本申請涉及蛋白轉(zhuǎn)印，特別涉及一種聚偏二氟乙烯微孔濾膜的用途及蛋白免疫印跡方法。

背景技術(shù)：

1、蛋白免疫印跡(western?blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

2、蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)中常用的固相載體包括聚偏二氟乙烯(pvdf)膜、硝酸纖維素(nc)膜。其中，nc膜價(jià)格比較便宜，應(yīng)用較廣，結(jié)合牢固性較pvdf膜差，韌性也不如pvdf，不能重復(fù)使用，但蛋白吸附容量高，親水性較好。而pvdf膜具有更高的機(jī)械強(qiáng)度、背景低、溶劑相容性廣，以及著色能力好等優(yōu)點(diǎn)，而且還能用于蛋白測序。

3、但是pvdf膜是疏水性的，其使用時(shí)需要使用無水甲醇預(yù)潤濕，以賦予其親水性。并且現(xiàn)有技術(shù)制得的pvdf膜蛋白轉(zhuǎn)印條帶不夠清晰，靈敏度不夠高。

4、目前，能夠具有優(yōu)異蛋白轉(zhuǎn)印效果的pvdf膜主要由國外制造，其對pvdf進(jìn)行親水改性，制備工藝復(fù)雜，成本高昂。而國內(nèi)制備的pvdf膜很少能達(dá)到與國外膜在用于蛋白免疫印跡時(shí)相同的蛋白轉(zhuǎn)印效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種聚偏二氟乙烯微孔濾膜的用途及蛋白免疫印跡方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的國內(nèi)制備的pvdf膜用于蛋白免疫印跡中蛋白轉(zhuǎn)印效果不及國外制備的pvdf膜，且成本高昂等問題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的及相關(guān)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明第一方面提供一種聚偏二氟乙烯微孔濾膜作為蛋白免疫印跡的固相載體的用途，包括：聚偏二氟乙烯微孔濾膜在蛋白免疫印跡過程中作為固相載體對微克級別含量的蛋白樣本進(jìn)行高靈敏度檢測，并獲得清晰蛋白條帶；

4、聚偏二氟乙烯微孔濾膜通過如下方法制得：

5、(1)在第一溫度下，將聚偏二氟乙烯溶于溶劑中并加入添加劑，混合得到料液，將料液降溫至第二溫度，得到鑄膜液；

6、(2)將鑄膜液制備形成液態(tài)膜；

7、(3)將液態(tài)膜進(jìn)行蒸汽誘導(dǎo)相分離后，浸入凝固浴中凝固成型，制得聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

8、于本申請一實(shí)施例中，第一溫度為40～80℃；和/或，第二溫度為30～60℃。

9、于本申請一實(shí)施例中，步驟(1)料液中，聚偏二氟乙烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10～30wt％；

10、和/或，溶劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50～80wt％；

11、和/或，添加劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0～20wt％。

12、于本申請一實(shí)施例中，溶劑包括n,n-二甲基乙酰胺、n,n-甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、磷酸三乙酯、2-吡咯烷酮中的一種或多種。

13、于本申請一實(shí)施例中，添加劑包括甲醇、乙醇、甘油、異丙醇、正丁醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、乙二醇甲醚、乙二醇二甲醚、水中的一種或多種。

14、于本申請一實(shí)施例中，步驟(3)包括：將液態(tài)膜置于低溫低濕環(huán)境中進(jìn)行蒸汽誘導(dǎo)相分離，低溫低濕環(huán)境的溫度為10～30℃，相對濕度為40～80rh％。

15、于本申請一實(shí)施例中，步驟(3)中蒸汽誘導(dǎo)的時(shí)間為120～600s。

16、于本申請一實(shí)施例中，第二溫度進(jìn)一步優(yōu)選為30～50℃。

17、于本申請一實(shí)施例中，步驟(3)包括：浸入凝固浴中凝固成型，清洗，干燥，制得聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

18、本發(fā)明第二方面提供一種蛋白免疫印跡方法，包括：將蛋白樣品在固相載體上進(jìn)行電泳分離并轉(zhuǎn)印，最后通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測和分析，固相載體為具有上述用途的聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

19、本發(fā)明的有益技術(shù)效果在于：

20、本發(fā)明首先通過降低料液溫度，保證料液體系處于一個亞穩(wěn)態(tài)狀態(tài)；然后，在低溫低濕條件下，利用非溶劑蒸汽誘導(dǎo)使膜發(fā)生結(jié)晶分相，生成球晶和棒狀短纖結(jié)晶；最后，浸入凝固浴中交換出溶劑等其他組分，從而制得聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

21、本發(fā)明采用簡單工藝制備的聚偏二氟乙烯微孔濾膜在短時(shí)快速的蛋白免疫印跡過程中能作為固相載體對微克級別含量的蛋白樣本進(jìn)行高靈敏度檢測，并獲得清晰蛋白條帶，蛋白轉(zhuǎn)印效果好，檢測效果的提升尤為顯著。

22、應(yīng)當(dāng)理解的是，以上的一般描述和后文的細(xì)節(jié)描述僅是示例性和解釋性的，并不能限制本申請。

技術(shù)特征：

1.一種聚偏二氟乙烯微孔濾膜作為蛋白免疫印跡的固相載體的用途，其特征在于，所述聚偏二氟乙烯微孔濾膜表面具有球晶和棒狀短纖結(jié)晶且無致密皮層，所述用途包括：所述聚偏二氟乙烯微孔濾膜在蛋白免疫印跡過程中作為固相載體對微克級別含量的蛋白樣本進(jìn)行高靈敏度檢測，并獲得清晰蛋白條帶；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述第一溫度為40～80℃；和/或，所述第二溫度為30～60℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述步驟(1)料液中，聚偏二氟乙烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10～30wt％；

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述溶劑包括n,n-二甲基乙酰胺、n,n-甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、磷酸三乙酯、2-吡咯烷酮中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述添加劑包括甲醇、乙醇、甘油、異丙醇、正丁醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、乙二醇甲醚、乙二醇二甲醚、水中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述步驟(3)包括：將所述液態(tài)膜置于低溫低濕環(huán)境中進(jìn)行蒸汽誘導(dǎo)相分離，所述低溫低濕環(huán)境的溫度為10～30℃，相對濕度為40～80rh％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述步驟(3)中蒸汽誘導(dǎo)的時(shí)間為120～600s。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述第二溫度為30～50℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述步驟(3)包括：浸入凝固浴中凝固成型，清洗，干燥，制得所述聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

10.一種蛋白免疫印跡方法，其特征在于，包括：將蛋白樣品在固相載體上進(jìn)行電泳分離并轉(zhuǎn)印，最后通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測和分析，所述固相載體為具有權(quán)利要求1～9任一項(xiàng)所述用途的所述聚偏二氟乙烯微孔濾膜。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于蛋白轉(zhuǎn)印技術(shù)領(lǐng)域，提供一種聚偏二氟乙烯微孔濾膜的用途及蛋白免疫印跡方法，該聚偏二氟乙烯微孔濾膜表面具有球晶和棒狀短纖結(jié)晶且無致密皮層，用途包括聚偏二氟乙烯微孔濾膜在蛋白免疫印跡過程中作為固相載體對微克級別含量的蛋白樣本進(jìn)行高靈敏度檢測，并獲得清晰蛋白條帶；聚偏二氟乙烯微孔濾膜通過如下方法制得：在第一溫度下，將聚偏二氟乙烯溶于溶劑中并加入添加劑，混合得到料液，將料液降溫至第二溫度，得到鑄膜液；將鑄膜液制備形成液態(tài)膜；將液態(tài)膜進(jìn)行蒸汽誘導(dǎo)相分離后，浸入凝固浴中凝固成型，制得聚偏二氟乙烯微孔濾膜。本發(fā)明制備的聚偏二氟乙烯微孔濾膜在蛋白免疫印跡過程中蛋白轉(zhuǎn)印效果好，檢測效果的提升尤為顯著。

技術(shù)研發(fā)人員：張小明,熊青山,李倩,趙新振
受保護(hù)的技術(shù)使用者：邁博瑞生物膜技術(shù)（南通）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19