專利名稱：黨參內(nèi)酯分子印跡固相萃取柱的制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利涉及的是高分子合成及其在中藥活性成分分離中應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物的制備及利用該聚合物為固相萃取劑分離、純化天然產(chǎn)物中的黨參內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
(1)黨參，桔?？浦参稂h參 Codonopsis ρilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參 Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta(Nannf. )L. Τ. Shen 或川黨參 Codonpsistangshen Oliv.的干燥根。黨參內(nèi)酯是其主要有效成份，具有增強免疫力、擴(kuò)張血管、降壓、改善微循環(huán)、增強造血功能等作用。(2)中草藥所含成分十分復(fù)雜，既有有效成分，又有無效成分和有毒成分。為了提高中草藥的治療效果，就要盡最大限度提取有效成分，去除無效成分及有毒成分。因此，中草藥活性成分分離提取對于提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床療效都極為重要。傳統(tǒng)中藥活性成分的分離提取常采用硅膠柱、C18鍵合相柱、Al2O3柱等利用成分的吸附系數(shù)差異實現(xiàn)分離，但最大缺點是選擇性差，富集容量低，尤其對一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分離提純難度大，采用這些常規(guī)分離手段往往需要反復(fù)操作，提取率極低，手性構(gòu)型可能因此改變而失活。分子印跡聚合物是為模板分子量身定做的高分子聚合物，由于其經(jīng)洗脫模板分子后，能留下在形狀、大小以及識別位點都與模板分子相匹配的空穴，該空穴能重新識別模板分。由于其兼有高效、穩(wěn)定和特異選擇性且合成價格低廉的特點，因而具有較廣泛應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于避免上述傳統(tǒng)提取方法技術(shù)存在的問題，建立一種基于黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物為新型吸附分離材料，并以此作固相萃取柱的固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化黨參內(nèi)酯的方法，由此可以獲得高提取率的目標(biāo)成分。本發(fā)明通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)的，具體包括步驟如下1.黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物的制備(1)將黨參內(nèi)酯、功能單體和交聯(lián)劑按照摩爾比1 4 20溶解在裝有68mL致孔劑乙腈溶液的圓底燒瓶中；(2)再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈78mg后，通氮氣脫氧15min ；(3)將密封好的圓底燒瓶放入60°C的水浴中，恒溫聚合24h得到聚合物；(4)將制得的聚合物用甲醇-冰醋酸(9 1，V/V)混合液為萃取劑，通過索氏提取的方法洗去模板分子及沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，以紫外光譜進(jìn)行檢查直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，然后用甲醇除去殘留的冰醋酸；(5)將除去模板分子的聚合物在60°C干燥2h，獲得黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物；(6)非印跡聚合物的制備方法，除不加入模板分子外，其余步驟同上。
2.固相萃取分離純化中藥粗提液中的黨參內(nèi)酯(1)固相萃取分離純化中藥粗提物中的黨參內(nèi)酯稱取黨參藥材粉末(過50目篩)5. Og,加入甲醇提取液40mL，浸泡Ih后，放入超聲波中超聲40min后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用甲醇溶解并定容至5mL，備用；

(2)將上述得到的黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物采用干法裝柱填充到固相萃取柱中， 并用甲醇溶液平衡柱子；取黨參藥材粗提取液5mL上樣后，用甲醇洗脫保留在萃取柱中的黨參內(nèi)酯，將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的黨參內(nèi)酯。本發(fā)明制備的分子印跡聚合物形貌為規(guī)則球形且單分散，粒徑5 μ m左右，對黨參內(nèi)酯具有很好的識別性能，作為固相萃取的填料，可用于中藥中黨參內(nèi)酯成分的高效分離、
富集及純化。與C18鍵合固相萃取柱，硅膠固相萃取柱及Al2O3固相萃取柱相比，黨參分子印跡固相萃取柱對提取液中的黨參內(nèi)酯有更好的選擇性，柱容量最高，達(dá)到8. 6 μ mol/g,是C18 鍵合固相萃取柱和硅膠固相萃取柱的2-3倍，Al2O3固相萃取柱的10倍。同時洗脫率達(dá)到 93%，亦高于其它吸附劑固相萃取柱。


附圖1為黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物合成示意圖，表明黨參內(nèi)酯與功能單體1-乙烯基咪唑之間通過氫鍵發(fā)生分子間作用力，交聯(lián)劑在引發(fā)劑熱引發(fā)下發(fā)生聚合反應(yīng)后，固定了黨參內(nèi)酯和1-乙烯基咪唑形成的復(fù)合物，洗脫模板分子后留下作用位點的空腔，得到印跡聚合物；圖2是聚合物微粒的形態(tài)電鏡掃描圖，放大6000倍，粒徑在5 μ m左右。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的實施例作詳細(xì)說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實施，給出了詳細(xì)的實施方案和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實施例。實施例1 1.黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物的優(yōu)選制備方法黨參內(nèi)酯0. 6mmol，功能單體1_乙烯基咪唑2. 4mmol和交聯(lián)劑DVB-80 12mmol混合，溶解于裝有61mL致孔劑乙腈液的圓底燒瓶中，加入引發(fā)劑AIBN 78mg，通氮氣脫氧15min，在氮氣保護(hù)下迅速封口。將密封好的試管放入60°C的水浴中恒溫聚合24h后，得到聚合物。將聚合物放入索式提取器中，用甲醇-冰醋酸(9 1，V/V)混合液洗脫模板分子和沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，再用甲醇洗去殘留冰醋酸，在60°C干燥2h，得到黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物。2.固相萃取分離純化中藥粗提液中的黨參內(nèi)酯稱取黨參粉末5. 0g，加人甲醇溶液40ml，放入超聲波中超聲40min后，稱重用甲醇補足重量，過濾即得黨參粗提取液。稱取200mg洗脫好的黨參內(nèi)酯印跡聚合物，采用干法裝柱，依次加入甲醇和40%甲醇溶液平衡固相萃取柱后，取黨參粗提取液5mL，上樣，往柱中加壓，控制流速為0. 5mL/min，再用IOmL甲醇溶液洗脫保留在萃取柱上的黨參內(nèi)酯。經(jīng)濃縮、干燥得到黨參內(nèi)酯1.6mg。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明的目的在于提供一種制備黨參內(nèi)酯分了印跡聚合物的方法，并提供利用該聚合物作為固相萃取固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化黨參內(nèi)酯的方法。其特征在于可通過以下步驟得到(1)首先將黨參內(nèi)酯、功能單體(1-乙烯基咪唑)和交聯(lián)劑(80%-二乙烯基苯， DVB-80)按1 3-5 20溶解在裝有致孔劑乙腈溶液的圓底燒瓶中；加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，在60°C水浴中聚合24h;反應(yīng)后的聚合物經(jīng)甲醇-冰醋酸溶液通過索氏提取的方法洗去模板分子及未反應(yīng)完全的試劑，以紫外光譜進(jìn)行檢查，直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，再用甲醇洗去殘留的冰醋酸，即得到黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物。(2)固相萃取分離純化中藥粗提物中的黨參內(nèi)酯稱取黨參藥材粉末(過50目篩)5. Og,加入甲醇40mL，浸泡Ih后，放入超聲波中超聲40min，冷卻至室溫后稱量用甲醇補足重量，過濾即得到黨參藥材粗提取液；將上述得到的黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，用甲醇溶液平衡柱子；取黨參藥材粗提取液上樣后，用甲醇洗脫保留在萃取柱中的黨參內(nèi)酯，將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的黨參內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，該分子印跡聚合物制備采用的模板分子是黨參內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的功能單體是1-乙烯基咪唑，用量為每0. 6mmol黨參內(nèi)酯需1. 2-3. Ommoll-乙烯基咪唑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的交聯(lián)劑是二乙烯基苯 (DVB-80)，用量為每 0. 6mmol 黨參內(nèi)酯需 10_14mmol DVB-80
5.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的引發(fā)劑是偶氮二異丁腈 (AIBN)，按照模板分子及功能單體的用量需75-80mg偶氮二異丁腈。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的致孔劑是乙腈，根據(jù)功能單體與交聯(lián)劑的用量，需55-70mL乙腈。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，洗除聚合物中模板分子及沒有聚合的交聯(lián)劑、功能單體和引發(fā)劑采用的是甲醇-冰醋酸(9 1，V/V)混合液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，該聚合物可作為固相萃取固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化黨參內(nèi)酯。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，該聚合物可作為填充料用于制備固相萃取柱。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，固相萃取中采用甲醇洗脫保留在萃取柱中的黨參內(nèi)酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了從中藥黨參提取液中直接定向提取分離黨參內(nèi)酯的分子印跡聚合物的制備及其應(yīng)用方法?？蓪⒃摼酆衔镒鳛樘畛淞现瞥晒滔噍腿≈鶑闹兴幪崛∫褐刑崛》蛛x、純化黨參內(nèi)酯。與C18鍵合固相萃取柱，硅膠固相萃取柱相比，黨參內(nèi)酯分子印跡固相萃取柱對提取液中的黨參內(nèi)酯有更好的選擇性，更高的柱容量，達(dá)8.6μmol/g，是后兩者的2-3倍，同時洗脫率達(dá)到93％，亦高于其它兩種固相萃取柱。本方法用于黨參內(nèi)酯的提取分離所得產(chǎn)品純度高，操作過程簡單，極易實現(xiàn)工業(yè)化。同時減少了溶劑使用量，工藝更為安全、環(huán)保，能夠達(dá)到去除雜質(zhì)、純化及富集黨參內(nèi)酯的目的。
文檔編號B01D15/22GK102174138SQ20111002712
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者尹小英, 江一帆, 羅永明, 衷友泉 申請人:尹小英