專(zhuān)利名稱(chēng)：高速逆流色譜法從鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用植物單體的分離方法，具體的說(shuō)是應(yīng)用高速逆流色譜法從 鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法。
背景技術(shù)：
鉤吻(Ge/w附/wme/e^raBenth.， GEB)為馬錢(qián)科植物胡蔓藤的全草，分為 中國(guó)鉤吻和北美鉤吻兩種。在我國(guó)盛產(chǎn)于浙江、福建、廣東、廣西、湖南、貴 州、云南等地，又名斷腸草、野葛、毒根、大茶藥等。國(guó)外，1887年HGerrad 等將其制成格林制劑，為一些國(guó)家副藥典所收載；美國(guó)藥物索引及日本《世界 的民間藥》中均有鉤吻的記載。我國(guó)對(duì)鉤吻的研究歷史更為悠久，《神農(nóng)本草》、 《本草綱目》均有記載，我國(guó)民間一直應(yīng)用鉤吻原樓物治療各類(lèi)疼痛，尤其慢 性神經(jīng)性疼痛與癌性疼痛。鉤吻的主要有效成分為吲哚類(lèi)生物堿。鉤吻總生物 堿或粗提物具有治療免疫疾病、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗銀屑病、擴(kuò)瞳、促進(jìn)畜 禽生長(zhǎng)等藥理作用(張?zhí)m蘭，林敬明，吳忠.鉤吻化學(xué)成分與藥理研究進(jìn)展，中 藥材，2003， 26 (6): 451-453)。鉤吻毒性大，臨床應(yīng)用受到一定限制，但在其 顯著的臨床療效誘惑下，近年對(duì)其研發(fā)日趨活躍，開(kāi)始瞄準(zhǔn)其生物堿單體。鉤吻生物堿單體，目前己經(jīng)分離得到鉤吻素子、甲、寅、卯、辰、丙、丁、 戊、己、庚以及胡蔓藤堿甲、乙、丙、丁等40多種單體，其毒性大小不同，鉤 吻生物堿單體的用途也很廣泛。如鉤吻素子具有抗腫瘤作用(吳達(dá)榮，秦瑞， 蔡晶，遲德彪.鉤吻素子抗腫瘤作用研究，中藥藥理與臨床，2006， 22 (5): 6-8)、調(diào)節(jié)免疫功能作用(孫莉莎，雷林生，方放治，楊淑琴，王劍.鉤吻素 子對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)及體液免疫反應(yīng)的抑制作用，中藥藥理與臨床，1999， 15 (6): 10-12)、治療銀屑病(張?zhí)m蘭，黃昌全，張忠義，等.鉤吻素子治療銀 屑病樣動(dòng)物模型的療效觀察.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005， 25 (5): 547-549)以及 抗血小板聚集作用(方放治，單春文，陳平雁.鉤吻素子對(duì)兔血小板聚集的影響， 中藥藥理與臨床，1998， 14 (1): 21-24)等。目前文獻(xiàn)報(bào)道的，用于從鉤吻總生物堿中分離鉤吻生物堿單體的方法為柱3層析法，如硅膠柱層析法、氧化鋁柱層析法。柱層析法的不足之處是分離周 期長(zhǎng)，回收率低，分離效果很不理想。高速逆流色譜(High-speed Counter-current Chromatography, HSCCC)是國(guó)際上于20世紀(jì)80年代以來(lái)在液-液分配色譜基 礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型分離技術(shù)，它不用任何固態(tài)支撐體或載體因而克服了傳統(tǒng) 分離技術(shù)對(duì)樣品組分的不可逆吸附作用，節(jié)省了材料和溶媒消耗，樣品回收率 高，同時(shí)還具有操作簡(jiǎn)便、分離量大、分離周期短、分離效率高以及重現(xiàn)性好 等優(yōu)點(diǎn)，易形成自動(dòng)化生產(chǎn)，被廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域各種物質(zhì) 的制備分離和純化。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，鉤吻總生物堿提取方法己有大量文獻(xiàn)報(bào)道(徐堅(jiān)，梁崇真.鉤 吻總生物堿提取方法的比較，藥學(xué)通報(bào)，1988， 23 (6) : 341-342),其中包括 2篇申請(qǐng)專(zhuān)利①鉤吻總生物堿的提取方法，公開(kāi)號(hào)CN101011466A，
公開(kāi)日
2007年8月8日；②一種抗癌鎮(zhèn)痛的中藥鉤吻總生物堿和含它的藥物組合物及 其制備方法，公開(kāi)號(hào):CN1528767A，
公開(kāi)日2004年9月15日。但上述2篇申 請(qǐng)專(zhuān)利未涉及單體的分離方法?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中，未見(jiàn)高速逆流色譜法用于鉤吻生 物堿單體分離的國(guó)內(nèi)外報(bào)道。因此，本發(fā)明公開(kāi)了高速逆流色譜法從鉤吻中分 離鉤吻生物堿單體的方法。發(fā)明內(nèi)容為了克服現(xiàn)有分離鉤吻生物堿單體技術(shù)的不足，本發(fā)明目的在于提供一種 高效、速效分離鉤吻生物堿單體的新方法，即使用高速逆流色譜法從鉤吻中分 離制備鉤吻生物堿單體的方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是 一種高速逆流色譜法從鉤吻 中分離制備鉤吻生物堿單體的方法，其特征是原料鉤吻總生物堿。所述的原料鉤吻總生物堿，系參考經(jīng)典的鉤吻生物堿提取方法獲得(陳忠 良.鉤吻生物堿的提取與分離，中藥通報(bào)，1987， 12 (5) : 41;徐堅(jiān)，梁崇真. 鉤吻總生物堿提取方法的比較，藥學(xué)通報(bào)，1988， 23 (6) : 341-342;陳競(jìng)峰， 袁慧.鉤吻總堿的提取、分離、鑒定及一般毒性，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué) 版)，2003， 29 (5) : 422-425)。逆流色譜儀所述的分離設(shè)備高速逆流色譜儀，根據(jù)所需目標(biāo)分離量的不同，可選擇分 析型、半制備型或制備型高速逆流色譜儀。高速逆流色譜分離制備鉤吻生物堿單體的方法，包括制備構(gòu)成固定相、流 動(dòng)相的溶劑體系；高速逆流色譜儀填充滿(mǎn)固定相；泵入流動(dòng)相并平衡；由進(jìn)樣 閥進(jìn)樣；根據(jù)檢測(cè)器圖譜或結(jié)合高效液相色譜、薄層色譜檢測(cè)方法，收集目的 組分，減壓蒸干后重結(jié)晶獲得高純度鉤吻生物堿單體。所述的溶劑體系可為1)烷烴脂肪酸酯脂肪醇水構(gòu)成的兩相溶劑體 系；2)氯仿脂肪醇水(含一定濃度酸)構(gòu)成的兩相溶劑體系；3)以及在 上述兩種體系基礎(chǔ)上建立的多元兩相溶劑體系。所述的分離方法，通過(guò)調(diào)整溶劑體系的具體配比參數(shù)，可用于一步分離單 個(gè)目標(biāo)鉤吻生物堿單體；也可一步分離多個(gè)目標(biāo)鉤吻生物堿單體；亦可分步分 離鉤吻生物堿單體，即首先分離一種或幾種較易分離的鉤吻生物堿單體，然后 將未能分離開(kāi)的組分從色譜儀中泵出，濃縮后釆用高速逆流色譜法進(jìn)行二次分 離。分離出的鉤吻生物堿單體可通過(guò)熔點(diǎn)儀測(cè)定熔點(diǎn)、高效液相色譜儀測(cè)定純 度、紫外(Uultraviolet， UV)全波譜掃描圖譜、紅外(Infrared, IR)掃描圖譜、 核磁共振譜(Nuclear Magnetic Resonance,麗R)、質(zhì)譜(Mass Spectrum, MS) 等方法驗(yàn)證其結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是-1) 方便快捷，操作簡(jiǎn)便，分離周期短。傳統(tǒng)分離制備方法操作繁瑣、分離 周期長(zhǎng)， 一般要1 2個(gè)月，甚至更長(zhǎng)時(shí)間；采用本法高速逆流色譜法分離鉤吻 生物堿單體，只需1 2天即可，大大縮短分離周期。2) 制備量大。根據(jù)所需的目標(biāo)樣品量，可選擇不同型號(hào)的高速逆流色譜儀 進(jìn)行分離。其中，制備型高速逆流色譜儀進(jìn)樣量可達(dá)幾克甚至幾十克， 一次分 離出的鉤吻生物堿單體的量即可約達(dá)中試水平。3) 樣品損耗少，得率高，分離效果好。傳統(tǒng)的柱層析法所用固定相是固體， 易出現(xiàn)樣品的吸附、拖尾、分離純度不高等現(xiàn)象；而高速逆流色譜分離法所用 固定相是液體，不存在吸附現(xiàn)象，因而分離得率高，不易產(chǎn)生拖尾，分離效果好，經(jīng)重結(jié)晶后純度可達(dá)98.5%以上。4) 重復(fù)可控性好。傳統(tǒng)的柱層析法常采用梯度洗脫，洗脫液濃度、洗脫速 度不易精確控制，重復(fù)性差；而本法參數(shù)可控，重復(fù)性好，適合自動(dòng)化生產(chǎn)， 可推廣應(yīng)用。5) 分離得到的鉤吻生物堿單體，具有多種藥理活性，如調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤 等作用，具有制備成藥物的潛在應(yīng)用。本分離方法，則提供了實(shí)現(xiàn)鉤吻生物堿 單體藥用的產(chǎn)業(yè)化制備基礎(chǔ)。總之，通過(guò)調(diào)整溶劑體系，可以采用高速逆流色譜法一步分離某種或多種 目標(biāo)鉤吻生物堿單體，也可分步分離多種鉤吻生物堿單體。較傳統(tǒng)分離方法操 作簡(jiǎn)便，分離周期短，可控性好，制備量大，樣品損耗少，擁有用于自動(dòng)化制 備鉤吻生物堿單體應(yīng)用的前景，鉤吻生物堿單體具有多種藥理效應(yīng)，有望應(yīng)用 于制備治療多種疾病的藥品，而本法可以成為制備鉤吻生物堿單體藥用的產(chǎn)業(yè) 化制備基礎(chǔ)。
以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述。

圖1是實(shí)施例1的從鉤吻總生物堿中分離鉤吻素子的高速逆流色譜圖；圖中橫坐標(biāo)表示時(shí)間；l為鉤吻素子，2為鉤吻素甲，3為鉤吻素己。圖2是實(shí)施例2的從鉤吻總生物堿中分離鉤吻素甲和鉤吻素己的高速逆流 色譜圖；圖中橫坐標(biāo)表示吋間；l為鉤吻素己，2為鉤吻素甲。圖3是實(shí)施例3的從鉤吻總生物堿中分離鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己 等4種單體的高速逆流色譜圖；圖中橫坐標(biāo)表示時(shí)間；l為單體l， 2為單體2:鉤吻素己，3為單體3:鉤 吻素子，4為單體4:鉤吻素甲。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但不對(duì)本發(fā)明的實(shí)施范圍構(gòu) 成任何限制。實(shí)施例1高速逆流色譜法從鉤吻總生物堿中分離鉤吻生物堿單體鉤吻素子(見(jiàn)圖1)。1. 樣品鉤吻總生物堿，系參考經(jīng)典的鉤吻生物堿提取方法(陳忠良.鉤 吻生物堿的提取與分離，中藥通報(bào)，1987， 12 (5) : 41;徐堅(jiān)，梁崇真.鉤吻總生物堿提取方法的比較，藥學(xué)通報(bào)，1988， 23 (6) : 341-342;陳競(jìng)峰，袁慧. 鉤吻總堿的提取、分離、鑒定及一般毒性，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2003， 29 (5) : 422-425)從榕產(chǎn)鉤吻根莖提取獲得。2. 儀器TBE-300A高速逆流色譜儀，上海同田生物技術(shù)有限公司。3. 方法3.1配制溶劑體系，正己烷乙酸乙酉旨無(wú)水乙醇水(3 : 3 : 2 : 3 V/V) 共2200ml，充分混勻后靜置過(guò)夜分層。第二天分離分層的兩相溶液，上相作為 固定相，下相作為流動(dòng)相，超聲半小時(shí)。3.2制備樣品溶液取鉤吻總生物堿約300mg，用略少于20ml的流動(dòng)相溶 解，超聲10min，備用。3.3平衡高速逆流色譜儀固定相、流動(dòng)相體系固定相以25 ml/min流速泵 入高速逆流色譜儀至泵滿(mǎn)，設(shè)定恒溫循環(huán)器溫度為25 °C;以1.5ml/min流速泵 入流動(dòng)相至平衡，泵流動(dòng)相同時(shí)迅速開(kāi)啟主機(jī)，調(diào)主機(jī)反轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為900rpm。 計(jì)算平衡時(shí)本溶劑體系的保留率P為71.6G/0 (P = (V總一V出)/V,exl00%，其 中V,e,:管路總體積(ml); 平衡過(guò)程中流動(dòng)相推出的固定相體積(ml))。平衡穩(wěn)定10min。3.4上樣分離開(kāi)啟紫外檢測(cè)器與N2000色譜工作站軟件，樣品通過(guò)進(jìn)樣 閥倒吸入儀器，進(jìn)樣完畢的同時(shí)迅速點(diǎn)擊軟件開(kāi)始采集紫外吸收數(shù)據(jù)。進(jìn)樣后 40min開(kāi)始用自動(dòng)部分收集器收集流出的樣品，每4min收集1管，共收集60 管。收集完畢后，將主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至0，關(guān)閉主機(jī)和恒溫循環(huán)器，以25ml/min流 速泵入固定相，將主機(jī)內(nèi)的平衡體系溶液泵出回收濃縮備用。4. 目標(biāo)單體收集純化將收集到的各管組分用高效液相色譜檢測(cè)。檢測(cè)條 件如下色譜柱為依利特Hypersil ODS2高效液相色譜柱(5 pm， 4.6 mm x 250 mm)，柱溫25 。C;流動(dòng)相為甲醇水正丁胺(50 : 50 : 0.1V/V);流速為1.0 ml/min;紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為256 nrn。經(jīng)檢測(cè)，將含有純度較高的相同成分的組分合并，減壓蒸干，乙醇重結(jié)晶，得到一個(gè)單體成分，經(jīng)紫外全波譜掃描、紅外圖譜掃描、核磁共振譜、質(zhì)譜等方法分析確定為鉤吻素子，純度>98.5 %。 實(shí)施例2高速逆流色譜法分離鉤吻生物堿單體鉤吻素甲和鉤吻素己。(見(jiàn)圖2)本實(shí)施例是采用高速逆流色譜法分步分離鉤吻生物堿的單體的實(shí)例。第一 步，采用高速逆流色譜法分離鉤吻素子，具體方法詳見(jiàn)實(shí)施例l;第二步，將第 一步高速逆流色譜法未能分離的組分收集濃縮后，作為新的分離樣品，再次經(jīng) 高速逆流色譜法分離，可得鉤吻素甲和鉤吻素己。本實(shí)施例僅述第二步。2.1樣品實(shí)施例1中未能分離開(kāi)的鉤吻素甲和鉤吻素己兩個(gè)組分(即圖1 中2、 3組分)收集液合并后，45r減壓蒸干，作為新的分離樣品。2.2儀器TBE-300A高速逆流色譜儀，上海同田生物技術(shù)有限公司。2.3 3.方法3.1配制溶劑體系，氯仿甲醇0.2mol/l鹽酸(4 : 3 : 1.5 V/V)共1700 ml， 充分混勻后靜置過(guò)夜分層。第二天分離分層的兩相溶液，上相作為固定相，下 相作為流動(dòng)相，超聲半小時(shí)。3.2制備樣品溶液取上述樣品約300mg，用略少于20ml的流動(dòng)相溶解， 超聲10min，備用。3.3平衡高速逆流色譜儀固定相、流動(dòng)相體系固定相以25ml/min流速泵 入高速逆流色譜儀至泵滿(mǎn)，設(shè)定恒溫循環(huán)器溫度為25 °C;以2ml/min流速泵入 流動(dòng)相至平衡，泵流動(dòng)相同時(shí)迅速開(kāi)啟主機(jī)，調(diào)主機(jī)反轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800rpm。計(jì) 算平衡時(shí)本溶劑體系的保留率p為66 %。平衡穩(wěn)定10 min。3.4上樣分離開(kāi)啟紫外檢測(cè)器與N2000色譜工作站軟件，樣品通過(guò)進(jìn)樣 閥倒吸入儀器，進(jìn)樣完畢的同時(shí)迅速點(diǎn)擊軟件開(kāi)始采集紫外吸收數(shù)據(jù)(檢測(cè)波 長(zhǎng)為254nm)。進(jìn)樣后30 min開(kāi)始用自動(dòng)部分收集器收集流出的樣品，每4 min 收集1管，共收集100管。收集完畢后，將主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至0，關(guān)閉主機(jī)和恒溫循 環(huán)器，用氮?dú)鈱⒅鳈C(jī)內(nèi)的平衡體系溶液泵出回收濃縮備用。4.目標(biāo)單體收集純化將收集到的各管組分用高效液相色譜檢測(cè)。檢測(cè)條 件如下色譜柱為依利特Hypersil ODS2高效液相色譜柱(5 |im， 4.6 mm x 250 mm)，柱溫25 。C;流動(dòng)相為甲醇水正丁胺(50 : 50 : 0.1V/V);流速為1.0ml/min;紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為256 nm。經(jīng)檢測(cè)，將含有純度較高的相同成 分的組分合并，減壓蒸干，乙醇重結(jié)晶，得到兩個(gè)單體成分，經(jīng)紫外全波譜掃 描、紅外圖譜掃描、核磁共振譜、質(zhì)譜等方法分析確定為鉤吻素甲和鉤吻素己， 純度>98.5 %。 實(shí)施例3高速逆流色譜法分離鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己等4種單體。(見(jiàn)圖3)1. 樣品鉤吻總生物堿，系參考經(jīng)典的鉤吻生物堿提取方法(陳忠良.鉤 吻生物堿的提取與分離，中藥通報(bào)，1987， 12 (5) : 41;徐堅(jiān)，梁崇真.鉤吻 總生物堿提取方法的比較，藥學(xué)通報(bào)，1988， 23 (6) : 341-342;陳競(jìng)峰，袁慧. 鉤吻總堿的提取、分離、鑒定及一般毒性，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2003， 29 (5) : 422-425)從榕產(chǎn)鉤吻根莖提取獲得。2. 儀器TBE-300A高速逆流色譜儀，上海同田生物技術(shù)有限公司。3. 方法3.1配制溶劑體系，氯仿:甲醇:0.2mol/l鹽酸(2:2:1 V/V)共2000ml， 充分混勻后靜置過(guò)夜分層。第二天分離分層的兩相溶液，上相作為固定相，下 相作為流動(dòng)相，超聲半小時(shí)。3.2制備樣品溶液取鉤吻總生物堿300mg，用略少于20ml的流動(dòng)相溶解， 超聲10min，備用。3.3平衡高速逆流色譜儀固定相、流動(dòng)相體系固定相以25 ml/min流速泵 入高速逆流色譜儀至泵滿(mǎn)，設(shè)定恒溫循環(huán)器溫度為25 °C;以1.5ml/min流速泵 入流動(dòng)相至平衡，泵流動(dòng)相同時(shí)迅速開(kāi)啟主機(jī)，調(diào)主機(jī)反轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為850rpm。 計(jì)算平衡時(shí)本溶劑體系的保留率P為73 %。平衡穩(wěn)定10 min。3.4上樣分離開(kāi)啟紫外檢測(cè)器與N2000色譜工作站軟件，樣品通過(guò)進(jìn)樣 閥倒吸入儀器，進(jìn)樣完畢的同時(shí)迅速點(diǎn)擊軟件開(kāi)始采集紫外吸收數(shù)據(jù)(檢測(cè)波 長(zhǎng)為254nm)。進(jìn)樣后40 min開(kāi)始用自動(dòng)部分收集器收集流出的樣品，每4 min 收集1管，共收集110管。收集完畢后，將主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至0，關(guān)閉主機(jī)和恒溫循 環(huán)器，用氮?dú)鈱⒅鳈C(jī)內(nèi)的平衡體系溶液泵出回收濃縮備用。4. 目標(biāo)單體收集純化將收集到的各管組分用高效液相色譜檢測(cè)。檢測(cè)條 件如下色譜柱為依利特Hypersil ODS2高效液相色譜柱(5 jim， 4.6 mm xmm),柱溫25 。C;流動(dòng)相為甲醇水正丁胺(50 : 50 : 0.1V/V);流速為1.0 ml/min;紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為256 nm。經(jīng)檢測(cè)，將含有純度較高的相同成 分的組分合并，減壓蒸干，乙醇重結(jié)晶，得到四個(gè)單體成分，經(jīng)紫外全波譜掃 描、紅外圖譜掃描、核磁共振譜、質(zhì)譜等方法分析確定其中三種為鉤吻素子、 鉤吻素甲和鉤吻素己，純度〉98.5%。
權(quán)利要求
1.一種高速逆流色譜法從鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法，其特征是以鉤吻總生物堿為原料，以高速逆流色譜儀為分離設(shè)備，該方法包括制備構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系；高速逆流色譜儀填充滿(mǎn)固定相；泵入流動(dòng)相并平衡；由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；根據(jù)檢測(cè)器圖譜或結(jié)合其他檢測(cè)方法，如高效液相色譜法、薄層色譜法，收集目的組分，減壓蒸干后重結(jié)晶獲得高純度鉤吻生物堿單體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法，其特 征是所述的分離方法為高速逆流色譜法。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法，其特 征是所述的分離設(shè)備為高速逆流色譜儀。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l、 3所述的分離設(shè)備高速逆流色譜儀，其特征是所述設(shè)備根據(jù)所需目標(biāo)分離量的不同，可選擇分析型、半制備型或制備型高速逆流色譜 儀。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征是所述的溶劑體系可為1) 烷烴脂肪酸酯脂肪醇水構(gòu)成的兩相溶劑體系；2)氯仿脂肪醇水(含 一定濃度酸)構(gòu)成的兩相溶劑體系；3)以及在上述兩種體系基礎(chǔ)上建立的多元兩相溶劑體系。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征是所述的分離方法，通過(guò)調(diào)整溶劑體系的具體配比參數(shù)，可用于一步分離單個(gè)目標(biāo)鉤吻生物堿單體；也可 一步分離多個(gè)目標(biāo)鉤吻生物堿單體；亦可分步分離鉤吻生物堿單體，即首先分 離一種或幾種較易分離的鉤吻生物堿單體，然后將未能分離開(kāi)的組分從色譜儀 中泵出，濃縮后采用高速逆流色譜法進(jìn)行二次分離。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離方法，其特征是分離出的鉤吻生物堿單體 可通過(guò)熔點(diǎn)儀測(cè)定熔點(diǎn)、高效液相色譜儀測(cè)定純度、紫外全波譜掃描圖譜、紅 外掃描圖譜、核磁共振譜、質(zhì)譜等方法驗(yàn)證其結(jié)構(gòu)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種高速逆流色譜法從鉤吻中分離制備鉤吻生物堿單體的方法，屬藥用植物單體的分離方法。本發(fā)明以鉤吻總生物堿為原料，以高速逆流色譜儀為分離設(shè)備，方法包括制備構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系；高速逆流色譜儀填充滿(mǎn)固定相；泵入流動(dòng)相并平衡；由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；根據(jù)檢測(cè)器圖譜或結(jié)合高效液相色譜、薄層色譜檢測(cè)方法，收集目的組分，減壓蒸干后重結(jié)晶獲得高純度鉤吻生物堿單體。通過(guò)調(diào)整溶劑體系的具體配比參數(shù)，可以一步或分步分離單個(gè)或多個(gè)目標(biāo)鉤吻生物堿單體。本方法方便快捷、制備量大、樣品損耗少、分離效果好、可控性強(qiáng)、適合自動(dòng)化生產(chǎn)，分離獲得的鉤吻生物堿單體具有多種藥理活性，具有制備成藥物的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)B01D15/30GK101323618SQ200810071469
公開(kāi)日2008年12月17日 申請(qǐng)日期2008年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月28日
發(fā)明者俞昌喜, 浩 劉, 盈 許 申請(qǐng)人:福建醫(yī)科大學(xué)