本發(fā)明涉及微粒分選裝置(微顆粒分選裝置,微粒子分選裝置,microparticlesortingapparatus)以及微粒分選裝置中的延遲時(shí)間確定方法。更具體地,本發(fā)明涉及自動(dòng)確定延遲時(shí)間的微粒分選裝置等。
背景技術(shù):在相關(guān)領(lǐng)域中,存在光學(xué)檢測、電檢測或者磁檢測諸如細(xì)胞的微粒的特性,然后分離和收集僅具有預(yù)定特性的微粒的微粒分選裝置(例如,流式細(xì)胞儀)。首先,在流式細(xì)胞儀中的細(xì)胞分離中,從在流式細(xì)胞中形成的孔來產(chǎn)生液滴流股(包含細(xì)胞和鞘液的樣品液體的層流),通過對孔施加振動(dòng),液體流股被制成液滴,并將電荷施加至液滴。此外,從孔排出的包含細(xì)胞的液滴的移動(dòng)方向受電控制,并將具有期望特性的靶細(xì)胞以及其他非靶細(xì)胞收集在不同的收集容器中。例如,作為微芯片型流式細(xì)胞儀,日本未審查專利申請公開第2010-190680號公開了“微粒分選裝置,包括:微芯片,安裝在包含微粒流的液體所經(jīng)過的流路上,以及排出經(jīng)過流路流動(dòng)至芯片外部的空間的液體的孔上;振動(dòng)元件,用于將孔中的液體制成液滴并將其排出;充電裝置,用于對排出的液滴施加電荷;光學(xué)檢測裝置,用于檢測流過流路的微粒的光學(xué)特性;電極對(electrodecouple),被安裝為彼此相對以夾住移動(dòng)的液滴;以及兩個(gè)以上的容器,其收集在相對電極之間流動(dòng)的液滴”。此外,日本未審查專利申請公開(PCT申請的翻譯)第2007-532874號公開了一種方法,其中通過在液滴從流體分離的位置(以下,稱為分離點(diǎn)(break-offpoint))中設(shè)置輔助照明和檢測單元,對能夠確認(rèn)液滴是否已經(jīng)被分選入預(yù)期的流路中的流式細(xì)胞儀的操作進(jìn)行控制。以這種方式,通過確定分離點(diǎn),可以確定從作為細(xì)胞等的微粒被檢測時(shí)直到包含細(xì)胞等的液滴達(dá)到分離點(diǎn)為止的延遲時(shí)間,并且可以基于延遲時(shí)間對包含被檢測的微粒的液滴施加電荷。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:然而,分離點(diǎn)(斷開點(diǎn),中斷點(diǎn),break-offpoint)根據(jù)液滴等的排出條件而波動(dòng),因此延遲時(shí)間也波動(dòng)。此外,僅通過確定分離點(diǎn),難以充分確定準(zhǔn)確的定時(shí),以對包含微粒的液滴施加電荷。因此,將適當(dāng)?shù)碾姾墒┘又涟⒘5囊旱?,但最終,已主要采用該方法,其中,通過觀察在制備時(shí)施加電荷的液滴,使用者視覺辨別液滴是否分配至期望的收集容器。這樣的方法需要使用者具有熟練的技術(shù),并存在可靠性和穩(wěn)定性的問題。因此,期望提供一種能夠自動(dòng)地、簡單地以及準(zhǔn)確地對液滴施加電荷的微粒分選裝置。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式,提供了一種微粒分選裝置,包括:檢測單元,檢測流經(jīng)流路的微粒;成像裝置,對包括從設(shè)置在流路的邊緣部分(端部)上的孔排出的微粒的液滴進(jìn)行成像;充電單元,對液滴施加電荷;以及控制單元,確定延遲時(shí)間,作為從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間,到通過成像裝置所成像的圖像信息中的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間,在由檢測單元檢測微粒之后,一旦延遲時(shí)間流逝,可以使得充電單元對微粒施加電荷。根據(jù)該微粒分選裝置,可以基于標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域范圍內(nèi)亮點(diǎn)的數(shù)量來自動(dòng)地確定延遲時(shí)間,而不要求使用者實(shí)施設(shè)置。在該微粒分選裝置中,成像裝置可以在多個(gè)不同時(shí)間,對多個(gè)液滴的圖像進(jìn)行成像,并且控制單元使用從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間,到通過比較由成像裝置所成像的多個(gè)液滴的圖像信息而計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間作為臨時(shí)延時(shí)時(shí)間來初步確定延遲時(shí)間。在該微粒分選裝置中,從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間起,一旦臨時(shí)延遲時(shí)間流逝,在短于各個(gè)液滴的排出間隔時(shí)間內(nèi),成像裝置可以將多個(gè)液滴的圖像進(jìn)行成像,并且通過參考涉及相對于所述圖像信息中所述液滴的排出方向的鄰近所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域中的至少一個(gè)中的亮點(diǎn)數(shù)量的鄰近信息,所述控制單元可以更新所述臨時(shí)延遲時(shí)間并確定所述延遲時(shí)間。在該微粒分選裝置中,在所述兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域可以在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,并且所述控制單元可以計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間,并且可以將該時(shí)間確定為所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間。在該微粒分選裝置中,在兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域可以在所述液滴的排出方向按順序進(jìn)行設(shè)置,并且所述控制單元可以計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量從在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間起減少的過程中,在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的第一時(shí)間,可以計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的第二時(shí)間,并且可以將所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的該時(shí)間確定為(所述第一時(shí)間+所述第二時(shí)間)/2。在該微粒分選裝置中,所述控制單元可以調(diào)整所述液滴的排出頻率,并將所述液滴的最佳排出頻率確定為在所述液滴的排出方向上所述液滴開始形成的分離點(diǎn)最靠近所述孔的排出頻率。此外,該微粒分選裝置可進(jìn)一步包括被設(shè)置成彼此相對以夾置(插入,放入)由所述成像裝置所成像的所述液滴的一對偏轉(zhuǎn)板,所述一對偏轉(zhuǎn)板利用在所述偏轉(zhuǎn)板與所述電荷之間起作用的電力來改變所述液滴的前進(jìn)方向。此外,所述微粒分選裝置是微芯片型流式細(xì)胞儀,其中,在所述微芯片中設(shè)置所述孔和所述流路。此外,在這里的術(shù)語“延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間,到由包含微粒的流體形成液滴時(shí)的延遲時(shí)間。換言之,“延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間,到包含微粒的液滴具有施加至其上的電荷時(shí)的必需時(shí)間。在本發(fā)明中,這是指從微粒被檢測單元檢測的時(shí)間,到通過成像裝置所成像的圖像信息中的在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的持續(xù)時(shí)間。此外,術(shù)語“臨時(shí)延遲時(shí)間”是指直到確定延遲時(shí)間為止的臨時(shí)延遲時(shí)間。更具體地,“臨時(shí)延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元檢測時(shí)的時(shí)間,到通過比較成像裝置所成像的液滴的多個(gè)圖像信息項(xiàng)而計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間。此外,成像裝置的實(shí)例包括液滴照相機(jī)等。此外,根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式,提供了一種延遲時(shí)間確定方法,包括使微粒分選裝置檢測流經(jīng)流路的微粒;使微粒分選裝置對從設(shè)置在所述流路的邊緣部分(端部)上的孔排出的包含所述微粒的液滴進(jìn)行成像;以及使微粒分選裝置確定從所述微粒被檢測到的時(shí)間起,直到在被成像的液滴的圖像信息中,在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域中預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間作為延遲時(shí)間。此外,在本方法中,該方法還可以包括在多個(gè)時(shí)間對多個(gè)液滴中的每一個(gè)的圖像進(jìn)行成像;使用從所述微粒被檢測到的時(shí)間,到通過比較被成像的所述多個(gè)液滴的所述圖像信息而計(jì)算的所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的時(shí)間段作為臨時(shí)延遲時(shí)間,來初步確定所述延遲時(shí)間。此外,在本方法中,方法還可以包括從所述微粒被檢測到的時(shí)間起,一旦所述臨時(shí)延遲時(shí)間流逝,在短于每個(gè)所述液滴的排出間隔時(shí)間的時(shí)間內(nèi),對所述多個(gè)液滴的圖像進(jìn)行成像;以及通過參考涉及相對于所述圖像信息中所述液滴的排出方向鄰近所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域中的至少一個(gè)中的亮點(diǎn)數(shù)量的鄰近信息,更新所述臨時(shí)延遲時(shí)間并確定所述延遲時(shí)間。此外,在本方法中,方法還可以包括在兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間的第一時(shí)間,并且將在所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間確定為第二時(shí)間。此外,在本方法中,方法還可以包括在兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向按順序進(jìn)行設(shè)置,計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量從在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間起減少的過程中,在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間,計(jì)算在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,所述第二比較區(qū)域中的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間,并且可以將所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的該時(shí)間確定為(第一時(shí)間+第二時(shí)間)/2。在本發(fā)明中,術(shù)語“微粒(微粒子,微顆粒)”廣泛地包括有機(jī)物相關(guān)微粒,諸如細(xì)胞、微生物以及脂質(zhì)體,或者諸如乳膠粒子、凝膠粒子以及用于工業(yè)用途的粒子的合成粒子。有機(jī)物相關(guān)微粒包括各種類型的細(xì)胞所包含的染色體、脂質(zhì)體、線粒體、細(xì)胞器等。細(xì)胞包括動(dòng)物細(xì)胞(造血細(xì)胞等)以及植物細(xì)胞。微生物包括諸如大腸桿菌的細(xì)菌、諸如煙草斑紋病毒的病毒、以及諸如酵母的真菌。此外,對于有機(jī)物相關(guān)微粒,也可以包括核酸和蛋白質(zhì)以及諸如其復(fù)合物的有機(jī)物相關(guān)聚合物。此外,用于工業(yè)用途的粒子也可包括例如有機(jī)聚合材料或無機(jī)聚合材料、金屬等。有機(jī)聚合材料包括聚苯乙烯、苯乙烯二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸甲酯等。無機(jī)聚合物材料包括玻璃、硅石、磁性材料等。金屬包括金屬膠體、鋁等。對于這些微粒的形狀正常是基本上球形,然而,它們也可以是非球形,并且不特別限制其尺寸、質(zhì)量等。期望提供一種能夠自動(dòng)地、簡單地以及準(zhǔn)確地對液滴施加電荷的微粒分選裝置。附圖說明圖1是示意圖,其用于示出根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式的被配置為微芯片型流式細(xì)胞儀的微粒分選裝置(流式細(xì)胞儀)的分選系統(tǒng)的構(gòu)造;圖2A和2B是用于示出可安裝在流式細(xì)胞儀中的微芯片的實(shí)例的示意圖;圖3A至3C是用于示出微芯片的孔的構(gòu)造的示意圖;圖4是用于示出在流式細(xì)胞儀中確定延遲時(shí)間的方法的流程圖;圖5A至5D是說明圖,其是示出了由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴的圖像的實(shí)例的照片,用于示出臨時(shí)延遲時(shí)間的確定步驟;圖6A至6C是用于示出流式細(xì)胞儀中延遲時(shí)間的確定步驟的說明圖;圖7A至7C是說明圖,其是示出了由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴圖像的實(shí)例的照片,用于示出延遲時(shí)間的確定步驟;圖8是作為照片的說明圖,其中水平軸是相位,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴的圖像的亮點(diǎn)數(shù)量,用于示出延遲時(shí)間確定步驟(第一延遲時(shí)間的確定方法)的實(shí)例;圖9是作為照片的說明圖,其中水平軸是相位,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴圖像的亮點(diǎn)數(shù)量,用于示出延遲時(shí)間確定步驟(第一延遲時(shí)間的確定方法)的實(shí)例;圖10是作為照片的說明圖,其中水平軸是相位,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴圖像的亮點(diǎn)數(shù)量,用于示出延遲時(shí)間確定步驟(第二延遲時(shí)間的確定方法)的實(shí)例;圖11是作為照片的說明圖,其中水平軸是相位,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀的液滴照相機(jī)所成像的液滴圖像的亮點(diǎn)數(shù)量,用于示出延遲時(shí)間確定步驟(第二延遲時(shí)間的確定方法)的實(shí)例;以及圖12是用于示出在流式細(xì)胞儀中分選微粒(微粒分選步驟)的方法的流程圖。具體實(shí)施方式在下文中,將參考附圖來提供用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的有利的實(shí)施方式的描述。此外,下述實(shí)施方式代表了本發(fā)明的代表性實(shí)施方式的實(shí)例,且不應(yīng)根據(jù)該實(shí)例來狹義地解釋本發(fā)明的范圍。本描述將以如下順序給出。1.根據(jù)本發(fā)明的微粒分選裝置的裝置構(gòu)造1-1充電單元1-2微芯片1-3檢測單元1-4液滴照相機(jī)1-5偏轉(zhuǎn)板1-6收集容器1-7控制單元或類似物2.根據(jù)本發(fā)明的微粒分選裝置中的延遲時(shí)間確定方法2-1微粒檢測步驟S12-2液滴排出步驟S22-3液滴成像步驟S32-4排出頻率確定步驟S42-5臨時(shí)延遲時(shí)間確定步驟S52-6延遲時(shí)間確定步驟S62-6-1第一延遲時(shí)間確定方法2-6-2第二延遲時(shí)間確定方法2-7微粒分選步驟S72-7-1微粒檢測步驟S712-7-2液滴排出以及電荷施加步驟S721.根據(jù)本發(fā)明的微粒分選裝置的裝置構(gòu)造圖1是示意圖,其用于示出根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式的被配置為微芯片型的流式細(xì)胞儀的微粒分選裝置1(在下文中,也稱為“流式細(xì)胞儀1”)的構(gòu)造。1-1充電單元流式細(xì)胞儀1設(shè)置有充電單元11,其對來自在微芯片2上形成的孔21所排出的液滴施加電荷。由電連接至充電單元11并插入設(shè)置在微芯片2上的樣品入口23中的電極12來實(shí)施液滴的充電。此外,將足夠的電極12插入到微芯片2上的位置,使得與流路中向下泵送的樣品流體或鞘液電接觸。在流式細(xì)胞儀1中,在由下述檢測單元3檢測樣品流體中所包含的微粒之后,一旦延遲時(shí)間流逝,充電單元11可以將包含微粒的液滴進(jìn)行充電。這里,術(shù)語“延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,到由包含微粒的液體形成液滴時(shí)的延遲時(shí)間。換言之,“延遲時(shí)間”是指微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,到包含微粒的液滴具有由充電單元11向其施加電荷時(shí)的必需時(shí)間。在本發(fā)明中,術(shù)語“延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,到通過下述液滴照相機(jī)4所成像的圖像信息中、在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的持續(xù)時(shí)間。1-2微芯片圖2A和2B以及圖3A至3C示出了可安裝在流式細(xì)胞儀1中的微芯片2的實(shí)例。圖2A示出了上表面的示意圖,并且圖2B示出了對應(yīng)于圖2A中的線IIB-IIB的截面示意圖。此外,圖3A至3C示意性地示出了微芯片2的孔21的構(gòu)造,圖3A示出了上表面示意圖,圖3B示出了截面示意圖,并且圖3C示出了前表面示意圖。圖3B對應(yīng)于沿著圖2A中的線IIIB-IIIB的橫截面。微芯片2由粘合在一起以形成樣品流路22的基板層2a和基板層2b形成。通過使用金屬模具注射成型熱塑性樹脂,可以從基板層2a和基板層2b來進(jìn)行樣品流路22的形成。對于熱塑性樹脂,可以采用通常在相關(guān)領(lǐng)域中作為微芯片材料使用的塑料,諸如聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯樹脂(PMMA)、環(huán)狀聚烯烴、聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯以及聚甲基二硅氮烷(PDMS)。將樣品流體從流體遞送連接器部分引入至樣品入口23,與從流體遞送連接器部分引入至鞘入口24的鞘液合并,并通過樣品流路22進(jìn)行遞送。將鞘液從鞘入口24引入,在分成兩個(gè)方向并進(jìn)行遞送后,在鞘液與從樣品入口23引入的樣品流體合并的合并部分中,將鞘液與樣品流體合并,使得從兩個(gè)方向放入樣品流體。因此,在合并部分中,在鞘液層流的中央,形成了放置樣品層流的三維層流。參考數(shù)字25表示當(dāng)在樣品流路22中發(fā)生堵塞或氣泡時(shí),用于對樣品流路22施加負(fù)壓的抽吸流路,其暫時(shí)地發(fā)生來回流動(dòng),以便解決堵塞或氣泡。在抽吸流路的一端,形成了經(jīng)由液體遞送連接器部分連接至諸如真空泵的負(fù)壓源的抽吸出口251,而另一端連接至連通孔252中的樣品流路22。在三維層流中,層流寬度在所形成的限制器部分261(參考圖2A和2B)以及限制器部分262(參考圖3A-3C)中被限制,使得其垂直截面的表面積在有關(guān)流體遞送方向上逐漸變小,或在流體遞送方向中從上游到下游的階段中逐漸變小。此后,三維層流從設(shè)置在流路的一側(cè)上的孔21變成液流(流體流股)(參考圖1),并排出。在圖1中,由Y軸正方向來表示來自孔21的液流(流體流股)的排出方向。與樣品流路22的孔21的連接部分是直線地形成的平平直部27。該平直部27起作用,使得來自孔21的液流在Y軸正方向上以直線噴出。通過芯片激勵(lì)單元對孔21所施加的振動(dòng),從孔21噴出的液流轉(zhuǎn)變成液滴???1在基板層2a和基板層2b的端面方向上是打開的,并在其開口位置和基板層端面之間設(shè)置槽口部分211。通過在孔21的開口部分和基板端面之間的基板層2a和基板層2b進(jìn)行開槽來形成該槽口部分211,使得槽口部分211的直徑L大于孔21的開口直徑l(參考圖3C)。期望形成槽口部分211的直徑L大于孔21的開口直徑l兩倍以上,使得不堵塞從孔21排出的液滴的移動(dòng)。1-3檢測單元圖1中的參考數(shù)字3表示檢測單元,其通過從光源31發(fā)出的激光L1的照射,來檢測從諸如細(xì)胞的微粒發(fā)出的測量目標(biāo)的光。該檢測單元3進(jìn)行樣品流路22的限制器部分261(參考圖2A和圖2B)以及限制器部分262(參考圖3A到圖3C)之間細(xì)胞的特性檢測。該特性檢測不特別限制,然而,例如,在使用光學(xué)檢測的情況下,在三維層流的中央,由于樣品流路22中以單行布置的、與所遞送的流體細(xì)胞有關(guān)的激光L1的照射(參考圖1),由細(xì)胞發(fā)出的散射光和熒光被檢測單元3檢測。對于光的照射和檢測,除了激光源外,也可構(gòu)造將激光會(huì)聚并照射在細(xì)胞上的照射系統(tǒng),諸如聚光透鏡、二向色鏡或通帶濾光片。例如,檢測系統(tǒng)通過諸如PMT(光電倍增管)、或CCD或者CMOS裝置的區(qū)域成像裝置來構(gòu)造。由檢測單元3的檢測系統(tǒng)所檢測的測量目標(biāo)光是來自由于測量光的照射細(xì)胞所發(fā)出的光,例如,可以是諸如前散射光、側(cè)散射光、瑞利散射、或米氏散射的散射光、熒光等。這些測量目標(biāo)光被轉(zhuǎn)換成電信號,輸出至控制單元7,并利用在細(xì)胞的光學(xué)特性辨別中。此外,檢測單元3也可以磁檢測或電檢測細(xì)胞的特性。在這種情況下,微粒在微芯片2的樣品流路22中被彼此相對地設(shè)置,并測量電極之間的電阻值、電容值、電感值、阻抗、電場變化值,或磁場中的磁化強(qiáng)度、變化等。1-4液滴照相機(jī)圖1中的參考數(shù)字4表示本發(fā)明的成像裝置的實(shí)例,其為用于將來自微芯片2的孔21所排出的液滴D成像的液滴照相機(jī),諸如CCD照相機(jī)、CMOS傳感器等。設(shè)計(jì)液滴照相機(jī)4,使得可以進(jìn)行被成像的液滴D的圖像的聚焦調(diào)整。在流式細(xì)胞儀1中,通過從光源41所發(fā)出的激光L2,來照射包含諸如細(xì)胞的微粒的液滴,并且在液滴D通過液滴照相機(jī)4進(jìn)行成像的同時(shí),微粒被激發(fā),由此設(shè)計(jì)流式細(xì)胞儀1,使得使用者能夠從顯示單元確認(rèn)液滴中包含微粒。此外,在流式細(xì)胞儀1中,由于微芯片被新的微芯片替換,或外部環(huán)境(溫度等)變化,因此存在有必要改變液滴信息參數(shù)(鞘壓、液滴頻率、壓電驅(qū)動(dòng)壓力等)的情況。在這種情況下,在微粒被檢測單元3檢測后,有必要調(diào)整該時(shí)間,直到電荷施加至包含微粒的液滴為止(在下文中,該時(shí)間也稱為延遲時(shí)間)。液滴照相機(jī)起作用以便將液滴D成像,并且也可以使得下述控制單元7確定延遲時(shí)間。更具體地,設(shè)計(jì)液滴照相機(jī),使得可以在多個(gè)不同時(shí)間,將液滴D的多個(gè)圖像進(jìn)行成像,使得下述的控制單元7可初步確定臨時(shí)延遲時(shí)間作為延遲時(shí)間。此外,術(shù)語“臨時(shí)延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,到通過液滴照相機(jī)4所成像的液滴圖像信息的多個(gè)項(xiàng)進(jìn)行比較而計(jì)算出的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)亮點(diǎn)數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的持續(xù)時(shí)間。此外,術(shù)語“多個(gè)不同時(shí)間”是指,例如各個(gè)時(shí)間、振動(dòng)元件13施加至孔21的振動(dòng)頻率的倒數(shù)的時(shí)間之間的間隔時(shí)間(換言之,每個(gè)液滴D的排出間隔時(shí)間)。此外,為了使控制單元7能夠更新臨時(shí)延遲時(shí)間并確定延遲時(shí)間,液滴照相機(jī)4被設(shè)計(jì)成能夠從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間起,在臨時(shí)延遲時(shí)間流逝后,在預(yù)定時(shí)間內(nèi)將液滴D的多個(gè)圖像進(jìn)行成像。此外,術(shù)語“預(yù)定時(shí)間”指的是短于每個(gè)液滴D的排出間隔時(shí)間的時(shí)間。此外,液滴照相機(jī)4被設(shè)計(jì)成沿Y軸的正方向或負(fù)方向可移動(dòng),以便控制單元7可確定下述的液滴D的最佳排出頻率。此外,由液滴照相機(jī)4所成像的圖像顯示在諸如顯示器的顯示單元上,并且也用來允許使用者確定孔21中液滴D的信息狀態(tài)(液滴的尺寸、形狀、間隔等)。1-5偏轉(zhuǎn)板圖1中的參考數(shù)字51和52表示設(shè)置成彼此相對以夾置從孔21噴出并由液滴照相機(jī)4所成像的液滴D的一對偏轉(zhuǎn)板。偏轉(zhuǎn)板51和52被構(gòu)造成包含電極,其利用施加至液滴的電荷上的電力來控制從孔21排出的液滴的移動(dòng)方向。此外,利用施加至液滴D的電荷上的電力,偏轉(zhuǎn)板51和52也控制從孔21噴出的液滴D的軌跡。在圖1中,通過X軸方向來表示偏轉(zhuǎn)板51和52的相對方向。1-6收集容器在流式細(xì)胞儀1中,通過在偏轉(zhuǎn)板51和52的相對方向上(X軸方向)成一行來設(shè)置多個(gè)收集容器611、612、62或63之一來接收液滴D。收集容器611、612、62或63也可為通常用于實(shí)驗(yàn)的塑料管或玻璃管。收集容器611、612、62或63的數(shù)量不特別限制,然而,在這里,示出了設(shè)置四個(gè)的情況。根據(jù)偏轉(zhuǎn)板51和52之間存在或不存在、或可替換的電力量級,從孔21排出的液滴D被導(dǎo)入并收集在四個(gè)收集容器611、612、62或63之一中。收集容器611、612、62以及63以可交換的方式設(shè)置在用作收集容器(未示出)的容器中。用作收集容器(未示出)的該容器被設(shè)置在Z軸滑臺(tái)(未示出)上,其被構(gòu)造成可在垂直于來自孔21的液滴D的排出方向(Y軸方向),并垂直于偏轉(zhuǎn)板51和52的相對方向(X軸方向)的方向(Z軸方向)上移動(dòng)。1-7控制單元或類似物除了上述的構(gòu)造外,流式細(xì)胞儀1還設(shè)置有用于由檢測單元3檢測的細(xì)胞等的特性鑒別的數(shù)據(jù)分析單元、用于容納樣品流體以及鞘液的槽部分、用于控制上述各個(gè)構(gòu)造的控制單元7等,其設(shè)置有普通流式細(xì)胞儀??刂茊卧?可由普通計(jì)算機(jī)來構(gòu)造,其設(shè)置有CPU、存儲(chǔ)器、硬盤等,并且在該硬盤上存儲(chǔ)OS,執(zhí)行與下述延遲時(shí)間確定方法相關(guān)的各個(gè)步驟的程序等。2.根據(jù)本發(fā)明的微粒分選裝置中的延遲時(shí)間確定方法2-1微粒檢測步驟S1圖4是用于示出在流式細(xì)胞儀1中延遲時(shí)間確定步驟的流程圖。該延遲時(shí)間確定步驟包括“微粒檢測步驟S1”、“液滴排出步驟S2”、“液滴成像步驟S3”、“排出頻率確定步驟S4”、“臨時(shí)延遲時(shí)間確定步驟S5”、以及“延遲時(shí)間確定步驟S6”的過程。此外,“微粒分選步驟S7”的過程也可在上述延遲時(shí)間確定步驟之后執(zhí)行。下面將提供各個(gè)過程的描述。首先,在微粒檢測步驟S1中,控制單元7將信號輸出至流體遞送連接器部分,并開始樣品流體以及鞘液的流體遞送。此外,檢測單元3通過例如激光L的照射來檢測在樣品流路22的樣品中所包含的微粒。此外,本步驟S1以及下述步驟S2到步驟S6是校準(zhǔn)過程,用于確定從檢測單元3檢測靶細(xì)胞等時(shí)直到充電單元11對包含細(xì)胞等的液滴施加電荷為止的延遲時(shí)間。因此,優(yōu)選使用校準(zhǔn)珠(諸如用于工業(yè)用途的、形狀等明確的顆粒)預(yù)先作為微粒。2-2液滴排出步驟S2在液滴排出步驟S2中,振動(dòng)元件13對孔21施加振動(dòng),液滴D從孔21排出,液滴D收集在廢液入口中,并可以進(jìn)行液體的處置(參照圖4)。2-3液滴成像步驟S3在液滴成像步驟S3中,控制單元7將信號輸出至液滴照相機(jī)4,并且,接收到信號的液滴照相機(jī)4將對被排出以及被激光L激發(fā)的液滴D成像(參照圖4)。在相同于或短于下述液滴時(shí)鐘的時(shí)間間隔的時(shí)間間隔,液滴照相機(jī)4可以對圖像進(jìn)行成像。此時(shí),例如,控制單元7可將信號輸出至液滴照相機(jī)4,并使得接收到信號的液滴照相機(jī)4在X軸方向上或Y軸方向上移動(dòng)。此外,在通過液滴照相機(jī)4的液滴D的圖像的成像中,控制單元可以進(jìn)行在Z軸方向上的聚焦調(diào)整。例如,控制單元可以進(jìn)行聚焦調(diào)整,直到由液滴照相機(jī)4所成像的圖像中的對比率落在預(yù)定范圍內(nèi)。2-4排出頻率確定步驟S4在排出頻率確定步驟S4中,控制單元7將液滴照相機(jī)4移動(dòng)至預(yù)定位置,并基于由液滴照相機(jī)4所成像的圖像信息來調(diào)整液滴D的排出頻率(參照圖4)。不特別限制上述預(yù)定位置,然而,根據(jù)排出條件,諸如孔徑和驅(qū)動(dòng)壓力,它可以是預(yù)先所設(shè)置的位置。此外,控制單元7將液滴D的最佳排出頻率確定為在液滴D開始在Y軸方向上(在下文中,稱為分離點(diǎn))形成的位置最接近孔21的排出頻率。此外,本步驟S4也可在下述步驟S5后執(zhí)行。以這種方式,在流式細(xì)胞儀1中,因?yàn)樵撟罴雅懦鲱l率是基于分離點(diǎn)由控制單元7來確定的,所以可以解決使用者手動(dòng)設(shè)置液滴頻率的困難。2-5臨時(shí)延遲時(shí)間確定步驟S5在臨時(shí)延遲時(shí)間確定步驟S5中,從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,通過比較由液滴照相機(jī)4所成像的液滴D的多項(xiàng)圖像信息,信息控制單元7確定液滴D的臨時(shí)延遲時(shí)間(參照圖4)。術(shù)語“臨時(shí)延遲時(shí)間”在這里是指被本步驟S5臨時(shí)當(dāng)作延遲時(shí)間的時(shí)間,其為直到通過下述延遲時(shí)間步驟S6確定延遲時(shí)間為止的時(shí)間。更具體地,該術(shù)語“臨時(shí)延遲時(shí)間”是指從微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間,到下述的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的持續(xù)時(shí)間,其通過比較在多個(gè)不同時(shí)間、由液滴照相機(jī)4所成像的液滴D的多項(xiàng)圖像信息來計(jì)算出的。此外,不特別限制術(shù)語“多個(gè)不同時(shí)間”,然而,例如,指各個(gè)時(shí)間、振動(dòng)元件13施加至孔21的振動(dòng)頻率的倒數(shù)的時(shí)間之間的間隔時(shí)間(換言之,指各個(gè)液滴D的排出間隔時(shí)間,并在下文中稱為“液滴時(shí)鐘”)。圖5A-5D是照片,其示出了由流式細(xì)胞儀1的液滴照相機(jī)4所成像的液滴圖像的實(shí)例,并表示在不同時(shí)間成像的圖像(參照圖5A-5D)。更具體地,圖5A-5D是攝影圖,其在微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間(T0),當(dāng)所檢測微粒包含在由液滴照相機(jī)4所成像的液滴D中時(shí),用于示出設(shè)置為第一液滴的液滴。此外,各個(gè)攝影圖也可為其中多個(gè)所成像的圖像整合在一起的圖。在圖5A-5D中,術(shù)語“部分1”指在圖像P中預(yù)先設(shè)置的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域??刂茊卧?將液滴照相機(jī)4在液滴時(shí)鐘的間隔時(shí)間所成像的液滴D的多個(gè)圖像進(jìn)行比較,并初步確定從T0直到“部分1”內(nèi)的亮點(diǎn)數(shù)量達(dá)到最大值時(shí)為止的時(shí)間,作為臨時(shí)延遲時(shí)間。此外,術(shù)語“亮點(diǎn)”指的是像素,其在液滴照相機(jī)4所成像的液滴D的圖像中具有高于預(yù)定閥值的亮度,并且是由激光L2所照射的激發(fā)的液滴D中包含的微粒的圖像信息項(xiàng)。作為本發(fā)明的實(shí)例,在圖5A-5D中,術(shù)語“亮點(diǎn)”是指當(dāng)排出第30個(gè)到第33個(gè)液滴時(shí),通過液滴照相機(jī)4成像的圖像,當(dāng)在T0從孔21排出的并由液滴照相機(jī)4成像時(shí)的液滴D設(shè)定為第一液滴。例如,第30個(gè)液滴是由N=30表示的攝影圖(參照圖5A)。在圖5A至5D中所示的實(shí)例中,基于“部分1”內(nèi)亮點(diǎn)B的數(shù)量達(dá)到最大值的N=32的圖像信息(參照圖5C),控制單元7能夠辨別在第32液滴中包含微粒。換言之,控制單元7將液滴照相機(jī)4在液滴時(shí)鐘的間隔時(shí)間所成像的液滴D的多個(gè)圖像進(jìn)行比較,并能夠初步確定從微粒被檢測的時(shí)間,直到排出第32液滴的時(shí)間為止的延遲時(shí)間,作為臨時(shí)延遲時(shí)間。以此方式,在流式細(xì)胞儀1中,通過比較“部分1”范圍內(nèi)與多個(gè)不同時(shí)間有關(guān)的圖像信息中亮點(diǎn)數(shù)量,可以初步確定臨時(shí)延遲時(shí)間作為延遲時(shí)間。因此,可以簡單地并準(zhǔn)確地對液滴施加電荷,而無需使用者的復(fù)雜操作。2-6延遲時(shí)間確定步驟S6在圖4中所示的延遲時(shí)間確定步驟S6中,首先,在臨時(shí)延遲時(shí)間自T0流逝后,在短于液滴時(shí)鐘的時(shí)間內(nèi),基于由液滴照相機(jī)4所成像的液滴D的多個(gè)圖像,控制單元7參考了下述的鄰近信息。此外,控制單元7更新臨時(shí)延遲時(shí)間,其通過上述的臨時(shí)延遲時(shí)間確定步驟S5來初步確定,并通過參考鄰近信息,可更精確地確定延遲時(shí)間。下面參照圖6A到圖11來描述該方法。此外,鄰近信息是與液滴的排出方向有關(guān)的兩個(gè)比較區(qū)域(鄰近標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域)中有關(guān)亮點(diǎn)數(shù)量的信息。圖6A至6C示意性地示出了從微粒被檢測單元3檢測時(shí),到由液滴照相機(jī)4將包含微粒的液滴D成像的變遷。圖6A示出了液滴時(shí)鐘(DropletCLK)的曲線圖。這里,圖6B示出了流經(jīng)微芯片2的流路并由檢測單元3檢測的微粒A1和A2。此外,圖6C示出了各自包含微粒A1和A2的液滴D1和D2。在圖6A至6C所示的實(shí)例中,即使微粒A1和A2包含在相同的液滴時(shí)鐘內(nèi),但相位僅通過(φ2-φ1)改變(參照圖6B)。因此,在微粒A1和A2包含在不同的液滴D1和D2中的情況下,當(dāng)延遲時(shí)間設(shè)置成臨時(shí)延遲時(shí)間時(shí),存在電荷施加至所期望液滴的定時(shí)發(fā)生偏離的情況(參照圖6C)。因此,為了更精確地確定當(dāng)施加電荷至液滴時(shí)的定時(shí),有必要將延遲時(shí)間調(diào)整至短于液滴時(shí)鐘的間隔時(shí)間(在下文中稱為相位)。圖7A至7C示出了在與同一液滴時(shí)鐘有關(guān)的不同相位上的由液滴照相機(jī)4成像的圖像。更具體地,圖7A至7C示出了在與同一液滴時(shí)鐘有關(guān)的各個(gè)相位(圖7APHY=0,圖7BPHY=90,圖7CPHY=270)上由液滴照相機(jī)4成像的微粒的圖像。在同一液滴時(shí)鐘的時(shí)間被分成360相位的相位中,以時(shí)間序列順序,圖7A至7C分別示出了與第0相位((圖7APHY=0)、第90相位(圖7BPHY=90)以及第270相位(圖7CPHY=270)相關(guān)的圖像。如參照圖6A至6C所示出的,因?yàn)榇嬖谠谕灰旱螘r(shí)鐘內(nèi),不同的液滴D1和D2包含微粒A1和A2的情況,所以,在圖7A所示的實(shí)例中,使用控制單元7,也可以檢測在鄰近標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域(部分1)的比較區(qū)域(部分0)中的亮點(diǎn)B。換言之,控制單元7辨別在比較區(qū)域(部分0)內(nèi)存在微粒。此外,在圖7C所示的實(shí)例中,在鄰近標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域(部分1)的其他比較區(qū)域(部分2)中,也檢測到亮點(diǎn)B。換言之,控制單元7辨別在比較區(qū)域(部分2)內(nèi)存在微粒。在本步驟S6中,這使得可以用于控制單元7來辨別相位偏差(延遲相位),以更新臨時(shí)延遲時(shí)間,并確定延遲時(shí)間。更具體地,通過參考圖像信息中與液滴D的排出方向有關(guān)的兩個(gè)比較區(qū)域中的一個(gè)比較區(qū)域中、有關(guān)亮點(diǎn)B數(shù)量的鄰近信息,控制單元7更新臨時(shí)延遲時(shí)間并確定延遲時(shí)間。參照圖8至圖11,將提供如下第一延遲時(shí)間確定方法以及第二延遲時(shí)間確定方法的詳細(xì)描述,作為特定的延遲時(shí)間確定方法。此外,這里,提供了在兩個(gè)區(qū)域(“部分1”以及“部分0”或“部分2”的兩個(gè)區(qū)域)中檢測亮點(diǎn)B的實(shí)例的描述。然而,即使在“部分1”、“部分0”以及“部分2”的三個(gè)區(qū)域中檢測亮點(diǎn)B的情況下,也可以以相同方式確定延遲時(shí)間,如同下述中第一延遲時(shí)間確定方法或第二延遲時(shí)間確定方法一樣。2-6-1第一延遲時(shí)間確定方法首先,參照圖8和圖9,將提供第一延遲時(shí)間確定方法的描述,其中,該延遲時(shí)間是通過參照兩個(gè)比較區(qū)域的僅“部分2(S2)”的亮點(diǎn)來確定的。圖8和圖9是曲線圖,其中,水平軸是相位值,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀1的液滴照相機(jī)4所成像的液滴圖像的亮點(diǎn)數(shù)量。更具體地,如圖8中所示,在曲線圖中,示出了在“部分0(S0)”、“部分1(S1)”以及“部分2(S2)”的三個(gè)區(qū)域中的亮點(diǎn)數(shù)量。首先,與“部分1(S1)”有關(guān),控制單元7計(jì)算兩個(gè)比較區(qū)域(其定位在液滴排出方向的正方向側(cè))的“部分2(S2)”中亮點(diǎn)數(shù)量的最大值(參照圖9,(1a))。接著,在亮點(diǎn)的數(shù)量朝“部分2(S2)”中的最大值增加的過程中,控制單元7計(jì)算亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到上述最大值的10%的時(shí)間(參照圖9中的點(diǎn)(1b)以及點(diǎn)(1c))。最后,控制單元7設(shè)置亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的10%的時(shí)間,作為在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)達(dá)到最大數(shù)量的亮點(diǎn)的時(shí)間,并確定延遲時(shí)間。換言之,基于相位值,控制單元7計(jì)算出與點(diǎn)(1b)以及點(diǎn)(1c)有關(guān)的相位值,并確定延遲時(shí)間。根據(jù)以上,在流式細(xì)胞儀1中,通過參考關(guān)于圖像信息中設(shè)置在與液滴D的排出方向有關(guān)的鄰近標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域的液滴排出方向的正方向側(cè)的比較區(qū)域中的亮點(diǎn)數(shù)量的鄰近信息,控制單元7計(jì)算延遲時(shí)間。以這種方式,在流式細(xì)胞儀1中,可以精確地且自動(dòng)地對液滴施加電荷,而不擔(dān)心在同步液滴和電荷信號之間將發(fā)生相移。此外,作為本步驟S6的實(shí)例的第一延遲時(shí)間確定方法有利地用于在微芯片2中進(jìn)行樣品中所包含的微粒的檢測以及在空氣中進(jìn)行對液滴D施加電荷的情況下。換言之,在微芯片2內(nèi)部和在空氣中之間的樣品速度發(fā)生變化,因此,在有必要調(diào)整對樣品施加電荷的定時(shí)的情況下,對使用第一延遲時(shí)間確定方法來確定延遲時(shí)間尤其有效。此外,提供了一種情況的描述,其中,在第一延遲時(shí)間確定方法中,基于在比較區(qū)域中亮點(diǎn)數(shù)量達(dá)到最大值的10%的值,控制單元7計(jì)算相位值,然而,本發(fā)明不限于該實(shí)例。例如,通過計(jì)算亮點(diǎn)最大數(shù)量的X%(例如,X是諸如5或20的任意值),控制單元7也可以確定適當(dāng)?shù)难舆t時(shí)間。2-6-2第二延遲時(shí)間確定方法接著,參照圖10和圖11,將提供第二延遲時(shí)間確定方法的描述,其中,該延遲時(shí)間是通過參照兩個(gè)比較區(qū)域的部分0(S0)和部分2(S2)的亮點(diǎn)來確定的。圖10和圖11是曲線圖,其中,水平軸是相位值,而垂直軸是由流式細(xì)胞儀1的液滴照相機(jī)4所成像的液滴圖像的亮點(diǎn)數(shù)量。更具體地,在如圖10中所示的曲線圖中,示出了在部分0(S0)、部分1(S1)以及部分2(S2)的三個(gè)區(qū)域中的亮點(diǎn)數(shù)量。首先,與部分1(S1)有關(guān),控制單元7計(jì)算兩個(gè)比較區(qū)域(其設(shè)置在液滴排出方向的負(fù)方向側(cè))的部分0(S0)中亮點(diǎn)數(shù)量的最大值以及亮點(diǎn)數(shù)量的最小值的平均值(參照圖11,(2a))。換言之,如圖11中所示,當(dāng)最小值為0時(shí),控制單元7計(jì)算在部分0(S0)中亮點(diǎn)數(shù)量的最大值乘以1/2的值(在下文中,稱為部分0(S0)中的中間值)。接著,以與部分0(S0)的情況相同的方式,與部分1(S1)有關(guān),控制單元7計(jì)算兩個(gè)比較區(qū)域(其定位在液滴排出方向的正方向側(cè))的部分1(S1)中亮點(diǎn)數(shù)量的最大值以及亮點(diǎn)數(shù)量的最小值的平均值(參照圖11,(2b))。換言之,如圖11中所示,當(dāng)最小值為0時(shí),控制單元7計(jì)算在部分2(S2)中亮點(diǎn)數(shù)量的最大值乘以1/2的值(在下文中,稱為部分2中的中間值)。接著,在亮點(diǎn)數(shù)量從部分0(S0)中的最大值減少的過程中,控制單元7計(jì)算在達(dá)到亮點(diǎn)最大數(shù)量的1/2時(shí)的第一時(shí)間。換言之,控制單元7采取在部分0中的中間值,計(jì)算曲線圖的水平軸上的平行直線,以及計(jì)算在部分0(S0)標(biāo)繪的直線交叉點(diǎn)的點(diǎn)的相位值(參考圖11中的點(diǎn)(2c))。接著,在亮點(diǎn)數(shù)量朝部分2(S2)中的最大值增加的過程中,控制單元7計(jì)算在達(dá)到亮點(diǎn)最大數(shù)量的1/2時(shí)的第二時(shí)間。換言之,以與部分0(S0)的情況相同的方式,控制單元7采取在部分0中的中間值,計(jì)算曲線圖的水平軸上的平行直線,以及計(jì)算在部分0(S0)標(biāo)繪的直線交叉點(diǎn)的點(diǎn)的相位值(參考圖11中的點(diǎn)(2d))。最后,基于第一時(shí)間和第二時(shí)間,控制單元7確定延遲時(shí)間為(第一時(shí)間+第二時(shí)間)/2。換言之,控制單元7計(jì)算與點(diǎn)(2c)以及點(diǎn)(2d)有關(guān)的相位值的中間點(diǎn)(參照圖11中的點(diǎn)(2e)),并確定具有設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)亮點(diǎn)最大數(shù)量的中間點(diǎn)的相位值。根據(jù)以上,在流式細(xì)胞儀1中,控制單元7通過參考與相對于所述圖像信息中所述液滴的排出方向鄰近所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域中的亮點(diǎn)數(shù)量有關(guān)的鄰近信息,來計(jì)算延遲時(shí)間。以此方式,在流式細(xì)胞儀1中,可以精確地且自動(dòng)地對液滴施加電荷,而不擔(dān)心在同步液滴和電荷信號之間將發(fā)生相移。此外,作為本步驟S6的實(shí)例的第二延遲時(shí)間確定方法有利地用于樣品在空氣中的情況,從檢測到樣品中所包含微粒的位置,直到對微粒實(shí)施電荷施加的位置(在計(jì)算S0值以及S2值的點(diǎn))。此外,提供了一種情況的描述,其中,在第二延遲時(shí)間確定方法中,控制單元7計(jì)算相位值作為中間值,其具有在比較區(qū)域中亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的1/2的值,然而,本發(fā)明不限于該實(shí)例。例如,通過計(jì)算中間值作為比較區(qū)域中亮點(diǎn)的最大數(shù)量的X%(例如,X是諸如90或80的任意值)的值的1/Y(例如,Y是諸如2、3或4的任意值),控制單元7也可以確定延遲時(shí)間。2-7微粒分選步驟S7圖12是流程圖,其用于示出在流式細(xì)胞儀1中分選諸如細(xì)胞的微粒的步驟S7。在微粒分選步驟S7中,基于在上述步驟S1至S6中確定的延遲時(shí)間,流式細(xì)胞儀1進(jìn)行包含諸如細(xì)胞的微粒的分選。軌跡方向確定步驟包括“微粒檢測步驟S71”以及“液滴排出以及電荷施加步驟S72”的過程。如下將提供各個(gè)過程的描述。2-7-1微粒檢測步驟S71首先,在本步驟S71中,檢測單元3檢測微粒。以與上述步驟S1中的方法相同的方式,可以進(jìn)行該檢測方法。2-7-2液滴排出和電荷施加步驟S72接著,在本步驟S72中,從諸如細(xì)胞的微粒被檢測單元3檢測的時(shí)間起,一旦所確定的延遲時(shí)間流逝,控制單元7將信號輸出至充電單元11,用于對包含微粒的液滴進(jìn)行電荷施加(參照圖12)。此外,充電單元11對液滴施加電荷。以此方式,在流式細(xì)胞儀1中,可以精確地且自動(dòng)地對諸如細(xì)胞的所期望微粒施加電荷。此外,在流式細(xì)胞儀1中,在已確定了延遲時(shí)間的狀態(tài)中,可以施加電荷。因此,在諸如細(xì)胞的微粒被檢測單元3檢測后,一旦臨時(shí)延遲時(shí)間流逝,通過只使用激光L2照射液滴D,可以精確地確認(rèn),當(dāng)減少激光的使用量時(shí)液滴D包含微粒。根據(jù)本發(fā)明的微粒分選裝置和延遲時(shí)間確定方法也可采用以下構(gòu)造。(1)一種微粒分選裝置,包括:檢測單元,檢測流經(jīng)流路的微粒;成像裝置,對包含從設(shè)置在所述流路的端部上的孔排出的所述微粒的液滴進(jìn)行成像;充電單元,對所述液滴施加電荷;以及控制單元,所述控制單元確定從所述微粒被所述檢測單元檢測到的時(shí)間到由所述成像裝置所成像的圖像信息的在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域中預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)目達(dá)到最大值的時(shí)間作為延遲時(shí)間,在所述微粒被所述檢測單元檢測之后,一旦所述延遲時(shí)間流逝,可以使得所述充電單元將電荷施加至所述微粒。(2)根據(jù)(1)的微粒分選裝置,其中,所述成像裝置在多個(gè)不同的時(shí)間對多個(gè)所述液滴的圖像進(jìn)行成像,并且其中,所述控制單元使用從所述微粒被所述檢測單元檢測到的時(shí)間,到通過比較由所述成像裝置所成像的多個(gè)液滴的所述圖像信息而計(jì)算的所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的亮點(diǎn)數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間作為臨時(shí)延遲時(shí)間來初步確定所述延遲時(shí)間。(3)根據(jù)(2)的微粒分選裝置,其中,從所述微粒被所述檢測單元檢測到的時(shí)間起,一旦所述臨時(shí)延遲時(shí)間流逝,所述成像裝置在短于每個(gè)所述液滴的排出間隔時(shí)間的時(shí)間內(nèi),對所述多個(gè)液滴的所述圖像進(jìn)行成像,并且其中,通過參考與相對于所述圖像信息中所述液滴的排出方向鄰近所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域中的至少一個(gè)中的亮點(diǎn)數(shù)量有關(guān)的鄰近信息,所述控制單元更新所述臨時(shí)延遲時(shí)間并確定所述延遲時(shí)間。(4)根據(jù)(3)的微粒分選裝置,其中在所述兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,并且其中,所述控制單元計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間,并且將所述時(shí)間確定為所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間。(5)根據(jù)(3)或(4)的微粒分選裝置,其中在所述兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,其中,所述控制單元計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量從在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間起減少的過程中,在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的第一時(shí)間,計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的第二時(shí)間,以及將所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的所述時(shí)間確定為(所述第一時(shí)間+所述第二時(shí)間)/2。(6)根據(jù)(1)到(5)中的任一個(gè)的微粒分選裝置,其中,所述控制單元調(diào)整所述液滴的排出頻率,并將所述液滴的最佳排出頻率確定為在所述液滴的排出方向上所述液滴開始形成的分離點(diǎn)最靠近所述孔的排出頻率。(7)根據(jù)(1)到(6)中的任一個(gè)的微粒分選裝置,進(jìn)一步包括設(shè)置成彼此相對以夾置由所述成像裝置所成像的所述液滴的一對偏轉(zhuǎn)板,所述一對偏轉(zhuǎn)板利用在所述偏轉(zhuǎn)板與所述電荷之間起作用的電力來改變所述液滴的前進(jìn)方向。(8)根據(jù)(1)到(7)中的任一個(gè)的微粒分選裝置,其中,所述微粒分選裝置是微芯片型流式細(xì)胞儀,其中,在所述微芯片中設(shè)置所述孔和所述流路。(9)一種在微粒分選裝置中的延遲時(shí)間確定方法,包括:使微粒分選裝置檢測流經(jīng)流路的微粒;使微粒分選裝置對包含從設(shè)置在所述流路的端部上的孔排出的所述微粒的液滴進(jìn)行成像;以及使微粒分選裝置確定從所述微粒被檢測到的時(shí)間直到在被成像的液滴的圖像信息中的在標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域中預(yù)先設(shè)置的亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間作為延遲時(shí)間。(10)根據(jù)(9)的延遲時(shí)間確定方法,進(jìn)一步在多個(gè)時(shí)間對多個(gè)所述液滴的所述圖像進(jìn)行成像;以及使用從所述微粒被檢測到的時(shí)間直到通過比較被成像的所述多個(gè)液滴的所述圖像信息而計(jì)算的所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間的時(shí)間段作為臨時(shí)延遲時(shí)間,來初步確定所述延遲時(shí)間。(11)根據(jù)(10)的延遲時(shí)間確定方法,進(jìn)一步包括從所述微粒被檢測到的時(shí)間起,一旦所述臨時(shí)延遲時(shí)間流逝,在短于每個(gè)所述液滴的排出間隔時(shí)間的時(shí)間內(nèi),對所述多個(gè)液滴的圖像進(jìn)行成像;以及通過參考與相對于所述圖像信息中所述液滴的排出方向鄰近所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域的兩個(gè)比較區(qū)域中的至少一個(gè)中的亮點(diǎn)的數(shù)量有關(guān)的鄰近信息,更新所述臨時(shí)延遲時(shí)間并確定所述延遲時(shí)間。(12)根據(jù)(10)的延遲時(shí)間確定方法,其中,在所述兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,所述方法進(jìn)一步包括:計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的預(yù)定百分比的時(shí)間;以及將所述時(shí)間確定為所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間。(13)根據(jù)(11)或(12)的延遲時(shí)間確定方法,其中,在所述兩個(gè)比較區(qū)域中,第一比較區(qū)域和第二比較區(qū)域在所述液滴的排出方向上按順序進(jìn)行設(shè)置,所述方法進(jìn)一步包括:計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量從在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間起減少的過程中,在所述第一比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到所述最大值的預(yù)定百分比的第一時(shí)間;計(jì)算在所述亮點(diǎn)的數(shù)量朝著在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的時(shí)間增加的過程中,在所述第二比較區(qū)域中所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到所述最大值的預(yù)定百分比的第二時(shí)間;以及將所述標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的所述亮點(diǎn)的數(shù)量達(dá)到最大值的所述時(shí)間確定為(所述第一時(shí)間+所述第二時(shí)間)/2。本發(fā)明包含與于2012年3月30日向日本專利局提交的日本優(yōu)先權(quán)專利申請JP2012-080192中所公開的主題,將其全部內(nèi)容結(jié)合于此作為參考。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,根據(jù)設(shè)計(jì)要求和其他因素,可以進(jìn)行各種修改、組合、子組合和變形,只要它們在所附權(quán)利要求或其等同物的范圍之內(nèi)。