培養(yǎng)生物絮團和有益菌的絮團營養(yǎng)素配方及制備方法與應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于海洋生物健康養(yǎng)殖技術，具體涉及一種培養(yǎng)生物絮團和有益菌的絮團 營養(yǎng)素配方及制備方法與應用。
【背景技術】
[0002 ] 對蝦是我國重要的水產養(yǎng)殖品種之一，2012年，全國對蝦產量已經達到169萬噸， 對蝦養(yǎng)殖已成為我國漁業(yè)經濟的重要支柱。近年來，隨著工業(yè)的快速發(fā)展，水產養(yǎng)殖用地及 水資源日益緊缺，在有限養(yǎng)殖空間條件下開展集約化對蝦養(yǎng)殖成為未來養(yǎng)殖的發(fā)展趨勢。 集約化高密度的對蝦養(yǎng)殖水體中，殘餌、糞便及排泄物積累會產生大量的氨氮及亞硝氮等 有毒物質，嚴重影響?zhàn)B殖對蝦正常的生理代謝，降低對蝦的免疫力，誘發(fā)蝦病影響健康。至 今在生產中只能通過加大換水量，適當降低污物濃度。近年來雖然利用生物絮團技術養(yǎng)殖 對蝦能通過調控水體中的碳氮比，達到去除部分有害含氮化合物的效果，但是該技術目前 尚有許多技術參數(shù)需要完善，且在生產中形成的生物絮團量不易控制，組成生物絮團的菌 群種類具有不確定性，缺乏實用的生物絮團操作技術和產品來推動養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
[0003] 大量研究發(fā)現(xiàn)，自然養(yǎng)殖水體中存在多種有益微生物，如硝化細菌與反硝化細菌， 該類細菌具有脫氮性能，可以將水體中的氨及亞硝氮轉化為無毒物質。另外，水體中還存在 多種對病原具有拮抗作用的細菌，只有當該類細菌處于優(yōu)勢地位時才能有效的抑制病原菌 的繁殖；同時水體中還存在多種對對蝦魚類等養(yǎng)殖動物免疫力具有促進作用的菌，可以提 高養(yǎng)殖動物的免疫抵抗力。但是由于目前對蝦養(yǎng)殖模式多采用過濾或消毒后的水體進行養(yǎng) 殖，多數(shù)的有益菌也被去除，造成益菌菌種缺少，另一方面，養(yǎng)殖水體中維持有益菌生長的 營養(yǎng)物質欠缺且不均衡，成為有益菌增殖的限制因子，因此在常規(guī)養(yǎng)殖中培養(yǎng)有益菌難度 大。實踐結果也表明，即使在水體中潑灑有益菌，幾天之后相應細菌的檢出率極低，表明養(yǎng) 殖環(huán)境并不適有益菌的存活。
[0004] 顯然，提供一種既能促進水體中生物絮團形成，同時還能增加其中有益菌數(shù)量的 產品及應用技術，將對對蝦養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展具有重要的推動作用。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為實現(xiàn)對蝦生物絮團健康養(yǎng)殖及養(yǎng)殖水體中有益菌定向穩(wěn)定培 養(yǎng)，提供一種培養(yǎng)生物絮團和有益菌的絮團營養(yǎng)素配方及制備與應用。
[0006] 已有研究表明，蠟樣芽胞桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、嗜酸乳桿 菌等可作為有益菌用于水產養(yǎng)殖，在水體中添加該類菌能夠提高對蝦多種酶活性和成活 率，促進對蝦生長。在養(yǎng)殖水體中培養(yǎng)該類有益菌，需要具備兩個必要的條件，首先應保證 水體中有一定密度的有益菌的菌種存在;另外，要滿足有益菌生長的環(huán)境條件及營養(yǎng)物質。 進一步研究表明，生物絮團中也含有多種菌，通過人工調控能夠改變絮團中菌群組成。
[0007] 因此，本發(fā)明提供了一種既能促進養(yǎng)殖水體中生物絮團形成又利于有益菌擴增的 絮團營養(yǎng)素配方，同時添加了有益菌作為生物絮團中有益菌的菌種。大大改善了養(yǎng)殖水質， 提尚養(yǎng)殖成活率。
[0008] 本發(fā)明的配方是由以下組分構成，其中各組分的重量百分比為:膨化玉米粉20%-40%、稻殼粉5%-10%、腐殖酸5%-10%、糖蜜粉40%-60%、有益菌粉10%-20%。
[0009] 本發(fā)明各組分之間的重量百分比還可以為：膨化玉米粉25%-35%、稻殼粉7%-9%、腐殖酸7%-9%、糖蜜粉40%-50%、有益菌粉10%-15% ;或者為:膨化玉米粉30%、稻 殼粉7%、腐殖酸7%、糖蜜粉44%、有益菌粉12%。
[0010]上述有益菌包括:蠟樣芽胞桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌或者嗜 酸乳桿菌其中的一種或幾種，其中有益菌的總菌數(shù)量為IXIO8~I X 101()cell/g。
[0011] 本發(fā)明的制備方法:首先分別稱取所需的膨化玉米粉、稻殼粉和腐殖酸以及糖蜜 粉混勻，再用粉碎機粉碎至直徑小于80~300微米顆粒成為具有促進生物絮團及有益菌生 長的營養(yǎng)粉;再將發(fā)酵后的有益菌干燥后，粉碎至粒徑100微米以下制成有益菌粉，最后將 粉碎后的有益菌粉與上述營養(yǎng)粉混勻，即得絮團營養(yǎng)素。
[0012] 本發(fā)明廣泛應用于對蝦、海參、魚類養(yǎng)殖水體中，以加速生物絮團的形成，快速降 低中氨氮、亞硝酸氮等有害物質，同時定向培養(yǎng)對蝦養(yǎng)殖水體中有益菌。
[0013] 顯然，本發(fā)明提供了一種既能穩(wěn)定促進養(yǎng)殖水體中生物絮團形成、又能使生物絮 團菌群中含有大量有益菌的營養(yǎng)素，從而促進水體中生物絮團與有益菌增殖，大大提高對 蝦健康和養(yǎng)殖成活率。在養(yǎng)殖生產中具有較高的應用價值與廣闊的市場推廣前景。
[0014] 使用時，將制備好的絮團營養(yǎng)素用水稀釋，潑灑到養(yǎng)殖水體中，每次每立方水體用 量2~5g，每天使用1次。該產品成本較低，使用安全無毒副作用，提高生產效益。
【附圖說明】
[0015] 圖1應用本發(fā)明（組方1)于對蝦養(yǎng)殖水體中氨氮濃度變化曲線圖。
[0016] 圖2應用本發(fā)明（組方1)于對蝦養(yǎng)殖水體中亞硝氮濃度變化曲線圖。
[0017] 圖3應用本發(fā)明（組方2)于刺參養(yǎng)殖水體中氨氮濃度變化曲線圖。
[0018] 圖4應用本發(fā)明（組方2)于刺參養(yǎng)殖水體中亞硝氮濃度變化曲線圖。
[0019] 圖5應用本發(fā)明（組方3)于羅非魚養(yǎng)殖水體中氨氮濃度變化曲線圖。
[0020] 圖6應用本發(fā)明（組方3)于羅非魚養(yǎng)殖水體中亞硝氮濃度變化曲線圖。
【具體實施方式】
[0021 ]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0022]實施例1絮團營養(yǎng)素組成為(組方1):膨化玉米粉2kg、稻殼粉0.5kg、腐殖酸lkg、糖 蜜粉5.5kg，蠟樣芽胞桿菌、地衣芽孢桿菌及枯草芽孢桿菌粉總重Ikg(三種菌比例1:1:1，總 菌濃度I X l〇1()cell/g)。養(yǎng)殖動物為凡納濱對蝦。
[0023] 1 材料
[0024] 1.1試驗用蝦及養(yǎng)殖管理
[0025]凡納濱對4下（Litopenaeus vannamei)平均體長（1 ·52±0·36)cm，平均體重（0·045 ±0.003)g。試驗前暫養(yǎng)1周，養(yǎng)殖試驗為期51d，實驗用水為沉淀后的自然海水，整個養(yǎng)殖過 程不換水，養(yǎng)殖過程中連續(xù)充氣，每天投喂4次(8:00、12:00、16:00、20:00 )，投喂量按照對 蝦體重的3 %計算。
[0026] 2試驗方法
[0027] 2.1試驗分組:試驗設A組(空白對照組）、B組(添加絮團營養(yǎng)素），每組設三個平行， 每組3X30尾對蝦。實驗用桶為有效水體10升的整理箱，將制備好的絮團營養(yǎng)素用水稀釋， 潑灑到養(yǎng)殖水體中，濃度每次每立方水體2g，每天使用1次 [0028] 2.2對蝦生長及存活率測定
[0029] 實驗結束統(tǒng)計各組對蝦的存活數(shù)、生物學體長和體重，分別計算對蝦存活率、體長 增長率和餌料系數(shù)。存活率（％ )=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)X 100 ;體長增長率（％ )=(終末體 長-初始體長)/初始體長X100;餌料系數(shù)=餌料用量/對蝦增重量。
[0030] 2.3水質指標測定
[0031]養(yǎng)殖期間，每天使用YSI556便攜式水質測定儀對養(yǎng)殖水體的溫度、鹽度、溶氧和pH 值進行測量;水質分析方法均采用國家標準分析方法，每隔7天取一次水樣，經0.45um微孔 濾膜過濾后，分別采用納氏試劑分光光度法和鹽酸萘乙二胺分光光度法測定養(yǎng)殖水體的氨 氮和亞硝酸氮濃度。養(yǎng)殖結束時，使用Nalgene沉淀漏斗測定養(yǎng)殖池內生物絮團的沉積量， 取樣靜置20min后讀數(shù)。每次實驗均設置3個平行，取平均值進行分析。
[0032] 2.4養(yǎng)殖水體中可培養(yǎng)菌群組成分析
[0033] 實驗結束時，采用2216E平板劃線分離法，對養(yǎng)殖水體與生物絮團混合物中的細菌 進行分離，采用細菌16S rDNA序列分析比對法對所分離的細菌進行初步分類鑒定，統(tǒng)計不 同處理組可培養(yǎng)菌群的種類及所占比例。
[0034] 3試驗結果
[0035] 3.1對蝦存活率、生長指標及餌料系數(shù)
[0036] 對蝦養(yǎng)殖51d后，分別統(tǒng)計各組對蝦的存活數(shù)，各組對蝦的平均生物學體長及各組 對蝦的平均體重。分別計算對蝦存活率、體長增長率及餌料系數(shù)結果見表1-1，結果顯示:試 驗組對蝦存活率為(42±1.57) %，對照組對蝦存活率為（13±2.72) %，試驗組對蝦體長增 長率為（44 ± 1.88) %，高于對照組A組（39 ± 2.1) %，試驗組餌料系數(shù)為（1.05 ± 0.263)，對 照組餌料系數(shù)為（2.53±0.240)?？芍砑有鯃F營養(yǎng)素組的對蝦存活率及體長增長率顯著 高于對照組，而餌料系數(shù)顯著低于對照組。表明本發(fā)明產品具有提高對蝦存活率、促進生長 及節(jié)省飼料的效果。
[0037] 表1-1.試驗組及對照組對蝦成活率、體長增長率及餌料系數(shù)比較
[0039] 3.2水質分析結果
[0040]養(yǎng)殖過程中對照組及實驗組常規(guī)水質指標一致，水溫（28±2.98)°C，海水鹽度為 31-33，溶解氧均大于5 · 5mg/L。實驗組pH值7 · 75 ± 0 · 4，對照組pH8 · 38 ± 0 · 3。上述指標均在 正常范圍。
[0041]在養(yǎng)殖試驗過程中，試驗組與對照組水體中的氨氮濃度變化如圖1，可見整個養(yǎng)殖 期間，試驗組水體中氨氮含量都低于對照組;水體中亞硝酸氮含量變化趨勢見圖2,試驗組 水體的亞硝酸氮含量在各測樣點都低于對照組。
[0042] 3.3生物絮團數(shù)量。
[0043]養(yǎng)殖結束時，使用Nalgene沉淀漏斗測定養(yǎng)殖池內生物絮團的沉積量，結果顯示試 驗組生物絮團沉積量為(6.3 ± 0.25 )mL/L，對照組為（1.2 ± 0.10 )ml/L，表明添加絮團營養(yǎng) 素后，顯著提高了生物絮團的含量。
[0044] 3.4養(yǎng)殖水體中可培養(yǎng)菌群組成分析
[0045] 對養(yǎng)殖水體及生物絮團中可培養(yǎng)細菌進行鑒定分析，結果表明對照組中主要菌群 是嗜鹽桿菌屬(48.9±3·09) %、弧菌屬（21.7±2· 17)%、極地桿菌屬（14.1±1.09) %以及 耐鹽菌屬（10.5 ± 0.63) % ;試驗組中主要菌群是蠟樣芽胞桿菌(25.1 ± 2) %、地衣芽孢桿菌 (22.7± 3.1) %及枯草芽孢桿（28.5 ±5)%，交替單胞菌屬（13.9 ±0.34)%，嗜鹽桿菌屬 (9.8 ± 3.09) %，沒有致病弧菌檢出。
[0046] 實施例2
[004