一種使用超聲反相懸浮法制備高度交聯(lián)均一粒徑瓊脂糖凝膠介質(zhì)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種瓊脂糖凝膠介質(zhì)的制備工藝，尤其涉及一種使用超聲反相懸浮法制備高度交聯(lián)均一粒徑瓊脂糖凝膠介質(zhì)。
【背景技術(shù)】
[0002]瓊脂糖凝膠基質(zhì)在生物醫(yī)學(xué)行業(yè)的應(yīng)用可追溯到上個世紀(jì)六七十年代，由于瓊脂糖的電中性，能與生物大分子良好相容而不發(fā)生特異性結(jié)合，容易被修飾和交聯(lián)等特性使它迅速成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛的介質(zhì)。經(jīng)過近半個世紀(jì)的應(yīng)用，瓊脂糖凝膠其機(jī)械強(qiáng)度、多孔性、生物相容性、化學(xué)穩(wěn)定性和衍生能力等方面得到了長足的發(fā)展。然而，目前瓊脂糖凝膠介質(zhì)的生產(chǎn)技術(shù)與市場仍然被國外企業(yè)所壟斷。瓊脂糖凝膠介質(zhì)的銷售價格正在以每年10%上漲。這也是以瓊脂糖為基質(zhì)的免疫吸附劑價格居高不下的原因之一。國內(nèi)雖然也有一些科研單位和廠家在研發(fā)生產(chǎn)，但質(zhì)量參差不齊，所制備的凝膠在百分比含量、純度、均一性、機(jī)械性能、外觀色澤等等方面存在問題。尤其是在機(jī)械性能差或是均一性上。原因主要是而按照國外傳統(tǒng)的工藝，主要還是采用冷水液相的工藝，要做到高水平的瓊脂糖凝膠介質(zhì)，實施控制技術(shù)難度較高，符合質(zhì)量的凝膠回收率低，成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明公開了一種使用超聲反相懸浮法制備高度交聯(lián)均一粒徑瓊脂糖凝膠介質(zhì)，以解決凝膠顆粒均一性和機(jī)械性能問題，以期提高瓊脂糖凝膠介質(zhì)的質(zhì)量同時降低其生產(chǎn)成本。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
[0005]一種使用超聲反相懸浮法制備高度交聯(lián)均一粒徑瓊脂糖凝膠介質(zhì)的方法，其步驟是:
[0006]a、準(zhǔn)確量取2-20體積比例的油性液體與準(zhǔn)確量取I體積比例的有機(jī)溶劑按2_20:I的比例混勻制成油相溶液；
[0007]b、向油相溶液中加入非離子表面活性劑調(diào)節(jié)油相溶液的親水親油平衡值至3-20之間；
[0008]C、將上述體系用100w-1000w超聲5_30分鐘，混均后預(yù)熱至60_90°C ；
[0009]d、準(zhǔn)確稱取重量分比為0.4?4的瓊脂糖，重量分比為0.18的氯化鈉使用超純水定容至體積比例為20，加熱融化，制成水相的2%?20%瓊脂糖溶液；
[0010]e、將2%?20%瓊脂糖溶液加熱至60_90°C加入60_90°C的油相中，恒溫以轉(zhuǎn)速10-1OOOrpm攪拌15-90分鐘乳化；
[0011]f、乳化完成之后以低速50-300rpm攪拌，3小時內(nèi)緩慢降至室溫，再繼續(xù)降溫至
4-8 0C ；
[0012]g、通過100-1000目篩網(wǎng)抽濾收集凝膠微球，并用有機(jī)溶劑和超凈水洗滌微球，于20-80%乙醇中保存于4°C ;并在雙蒸水中攪拌懸浮篩分，獲得均一粒徑瓊脂糖凝膠微球；
[0013]h、取5-50重量分比的瓊脂糖微球抽干，懸浮于體積比例為5-200的丙酮中，加入1，4 丁二醇-二縮水甘油醚，在10-1OOOrpm常溫下攪拌1_10小時后向反應(yīng)體系中緩慢滴加入5-65%的NaOH溶液并在10rpm于常溫下反應(yīng)4小時，然后在將反應(yīng)體系以0.5°C /min的升溫速度緩慢升溫至38 °C繼續(xù)反應(yīng)4小時；
[0014]1、反應(yīng)后向反應(yīng)體系加入環(huán)氧氯丙烷，攪拌5-30分后向體系中緩慢滴入5-65%的NaOH溶液，升溫至30-60°C繼續(xù)反應(yīng)2_24小時；然后在50-1000rpm緩慢冷卻至室溫，反復(fù)洗滌至中性，抽干；
[0015]j、向反應(yīng)得凝膠加入1-10倍體積0.05-5% NaBH4，于室溫下以50_1000rpm反應(yīng)2-24小時，反復(fù)洗滌至中性，抽干并將所得的瓊脂糖凝膠介質(zhì)保存在20-80%乙醇中。
[0016]所述的步驟a中所述的油性液體是液體石蠟、大豆油、芝麻油或茶油中的1-2種，所述的有機(jī)溶劑是石油醚、丙酮、氯仿或苯中的1-2種。
[0017]所述的步驟b中加入的非離子表面活性劑是Emcol、Atlas G、AtmuK PEG、Span、Tween 或 Brij 中的 1-3 種。
[0018]所述的步驟g中選用的有機(jī)溶劑為丙酮、氯仿、石油醚、苯或無水乙醇等有機(jī)溶劑。
[0019]所述的步驟h、i加入的5-65%的NaOH溶液內(nèi)含0.05-5% NaBH4。
[0020]本發(fā)明的有益效果是:使用本超聲反相懸浮攪拌制備方法與現(xiàn)有的冷水相急速射入制備方法相比，在制備過程中步驟明確，條件溫和，參數(shù)可控，故而提高了凝膠的回收率，實現(xiàn)了凝膠均一性控制，極大地降低了生產(chǎn)成本和凝膠的機(jī)械性能。
【具體實施方式】
[0021]下面對本發(fā)明的【具體實施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0022]本發(fā)明一種使用超聲反相懸浮法制備高度交聯(lián)均一粒徑瓊脂糖凝膠介質(zhì)的方法，其步驟是:
[0023]a、準(zhǔn)確量取2-20體積比例的油性液體與準(zhǔn)確量取I體積比例的有機(jī)溶劑按2_20:I的比例混勻制成油相溶液；
[0024]b、向油相溶液中加入非離子表面活性劑調(diào)節(jié)油相溶液的親水親油平衡值至3-20之間；
[0025]C、將上述體系用100w-1000w超聲5_30分鐘，混均后預(yù)熱至60_90°C ；
[0026]d、準(zhǔn)確稱取重量分比為0.4?4的瓊脂糖，重量分比為0.18的氯化鈉使用超純水定容至體積比例為20，加熱融化，制成水相的2%?20%瓊脂糖溶液；
[0027]e、將2%?20%瓊脂糖溶液加熱至60_90°C加入60_90°C的油相中，恒溫以轉(zhuǎn)速10-1OOOrpm攪拌15-90分鐘乳化；
[0028]f、乳化完成之后以低速50-300rpm攪拌，3小時內(nèi)緩慢降至室溫，再繼續(xù)降溫至4-8 0C ；
[0029]g、通過100-1000目篩網(wǎng)抽濾收集凝膠微球，并用有機(jī)溶劑和超凈水洗滌微球，于20-80%乙醇中保存于4°C ;并在雙蒸水中攪拌懸浮篩分，獲得均一粒徑瓊脂糖凝膠微球；
[0030]h、取5-50重量分比的瓊脂糖微球抽干，懸浮于體積比例為5-200的丙酮中，加入1，4 丁二醇-二縮水甘油醚，在10-1OOOrpm常溫下攪拌1_10小時后向反應(yīng)體系中緩慢滴加入5-65%的NaOH溶液并在10rpm于常溫下反應(yīng)4小時，然后在將反應(yīng)體系以0.5°C /min的升溫速度緩慢升溫至38 °C繼續(xù)反應(yīng)4小時；
[0031 ] 1、反應(yīng)后向反應(yīng)體系加入環(huán)氧氯丙烷，攪拌5-30分后向體系中緩慢滴入5-65 %的NaOH溶液，升溫至30-60°C繼續(xù)反應(yīng)2_24小時；然后在50-1000rpm緩慢冷卻至室溫，反復(fù)洗滌至中性，抽干；
[0032]j、向反應(yīng)得凝膠加入1-10倍體積0.05-5% NaBH4，于室溫下以50_1000rpm反應(yīng)2-24小時，反復(fù)洗滌至中性，抽干并將所得的瓊脂糖凝膠介質(zhì)保存在20-80%乙醇中。
[0033]所述的步驟a中所述的油性液體是液體石蠟、大豆油、芝麻油或茶油中的1-