專利名稱：不可逆性神經(jīng)損傷易感個(gè)體的鑒定方法,包括定量檢測(cè)胃蛋白酶原i(pgi)和維生素b12濃 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于鑒定不可逆性神經(jīng)損傷包括癡呆的易感個(gè)體的聯(lián)合診斷方法。
本發(fā)明的方法基于對(duì)血液或血清樣品進(jìn)行兩種檢驗(yàn)的聯(lián)合，尤其為了鑒定傾向于發(fā)生B12缺乏并因這種缺乏而很可能遭受痛苦，如不可逆性神經(jīng)損傷，包括癡呆和惡性貧血的病人。
背景技術(shù)：
許多不同的胃部疾病或癥狀，如慢性萎縮性胃炎，惡性貧血，室性潰瘍，胃息肉和Menetrier病(巨大肥厚性胃炎)可能導(dǎo)致胃癌。粘膜的明顯可識(shí)別的改變是發(fā)育不良和腺癌。已被證實(shí)幾乎所有疾病的危險(xiǎn)都通過(guò)慢性萎縮性胃炎介導(dǎo)。
慢性胃炎是指胃粘膜的持續(xù)炎癥狀態(tài)。該病可粗略分為淺表型和萎縮型。在淺表型胃炎中，炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)集中在表面的上皮以下。倘若炎癥發(fā)展和擴(kuò)散到特定的胃分泌腺之間，這一類即歸為慢性萎縮性胃炎。在這種病例中，胃粘膜的正常腺體結(jié)構(gòu)至少部分被組織轉(zhuǎn)化的改變代替。
估計(jì)胃體部萎縮性胃炎病人患胃癌的相對(duì)危險(xiǎn)，按芬蘭的癌癥統(tǒng)計(jì)計(jì)算，為具有健康粘膜的人的約4-5倍。另外，由于內(nèi)在因子的缺乏和B12維生素的吸收障礙有患惡性貧血的危險(xiǎn)。在胃竇部嚴(yán)重萎縮中，這種危險(xiǎn)甚至達(dá)到18倍。如果萎縮性改變?cè)谖阁w部和胃竇部(全胃炎(pangastritis)都出現(xiàn)，這種危險(xiǎn)甚至可增加到90倍。
WO96/15456公開(kāi)了一種篩查胃癌危險(xiǎn)的方法，依據(jù)該方法，胃體或胃竇或這兩個(gè)部位均存在的萎縮通過(guò)測(cè)定血清樣品中的胃蛋白酶原I(PGI)和胃泌素-17(G-17)分析物水平來(lái)檢測(cè)，并且把所檢測(cè)的水平與每種分析物各自的方法特異性閾值比較。還優(yōu)選將所檢測(cè)的水平與兩種分析物各自的方法特異性參考值比較。
血清PGI值低于PGI的特異性閾值表明萎縮性胃炎位于胃體部。如果血清G-17濃度低于它的閾值，則萎縮位于胃竇部。在全胃炎中，血清PGI低于閾值，并且血清G-17值在其參考值的下限。
充足的B12維生素的供給對(duì)于葉酸的新陳代謝和正常的血液產(chǎn)生，還有神經(jīng)細(xì)胞的功能都是必需的。維生素B12與胃體粘膜產(chǎn)生的內(nèi)在因子這種蛋白形成一種復(fù)合體，該復(fù)合體在回腸下段被重吸收。這是維生素B12優(yōu)選的重吸收形式。
由于萎縮性胃炎或胃癌，特別是胃體部的胃炎或胃癌造成的內(nèi)在因子的缺乏，將最終導(dǎo)致體內(nèi)B12維生素的缺乏。長(zhǎng)期的缺乏可以導(dǎo)致惡性貧血的發(fā)生，并且甚至在早期，即一年內(nèi)，發(fā)展成不可逆性神經(jīng)損傷和癡呆。因此，認(rèn)為B12維生素的缺乏是與神經(jīng)紊亂，如癡呆，特別在老年群體發(fā)生的癡呆的發(fā)生相關(guān)的一種重要危險(xiǎn)因素。據(jù)估計(jì)，B12維生素的癥狀不明顯的不足折磨著成千上萬(wàn)的人。在這些病例中，如果已知不足，則采用B12維生素的注射治療是簡(jiǎn)單且有效的。特別有價(jià)值的是該治療方法能夠鑒定下述個(gè)體，他們目前還沒(méi)有發(fā)展成B12維生素缺乏癥，但有相當(dāng)大的危險(xiǎn)會(huì)在將來(lái)發(fā)生該疾病，除非采取防止這種缺乏繼續(xù)發(fā)展的措施。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及將測(cè)定血樣中萎縮性胃炎的標(biāo)志的試驗(yàn)與測(cè)定維生素B12的試驗(yàn)聯(lián)合用于輔助診斷個(gè)體的不可逆性神經(jīng)損傷或確定其易感性的方法。
本發(fā)明的方法是鑒定對(duì)不可逆性神經(jīng)損傷和惡性貧血易感的個(gè)體的方法，該方法包括以下步驟-定量檢測(cè)上述個(gè)體血清樣品中的胃蛋白酶原I(PGI)分析物濃度，-選擇上述分析物的方法特異性閾值，-把如此檢測(cè)的分析物濃度與該分析物的方法特異性閾值比較，并且-檢測(cè)該個(gè)體血清樣品中的B12維生素的濃度，或檢測(cè)與B12維生素濃度相關(guān)的分析物濃度，并把它與所測(cè)的該分析物的方法特異性參考值比較。
對(duì)血清PGI和維生素B12濃度的測(cè)定，或?qū)εcB12濃度相關(guān)的分析物的檢測(cè)可以以任何順序進(jìn)行，以便同時(shí)了解血清PGI和維生素B12水平，從而輔助診斷或評(píng)估上述個(gè)體對(duì)神經(jīng)性損傷的易感性。但是，依據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，檢測(cè)血清PGI濃度并把它與它的方法特異性閾值比較，而且為了進(jìn)一步診斷，選擇出血清PGI濃度值低于它的方法特異性閾值的個(gè)體。在本實(shí)施方案中，只有顯示出表明胃體萎縮的低血清PGI值的個(gè)體才進(jìn)行維生素B12的篩查。
這樣，依據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明尤其旨在篩查這樣的個(gè)體，他們還沒(méi)有顯示出B12維生素缺乏癥，即基本顯示正常的B12維生素水平，但由于其被診斷為胃體部萎縮，隨時(shí)間的推移傾向于發(fā)生這種缺乏癥。這種鑒定使得有可能在早期采取預(yù)防措施，以防止發(fā)生與B12維生素缺乏有關(guān)的痛苦，特別是比癡呆更早發(fā)生的不可逆性神經(jīng)損傷。
發(fā)明詳述1.胃蛋白酶原I(PGI)的檢測(cè)血清樣品中PGI的檢測(cè)可如WO96/15456所述進(jìn)行，該出版物包括在此作為參考。
上述方法優(yōu)選包括，在免疫學(xué)方法中使用抗胃蛋白酶原I的多或單克隆抗體檢測(cè)胃蛋白酶原I的步驟。優(yōu)選該反應(yīng)在合適的支持物，如塑料、玻璃或纖維素支持物，例如微滴板上進(jìn)行。免疫學(xué)方法可以用已知方式進(jìn)行，如使用吸收度，發(fā)光技術(shù)或熒光技術(shù)檢測(cè)上述樣品中的胃蛋白酶原I濃度。
在這種情況下，針對(duì)血清PGI的方法特異性閾值根據(jù)用于檢測(cè)分析物濃度的實(shí)驗(yàn)的特異性和敏感性來(lái)選擇，并且是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的，如見(jiàn)William J Marshall，臨床化學(xué)，第三版，1995，Mosby。
當(dāng)根據(jù)所用方法的特異性和敏感性將閾值定為20-30μg/l，相當(dāng)于約450-690pmol/l時(shí)，如果血清胃蛋白酶原I濃度低于該閾值，則在胃體部存在萎縮。PGI的正常值或參考值為25-120μg/l。
2.維生素B12的檢測(cè)血清樣品中維生素B12(鈷胺素)的濃度可以按照任何一種本身已知用于此目的的方法檢測(cè)。這些已知的方法包括利用諸如需要鈷胺素促進(jìn)生長(zhǎng)的纖細(xì)眼蟲(Euglena gracilis)或德氏乳桿菌(Lactobacillus leichnannii)進(jìn)行的血清B12的微生物試驗(yàn)。還可使用B12維生素的放射性同位素稀釋試驗(yàn)，這些試驗(yàn)技術(shù)在文獻(xiàn)中有詳細(xì)記錄，如Lau等，“應(yīng)用放射性同位素稀釋法和包被炭法檢測(cè)血清B12水平”，血液(Blood)，26(1965)，202。放射性同位素稀釋法更快速并且給出的結(jié)果可與其它方法，如眼蟲屬試驗(yàn)的結(jié)果相比，前提是結(jié)合蛋白特異于生物學(xué)活性鈷胺素。標(biāo)準(zhǔn)純或純化的內(nèi)在因子是最合適的結(jié)合蛋白，因?yàn)樗c真正的鈷胺素而不是鈷胺素類似物發(fā)生特異性結(jié)合。
B12的放射性同位素稀釋試驗(yàn)通常包括從B12的天然結(jié)合蛋白上釋放內(nèi)源性B12的步驟，方法如在選定的pH值下煮沸然后加入精確量的放射性同位素57Co-B12，以及有限量的結(jié)合蛋白。由于所加入的放射性B12的量足以結(jié)合所述有限量蛋白，所以所有的結(jié)合蛋白都可被B12的某種形式結(jié)合。由于天然B12和放射性B12競(jìng)爭(zhēng)與結(jié)合蛋白的結(jié)合，被蛋白結(jié)合的B12的放射活性計(jì)數(shù)被抑制的程度指示樣品中B12的量。該方法已被Lau，出處同上修改，即利用蛋白包被的炭將未結(jié)合的B12與蛋白結(jié)合的B12分離，并且計(jì)數(shù)含有結(jié)合型放射性B12和結(jié)合型非放射性B12的混合上清液的放射性。然后由該計(jì)數(shù)算出血清B12濃度，通常通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)圖表得到。已有商業(yè)化放射測(cè)定試劑盒可用于進(jìn)行該方法。
也有其它的方法可用于檢測(cè)血清樣品的B12水平。因?yàn)殁挵匪剌o酶是甲基丙二酸鹽向琥珀酸鹽的異構(gòu)化的必需物質(zhì)，所以在B12維生素缺乏癥中發(fā)現(xiàn)甲基丙二酸鹽排泄量的增加。這就提供了一種用于B12維生素缺乏癥的敏感試驗(yàn)。另外，同型半胱氨酸的血漿水平也是增加的。美國(guó)專利號(hào)4,940,658描述了一種用于檢測(cè)同型半胱氨酸水平升高的方法，該方法使已知數(shù)量的標(biāo)記的同型半胱氨酸與樣品混合，接著利用如質(zhì)量分光術(shù)檢測(cè)標(biāo)記的與未標(biāo)記的同型半胱氨酸的比率，然后計(jì)算樣品中未標(biāo)記的同型半胱氨酸的量。
B12維生素的缺乏也曾使用，如化學(xué)發(fā)光受體試驗(yàn)(Wentworth，S.等，臨床化學(xué)，卷40 537-540)，放射免疫分析(Endres，D.B.等，臨床化學(xué)，卷24，460-465)，以及非同位素結(jié)合試驗(yàn)，CEDIA法，克隆化酶供體的免疫分析(van der Weide，J等，臨床化學(xué)，卷38，766-768)來(lái)檢測(cè)。
測(cè)定B12，或甲基丙二酸鹽或同型半胱氨酸等物質(zhì)(樣品中它們的濃度增加可指示B12的缺乏)的濃度時(shí)所能使用的任何已知方法和試劑盒都可在本發(fā)明的方法中使用。本發(fā)明還涉及對(duì)B12濃度以及與B12濃度相關(guān)的分析物濃度都進(jìn)行測(cè)定的可能性。
依據(jù)本發(fā)明，將所測(cè)量的B12維生素濃度與選定的B12的方法特異性參考值或參考范圍進(jìn)行比較。這種參考值在200-900ng/l之間，相當(dāng)于約170-700pmol/l之間變動(dòng)。關(guān)于同型半胱氨酸，推薦的參考值小于15-16μmol/l，關(guān)于甲基丙二酸鹽，推薦的參考值小于0.4μmol/l。
本發(fā)明還涉及一種在本發(fā)明方法中使用的試劑盒，該試劑盒包含-檢測(cè)血清樣品中PGI濃度的工具(means)，-檢測(cè)血清樣品中維生素B12濃度或與該維生素B12濃度相關(guān)的分析物的濃度的工具。
權(quán)利要求
1.用于鑒定對(duì)不可逆性神經(jīng)損傷和惡性貧血易感的個(gè)體的方法，該方法包括以下步驟-定量檢測(cè)所述個(gè)體的血清樣品中胃蛋白酶原I(PGI)分析物的濃度，-選擇一個(gè)針對(duì)該分析物的方法特異性閾值，-將所測(cè)分析物濃度與該分析物的方法特異性閾值比較，并且-檢測(cè)該個(gè)體血清樣品中的B12維生素的濃度，或檢測(cè)與B12維生素濃度相關(guān)的分析物濃度，并把它與所測(cè)分析物的方法特異性參考值比較。
2.權(quán)利要求1的方法，包含測(cè)定血清PGI濃度，并選擇表現(xiàn)出血清PGI濃度低于PGI閾值的個(gè)體，進(jìn)一步測(cè)定其維生素B12或與維生素B12相關(guān)的分析物的濃度。
3.權(quán)利要求1的方法，其中檢測(cè)樣品中B12維生素的濃度。
4.權(quán)利要求1的方法，其中檢測(cè)樣品中甲基丙二酸鹽或同型半胱氨酸的濃度。
5.用于實(shí)施權(quán)利要求1的方法的試劑盒，包含-在血清樣品中檢測(cè)PGI濃度的工具，-在血清樣品中檢測(cè)維生素B12濃度或與該維生素B12濃度相關(guān)的分析物濃度的工具。
全文摘要
本發(fā)明涉及鑒定不可逆性神經(jīng)損傷和惡性貧血危險(xiǎn)的易感個(gè)體的方法和試劑盒,該方法的步驟包括定量檢測(cè)上述個(gè)體血清樣品中的胃蛋白酶原I(PGI)分析物濃度,選擇針對(duì)該分析物的方法特異性閾值,將如此檢測(cè)的分析物濃度與該分析物的方法特異性閾值比較,并測(cè)定上述個(gè)體血清樣品中的維生素B12濃度或一種與其相關(guān)的分析物的濃度。
文檔編號(hào)G01N33/68GK1353816SQ00808519
公開(kāi)日2002年6月12日 申請(qǐng)日期2000年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月30日
發(fā)明者彭蒂·西波南, 馬蒂·哈科南, 奧斯莫·斯沃瓦尼米, 埃里克·福斯布洛姆 申請(qǐng)人:拜奧希特公司