加熱的色譜分離方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸（PUFA）產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括使進(jìn)料混合物通過(guò)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱，其中，進(jìn)料混合物通過(guò)至少一個(gè)色譜柱的溫度比室溫更高。
【專利說(shuō)明】加熱的色譜分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及純化多元不飽和脂肪酸(PUFA)及其衍生物的改進(jìn)的色譜分離方法。特別是，本發(fā)明涉及允許待使用的洗脫液的量減少的改進(jìn)的色譜分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪酸(特別是PUFA)及其衍生物是生物學(xué)上重要分子的前體，它們?cè)谡{(diào)節(jié)諸如血小板聚集、炎癥和免疫反應(yīng)等生物學(xué)功能中起著重要作用。因此，PUFA及其衍生物可在治療上可用于治療廣泛的病理病癥，這病理病癥包括CNS病癥、包括糖尿病性神經(jīng)病變的神經(jīng)病變、心血管疾病、包括炎性皮膚疾病的全身免疫系統(tǒng)和炎癥病癥。
[0003]在諸如蔬菜油和海洋油等天然進(jìn)料中發(fā)現(xiàn)PUFA。然而，這些PUFA經(jīng)常以飽和脂肪酸和許多其他雜質(zhì)的摻和劑存在于這些油中。因此，在用于營(yíng)養(yǎng)或用于藥物之前，應(yīng)該對(duì)PUFA進(jìn)行合意的純化。
[0004]不幸的是，PUFA極易被破壞。因此，當(dāng)在氧存在下加熱時(shí)，它們易于發(fā)生異構(gòu)化反應(yīng)、過(guò)氧化反應(yīng)和低聚反應(yīng)。因此，難以通過(guò)PUFA產(chǎn)物的分餾和純化來(lái)制備純脂肪酸。即使在真空條件下蒸餾也可能導(dǎo)致不可接受的產(chǎn)物降解。
[0005]色譜分離技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。涉及固定床系統(tǒng)和模擬或真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)的色譜分離技術(shù)均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉。
[0006]在常規(guī)的固定床色譜系統(tǒng)中，其組分待分離的混合物滲透通過(guò)容器。該容器一般是圓柱形的，并且通常被稱為柱。該柱含有對(duì)流體表現(xiàn)出高滲透率的多孔材料的填料(一般稱為固定相)?；旌衔镏懈鹘M分的滲透速度取決于該組分的物理性質(zhì)，從而使得組分接連地且優(yōu)選地從柱中出來(lái)。因此，一些組分趨向于牢固地固定到固定相，并且因此將緩慢地滲出，然而其他組分趨向于薄弱地固定并更快速地從柱中出來(lái)。已經(jīng)提出許多不同的固定床色譜系統(tǒng)并且這些固定床色譜系統(tǒng)均被用于分析目的和工業(yè)生產(chǎn)目的。
[0007]模擬和真實(shí)移動(dòng)床色譜是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的已知技術(shù)。操作原理涉及液體洗脫液相和固體吸附劑相的逆流移動(dòng)。該操作允許溶劑的最小用量，從而使得該方法經(jīng)濟(jì)可行。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種分離技術(shù)在不同領(lǐng)域中的若干應(yīng)用，這些領(lǐng)域包括碳?xì)浠衔?、工業(yè)化學(xué)品、油、糖和API。
[0008]因此，模擬移動(dòng)床系統(tǒng)由含有串聯(lián)連接在一起的吸附劑的若干獨(dú)立的柱組成。在第一方向上洗脫液通過(guò)該柱。在系統(tǒng)中原料和洗脫液的注入點(diǎn)和已分離組分的收集點(diǎn)依靠一系列閥門而周期性地移動(dòng)。整體效應(yīng)將模擬含有固體吸附劑的移動(dòng)床的單一柱的操作，固體吸附劑在洗脫液的流動(dòng)的逆流方向上移動(dòng)。因此，如常規(guī)的固定床系統(tǒng)中的，模擬移動(dòng)床系統(tǒng)由含有洗脫液通過(guò)的固體吸附劑的固定床的柱組成；但在模擬移動(dòng)床系統(tǒng)中，該操作達(dá)到模擬連續(xù)逆流移動(dòng)床的程度。
[0009]參照?qǐng)D1，示出了典型的模擬移動(dòng)床色譜設(shè)備。通過(guò)考慮含有被分成多段(section)(更精確地說(shuō)，從柱的底部到頂部被分成四個(gè)重疊的子區(qū)域1、I1、III和IV)的固定相S的豎直的色譜柱來(lái)解釋模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜分離方法的概念。借助于泵P在底部的IE處引入該洗脫液。在子區(qū)域II和子區(qū)域III之間的IA+B處引入待分離的組分A和B的混合物。在子區(qū)域I和子區(qū)域II之間的SB處收集主要含有B的提取物，并且在子區(qū)域III和子區(qū)域IV之間的SA處收集主要含有A的提余物。
[0010]在模擬移動(dòng)床系統(tǒng)的情況下，通過(guò)弓I入點(diǎn)和收集點(diǎn)相對(duì)于固體相的移動(dòng)來(lái)弓I起固定相S的模擬向下移動(dòng)。在真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)的情況下，通過(guò)多個(gè)色譜柱相對(duì)于引入點(diǎn)和收集點(diǎn)的移動(dòng)來(lái)引起固定相S的模擬向下移動(dòng)。在圖1中，洗脫液向上流動(dòng)，并且混合物A+B注入到子區(qū)域II和子區(qū)域III之間。組分將根據(jù)它們與固定相的色譜相互作用(例如在多孔介質(zhì)上的吸附)而移動(dòng)。對(duì)固定相表現(xiàn)出較強(qiáng)的親和力的組分B (運(yùn)動(dòng)較慢的組分)將會(huì)較慢地被洗脫液夾帶并且將會(huì)由延遲地跟隨著洗脫液。對(duì)固定相表現(xiàn)出較弱的親和力的組分A (運(yùn)動(dòng)較快的組分)將會(huì)容易地被洗脫液夾帶。如果恰當(dāng)?shù)毓烙?jì)和控制參數(shù)的合適設(shè)置(特別是在每個(gè)子區(qū)域中的流速)，那么將在子區(qū)域III和子區(qū)域IV之間收集展示對(duì)固定相的較弱親合性的組分A作為提余物，并且在子區(qū)域I和子區(qū)域II之間收集展示對(duì)固定相的較強(qiáng)親合性的組分B作為提取物。
[0011]因此，應(yīng)當(dāng)理解的是，示意性示出在圖1中的常規(guī)的移動(dòng)床系統(tǒng)僅限于二元分餾。
[0012]在下列若干專利中描述了用于模擬移動(dòng)床色譜的方法和裝置，這些專利包括:US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148 和FR-A-2651149,通過(guò)引用將這些專利的全文并入本文中。該主題還在Ganetsos和Barker編輯的“Preparative and Production Scale Chromatography，，, Marcel Dekker Inc, NewYork, 1993中得以充分論述，通過(guò)引用將其全文并入本文中。
[0013]真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)在操作上類似于模擬移動(dòng)床系統(tǒng)。然而，不是借助于閥門系統(tǒng)來(lái)變換進(jìn)料混合物和洗脫液的注入點(diǎn)與被分離開(kāi)的組分的收集點(diǎn)，而是使一系列吸附部件(即，柱)相對(duì)于進(jìn)料點(diǎn)和排出點(diǎn)進(jìn)行物理移動(dòng)。再者，操作達(dá)到模擬連續(xù)的逆流的移動(dòng)床的程度。
[0014]在以下若干專利中描述了真實(shí)移動(dòng)床色譜的方法和裝置，這些專利包括:US6979402、US5069883和US4764276，通過(guò)引用將這些專利并入本文中。
[0015]PUFA產(chǎn)物的純化特別有挑戰(zhàn)性。因此，用于制備PUFA產(chǎn)物的許多合適的原料是極其復(fù)雜的混合物，該極其復(fù)雜的混合物含有大量在色譜設(shè)備中具有非常相似的保留時(shí)間的不同組分的。因此，非常難以將治療上有用的PUFA與這些原料分離。然而，特別是對(duì)于藥物應(yīng)用和營(yíng)養(yǎng)食品應(yīng)用來(lái)講，需要高純度的PUFA產(chǎn)物。因此歷史上，當(dāng)需要高純度PUFA產(chǎn)物時(shí)，已經(jīng)使用了蒸餾。然而，如上所討論，使用蒸餾作為用于難以處理的PUFA的分離技術(shù)具有顯著的缺點(diǎn)。
[0016]一般而言，分離PUFA的所有色譜分離技術(shù)利用大體積的有機(jī)溶劑作為洗脫液。在完成色譜分離方法后，必須從洗脫液中的溶液中回收PUFA。典型地，巨大支出的時(shí)間和精力涉及到從洗脫液中的溶液中回收PUFA。而且，用作色譜分離方法中的洗脫液的有機(jī)溶劑經(jīng)常有害于環(huán)境或處理它們的技工。因此，需要待使用的有機(jī)溶劑的量減少的色譜分離方法。
[0017]如上所述，含有PUFA的合適的商業(yè)原料，例如魚(yú)油，典型地含有在色譜設(shè)備中具有非常相似的保留時(shí)間的大量的不同組分。因此，也需要提高在具有相似的保留時(shí)間的進(jìn)料混合物的組分之間的分辨率的色譜分離方法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0018]已經(jīng)有利地發(fā)現(xiàn)，在室溫以上的溫度下所進(jìn)行的色譜分離方法需要較少的有機(jī)溶劑洗脫液。因此，在高溫(elevated temperature)下,基本上減少了商業(yè)上關(guān)注的很多PUFA的保留時(shí)間，反過(guò)來(lái)，意味著較少的有機(jī)溶劑洗脫液必須用于分離含有各種不同的PUFA的混合物，例如魚(yú)油原料，或魚(yú)油衍生的原料。
[0019]已經(jīng)有利地發(fā)現(xiàn)，使用含水有機(jī)溶劑來(lái)提高色譜分離方法中使用的水的量提高了存在于具有相似的保留時(shí)間的進(jìn)料混合物中的組分的分辨率。這意味著具有較高的水含量的洗脫液允許PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物較干凈地分離。
[0020]因此，本發(fā)明提供了從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括進(jìn)料混合物通過(guò)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱，
[0021]其中，進(jìn)料混合物通過(guò)色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于室溫。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1示出用于分離二元混合物的模擬或真實(shí)移動(dòng)床方法的基本原理。
[0023]圖2示出適合于將EPA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】。
[0024]圖3示出適合于將DHA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】。
[0025]圖4更詳細(xì)地示出適合于將EPA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】。
[0026]圖5更詳細(xì)地示出適合于將DHA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】。
[0027]圖6更詳細(xì)地示出適合于將EPA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的第一優(yōu)選的實(shí)施方式的替代方法。
[0028]圖7更詳細(xì)地示出適合于將DHA與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的本發(fā)明的第二優(yōu)選的實(shí)施方式的替代方法。
[0029]圖8示出用于純化與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的EPA的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】。
[0030]圖9示出用于純化與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的EPA的本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】的替代方法。
[0031]圖10示出可以進(jìn)行本發(fā)明的色譜分離方法的一個(gè)【具體實(shí)施方式】的三種方式。
[0032]圖11顯示用于純化與運(yùn)動(dòng)較快和較慢的組分(S卩，極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離的EPA的進(jìn)一步的實(shí)施方式。
[0033]圖12顯示按照本發(fā)明所生產(chǎn)的EPA PUFA的GC FAMES跡線(traces)。
[0034]圖13顯示按照本發(fā)明所生產(chǎn)的EPA PUFA的GC FAMES跡線。
【具體實(shí)施方式】
[0035]如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“PUFA產(chǎn)物”是指包含一種或多種的典型地具有營(yíng)養(yǎng)或藥物重要性的多元不飽和脂肪酸(PUFA)和/或其衍生物的產(chǎn)物。典型地，PUFA產(chǎn)物是單一的PUFA或其衍生物?；蛘撸琍UFA產(chǎn)物是兩種或更多種PUFA或其衍生物，例如兩種PUFA或其衍生物的混合物。
[0036]術(shù)語(yǔ)“多元不飽和脂肪酸”(PUFA)是指含有多于一個(gè)雙鍵的脂肪酸。這種PUFA為本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知。如本文所用的，PUFA衍生物是甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯、酯、磷脂、酰胺、內(nèi)酯或鹽形式的PUFA。甘油三酯和酯是優(yōu)選的。酯是更優(yōu)選的。酯典型地為烷基酯，優(yōu)選C1-C6的烷基酯，更優(yōu)選C1-C4的烷基酯。酯的實(shí)例包括甲酯和乙酯。乙酯是最優(yōu)選的。
[0037]典型地，PUFA產(chǎn)物含有至少一種ω-3或co-6PUFA，優(yōu)選至少一種(0-3PUFA。co-3PUFA的實(shí)例包括α -亞麻酸(ALA)、十八碳四烯酸(SDA)、二十碳三烯酸(ΕΤΕ)、二十碳四烯酸(ETA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。優(yōu)選SDA、EPA、DPA和DHA。更優(yōu)選EPA和DHA。(0-6PUFA的實(shí)例包括亞油酸(LA)、Y -亞麻酸(GLA)、二十碳二烯酸、二高-Y-亞麻酸(DGLA)、花生四烯酸(ARA)、二十二碳二烯酸、腎上腺酸以及二十二碳五(ω -6)烯酸。優(yōu)選LA、ARA, GLA和DGLA。
[0038]在一個(gè)實(shí)施方式中，PUFA產(chǎn)物是EPA和/或EPA乙酯(EE)。
[0039]在另一個(gè)實(shí)施方式中，PUFA產(chǎn)物是DHA和/或DHA乙酯(EE)。
[0040]在又一個(gè)實(shí)施方式中，PUFA產(chǎn)物是EPA和DHA和/或EPA EE和DHA EE的混合物。
[0041]在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，PUFA產(chǎn)物是EPA或EPA乙酯，所生產(chǎn)的EPA或EPA乙酯的純度為大于90%的純度，優(yōu)選為大于95%的純度，并且更優(yōu)選為大于97%的純度。
[0042]典型地，除了所述PUFA產(chǎn)物，在本發(fā)明的色譜分離方法中收集另外的次要PUFA產(chǎn)物。優(yōu)選地，PUFA產(chǎn)物是ΕΡΑ，并且另外的次要PUFA產(chǎn)物是DHA。
[0043]在本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該設(shè)備配置為收集PUFA產(chǎn)物，該P(yáng)UFA產(chǎn)物是EPA和DHA的濃縮混合物。因此，使用含有EPA、DHA,比EPA和DHA極性更大的組分以及比EPA和DHA極性更小的組分的進(jìn)料混合物。在第一分離步驟中，典型地移出比EPA和DHA極性更小的材料。在第二分離步驟中，典型地移出比EPA和DHA極性更大的材料，并且收集EPA和DHA的濃縮混合物作為PUFA產(chǎn)物。
[0044]適用于通過(guò)本發(fā)明的方法分餾的進(jìn)料混合物可以從包括植物和動(dòng)物油和脂肪的天然來(lái)源中和從包括基因修飾的植物、動(dòng)物和包括酵母的微生物的合成來(lái)源中獲得。實(shí)例包括魚(yú)油、藻油和微藻油以及植物油，例如琉璃苣油，藍(lán)薊油和月見(jiàn)草油。在一個(gè)實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物是魚(yú)油。在另一個(gè)實(shí)施方式，進(jìn)料混合物是藻油。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是EPA和/或DHA時(shí)，藻油特別合適。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是GLA時(shí)，基因修飾的紅花油特別合適。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是EPA時(shí)，基因修飾的酵母特別合適。
[0045]在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物是魚(yú)油或魚(yú)油衍生的原料。已經(jīng)有利地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用魚(yú)油或魚(yú)油衍生的原料時(shí)，通過(guò)本發(fā)明的方法可以大于90%的純度，優(yōu)選為大于95%的純度，并且更優(yōu)選為大于97%的純度生產(chǎn)EPA或EPA乙酯PUFA產(chǎn)物。
[0046]在通過(guò)本發(fā)明的方法分餾之前，進(jìn)料混合物可以經(jīng)歷化學(xué)處理。例如，它可以經(jīng)歷甘油酯交換或甘油酯水解，在某些情況下，接著經(jīng)歷選擇性方法，諸如結(jié)晶、分子蒸餾、尿素分餾、硝酸銀或其他金屬鹽溶液的萃取、碘內(nèi)酯化反應(yīng)或超臨界流體分餾?；蛘?，進(jìn)料混合物可以直接使用而沒(méi)有初始處理步驟。[0047]進(jìn)料混合物典型地含有PUFA產(chǎn)物以及至少一種極性較大的組分和至少一種極性較小的組分。極性較小的組分相比PUFA產(chǎn)物對(duì)本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有更強(qiáng)的吸附力。在操作期間，這種極性較小的組分典型地優(yōu)先于液體洗脫液相而隨著固體吸附劑相移動(dòng)。極性較大的組分相比PUFA產(chǎn)物對(duì)本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有更弱的吸附力。在操作期間，這種極性較大的組分典型地優(yōu)先于固體吸附劑相而隨著液體洗脫液相移動(dòng)。一般而言，極性較大的組分將分離進(jìn)入提余物流，而極性較大的組分將分離進(jìn)入提取物流。
[0048]極性較大和極性較小的組分的實(shí)例包括(I)存在于天然油(例如，海洋油或植物油)中的其他組分，(2)貯藏、精煉和在先前濃縮步驟期間形成的副產(chǎn)物以及(3)來(lái)自先前濃縮或純化步驟期間利用的溶劑或試劑的污染物。
[0049](I)的實(shí)例包括其他不需要的PUFA ;飽和脂肪酸；固醇，例如膽固醇；維生素；以及環(huán)境致污物，諸如多氯聯(lián)苯(PCB)、聚芳烴(PAH)殺蟲(chóng)劑、有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑、二噁英和重金屬。PCB、PAH、二噁英和有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑都是高度非極性的組分。
[0050](2)的實(shí)例包括來(lái)自PUFA產(chǎn)物的同分異構(gòu)體以及氧化或分解產(chǎn)物，例如，脂肪酸及其衍生物的自氧化聚合產(chǎn)物。
[0051](3)的實(shí)例包括可以加入以從進(jìn)料混合物中移出飽和或單一不飽和脂肪酸的尿素。
[0052]優(yōu)選地，進(jìn)料混合物是含PUFA的海洋油(例如，魚(yú)油)，更優(yōu)選的是包含EPA和/或DHA的海洋油(例如，魚(yú)油)。
[0053]通過(guò)本發(fā)明的方法制備濃縮的EPA (EE)的典型的進(jìn)料混合物包含50?75%的EPA (EE),O?10%的DHA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。
[0054]通過(guò)本發(fā)明的方法制備濃縮EPA (EE)的優(yōu)選的進(jìn)料混合物包括:55%的EPA (EE),5%的DHA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。DHA (EE)比EPA(EE)極性更小。
[0055]通過(guò)本發(fā)明的方法制備濃縮DHA (EE)的典型的進(jìn)料混合物包括:55?75%的DHA(EE),O?10%的EPA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。
[0056]通過(guò)本發(fā)明的方法制備濃縮DHA (EE)的優(yōu)選的進(jìn)料混合物包括:75%的DHA (ΕΕ)、7%的EPA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。EPA (EE)比DHA(EE)極性更大。
[0057]通過(guò)本發(fā)明的方法制備EPA (EE)和DHA (EE)的濃縮混合物的典型的進(jìn)料混合物包括:大于33%的EPA (EE)和大于22%的DHA (ΕΕ)。
[0058]典型地，本發(fā)明的方法中使用的所有色譜柱的溫度大于室溫。
[0059]如將理解的是，在大于室溫的溫度下至少一個(gè)色譜柱中，柱的內(nèi)部對(duì)分離方法來(lái)說(shuō)是重要的。因此，典型地，色譜柱里面的含水有機(jī)溶劑洗脫液和吸附劑的溫度大于室溫。當(dāng)然，可以通過(guò)內(nèi)部機(jī)構(gòu)(例如通過(guò)加熱洗脫液和/或進(jìn)料混合物)和/或外部機(jī)構(gòu)(例如通過(guò)用任何已知傳統(tǒng)機(jī)構(gòu)加熱色譜柱的外面)在至少一個(gè)色譜柱里面獲取所需的溫度。
[0060]典型地，通過(guò)加熱含水有機(jī)溶劑洗脫液和/或進(jìn)料混合物來(lái)獲取加熱后的色譜柱的所需高溫。這具有內(nèi)部加熱柱的效果。
[0061]因此，進(jìn)料混合物通過(guò)色譜柱中的至少一個(gè)的溫度也可以測(cè)量為含水有機(jī)溶劑洗脫液的溫度。
[0062]因此，本發(fā)明也提供了從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括使進(jìn)料混合物通過(guò)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱，
[0063]其中，如本文所定義的，洗脫液的溫度高于室溫。
[0064]或者，通過(guò)加熱柱來(lái)獲取色譜柱中的至少一個(gè)的所需溫度。使用例如電加熱罩、熱水套或盤管(coil)或者通過(guò)熱輻射燈來(lái)進(jìn)行加熱。典型地加熱一個(gè)或多個(gè)色譜柱的內(nèi)部和/或外部。
[0065]可以通過(guò)加熱柱和/或含水有機(jī)溶劑洗脫液和/或進(jìn)料混合物來(lái)獲取色譜柱中的至少一個(gè)的所需溫度。
[0066]典型地，色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于30°C，優(yōu)選大于35°C，更優(yōu)選大于40°C，甚至更優(yōu)選大于45°C，甚至更優(yōu)選大于50°C，甚至更優(yōu)選大于55°C，并且甚至更優(yōu)選大于57 °C。在某些實(shí)施方式中，56 °C的溫度是有利的。
[0067]典型地，色譜柱中的至少一個(gè)的溫度為至多100°C，優(yōu)選至多95°C，更優(yōu)選至多900C，甚至更優(yōu)選至多85°C，甚至更優(yōu)選至多80°C，甚至更優(yōu)選至多75°C，并且甚至更優(yōu)選至多70°C。
[0068]典型地，色譜柱中的至少一個(gè)的典型的溫度范圍為30~100°C、35~95°C、40~90 0C >45 ~85°C、50 ~8(TC、55 ~75? 或者 57 ~7(TC。
[0069]色譜柱中的至少一個(gè)的優(yōu)選的溫度范圍為40~70°C，優(yōu)選為50~67°C，更優(yōu)選56~65°C，并且甚至更優(yōu)選57~63°C。
[0070]本發(fā)明的方法涉及使進(jìn)料混合物通過(guò)一個(gè)或多個(gè)色譜柱。任何已知的色譜柱可以用于所要求保護(hù)的方法。
[0071]一個(gè)或多個(gè)色譜柱典型地含有吸附劑。色譜分離【技術(shù)領(lǐng)域】中已知的常規(guī)吸附劑可以用于本發(fā)明的方法。當(dāng)使用多于一個(gè)色譜柱時(shí)，每個(gè)色譜柱可以含有相同的或不同的吸附劑。典型地，當(dāng)使用多于一個(gè)色譜柱時(shí)，每個(gè)柱含有相同的吸附劑。這種通常使用的材料實(shí)例是聚合物珠粒，優(yōu)選用DVB (二乙烯基苯)成網(wǎng)的聚苯乙烯；和硅膠，優(yōu)選具有C8或C18烷烴的反相鍵合的硅膠，特別是C18烷烴的反相鍵合的硅膠。優(yōu)選的是C18鍵合的反相硅膠。本發(fā)明的方法中使用的吸附劑優(yōu)選是非極性的。
[0072]吸附劑固定相材料的形狀可以是例如球形或非球形的珠粒，優(yōu)選為基本上球形的珠粒。這種珠粒的直徑典型地為5~500微米，優(yōu)選為10~500微米，更優(yōu)選為15~500微米，更優(yōu)選為40~500微米，更優(yōu)選為100~500微米，更優(yōu)選為250~500微米，更加優(yōu)選為250~400微米，最優(yōu)選為250~350微米。在一些實(shí)施方式中，可以使用的珠粒的直徑為5~35微米，典型地為10~30微米，優(yōu)選為15~25微米。一些優(yōu)選的粒徑多少比過(guò)去的模擬和真實(shí)移動(dòng)床方法中使用的珠粒的粒徑更大。使用較大顆粒能夠使較低壓力的洗脫液用于該系統(tǒng)。依次地，這在設(shè)備的成本節(jié)約、效率和壽命方面上具有優(yōu)勢(shì)。已驚奇地發(fā)現(xiàn)，大粒徑`的吸附劑珠粒可以用于本發(fā)明的方法(具有它們的相關(guān)優(yōu)勢(shì))，而在分辨率上沒(méi)有任何損失。
[0073]使用的柱的維度沒(méi)有特別受限制，并將在一定程度上取決于待純化的進(jìn)料混合物的體積。技術(shù)人員將能夠易于確定適當(dāng)大小的柱以應(yīng)用。每個(gè)柱的直徑典型地為10~1000mm,優(yōu)選為10?500mm,更優(yōu)選為25?250mm,甚至更優(yōu)選50?100mm,并最優(yōu)選為70?80mm。每個(gè)柱的長(zhǎng)度典型地為10?300cm,優(yōu)選為10?200cm,更優(yōu)選為25?150cm,甚至更優(yōu)選為70?IlOcm,并更優(yōu)選為80?100cm。
[0074]本發(fā)明的方法中使用的洗脫液是含水有機(jī)溶劑。
[0075]含水有機(jī)溶劑典型地包括水以及一種或多種醇、醚、酯、酮或腈或者其混合物。
[0076]醇溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。醇典型地為短鏈醇。醇的化學(xué)式典型地為R0H，其中，R是直鏈或支鏈Cl?C6烷基。Cl?C6烷基優(yōu)選為未取代的。醇的實(shí)例包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇和叔丁醇。優(yōu)選甲醇和乙醇。更優(yōu)選甲醇。
[0077]醚溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。醚典型地為短鏈醚。醚典型地具有化學(xué)式R-O-R'，其中R和R’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的C1?C6烷基。C1?C6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的醚包括二乙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚(MTBE)。
[0078]酯溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。酯典型地為短鏈酯。酯典型地具有化學(xué)式R-(C=O)-O-R'，其中R和R’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選的酯包括乙酸甲酯和乙酸乙酯。
[0079]酮溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。酮典型地為短鏈酮。酮典型地具有化學(xué)式R-(C=0)-R’，其中R和R’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的C1-C6烷基。C1-C6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的酮包括丙酮、甲乙酮和甲基異丁基酮(MIBK)。
[0080]腈溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。腈典型地為短鏈腈。腈典型地具有化學(xué)式R-CN，其中，R代表直鏈或支鏈的C1?C6烷基。C1?C6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的腈包括乙腈。
[0081]典型地，含水有機(jī)溶劑是含水醇或含水乙腈。
[0082]含水有機(jī)溶劑優(yōu)選為含水甲醇或含水乙腈。更優(yōu)選含水甲醇。
[0083]典型地，洗脫液不是超臨界狀態(tài)。典型地，洗脫液是液體。
[0084]典型地，整個(gè)設(shè)備中的洗脫液的平均水與有機(jī)溶劑的比例，例如水:甲醇比例，為
0.1:99.9?12:88體積份，優(yōu)選為0.25:99.75?10:90體積份，并更優(yōu)選為0.5:99.5?9:91體積份。在一些實(shí)施方式中，整個(gè)設(shè)備中的洗脫液的平均水與有機(jī)溶劑的比例，例如水:甲醇比例，優(yōu)選為0.1:99.9?9:91體積份，更優(yōu)選為0.25:99.75?7:93體積份，甚至更優(yōu)選為0.5:99.5?6:94體積份。在其他實(shí)施方式中，整個(gè)設(shè)備中的洗脫液的平均水與有機(jī)溶劑的比例，例如水:甲醇比例，優(yōu)選為4:96?12:88體積份，優(yōu)選為6:94?10:90體積份，優(yōu)選為7:93?9:91體積份，甚至優(yōu)選為7.5:92.5?8.5:91.5體積份。
[0085]當(dāng)含水有機(jī)溶劑是含水乙腈時(shí)，洗脫液典型地含有至多30wt%的水，余量為乙腈。優(yōu)選地，洗脫液含有5?25wt%的水，余量為乙腈。更優(yōu)選地，洗脫液含有10?20wt%的水，余量為乙腈。甚至更優(yōu)選地，洗脫液含有15?25wt%的水，余量為乙腈。
[0086]典型地，基于水和有機(jī)溶劑的總重量，洗脫液含有5wt%的水或更多。優(yōu)選地，洗脫液含有6wt%的水或更多，更優(yōu)選7wt%的水或更多，甚至更優(yōu)選約8wt%的水。因此,洗脫液典型地含有5?15wt%的水,優(yōu)選6?13wt%的水,更優(yōu)選7?llwt%的水,甚至更優(yōu)選
7.5?9.5wt%的水，甚至更優(yōu)選7.5?8.5wt%的水。有利地，此增加的水含量提高了存在于進(jìn)料混合物中的密切相關(guān)組分的分辨率。增加的水含量的洗脫液可以在某些環(huán)境下需要較大體積的正使用的洗脫液。在實(shí)踐中，這通過(guò)將進(jìn)料混合物通過(guò)的色譜柱中的至少一個(gè)加熱至大于室溫的溫度，優(yōu)選通過(guò)將洗脫液加熱至大于室溫的溫度而進(jìn)行彌補(bǔ)(offset)。以此方式加熱柱和/或洗脫液減少需要使用的溶劑量。
[0087]任何已知的色譜設(shè)備均可以用于本發(fā)明的方法目的，只要它涉及使進(jìn)料混合物通過(guò)一個(gè)或多個(gè)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的色譜柱，其中，進(jìn)料混合物通過(guò)的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于室溫。
[0088]在模擬或移動(dòng)床色譜設(shè)備進(jìn)行本發(fā)明的方法的每個(gè)分離步驟。
[0089]本發(fā)明的方法中使用的色譜柱數(shù)不特別受限制。在某些實(shí)施方式中，可以使用單一色譜柱。因此，這種實(shí)施方式典型地涉及單一固定柱。
[0090]在其他的實(shí)施方式中，使用多于一個(gè)色譜柱。這可以涉及使進(jìn)料混合物通過(guò)兩個(gè)或更多個(gè)串聯(lián)或并聯(lián)布置的可相同或不同的色譜柱。在此實(shí)施方式中使用的柱數(shù)不特別受限制，但是典型地不超過(guò)三十個(gè)柱。
[0091]使用多個(gè)色譜柱的一個(gè)【具體實(shí)施方式】是模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜。
[0092]因此，本發(fā)明的方法典型地包括引入進(jìn)料混合物到具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的一個(gè)或多個(gè)模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備中，其中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于室溫。
[0093]典型地，基本上所有連接的色譜柱的溫度大于室溫。優(yōu)選地，所有連接的色譜柱的溫度大于室溫。
[0094]任何已知的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備均可以用于本發(fā)明的方法的目的，只要設(shè)備按照本發(fā)明的方法使用。如果依照本發(fā)明的方法進(jìn)行配置，US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148、FR-A-2651149、US6979402、US5069883和US4764276中描述的這些設(shè)備都可以使用。
[0095]在一個(gè)實(shí)施方式中，該方法包括步驟:
[0096](i)在具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備中的第一分離步驟中，純化進(jìn)料混合物以獲得中間產(chǎn)物；以及(ii )在使用具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備的第二分離步驟中，純化(i )中獲得的中間產(chǎn)物以獲得PUFA產(chǎn)物；
[0097]其中，第一分離步驟中的多個(gè)連接的色譜柱中的一個(gè)或多個(gè)的溫度和/或第二分離步驟中的多個(gè)連接的色譜柱中的一個(gè)或多個(gè)的溫度大于室溫；并且其中，
[0098](a)在同一色譜設(shè)備上依次進(jìn)行第一和第二分離步驟，在第一和第二分離步驟之間回收中間產(chǎn)物并且在第一和第二分離步驟之間調(diào)節(jié)在色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離；或者
[0099](b)在單獨(dú)的第一和第二色譜設(shè)備上分別進(jìn)行第一和第二分離步驟，從第一分離步驟中所獲得的中間產(chǎn)物引入到第二色譜柱中，并且在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0100]在此實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備”典型地是指多個(gè)連接的色譜柱，該多個(gè)連接的色譜柱含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑，并且具有進(jìn)料混合物流的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)、水和/或有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)、從所述多個(gè)連接的色譜柱中能夠收集液體的提余物取出流、來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體。
[0101]在此實(shí)施方式中使用的色譜設(shè)備具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的單一列的串聯(lián)連接的色譜柱。典型地，每個(gè)色譜柱連接到設(shè)備中與該柱相鄰的兩個(gè)柱。因此，來(lái)自該列中的給定柱的輸出連接到該列中的相鄰的柱的輸入，相對(duì)于該列中的洗脫液的流動(dòng)是下游。因此，洗脫液可以繞著連接的色譜柱的列流動(dòng)。典型地，沒(méi)有色譜柱連接到該設(shè)備中的不相鄰的柱。
[0102]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“不相鄰”是指在例如相同設(shè)備中，由一個(gè)或多個(gè)柱，優(yōu)選3個(gè)或更多個(gè)柱，更優(yōu)選5個(gè)或更多個(gè)柱，最優(yōu)選約5個(gè)柱分開(kāi)的柱。
[0103]典型地，在此實(shí)施方式中，每個(gè)設(shè)備僅具有進(jìn)料混合物的一個(gè)注入點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方式中，每個(gè)設(shè)備僅具有含水有機(jī)溶劑洗脫液的一個(gè)注入點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，每個(gè)設(shè)備具有水和/或有機(jī)溶劑的兩個(gè)或更多個(gè)注入點(diǎn)。
[0104]術(shù)語(yǔ)“提余物”為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。在真實(shí)和模擬移動(dòng)床色譜的上下文中，它是指與固體吸附劑相相比隨液體洗脫液相移動(dòng)更迅速的組分的流。因此，與進(jìn)料流相比，提余物流典型地富含極性較大的組分并缺乏極性較小的組分。
[0105]術(shù)語(yǔ)“提取物”為本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知。在真實(shí)和模擬移動(dòng)床色譜的上下文中，它是指與液體洗脫液相相比隨固體吸附劑相移動(dòng)更迅速的組分的流。因此，與進(jìn)料流相比，提取物流典型地富含極性較小的組分并缺乏極性較大的組分。
[0106]在此實(shí)施方式中，每個(gè)設(shè)備中使用的柱數(shù)不特別受限制。技術(shù)人員將能夠易于確定適當(dāng)?shù)闹鶖?shù)以使用。柱數(shù)典型地為4個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選為6個(gè)或更多個(gè)，更優(yōu)選為8個(gè)或更多個(gè)，例如4、5、6、7、8、9或10個(gè)柱。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用5個(gè)或6個(gè)柱，更優(yōu)選6個(gè)柱。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用7個(gè)或8個(gè)柱,更優(yōu)選8個(gè)柱。典型地,有不多于25個(gè)柱，優(yōu)選不多于20個(gè)柱，更優(yōu)選不多于15個(gè)柱。
[0107]在此實(shí)施方式中，第一和第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備典型地含有相同的柱數(shù)。對(duì)于某些應(yīng)用，它們可以具有不同的柱數(shù)。
[0108]在此實(shí)施方式中，第一和第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱典型地具有相同的維度，但對(duì)于某些應(yīng)用，可以具有不同的維度。
[0109]柱的流速受限于一系列柱中的最大壓力并且取決于柱的維度和固體相的粒徑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠易于建立每個(gè)柱維度的所需流速以確保充分解吸。直徑較大的柱一般將需要較高的流動(dòng)以保持穿過(guò)柱的線性流動(dòng)。
[0110]在此實(shí)施方式中，對(duì)于上面所概述的典型的柱大小，典型地，進(jìn)入第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的洗脫液的流速為I?4.5L/min，優(yōu)選為1.5?2.5L/min。典型地，來(lái)自第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的提取物的流速為0.1?2.5L/min，優(yōu)選為0.5?2.25L/min。在來(lái)自第一分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回到第一分離步驟的中使用的設(shè)備的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速典型地為0.7?1.4L/min，優(yōu)選為約lL/min。典型地，來(lái)自第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的提余物的流速為0.2?2.5L/min，優(yōu)選為0.3?2.0L/min。在來(lái)自第一分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回到第一分離步驟中使用的設(shè)備的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速典型地為0.3?1.0L/min，優(yōu)選為約0.5L/min。典型地，進(jìn)料混合物引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的流速為5?150mL/min,優(yōu)選為10?100mL/min,更優(yōu)選為20 ?BOmT ,/mi η。[0111]在此實(shí)施方式中，對(duì)于上面所概述的典型的柱大小，典型地，進(jìn)入第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的洗脫液的流速為I?4L/min，優(yōu)選為1.5?3.5L/min。典型地，來(lái)自第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的提取物的流速為0.5?2L/min，優(yōu)選為0.7?1.9L/min。在來(lái)自第二分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速典型地為0.6?1.4L/min,優(yōu)選為0.7?1.lL/min,更優(yōu)選為約0.9L/min。典型地，來(lái)自第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的提余物的流速為0.5?2.5L/min，優(yōu)選為
0.7?1.8L/min,更優(yōu)選為約1.4L/min。在來(lái)自第二分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速典型地為0.3?1.0L/min，優(yōu)選為約 0.5L/min。
[0112]如技術(shù)人員將理解的，經(jīng)由各種提取物流和提余物流所收集或移出的液體的速率的參數(shù)是指一段時(shí)間中移出的液體體積，典型地為L(zhǎng)/min。相似地，液體循環(huán)回到設(shè)備，典型地回到設(shè)備中的相鄰的柱的速度的參考是指一段時(shí)間中循環(huán)的液體體積，典型地為L(zhǎng)/min。
[0113]在此實(shí)施方式中，優(yōu)選真實(shí)移動(dòng)床色譜。
[0114]步進(jìn)時(shí)間(step time),即切換進(jìn)料混合物和洗脫液的注入點(diǎn)與所收集的懼分的各種取出點(diǎn)之間的時(shí)間，不特別受限制，并且將取決于所使用的柱數(shù)和維度以及通過(guò)設(shè)備的流速。技術(shù)人員將能夠易于確定合適的步進(jìn)時(shí)間以用于本發(fā)明的方法。步進(jìn)時(shí)間典型地為100?1000秒，優(yōu)選為200?800秒，更優(yōu)選為250?750秒。在一些實(shí)施方式中，合適的步驟時(shí)間為100?400秒，優(yōu)選為200?300秒，更有優(yōu)選為約250秒。在其他實(shí)施方式中，合適的步進(jìn)時(shí)間為600?900秒，優(yōu)選為700?800秒，更優(yōu)選為約750秒。
[0115]在此實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括第一或第二分離方法。
[0116]這兩個(gè)步驟可以易于在單一色譜設(shè)備上進(jìn)行。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，(a)第一和第二分離步驟依次在同一色譜設(shè)備上進(jìn)行，在第一和第二步驟之間回收中間產(chǎn)物并且在第一和第二分離步驟之間調(diào)節(jié)色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。此分離方法的優(yōu)選實(shí)施方式如圖1Oa所示。因此，第一分離步驟(左手側(cè))在具有8個(gè)柱的SMB設(shè)備上進(jìn)行。在第一和第二分離步驟之間，中間產(chǎn)物回收到例如容器中，調(diào)節(jié)色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。然后，第二分離步驟(右手側(cè))在具有8個(gè)柱的SMB設(shè)備上進(jìn)行。
[0117]在實(shí)施方式(a)中，調(diào)節(jié)方法步驟通常是指整體上調(diào)節(jié)設(shè)備中的方法條件，即物理調(diào)節(jié)設(shè)備使得條件不同。它不是指簡(jiǎn)單地再次引入中間產(chǎn)物回到方法條件可能碰巧不同的相同設(shè)備的不同部分中。
[0118]或者，第一和第二分離色譜設(shè)備可以用于第一和第二分離步驟。因此，在另一個(gè)實(shí)施方式中，(b)第一和第二分離步驟分別在單獨(dú)的第一和第二色譜設(shè)備上進(jìn)行，來(lái)自第一分離設(shè)備的中間產(chǎn)物引入到第二色譜設(shè)備中，并且在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0119]在實(shí)施方式(b)中，兩個(gè)分離步驟可以依次進(jìn)行或同時(shí)進(jìn)行。
[0120]因此，在兩個(gè)分離步驟依次進(jìn)行的情況下的實(shí)施方式(b)中，第一和第二分離步驟依次分別在單獨(dú)的第一和第二色譜設(shè)備上進(jìn)行，在第一和第二分離步驟之間回收中間產(chǎn)物并且調(diào)節(jié)第一和第二色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。此分離方法的優(yōu)選實(shí)施方式如圖1Ob所示。因此，第一分離步驟(左手側(cè))在具有8個(gè)柱，一至八，的SMB設(shè)備上進(jìn)行。在第一和第二分離步驟之間，中間產(chǎn)物回收到例如容器中，然后引入到第二分離SMB設(shè)備中。第二分離步驟(右手側(cè))在具有8個(gè)柱，九至十六，的第二分離SMB設(shè)備上進(jìn)行。調(diào)節(jié)兩個(gè)色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0121]在兩個(gè)分離步驟同時(shí)進(jìn)行的情況下的實(shí)施方式(b)中，第一和第二分離步驟同時(shí)在單獨(dú)的第一和第二色譜設(shè)備上進(jìn)行，在第一和第二分離步驟之間將中間產(chǎn)物引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中，并且調(diào)節(jié)第一和第二色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。此分離方法的優(yōu)選實(shí)施方式如圖1Oc所示。因此，第一分離步驟(左手側(cè))在具有8個(gè)柱，一至八，的SMB設(shè)備上進(jìn)行。然后，第一分離步驟中獲得的中間產(chǎn)物引入到第二分離步驟中使用的第二分離色譜設(shè)備中。中間產(chǎn)物可以直接地或例如經(jīng)由容器而間接地從第一分離步驟送到第二分離步驟。第二分離步驟(右手側(cè))在具有8個(gè)柱，九至十六，的第二分離SMB設(shè)備上進(jìn)行。調(diào)節(jié)兩個(gè)色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0122]在兩個(gè)分離步驟同時(shí)進(jìn)行的情況下的實(shí)施方式(b)中，洗脫液?jiǎn)为?dú)地在兩個(gè)單獨(dú)的色譜設(shè)備中循環(huán)。因此，除了在第二分離步驟中純化并引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的中間產(chǎn)物中可作為溶劑存在的洗脫液，在兩個(gè)單獨(dú)的色譜設(shè)備之間不共用洗脫液。在第一和第二分離步驟中使用的兩個(gè)單獨(dú)的色譜設(shè)備之間不共用色譜柱。
[0123]在此實(shí)施方式中，在第一分離步驟中獲得中間產(chǎn)物之后，在第二分離步驟中純化中間產(chǎn)物之前，可以部分地或全部地移出含水有機(jī)溶劑洗脫液?；蛘?，可以在第二分離步驟中純化中間產(chǎn)物，而不移出任何存在的溶劑。
[0124]如上所提及的，在此實(shí)施方式中，在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。在實(shí)施方式(a)中，在第一和第二分離步驟之間調(diào)節(jié)兩個(gè)分離步驟中使用的單一 SMB設(shè)備的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。在實(shí)施方式(b)中，設(shè)置第一和第二分離步驟中使用的兩個(gè)單獨(dú)的色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0125]因此，在此實(shí)施方式中，改變第一和第二分離步驟中的方法條件。改變的方法條件可以包括:例如，使用的柱的大小、使用的柱數(shù)、柱中使用的填料、SMB設(shè)備的步進(jìn)時(shí)間、設(shè)備的溫度、分離步驟中使用的洗脫液或設(shè)備中使用的流速，特別是經(jīng)由提取物流或提余物流所收集的液體的循環(huán)速率。
[0126]優(yōu)選地，在此實(shí)施方式中，可以改變的方法條件是分離步驟中使用的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例和/或經(jīng)由分離步驟中的提取物流或提余物流所收集的液體的循環(huán)速率。這兩個(gè)選項(xiàng)在下面進(jìn)行更詳細(xì)的討論。
[0127]在此實(shí)施方式中，與進(jìn)料混合物相比，第一分離步驟中獲得的中間產(chǎn)物典型地富含PUFA產(chǎn)物。
[0128]在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中獲得的中間產(chǎn)物然后引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備。
[0129]在此實(shí)施方式中，典型地收集中間產(chǎn)物作為來(lái)自第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的提余物流或提取物流。[0130]典型地，在此實(shí)施方式中，收集中間產(chǎn)物作為第一分離步驟中的提余物流，并且收集PUFA產(chǎn)物作為第二分離步驟中的提取物流。因此，第一分離步驟中收集的提余物流用作第二分離步驟中的進(jìn)料混合物。第一分離步驟中收集的提余物流典型地含有I3UFA產(chǎn)物和極性較大的組分。
[0131]或者，在此實(shí)施方式中，收集中間產(chǎn)物作為第一分離步驟中的提取物流，并且收集PUFA產(chǎn)物作為第二分離步驟中的提余物流。因此，第一分離步驟中收集的提取物流用作第二分離步驟中的進(jìn)料混合物。第一分離步驟中收集的提取物流典型地含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分。
[0132]在此實(shí)施方式中，在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。典型地，本發(fā)明的方法的每個(gè)分離步驟中分離的組分具有不同的極性。
[0133]優(yōu)選地，在此實(shí)施方式中，在第一分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的極性較小的組分分離，并且在第二分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的極性較大的組分分離。
[0134]典型地，在此實(shí)施方式中，(a)來(lái)自第一分離步驟中使用的設(shè)備的提取物流的一部分循環(huán)回到第一分離步驟中使用的設(shè)備中；和/或
[0135](b)來(lái)自第一分離步驟中使用的設(shè)備的提余物流的一部分循環(huán)回到第一分離步驟中使用的設(shè)備中；和/或
[0136](C)來(lái)自第二分離步驟中使用的設(shè)備的提取物流的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備中；和/或
[0137](d)來(lái)自第二分離步驟中使用的設(shè)備的提余物流的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備中。
[0138]優(yōu)選地，在此實(shí)施方式中，(a)來(lái)自第一分離步驟中使用的設(shè)備的提取物流的一部分循環(huán)回到第一分離步驟中使用的設(shè)備中；和
[0139](b)來(lái)自第一分離步驟中使用的設(shè)備的提余物流的一部分循環(huán)回到第一分離步驟中使用的設(shè)備中；和
[0140](C)來(lái)自第二分離步驟中使用的設(shè)備的提取物流的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備中；和
[0141](d)來(lái)自第二分離步驟中使用的設(shè)備的提余物流的一部分循環(huán)回到第二分離步驟中使用的設(shè)備中。
[0142]在此實(shí)施方式中的循環(huán)涉及將第一或第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備外的提取物流或提余物流的一部分進(jìn)料回到該步驟中使用的設(shè)備中，典型地到相鄰的柱中。此相鄰的柱是在系統(tǒng)中相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)為下游的相鄰的柱。
[0143]在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一或第二分離步驟中的提取物流或提余物流循環(huán)回到該步驟中使用的色譜設(shè)備所收集的液體的速率是經(jīng)由將該流進(jìn)料回到該步驟中使用的設(shè)備中，典型地回到相鄰的柱，即在系統(tǒng)中相對(duì)于洗脫液流動(dòng)的下游柱中所收集的液體的速率。
[0144]這可以參照?qǐng)D9中的優(yōu)選實(shí)施方式看出。第一分離步驟中的提取物流的循環(huán)速率是從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部所收集的提取物進(jìn)料到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部的速率，即進(jìn)料到第一分離步驟中的色譜設(shè)備的柱3的頂部的液體的流速。
[0145]在此實(shí)施方式中，第二分離步驟中的提取物的循環(huán)速率是在第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部所收集的提取物進(jìn)料到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部的速率，即進(jìn)料到第二分離步驟中的色譜設(shè)備的柱3的頂部的液體的流速。
[0146]在此實(shí)施方式中，典型地通過(guò)將該分離步驟中的該流所收集的液體進(jìn)料到容器中并且然后用泵將來(lái)自容器中的該液體抽回到該分離步驟中使用的設(shè)備中，典型地到相鄰的柱中來(lái)影響第一和/或第二分離步驟中的提取物流和/或提余物流的循環(huán)。在這種情況下，在第一和/或第二分離步驟中經(jīng)由具體的提取物或提余物所收集的液體循環(huán)速率，典型地回到相鄰的柱的速率是用泵將液體從容器抽回到色譜設(shè)備中的速率，典型地到相鄰的柱中的速率。
[0147]正如技術(shù)人員將理解的是，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由洗脫液流和原料流引入到色譜設(shè)備的液體的量與從該設(shè)備中移出并循環(huán)回到設(shè)備中的液體的量平衡。
[0148]因此，在此參照?qǐng)D9的實(shí)施方式中，對(duì)于提取物流，進(jìn)入在第一和第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中洗脫液(解吸劑)的流速(D)等于在該分離步驟中經(jīng)由提取物流所收集的液體積聚到容器中的速率(El和E2)加上將提取物循環(huán)回到該具體分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率(D-EI和D-E2)。
[0149]在此實(shí)施方式中，對(duì)于來(lái)分離步驟的提余物流，將提取物循環(huán)回到該具體分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率(D-E1和D-E2)加上原料引入到該具體分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率(F和Rl)等于經(jīng)由該具體分離步驟中的提余物流所收集的液體積聚到容器中的速率(Rl和R2)加上提余物循環(huán)回到該具體分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率(D+F-E1-R1和 D+R1-E2-R2)。
[0150]在此實(shí)施方式中，來(lái)自色譜設(shè)備的具體提取物流或提余物流所收集的液體積聚到容器中的速率也可以被認(rèn)為是移出來(lái)自該色譜設(shè)備的該提取物流或提余物流的凈速率。
[0151]典型地，在此實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的設(shè)備中的速率，使得在每個(gè)分離步驟中PUFA產(chǎn)物可以與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0152]典型地，在此實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的設(shè)備中的速率，使得在每個(gè)分離步驟中PUFA產(chǎn)物可以與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0153]優(yōu)選地，在此實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)經(jīng)由每個(gè)分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的設(shè)備中的速率，使得在每個(gè)分離步驟中PUFA產(chǎn)物可以與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0154]典型地，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率不同于經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率，和/或經(jīng)由第一分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率不同于經(jīng)由第二分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率。
[0155]改變經(jīng)由第一或第二分離步驟中的提取物流和/或提取物流所收集的液體循環(huán)回到該具體分離步驟中使用的設(shè)備中的速率具有改變存在于提取物流和提余物流中的極性較大和極性較小的組分的量的作用。因此，例如，較低的提取物循環(huán)速率導(dǎo)致該分離步驟中的較少的極性較小的組分被提余物流攜帶。較高的提取物循環(huán)速率導(dǎo)致較多的極性較小的組分被提余物流攜帶(carry through)。
[0156]這個(gè)可以從例如，圖6中所示的本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】看出。經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的設(shè)備的速率(D-El)將影響在第一分離步驟中的提余物流攜帶任何組分A的程度(Rl)。
[0157]典型地，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提取物所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提取物所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率更快。優(yōu)選地，從第一分離步驟中收集含有PUFA和極性較大的組分的提余物流并在第二分離步驟中純化，并且經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。
[0158]或者，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更慢。
[0159]典型地，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提余物所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提余物所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率更快。優(yōu)選地，從第一分離步驟中收集含有PUFA和極性較大的組分的提取物流并在第二分離步驟中純化，并且經(jīng)由第一分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。
[0160]或者，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更慢。
[0161]在此實(shí)施方式中，當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)速率使得在每個(gè)分離步驟中PUFA產(chǎn)物可以與進(jìn)料混合物的不同組分分離時(shí)，每個(gè)分離步驟中使用的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例可以相同或不同。典型地，每個(gè)分離步驟中使用的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例為0.5:99.5?
5.5:94.5體積份。
[0162]典型地，在此實(shí)施方式中，每個(gè)分離步驟中使用的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例具有不同的水與有機(jī)溶劑的比例。優(yōu)選地調(diào)節(jié)每個(gè)分離步驟中使用的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例，使得在每個(gè)分離步驟中PUFA產(chǎn)物可以與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0163]在此實(shí)施方式中，每個(gè)分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力典型地不同。優(yōu)選地，第一分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力大于第二分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力。在實(shí)踐中，這個(gè)通過(guò)改變每個(gè)分離步驟中使用的水和有機(jī)溶劑的相對(duì)量來(lái)獲取。
[0164]取決于有機(jī)溶劑的選擇，它們可以是比水的更強(qiáng)的解吸劑?；蛘?，它們可以是比水更弱的解吸劑。例如，乙腈和醇是比水更強(qiáng)的解吸劑。因此，當(dāng)含水有機(jī)溶劑是含水醇或乙腈時(shí)，第一分離步驟中使用的洗脫液中的醇或乙腈的量大于第二分離步驟中使用的洗脫液中的醇或乙腈的量。[0165]典型地，在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例比第二分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中的洗脫液比第二分離步驟中的洗脫液典型地含有更多的有機(jī)溶劑，優(yōu)選醇，更優(yōu)選甲醇。
[0166]在此實(shí)施方式中，當(dāng)每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑具有不同的水與有機(jī)溶劑的比例時(shí)，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例典型地為0:100?5:95體積份，優(yōu)選為0.1:99.9?2.5:97.5體積份，更優(yōu)選為0.25:99.75?2:98體積份，且最優(yōu)選為0.5:99.5?1.5:98.5體積份。在這些實(shí)施方式中，第二分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例典型地為2:98?8:92體積份，優(yōu)選為3:97?7:93體積份，更優(yōu)選為4:96?6:94體積份，并且甚至更優(yōu)選為4.5:95.5?5.5:94.5體積份。
[0167]在此實(shí)施方式中，當(dāng)每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑具有不同的水有機(jī)溶劑含量時(shí)，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例優(yōu)選為0.5:99.5?1.5:98.5體積份，并且第二分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例優(yōu)選為4.5:95:5?5.5:94.5體積份。
[0168]將理解的是，上面所指的每個(gè)分離步驟中的水和有機(jī)溶劑的比例是全部的色譜設(shè)備中的平均比例。
[0169]典型地，在此實(shí)施方式中，通過(guò)引入水和/或有機(jī)溶劑到分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的一個(gè)或多個(gè)柱中來(lái)控制在每個(gè)分離步驟中的洗脫液的水與有機(jī)溶劑的比例。因此，例如，為了獲取比第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例更低的第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例，典型地，與第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備相比，水更緩慢地引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0170]典型地，在此實(shí)施方式中，在每個(gè)分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的不同的點(diǎn)處引入基本上純的有機(jī)溶劑和基本上純的水。這兩個(gè)流的相對(duì)流速將確定色譜設(shè)備中的整體溶劑曲線(profile)。或者，在此實(shí)施方式中，在每個(gè)分離步驟中使用的每個(gè)色譜設(shè)備中的不同的點(diǎn)處引入不同的有機(jī)溶劑/水混合物。那個(gè)將涉及兩種或更多種不同的有機(jī)溶劑/水混合物引入到具體分離步驟中使用的色譜設(shè)備中，每種有機(jī)溶劑/水混合物具有不同的有機(jī)溶劑/水比例。此實(shí)施方式中的有機(jī)溶劑/水比例的相對(duì)流速和相對(duì)濃度將確定該分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的整體溶劑曲線。
[0171]優(yōu)選地，在此實(shí)施方式中，要么(I)收集含有PUFA產(chǎn)物與極性較大的組分的中間產(chǎn)物作為第一分離步驟中的提余物流，并且收集PUFA產(chǎn)物作為第二分離步驟中的提取物流；要么
[0172](2)收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的中間產(chǎn)物作為第一分離步驟中的提取物流，并且收集PUFA產(chǎn)物作為第二分離步驟中的提余物流。
[0173]選項(xiàng)(I)適合于從進(jìn)料混合物中純化EPA。
[0174]選項(xiàng)(I)示于圖2。在第一分離步驟中純化包含PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F。在第一分離步驟中，移出極性較小的組分(A)作為提取物流E1。收集PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流R1。提余物流Rl是隨后在第二分離步驟中純化的中間產(chǎn)物。在第二分離步驟中，移出極性較大的組分(C)作為提余物流R2。收集PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2。
[0175]選項(xiàng)(I)更詳細(xì)地示于圖4。除了示出有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)引入到每個(gè)色譜設(shè)備的點(diǎn)，圖4和圖2相同。有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)—起組成洗脫液。(D)相典型地是基本上純的有機(jī)溶劑；但在某些實(shí)施方式中，它可以是主要包含有機(jī)溶劑的有機(jī)溶劑/水混合物。(W)相典型地是基本上純的水；但在某些實(shí)施方式中，它可以是主要包含水的有機(jī)溶劑/水混合物，例如98%的水/2%的乙腈的混合物。
[0176]選項(xiàng)(I)的進(jìn)一步圖解示于圖6。這里沒(méi)有分離的水注入點(diǎn)，而代替地，在(D)處注入含水有機(jī)溶劑解吸劑。
[0177]在此實(shí)施方式中，通過(guò)改變每個(gè)色譜設(shè)備中的洗脫液的解吸能力可以輔助提余物流和提取物流的分離。這個(gè)可以通過(guò)在每個(gè)色譜設(shè)備中的不同的點(diǎn)處引入洗脫液的有機(jī)溶齊IJ (或有機(jī)溶劑豐富)組分和水(或水豐富)組分來(lái)獲取。因此，典型地，在系統(tǒng)中相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在提取物輸出點(diǎn)上游處引入有機(jī)溶劑，并且在提取物輸出點(diǎn)和引入原料到該區(qū)域的點(diǎn)之間引入水。這個(gè)示于圖4。
[0178]典型地，在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫液比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多的有機(jī)溶劑，即第一步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例比第二步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例更低。
[0179]在此實(shí)施方式中，可以通過(guò)改變經(jīng)由第一和第二分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率來(lái)輔助分離。
[0180]典型地，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率更快。
[0181]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的下游處移出第一分離步驟中的第一提余物流。
[0182]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的上游處移出第一分離步驟中的第一提取物流。
[0183]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在中間產(chǎn)物引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的下游處移出第二分離步驟中的第二提余物流。
[0184]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在中間產(chǎn)物引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的上游處移出第二分離步驟中的第二提取物流。
[0185]典型地，在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在移出第一提取物流的點(diǎn)的上游處有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0186]典型地，在此實(shí)施方式中，當(dāng)水引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中時(shí)，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在引入進(jìn)料混合物的點(diǎn)的上游處但在移出第一提取物流的點(diǎn)的下游處有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0187]典型地，在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在移出第二提取物流的點(diǎn)的上游處有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0188]典型地，在此實(shí)施方式中，當(dāng)水引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中時(shí)，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在引入中間產(chǎn)物的點(diǎn)的上游處但在移出第二提取物流的點(diǎn)的下游處有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0189]選項(xiàng)(2)適合于從進(jìn)料混合物中純化的DHA。
[0190]選項(xiàng)(2)示于圖3。在第一分離步驟中純化包含PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F。在第一分離步驟中，移出極性較大的組分(C)作為提余物流Rl。收集PUFA產(chǎn)物(B)和極性較小的組分(A)作為提取物流El。提取物流El是隨后在第二分離步驟中純化的中間產(chǎn)物。在第二分離步驟中，移出極性較小的組分(A)作為提取物流E2。收集PUFA產(chǎn)物(B)作為提余物流R2。
[0191]選項(xiàng)(2)更詳細(xì)地示于圖5。除了示出引入有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)到每個(gè)色譜設(shè)備中的點(diǎn)，圖5和圖3相同。如上，(D)相是典型地是基本上純的有機(jī)溶劑，但在某些實(shí)施方式中，可以是主要包含有機(jī)溶劑的有機(jī)溶劑/水混合物。(W)相典型地是基本上純的水，但在某些實(shí)施方式中，可以是主要包含水的有機(jī)溶劑/水混合物，例如98%的水/2%的甲醇混合物。
[0192]選項(xiàng)(2)的進(jìn)一步的圖解示于圖7。這里沒(méi)有分離的水注入點(diǎn)，而代替地，在(D)處注入有機(jī)溶劑解吸劑。
[0193]典型地，在此實(shí)施方式中，經(jīng)由第一分離步驟中的提余物流所收集的液體再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率比經(jīng)由第二分離步驟中的提余物流所收集的液體再次引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率更快。
[0194]典型地，在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫液比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更少的有機(jī)溶劑，即第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例高于第二分離步驟中的更高。
[0195]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的下游處，移出第一分離步驟中的第一提余物流。
[0196]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的上游處，`移出第一分離步驟中的第一提取物流。
`[0197]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的下游處，移出第二分離步驟中的第二提余物流。
`[0198]在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在引入進(jìn)料混合物到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的點(diǎn)的上游處，移出第二分離步驟中的第二提取物流。
[0199]典型地，在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，典型地在移出第一提取物流的點(diǎn)的上游處，有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備。
[0200]典型地，在此實(shí)施方式中，當(dāng)水引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中時(shí)，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在引入進(jìn)料混合物的點(diǎn)的上游處但在移出第一提取物流的點(diǎn)的下游處，水引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0201 ] 典型地，在此實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在移出第二提取物流的點(diǎn)的上游處，將有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0202]典型地，在此實(shí)施方式中，當(dāng)水引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中時(shí)，相對(duì)于洗脫液的流動(dòng)，在引入中間產(chǎn)物的點(diǎn)的上游處但在移出第二提取物流的點(diǎn)的下游處，水引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中。
[0203]在此實(shí)施方式中，第一和第二分離設(shè)備中使用的每個(gè)模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備優(yōu)選由八個(gè)色譜柱組成。這些是指柱I~8。在每個(gè)設(shè)備中，八個(gè)柱串聯(lián)排列使得柱I的底部連接到柱2的頂部，柱2的底部連接到柱3的頂部…等等…并且柱8的底部連接到柱I頂部。這些連接可以可選地經(jīng)由保持容器(holding container),隨著循環(huán)流進(jìn)入下一個(gè)柱中。洗脫液的流動(dòng)從柱I到柱2到柱3等等通過(guò)系統(tǒng)。吸附劑的有效流動(dòng)從柱8到柱7到柱6等等通過(guò)系統(tǒng)。
[0204]這個(gè)示于圖8。包含PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大(C)和極性較小(A)的組分的進(jìn)料混合物F引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱5的頂部。有機(jī)溶劑解吸劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱I的頂部。水引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱4的頂部。在第一分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小的組分(A)作為提取物流El。從柱7的底部移出PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流Rl。提余物流Rl是隨后在第二分離步驟中通過(guò)在柱5的頂部處引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中進(jìn)行純化的中間產(chǎn)物。有機(jī)溶劑解吸劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱I的頂部。水引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱4的頂部。在第二分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大的組分(C)作為提余物流R2。在柱2的底部處，收集PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2。
[0205]在此實(shí)施方式中，典型地將有機(jī)溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱I的頂部。
[0206]在此實(shí)施方式中，典型地將水引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱4的頂部。
[0207]在此實(shí)施方式中，典型地將有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱I的頂部。
[0208]在此實(shí)施方式中，典型地將有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱4的頂部。
[0209]在此實(shí)施方式中，典型地將進(jìn)料流引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱5的頂部。
[0210]在此實(shí)施方式中，從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱7的底部收集第一提余物流作為中間產(chǎn)物。然后在第二分離步驟中純化此中間產(chǎn)物并且典型地引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱5的頂部。在第二分離步驟中純化之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。
[0211]在此實(shí)施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部移出第一提余物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中并且再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部。
[0212]在此實(shí)施方式中，典型地從第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱7的底部移出第二提余物流。
[0213]在此實(shí)施方式中，典型地從第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已純化的PUFA產(chǎn)物。第二提取物流可以可選地收集到容器中并且再次引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部。
[0214]在此實(shí)施方式中，所使用的洗脫液典型地為含水醇，優(yōu)選為含水甲醇。水與醇的比例典型地為0.5:99.5?6:94體積份。
[0215]典型地，在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的水與有機(jī)溶劑的比例比第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的水與有機(jī)溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中的洗脫液典型地比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多的有機(jī)溶劑。[0216]在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例典型地為0.5:99.5?1.5:98.5體積份。第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例典型地為2:98?6:94體積份。
[0217]在此實(shí)施方式中，雖然圖8的實(shí)施方式如圖1Oa所示配置，但是圖1Ob和IOc所示的配置也可以用于此實(shí)施方式中。
[0218]此實(shí)施方式也示于圖9。包含PUFA產(chǎn)物(B)的極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱5的頂部。含水有機(jī)溶劑解吸劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱I的頂部。在第一分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小組分(A)作為提取物流El。從柱7的底部移出PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流R1。提余物流Rl是在第二分離步驟中通過(guò)引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱4的頂部進(jìn)行純化的中間產(chǎn)物。含水有機(jī)溶劑解吸劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱I的頂部。在第二分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大組分(C)作為提余物流R2。在柱2的底部處，收集PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2。
[0219]在此實(shí)施方式中，典型地將含水有機(jī)溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱I的頂部。
[0220]在此實(shí)施方式中，典型地將含水有機(jī)溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱9的頂部。
[0221]在此實(shí)施方式中，典型地將進(jìn)料流引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的柱5的頂部。
[0222]在此實(shí)施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱7的底部收集第一提余物流作為中間產(chǎn)物。然后，中間產(chǎn)物在第二分離步驟中純化并典型地引入到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱5的頂部。在第二分離步驟中純化之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。
[0223]在此實(shí)施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中并且部分再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部。經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部的速率。
[0224]在此實(shí)施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱7的底部移出第二提余物流。
[0225]在此實(shí)施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已純化的PUFA產(chǎn)物。第二提取物流可以可選地收集到容器中并且部分再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的柱3的頂部。經(jīng)由來(lái)自第二分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部中的速率。
[0226]在此實(shí)施方式中，所使用的洗脫液典型地為含水醇，優(yōu)選為含水甲醇。水與醇的比例典型地為0.5:99.5?6:94體積份。
[0227]典型地，在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的水與有機(jī)溶劑的比例比第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備中的水與有機(jī)溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中使用的洗脫液典型地比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多有機(jī)溶劑。
[0228]在此實(shí)施方式中，第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑典型地為0.5:99.5?1.5:98.5體積份。第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑典型地為2:98?6:94體積份。
[0229]在此實(shí)施方式中，典型地經(jīng)由來(lái)自第一分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率比經(jīng)由來(lái)自第二分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二分離步驟中使用的色譜設(shè)備的速率更快。在這種情況下，在每個(gè)分離步驟中，含水有機(jī)溶劑洗脫液典型地基本上相同。
[0230]在此實(shí)施方式中，雖然圖9的實(shí)施方式如圖1Oa所示配置，但是示于圖1Ob和IOc的配置也用于此實(shí)施方式。
[0231]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括引入進(jìn)料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備，其中，該設(shè)備具有包含第一區(qū)域和第二區(qū)域的多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由提取物流和提余物流更夠收集液體，并且其中，Ca)從第一區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的提余物流并且引入到第二區(qū)域中的不相鄰的柱中，和/或
(b)從第二區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的提余物流并且引入到第一區(qū)域中的不相鄰的柱中，在每個(gè)區(qū)域中所述PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離，其中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于55 °C。
[0232]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“區(qū)域”是指多個(gè)連接的色譜柱，多個(gè)連接的色譜柱含有作為洗脫液的含水醇，并且具有一個(gè)或多個(gè)進(jìn)料混合物流的注入點(diǎn)、一個(gè)或多個(gè)水和/或醇的注入點(diǎn)、來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體。典型地，每個(gè)區(qū)域僅具有進(jìn)料混合物的一個(gè)注入點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方式中，每個(gè)區(qū)域僅具有含水醇洗脫液的一個(gè)注入點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，每個(gè)區(qū)域具有兩個(gè)或更多個(gè)水和/或醇的注入點(diǎn)。
[0233]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，基本上全部的多個(gè)連接的色譜柱的溫度典型地大于55°C。在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，全部的多個(gè)連接的色譜柱的溫度典型地大于55°C。
[0234]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度典型地為56°C或大于56°C，優(yōu)選為57°C或大于57°C。
[0235]典型地，在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度至多IOO0C，優(yōu)選至多95°C，更優(yōu)選為至多90°C，甚至更優(yōu)選為85°C，甚至更優(yōu)選為80°C，甚至更優(yōu)選為75°C，并且甚至更優(yōu)選為70°C。
[0236]典型地，在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度為56?70°C，優(yōu)選為56?67°C，更優(yōu)選為56?65°C，甚至更優(yōu)選為57?63°C。
[0237]此進(jìn)一步的實(shí)施方式是指如PCT/GB10/002339所描述的，通過(guò)引用將這些專利的全文并入本文中。PCT/GB10/002339中列舉的優(yōu)選的方法條件是此進(jìn)一步的實(shí)施方式的優(yōu)選的方法條件，并且可以將PCT/GB10/002339并入。
[0238]此進(jìn)一步的實(shí)施方式示于圖11。包含PUFA產(chǎn)物(B)的進(jìn)行較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F引入到第一區(qū)域中的柱5的頂部。含水醇吸附劑引入到第一區(qū)域中的柱I的頂部。在第一區(qū)域中，從柱2的底部移出極性較小的組分(A)作為提取物流E1。從柱7的底部移出PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流。然后，在柱12的頂部處，提余物流Rl引入到第二區(qū)域中。含水醇吸附劑引入到第二區(qū)域中的柱9的頂部。在第二區(qū)域中，在柱14的底部處，移出極性較大的組分(C)作為提余物流R2。在柱10的底部處，收集PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2。
[0239]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地將含水醇引入到第一區(qū)域中的柱I的頂部。
[0240]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地將含水醇引入到第一區(qū)域中的柱9的頂部。
[0241]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地將進(jìn)料流引入到第一區(qū)域中的柱5的頂部。
[0242]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地從第一區(qū)域中的柱7的底部收集第一提余物流并且引入到第二區(qū)域中的柱12的頂部。在引入到柱12之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。
[0243]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地從第一區(qū)域中的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中并且部分再次引入到第一區(qū)域中的柱3的頂部。經(jīng)由來(lái)自第一區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一區(qū)域中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部的速率。
[0244]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地從第二區(qū)域中的柱14的底部移出第二提余物流。
[0245]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地從第二區(qū)域中的柱10的底部收集第二提余物流。此第二提取物流典型地含有已純化的PUFA產(chǎn)物。第二提取物流可以可選地收集到容器中并且部分再次引入到第二區(qū)域中的柱11的頂部。經(jīng)由來(lái)自第二區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二區(qū)域中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱11的頂部的速率。
[0246]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，典型地經(jīng)由來(lái)自第一區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一區(qū)域中的速率經(jīng)由來(lái)自第二區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二區(qū)域中的速率更快。
[0247]在此進(jìn)一步的實(shí)施方式中，在每個(gè)區(qū)域中含水醇洗脫液典型地基本上相同。
[0248]在另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法不同于從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括引入進(jìn)料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備，其中，設(shè)備具有至少包含第一區(qū)域和第二區(qū)域的多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體，并且其中，Ca)從第一區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的提余物流并且引入到第二區(qū)域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的提取物流并且引入到第一區(qū)域中的不相鄰的柱中，在每個(gè)區(qū)域中所述PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離，其中，所有多個(gè)連接的色譜柱的溫度為40°C或55°C。
[0249]在此另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“區(qū)域”如上所定義。
[0250]典型地，在此另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度為40°C或55°C。優(yōu)選地，在此另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，在15?55°C下，優(yōu)選在20?40°C下，甚至更優(yōu)選在約30°C下，即在室溫下進(jìn)行該方法。
[0251]典型地，在此另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法不同于從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括引入進(jìn)料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備，其中，設(shè)備具有至少包含第一區(qū)域和第二區(qū)域的多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體，并且其中，Ca)從第一區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的提余物流并且引入到第二區(qū)域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區(qū)域中的柱中收集含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的提取物流并且引入到第一區(qū)域中的不相鄰的柱中，在每個(gè)區(qū)域中所述PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0252]因此，優(yōu)選地，在此另外進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法不同于如PCT/GB10/002339所描述的。
[0253]在又進(jìn)一步的實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物通過(guò)的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度不同于40°C或 55°C。
[0254]在此又進(jìn)一步的實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物通過(guò)的所有色譜柱的溫度典型地不同于40°C或55°C，優(yōu)選不同于40°C或55°C，更優(yōu)選不同于39.5?40.5°C或54.5?55.5°C。
[0255]在實(shí)踐中，本發(fā)明的方法一般地將通過(guò)計(jì)算機(jī)來(lái)控制。因此，本發(fā)明也提供控制如本文所定義的色譜設(shè)備的計(jì)算機(jī)程序，該計(jì)算機(jī)程序含有代碼模塊，當(dāng)計(jì)算機(jī)程序執(zhí)行時(shí)，代碼模塊命令設(shè)備執(zhí)行本發(fā)明的方法。
[0256]本發(fā)明也提供在從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法中一個(gè)或多個(gè)加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進(jìn)料混合物的應(yīng)用，該方法包括純化含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑一個(gè)或多個(gè)色譜柱中的進(jìn)料混合物，以(a)減少分離方法中使用的洗脫液的量和/或(b)提高存在于進(jìn)料混合物中的各種組分的分離方法中的分辨率。
[0257]典型地，加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進(jìn)料混合物中的至少一個(gè)加熱到如本文所定義的溫度。
[0258]典型地，本發(fā)明也提供加熱的洗脫液在從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法中的應(yīng)用，該方法包括純化含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱中的進(jìn)料混合物，以(a)減少分離方法中使用的洗脫液的量和/或(b)提高存在于進(jìn)料混合物中的各種組分的分離方法中的分辨率。
[0259]本發(fā)明也提供從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，該方法包括使進(jìn)料混合物通過(guò)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)加熱的色譜柱，
[0260]其中，進(jìn)料混合物通過(guò)的色譜柱中的至少一個(gè)的溫度大于室溫，和/或其中，洗脫液和/或進(jìn)料混合物的溫度大于室溫，并且
[0261]其中，一個(gè)或多個(gè)加熱的色譜柱能使(a)分離方法中使用的洗脫液的量減少和/或(b)存在于進(jìn)料混合物中的各種組分的分離方法中的分辨率提高。
[0262]典型地，色譜柱中的至少一個(gè)加熱到如本文所定義的溫度。
[0263]優(yōu)選地，洗脫液加熱到如本文所定義的溫度。
[0264]典型地，此方法是如本文所定義的方法。
[0265]典型地，在本發(fā)明的方法中，在大于室溫的溫度下，至少一個(gè)色譜柱能使(a)分離方法中使用的洗脫液的量減少和/或(b)存在于進(jìn)料混合物中的各種組分的分離方法中的分辨率提高。
[0266]本發(fā)明也提供包含通過(guò)本發(fā)明的方法可獲得的PUFA產(chǎn)物的組合物。
[0267]下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明。[0268]實(shí)施例
[0269]實(shí)施例1
[0270]根據(jù)圖11示意性所示的系統(tǒng)，使用真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)分餾魚(yú)油衍生的原料(55重量°/c^^EPA EE，5重量％的0撤EE)，該真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)使用鍵合C18硅膠(粒徑300 μ m)作為固定相并使用含水甲醇(90:10w/w甲醇:水)作為洗脫液。如圖11所示，15個(gè)柱(直徑:22mm，長(zhǎng)度:300mm)串聯(lián)連接。解吸劑預(yù)加熱到60°C的溫度，產(chǎn)生約60°C的柱溫度。
[0271]操作參數(shù)和流速如下。對(duì)于下面的條件，EPA EE以高水平的純度(由GC FAMES測(cè)定的99%)生產(chǎn)。EPA產(chǎn)物的GC FAMES跡線如圖12所示。
[0272]步進(jìn)時(shí)間:600秒
[0273]原料(F)進(jìn)料速率:0.5ml/min
[0274]第一區(qū)域中的解吸劑進(jìn)料速率(Dl):33ml/min
[0275]第一區(qū)域中的提取物速率(El):7ml/min
[0276]第一區(qū)域中的提取物循環(huán)速率(Dl-El):26ml/min
[0277]第一區(qū)域中的提余物速率(Rl):8ml/min
[0278]第二區(qū)域中的解吸劑進(jìn)料速率(D2):34ml/min
[0279]第二區(qū)域中的提取物速率(E2):10ml/min
[0280]第二區(qū)域中的提取物循環(huán)速率(D2-E2):24ml/min
[0281]第二區(qū)域中的提余物速率(R2):8ml/min
[0282]實(shí)施例2
[0283]根據(jù)圖10示意性所示的系統(tǒng)，使用真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)分餾魚(yú)油衍生的原料(55重量°/c^^EPA EE，5重量％的0撤EE)，該真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)使用鍵合C18硅膠(粒徑30(^111)作為固定相并使用含水甲醇(98:2￥/^甲醇:水)作為洗脫液。分離I由如圖10所示的串聯(lián)連接的8個(gè)柱(直徑:76.29mm，長(zhǎng)度:914.40mm)組成。隔離并分離來(lái)自分離I的中間提余物，并且使用如上述柱的相同順序進(jìn)行分離2。解吸劑預(yù)加熱到40°C的溫度，產(chǎn)生約40°C的柱溫度。
[0284]操作參數(shù)和流速如下。對(duì)于下面的條件，EPA EE以高水平的純度(由GC FAMES測(cè)定的98%)生產(chǎn)。EPA產(chǎn)物的GC FAMES跡線如圖13所示。
[0285]步進(jìn)時(shí)間:1200秒
[0286]原料(F)進(jìn)料速率:35ml/min
[0287]第一步驟中的解吸劑進(jìn)料速率(Dl):2270ml/min
[0288]第一步驟中的提取物速率(El):1320ml/min
[0289]第一步驟中的提取物循環(huán)速率(Dl-El):950ml/min
[0290]第一步驟中的提余物速率(Rl):950ml/min
[0291]第二步驟中的解吸劑進(jìn)料速率(D2):1510ml/min
[0292]第二步驟中的提取物速率(E2):850ml/min
[0293]第二步驟中的提取物循環(huán)速率(D2-E2):660ml/min [0294]第二步驟中的提余物速率(R2):670ml/min
[0295]實(shí)施例3[0296]在使用含水甲醇洗脫液和C18 二氧化硅吸附劑的固定床色譜設(shè)備中測(cè)量若干普通脂肪酸的保留時(shí)間。因此，測(cè)定十八碳四烯酸(SDA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)和油酸(OA)的保留時(shí)間，并且改變甲醇的溫度和濃度。下面的表顯示了絕對(duì)保留時(shí)間和各種脂肪酸(相對(duì)于EPA)的相對(duì)保留時(shí)間。
[0297]從表1、3和5中的絕對(duì)保留時(shí)間可以看出，在升高的溫度下，整體的運(yùn)行時(shí)間非常短，即在較高溫度下具有較低的溶劑消耗和較高的產(chǎn)量。
[0298]從表2、4和6的相對(duì)保留時(shí)間可以看出，升高的溫度相比更密切相關(guān)的組分(DHA)對(duì)極性較小的雜質(zhì)(OA)的相對(duì)保留時(shí)間具有更大的影響。因此，在5%的水下，OA (相對(duì)于EPA)的相對(duì)保留時(shí)間從18°C下的1.91減少到70°C下的1.63，然而DHA (相對(duì)于EPA)的相對(duì)保留時(shí)間從18°C下的1.19減少到70°C下的1.15。當(dāng)分別使用2%和10%的水進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，看到相似的效果。
[0299]這意味著，使用提高的水含量可以提高密切相關(guān)的組分(例如，來(lái)自DHA的EPA)的分辨率，但是在較高的溫度下進(jìn)行時(shí)具有較低的溶劑消耗和較高的產(chǎn)量。
[0300]表1:各種溫度下主要脂肪酸峰的保留時(shí)間(分鐘)
[0301]使用作為移動(dòng)相的含有2%水的甲醇和C18 二氧化硅
[0302]
【權(quán)利要求】
1.一種從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，所述方法包括使所述進(jìn)料混合物通過(guò)含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱， 其中，所述進(jìn)料混合物通過(guò)的所述色譜柱的至少一個(gè)色譜柱的溫度大于室溫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述洗脫液不是超臨界狀態(tài)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，通過(guò)加熱所述含水有機(jī)溶劑洗脫液和/或進(jìn)料混合物至大于室溫的溫度來(lái)獲得大于室溫的所述色譜柱的至少一個(gè)色譜柱的溫度。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述色譜柱中的至少一個(gè)色譜柱的溫度大于30°C，優(yōu)選大于40°C。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述色譜柱中的至少一個(gè)色譜柱的溫度為至多100°c，優(yōu)選至多70°C。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述色譜柱中的至少一個(gè)色譜柱的溫度為40~70°C，優(yōu)選為57~63°C。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述PUFA產(chǎn)物包括至少一種co-3PUFA。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述PUFA產(chǎn)物包括EPA或EPA衍生物和/或DHA或DHA衍生物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述PUFA產(chǎn)物包括EPA或EPA乙酯(EE)。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，所述方法包括將所述進(jìn)料混合物引入到具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的一個(gè)或多個(gè)模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備中，其中，所述多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)色譜柱的溫度大于室溫。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，所述方法包括以下步驟: (i)在具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備中的第一分離步驟中，純化所述進(jìn)料混合物以獲得中間產(chǎn)物；以及 (ii)在使用具有含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備的第二分離步驟中，純化在(1)中獲得的所述中間產(chǎn)物以獲得所述PUFA產(chǎn)物； 其中，所述第一分離步驟中的多個(gè)連接的色譜柱中的一個(gè)或多個(gè)色譜柱的溫度和/或所述第二分離步驟中的多個(gè)連接的色譜柱中的一個(gè)或多個(gè)色譜柱的溫度大于室溫；并且其中 (a)在同一色譜設(shè)備上依次進(jìn)行所述第一分離步驟和第二分離步驟，在所述第一分離步驟和第二分離步驟之間回收所述中間產(chǎn)物，并且在所述第一分離步驟和第二分離步驟之間調(diào)節(jié)所述色譜設(shè)備中的方法條件，使得在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離；或者 (b)在單獨(dú)的第一色譜設(shè)備和第二色譜設(shè)備上分別進(jìn)行所述第一分離步驟和第二分離步驟，將從所述第一分離步驟中獲得的所述中間產(chǎn)物引入到所述第二色譜設(shè)備中，并且在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的方法，其中，所有所述色譜柱的溫度都大于室溫。
13.根據(jù)權(quán)利要求10~12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，每個(gè)設(shè)備具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，基于所述有機(jī)溶劑和水的總重量，所述洗脫液含有大于5wt%的水。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述洗脫液是水與醇、醚、酯、酮或腈的混合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述洗脫液是水與甲醇的混合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜分離方法，其中，在所述方法包括將所述進(jìn)料混合物引入到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個(gè)連接的色譜柱的模擬或真實(shí)移動(dòng)床色譜設(shè)備中時(shí)，其中，所述設(shè)備具有至少包含第一和第二區(qū)域的多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體，并且其中，Ca)從所述第一區(qū)域中的柱中收集含有所述PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的提余物流并且將所述提余物流引入到所述第二區(qū)域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從所述第二區(qū)域中的柱中收集含有所述PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的提取物流并且將所述提取物流引入到所述第一區(qū)域中的不相鄰的柱中，在每個(gè)區(qū)域中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離， 所述多個(gè)連接的色譜柱中的至少一個(gè)色譜柱的溫度大于55°C，優(yōu)選56°C或更高。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述進(jìn)料混合物是魚(yú)油原料或魚(yú)油衍生的原料，所述PUFA產(chǎn)物是EPA或EPA乙酯，并且所述PUFA產(chǎn)物以大于90%的純度，優(yōu)選大于95%的純度，更優(yōu)選大于97%的純度進(jìn)行生產(chǎn)。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，在大于室溫的溫度下的所述至少一個(gè)色譜柱能夠使(a)所述分離方法中使用的洗脫液的量減少和/或(b)所述進(jìn)料混合物中存在的各種組分的所述分離方法中的分辨率提高。
20.一個(gè)或多個(gè)加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進(jìn)料混合物在從進(jìn)料混合物回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)`產(chǎn)物的色譜分離方法中的應(yīng)用，所述方法包括在含有作為洗脫液的含水有機(jī)溶劑的一個(gè)或多個(gè)色譜柱中純化所述進(jìn)料混合物，以(a)減少所述分離方法中使用的洗脫液的量和/或(b)提高在所述進(jìn)料混合物中存在的各種組分的所述分離方法中的分辨率。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的應(yīng)用，其中，所述一個(gè)或多個(gè)加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進(jìn)料混合物加熱至權(quán)利要求4~6中任意一項(xiàng)所述的溫度。
【文檔編號(hào)】B01D15/38GK103826715SQ201280033631
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2012年7月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月6日
【發(fā)明者】A·凱利赫, A·莫里森, 阿尼爾·奧斯卡爾, 拉凱什·威拉曼·奈爾雷瑪, 阿伯希萊什·阿加瓦爾 申請(qǐng)人:巴斯夫制藥（卡蘭尼什）公司