jià)進(jìn)入高強(qiáng)度訓(xùn)練期的馬出現(xiàn)損傷表現(xiàn)的傾向性；評(píng)價(jià)它們的表現(xiàn)潛能的一個(gè)有價(jià)值的指標(biāo)是高靜息IgA水平(例如＞100EU)，尤其是如果在一周高強(qiáng)度訓(xùn)練后有好的恢復(fù)水平(例如≥50EU)時(shí)。這表示從訓(xùn)練方案獲得優(yōu)質(zhì)結(jié)果的機(jī)率很大，這對(duì)所有馬是15-20％，但對(duì)整個(gè)完成訓(xùn)練組是約50％。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，這些數(shù)字是與研究的具體實(shí)例相關(guān)聯(lián)的，馬群會(huì)因訓(xùn)練方式的不同而不同。同樣應(yīng)認(rèn)識(shí)到，基于基線和分布圖模式而被發(fā)現(xiàn)有出現(xiàn)損傷表現(xiàn)的危險(xiǎn)性的馬可以得益于改變強(qiáng)度的訓(xùn)練。
因此，可以將測(cè)量唾液IgA和建立趨勢(shì)圖及個(gè)體分布圖單獨(dú)或結(jié)合起來使用以確定和優(yōu)化涉及訓(xùn)練計(jì)劃、休息期、心理參數(shù)、表現(xiàn)等方面的管理策略。
盡管參照一些實(shí)施例和優(yōu)選實(shí)施方案已經(jīng)描述了本發(fā)明；但可以理解，保持了本發(fā)明的原則和精神的那些變體和修飾也在考慮之列，而且它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
權(quán)利要求
1.預(yù)測(cè)暴露于壓力的馬的表現(xiàn)潛能、損傷表現(xiàn)、疲勞和/或?qū)Ω腥镜臐撛谝赘行缘姆椒?，包?a)測(cè)定訓(xùn)練期的免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白G(IgG)的水平；和(b)通過將訓(xùn)練期的IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)損傷表現(xiàn)、疲勞和/或感染易感性。
2.評(píng)價(jià)和/或監(jiān)測(cè)一個(gè)馬的體格訓(xùn)練方案的適宜性的方法，包括(a)在訓(xùn)練期前測(cè)定IgA和/或IgG水平；(b)在訓(xùn)練期內(nèi)每隔一段時(shí)間測(cè)定IgA和/或IgG水平一次；和(c)將訓(xùn)練期內(nèi)的IgA水平和訓(xùn)練期前的IgA和/或IgG水平作比較，并以此評(píng)價(jià)這個(gè)體格訓(xùn)練方案的適宜性。
3.評(píng)價(jià)壓力對(duì)本文定義的馬的表現(xiàn)和/或疲勞水平的影響的方法，包括(a)測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，和(b)通過將所述IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，評(píng)價(jià)壓力對(duì)馬的表現(xiàn)和/或疲勞水平的影響。
4.評(píng)價(jià)馬對(duì)呼吸道感染的潛在易感性的方法，包括(a)在訓(xùn)練早期測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，和(b)通過將訓(xùn)練早期的IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)馬對(duì)呼吸道感染的潛在易感性。
5.評(píng)價(jià)馬對(duì)疲勞/感染的潛在易感性的方法，包括(a)在暴露于壓力之后，測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)給予一個(gè)如本文所定義的恢復(fù)期，(c)在恢復(fù)期后測(cè)定IgA和/或IgG水平，(d)通過將上述步驟(a)中的IgA和/或IgG水平與上述步驟(c)中的IgA和/或IgG水平相比較，預(yù)測(cè)對(duì)疲勞/感染的潛在易感性。
6.設(shè)計(jì)訓(xùn)馬方案的方法，包括在選自下列的一個(gè)或多個(gè)時(shí)期測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平(a)訓(xùn)練開始前，(b)訓(xùn)練早期，(c)最佳訓(xùn)練期和/或進(jìn)行比賽或接受嚴(yán)峻身體壓力的期間。
7.設(shè)計(jì)訓(xùn)馬方案的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(c)在最佳訓(xùn)練期和/或在進(jìn)行比賽或接受嚴(yán)峻身體壓力的期間，測(cè)定唾液IgA和/或IgG水平，(d)用獲自步驟(a)到(c)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，以設(shè)計(jì)維持穩(wěn)定水平的IgA和/或IgG的訓(xùn)練方案。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中設(shè)計(jì)步驟(d)的訓(xùn)練方案，以使IgA和/或IgG水平不降低到預(yù)設(shè)水平以下。
9.評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)潛能的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白G(IgG)的水平，和(b)通過將此IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)差表現(xiàn)潛能。
10.評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)潛能的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定IgA和/或IgG水平，(c)用獲自步驟(a)到(b)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，并利用所述分布圖，通過將IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)差表現(xiàn)潛能。
11.預(yù)測(cè)馬完成訓(xùn)練方案的能力的方法，包括(a)在訓(xùn)練開始前測(cè)定IgA和/或IgG水平，(b)在訓(xùn)練早期測(cè)定IgA和/或IgG水平，(c)用獲自步驟(a)到(b)的水平建立馬的IgA和/或IgG分布圖，并利用所述分布圖，通過將IgA和/或IgG水平與預(yù)設(shè)閾值相比較，預(yù)測(cè)馬完成訓(xùn)練方案的能力。
12.根據(jù)權(quán)利要求1到11之任一項(xiàng)的方法，其中測(cè)定唾液中的免疫球蛋白水平。
13.根據(jù)權(quán)利要求1到12之任一項(xiàng)的方法，其中免疫球蛋白是IgA或者其亞類。
14.根據(jù)權(quán)利要求1到13之任一項(xiàng)的方法，其中閾值是在來自正常馬的樣品中測(cè)定的正常閾值。
15.根據(jù)權(quán)利要求1到13之任一項(xiàng)的方法，其中閾值是個(gè)體內(nèi)部閾值。
16.根據(jù)權(quán)利要求1到15之任一項(xiàng)的方法，其中唾液樣品是未受刺激的整個(gè)唾液。
17.根據(jù)權(quán)利要求1到16之任一項(xiàng)的方法，其中馬是賽馬或其他比賽用的馬。
18.根據(jù)權(quán)利要求1到17之任一項(xiàng)的方法，其中壓力是已知能影響免疫系統(tǒng)的效能的壓力。
19.根據(jù)權(quán)利要求1到18之任一項(xiàng)的方法，其中使用免疫測(cè)定方法測(cè)定免疫球蛋白水平，所述免疫測(cè)定方法選自ELISA、RIA、免疫擴(kuò)散等。
20.根據(jù)權(quán)利要求1到19之任一項(xiàng)的方法，其中通過使試驗(yàn)裝置或系統(tǒng)與馬唾液接觸，原位分析唾液中免疫球蛋白的含量。
21.應(yīng)用于根據(jù)權(quán)利要求1到20之任一項(xiàng)的方法中的試驗(yàn)裝置。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過測(cè)量免疫球蛋白水平(尤其是IgA和/或IgG水平)，評(píng)價(jià)馬的表現(xiàn)和表現(xiàn)潛能的方法。本發(fā)明也涉及預(yù)測(cè)暴露于壓力(尤其是身體壓力)下馬的損傷表現(xiàn)、疲勞和/或?qū)Ω腥镜囊赘行缘姆椒ā?br> 文檔編號(hào)G01N33/53GK1483145SQ01816502
公開日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2001年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月29日
發(fā)明者R·L·克蘭西, G·龐, R L 克蘭西 申請(qǐng)人:馬匹監(jiān)測(cè)公司