植物萃取液中活性成分的篩選方法及專用電泳分離裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，包括下列步驟：①將蛋白質與植物萃取液于緩沖溶液中在37℃下孵化30分鐘，使植物萃取液中的活性成分與蛋白質發(fā)生特異性結合；②將步驟①的混合溶液加入專用電泳分離裝置的樣品室中，緩沖溶液加入其它室中，電極室分別放入鉑片電極；③打開緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)、冷凝系統(tǒng)，打開電源供應系統(tǒng)使其在分離通道內形成電場；④蛋白質-活性成分復合物在電場作用下由樣品室遷移到接收室中，植物萃取液中除活性成分外的其他成分停留在樣品室中；⑤將樣品室和接收室中的組分做進一步分析，得到植物萃取液中的活性成分，達到篩選出植物萃取液中活性成分的目的。本發(fā)明還公開了上述方法中專用電泳分離裝置。
【專利說明】
植物萃取液中活性成分的篩選方法及專用電泳分離裝置

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用電泳技術和靶分子親和技術篩選植物萃取液中活性成分的方法及專用裝置，具體是指一種植物萃取液中活性成分的篩選方法及專用電泳分離裝置。

【背景技術】
[0002]目前，從天然植物中篩選生物活性成分已經成為新藥開發(fā)的重要途徑，如何從復雜的植物基質中快速、高效的篩選出活性成分，是現(xiàn)代藥物研究的重要領域之一。傳統(tǒng)的篩選技術需要重復的分離和純化步驟，費時、費力、效率低。近年來，靶分子親和技術因其快速、高效、特異性強等特點在藥物篩選領域得到快速發(fā)展。在此基礎上發(fā)展起來的藥物篩選技術有親和色譜技術、超濾技術、磁珠篩選技術、中空纖維篩選技術等，但是這些技術存在酶固定化降低酶的活性、酶-活性成分復合物分離過程復雜影響篩選結果等缺點?；谝陨暇窒蓿枰_發(fā)一種無需酶的固定化、篩選過程中使酶處于生理環(huán)境下、操作簡單且能快速分離酶-活性成分復合物與植物萃取液中除活性成分外的其他成分的技術。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有藥物篩選技術中酶固定化降低酶的活性、酶-活性成分復合物分離過程復雜影響篩選結果等不足，而提供了一種植物萃取液中活性成分的篩選方法及專用電泳分離裝置。本發(fā)明無需酶的固定化，在接近生理環(huán)境下，利用電場將蛋白質-活性成分的復合物與植物萃取液中除活性成分外的其他成分快速分離。
[0004]為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案如下:
一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，包括下列步驟:
①將蛋白質與植物萃取液于緩沖溶液中在37°C下孵化30分鐘，使植物萃取液中的活性成分與蛋白質發(fā)生特異性結合，形成蛋白質-活性成分復合物；
②將蛋白質與植物萃取液孵化后的混合溶液加入專用電泳分離裝置的樣品室中，緩沖溶液加入電泳分離裝置的正極室、正接收室、負接收室、負極室中，正極室和負極室分別放入有連接電源的鉬片電極；
③打開電泳分離裝置的緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)、冷凝系統(tǒng)，打開電源供應系統(tǒng)使其在分離通道內形成電場；
④蛋白質-活性成分復合物在電場作用下由樣品室遷移到接收室中，植物萃取液中除活性成分外的其他成分停留在樣品室中；
⑤將樣品室和接收室中的組分做進一步分析，得到植物萃取液中的活性成分。
[0005]所述的緩沖溶液的PH值為6 — 8。
[0006]所述的將樣品室和接收室中的組分做液相色譜一串聯(lián)質譜和核磁共振波譜進一步分析，得到植物萃取液中的活性成分。
[0007]所述電場的提供方式為直流電源。
[0008]一種專用電泳分離裝置，由緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、冷卻分離系統(tǒng)的冷凝系統(tǒng)和電源供應系統(tǒng)構成，所述的的分離系統(tǒng)依次由正極室、正接收室、樣品室、負接收室和負極室五個室組成，形成分離通道，其中的樣品室與正接收室、負接收室之間分別由醋酸纖維素膜隔開，正極室與正接收室之間、負極室與負接收室之間分別由超濾膜隔開，正極室和負極室分別開有與緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)連接的緩沖溶液入口和緩沖溶液出口，正極室和負極室分別放入有連接電源供應系統(tǒng)的鉬片電極。
[0009]所述的緩沖溶液入口設在正極室和負極室的一側下方，所述的緩沖溶液出口設在正極室和負極室相對應的另一側上方。
[0010]本發(fā)明篩選植物萃取液中活性成分的機理:孵化過程中蛋白質與植物萃取液中的活性成分發(fā)生特異性結合形成蛋白質-活性成分復合物，即靶分子親和技術。蛋白質在具有不同于其等電點的pH值的緩沖溶液中帶有電荷，因此蛋白質-活性成分復合物帶有相同電荷。施加電壓后，帶有電荷的蛋白質-活性成分復合物會發(fā)生遷移即電泳技術。蛋白質-活性成分復合物由樣品室穿過醋酸纖維素膜向接收室遷移，并且由于超濾膜的截留作用，蛋白質-活性成分復合物不會遷移到電極室而停留在接收室中，植物萃取液中除活性成分外的其他成分不受電場作用而停留在樣品室中，進而分離了蛋白質-活性成分復合物和植物萃取液中除活性成分外的其他成分，達到篩選出植物萃取液中活性成分的目的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1為本發(fā)明專用電泳分離裝置的示意圖。
[0012]圖2為本發(fā)明專用電泳分離裝置中的分離系統(tǒng)結構示意圖。

【具體實施方式】
[0013]在圖1和圖2中，1.緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)，2.泵，3.分離系統(tǒng)，4.冷凝系統(tǒng)，5.電源供應系統(tǒng)，6.有機玻璃夾板，7.正極室，8.正接收室，9.樣品室，10.負接收室，11.負極室，12.醋酸纖維素膜，13.超濾膜，14a.鉬片正電極、14b.鉬片負電極，15.緩沖溶液入口，16.緩沖溶液出口，17.螺桿，18.螺母。
[0014]參考圖1和圖2，一種多室電泳分離裝置，由緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)1、分離系統(tǒng)3、冷卻分離系統(tǒng)的冷凝系統(tǒng)4和電源供應系統(tǒng)5構成。其分離系統(tǒng)3依次由正極室7、正接收室
8、樣品室9、負接收室10、負極室11五個室組成，樣品室9與正接收室8之間、樣品室9與負接收室10之間分別由醋酸纖維素膜12隔開，正極室7與正接收室8之間、負極室11與負接收室10之間分別由超濾膜13隔開，正極室7與負極室11的一側下方各設有緩沖溶液入口 15，相對應的另一側上方各設有緩沖溶液出口 16，用于緩沖溶液的循環(huán)。正極室7和負極室11分別放入有連接電源供應系統(tǒng)的鉬片正電極14a和鉬片負電極14b。正極室7和負極室11外側各有一塊有機玻璃夾板6，且兩塊有機玻璃夾板6兩側各有螺桿17連接，并由螺母18用于固定。緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)I由裝有緩沖溶液的容器、循環(huán)管道、管道上設置的泵2構成，與分離系統(tǒng)3的緩沖溶液入口 15、緩沖溶液出口 16相連通形成回路。
[0015]利用上述專用電泳分離裝置而公開的一種篩選植物萃取液中活性成分的方法，該方法利用電場在接近生理環(huán)境下將蛋白質-活性成分的復合物與植物萃取液中除活性成分外的其他成分分離，以蛋白質在磷酸鹽緩沖溶液中帶負電荷、所選植物為丹參為例說明。具體實驗過程如下:①取干燥的丹參粗粉lg，用10ml、50%的甲醇超聲萃取兩次，合并萃取液，旋轉蒸發(fā)，將得到的殘余液溶于20ml磷酸鹽緩沖溶液，得到丹參萃取液；將蛋白質與丹參萃取液于緩沖溶液中在37°C下孵化30分鐘，緩沖溶液的PH值為6 — 8，使植物萃取液中的活性成分與蛋白質發(fā)生特異性結合，形成蛋白質-活性成分復合物；②將孵化后的混合溶液由微量注射器引入樣品室9中，緩沖溶液引入其他室中，鉬片正電極14a、鉬片負電極14b分別放入正極室7和負極室11中開啟泵2打開緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)1，打開冷凝系統(tǒng)4，打開電源供應系統(tǒng)5在分離通道內形成電場，所述電場的提供方式為直流電源；④蛋白質-活性成分復合物在電場作用下由樣品室9穿過醋酸纖維素膜12遷移到正接收室8中，丹參萃取液中除活性成分外的其他成分停留在樣品室9中；⑤將樣品室9和正接收室8中的組分用液相色譜一串聯(lián)質譜和核磁共振波譜做進一步分析，得到丹參萃取液中的活性成分。
【權利要求】
1.一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，包括下列步驟: ①將蛋白質與植物萃取液于緩沖溶液中在37°C下孵化30分鐘，使植物萃取液中的活性成分與蛋白質發(fā)生特異性結合，形成蛋白質-活性成分復合物； ②將蛋白質與植物萃取液孵化后的混合溶液加入專用電泳分離裝置的樣品室中，緩沖溶液加入電泳分離裝置的正極室、正接收室、負接收室、負極室中，正極室和負極室分別放入有連接電源的鉬片電極； ③打開電泳分離裝置的緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)、冷凝系統(tǒng)，打開電源供應系統(tǒng)使其在分離通道內形成電場； ④蛋白質-活性成分復合物在電場作用下由樣品室遷移到接收室中，植物萃取液中除活性成分外的其他成分停留在樣品室中； ⑤將樣品室和接收室中的組分做進一步分析，得到植物萃取液中的活性成分。
2.根據權利要求1所述的一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，其特征在于所述的緩沖溶液PH值為6 — 8。
3.根據權利要求1所述的一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，其特征在于所述的將樣品室和接收室中的組分做液相色譜一串聯(lián)質譜和核磁共振波譜進一步分析，得到植物萃取液中的活性成分。
4.根據權利要求1所述的一種植物萃取液中活性成分的篩選方法，其特征在于所述電場的提供方式為直流電源。
5.一種如權利要求1所述的專用電泳分離裝置，其特征在于由緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、冷卻分離系統(tǒng)的冷凝系統(tǒng)和電源供應系統(tǒng)構成，所述的的分離系統(tǒng)依次由正極室、正接收室、樣品室、負接收室和負極室五個室組成，形成分離通道，其中的樣品室與正接收室、負接收室之間分別由醋酸纖維素膜隔開，正極室與正接收室之間、負極室與負接收室之間分別由超濾膜隔開，正極室和負極室分別開有與緩沖溶液循環(huán)系統(tǒng)連接的緩沖溶液入口和緩沖溶液出口，正極室和負極室分別放入有連接電源供應系統(tǒng)的鉬片電極。
6.根據權利要求5所述的一種專用電泳分離裝置，其特征在于所述的緩沖溶液入口設在正極室和負極室的一側下方，所述的緩沖溶液出口設在正極室和負極室相對應的另一側上方。
【文檔編號】B01D57/02GK104307368SQ201410611855
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月5日 優(yōu)先權日:2014年11月5日
【發(fā)明者】李東浩, 夏曉玉, 王治國, 樸相范 申請人:延邊大學