Aeromonas aquariorum ZX1在還原硫酸鹽中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種Aeromonas aquariorum ZX1在還原硫酸鹽中的應(yīng)用。本發(fā)明的Aeromonas aquariorum ZX1是從醫(yī)院廢水中分離得到的，經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該Aeromonas aquariorum ZX1能夠高效、快速、安全還原降解硫酸鹽。因此，可以將Aeromonas aquariorum ZX1在還原降解硫酸鹽中的應(yīng)用。本發(fā)明從醫(yī)院廢水中分離得到Aeromonas aquariorum ZX1，該菌具有耐酸和碳源利用廣泛的特點(diǎn)，能夠高效、快速、安全降解硫酸鹽，并在重金屬?gòu)U水中有較強(qiáng)的功能，因此可以用于快速還原硫酸鹽中應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】Aeromonas aquariorum ZX1在還原硫酸鹽中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[000U 本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用領(lǐng)域，具體設(shè)及菌株Aeromonas aquariorum ZX1在快速還 原硫酸鹽中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】：
[000引 硫酸鹽還原細(xì)菌（sul化te-re化cing bacterium, SRB)是指一類(lèi)具有能把硫酸鹽、 亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等硫氧化物W及元素硫還原形成硫化氨該一生理特性的細(xì)菌的統(tǒng) 稱(chēng)。硫酸鹽還原菌能夠沉淀廢水中的重金屬離子，因此被廣泛的應(yīng)用在廢水的治理中。但是 不同的菌株之間功能相差較大，只有能夠廣泛適應(yīng)多種環(huán)境的菌株才能在廢水治理中發(fā)揮 作用。因此，分離、篩選高功能的菌株成為重金屬污染廢水微生物處理最關(guān)鍵的研發(fā)步驟。
[0003] 目前，硫酸鹽還原菌在實(shí)際應(yīng)用中存在2個(gè)主要的弊端：第一、菌株多為生長(zhǎng)較慢 的嚴(yán)格厭氧菌，在廢水中需要較長(zhǎng)的時(shí)間復(fù)蘇、生長(zhǎng)和定殖；第二、的大量的產(chǎn)生會(huì)造成 小環(huán)境中抑的下降，過(guò)低的抑會(huì)抑制SRB的生長(zhǎng)，進(jìn)而影響硫酸鹽的還原和重金屬離子的 沉淀。
[0004] 目前報(bào)道的具有硫酸鹽還原功能的菌株，包括脫硫弧菌值esul化vibrio)、脫硫腸 狀菌值esulfotomaculum)、脫硫球菌屬值esulfococ州S)和脫硫單胞菌值esulfomonas) 等，但是他們的培養(yǎng)、活化需要較長(zhǎng)的時(shí)間，并且降解速率低，功能不強(qiáng)。因此，發(fā)掘可W高 效、安全降解硫酸鹽的功能菌株具有重要的意義。
[0005] 到目前為止，沒(méi)有報(bào)道Aeromonas aquariorum的菌株有降解硫酸鹽還原的能力。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的目的是提供Aeromonas aquariorum ZX1在還原降解硫酸鹽中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的Aeromonas aquariorum ZX1是從醫(yī)院廢水中分離得到的，經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 該Aeromonas aquariorum ZX1能夠高效、快速、安全降解硫酸鹽。因此，可W將Aeromonas aquariorum ZX1在還原降解硫酸鹽中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明從醫(yī)院廢水中分離得到Aeromonas aquariorum ZX1，該菌具有耐酸和碳源 利用廣泛的特點(diǎn)，能夠高效、快速、安全還原降解硫酸鹽，并在重金屬?gòu)U水中有較強(qiáng)的功能， 因此可W用于快速還原硫酸鹽中應(yīng)用。

【具體實(shí)施方式】：
[0009] W下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0010] 實(shí)施例1 :
[0011] Aeromonas aquariorum ZX1 菌株的分離和鑒定 [001 引 Aeromonas aquariorum ZX1 菌株的分離
[0013] 篩選培養(yǎng)基；無(wú)機(jī)鹽溶液500mU硫酸錠0. 5g，微量元素溶液lOmU膜蛋白腺2. Og， 酵母粉2. Og，k半脫氨酸鹽酸鹽0. 5g，乳酸鋼3. Og，維生素C(l〇g/U 10血，蒸饋水1000m L高純化氮?dú)鉃闅庀啵?21°C、20min滅菌備用。質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%硫酸亞鐵按單獨(dú)滅菌后每5mL 培養(yǎng)基中加入0. ImL。
[0014] 無(wú)機(jī)鹽溶液；氯化鐘0. 67g，硫酸儀6. 9g，氯化儀5. 5g，氯化錠0. 5g，氯化鋼 0. 28g，磯酸氨鐘0. 25g，蒸饋水1000血。
[00巧]微量元素溶液（g。）；CoCl2 ? 6&0 0. 1，MnCla ? 4&0 0. 425, &iCl2〇. 05， NiCla ? 6&0 0. 01，CuS〇4 ? 5&0 0. 015, Na2Mo〇4 ? 2&0 0. 01，Na2Se〇4 ? 2&0 0. 01。
[0016] 本發(fā)明的Aeromonas aquariorum ZX1菌株是從廣州市南方醫(yī)院的河涌水中分離、 純化而得。其分離純化方法如下：
[0017] 取10ml河涌水放在100ml的篩選培養(yǎng)基中密閉富集培養(yǎng)。富集過(guò)程中通過(guò)查看 瓶壁上黑色菌落的大小和多少指示富集效果。富集培養(yǎng)是先30°C，靜置培養(yǎng)7天，觀察到有 明顯的菌落形成后，吸取形成的菌落轉(zhuǎn)接到新配置好的100ml篩選培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)7天， 如此反復(fù)3次。然后從上步富集培養(yǎng)的培養(yǎng)液里取混合菌群涂布到含有瓊脂的固體篩選培 養(yǎng)基中30°C厭氧環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，從中挑取快速生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行純化，和硫酸鹽還原篩選， 最后獲得菌株 Aeromonas aquariorum ZX1。
[0018] 菌株 Aeromonas aquariorum ZXl 的生物學(xué)特性
[0019] 1、菌株特性
[0020] a.采用常規(guī)的細(xì)菌生理生化鑒定方法和電子顯微鏡觀察，Aeromonas aquariorum ZXl菌株為革蘭氏陰性，桿狀，氧化酶陰性，不能運(yùn)動(dòng)。
[0021] b.在硫酸鹽培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)2她后，菌落表面呈黑色，圓形，有小的凸起。
[002引 2. Aeromonas aquariorum ZX1 的主要理化特性；
[002引 Aeromonas aquariorum ZX1 的 16S rRNA測(cè)序，其核巧酸序列如SEQ ID NO. 1 所不， BLAST 比對(duì)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的 Aeromonas aquariorum ZXl 的 16S rRNA 基因序列與 Aeromonas aquariorum已有模式菌株具有較高的相似性。其與Aeromonas aquariorum DSM 18362T的 序列相似性為98. 1%。
[0024] 綜合上述的生理生化特性和16S rRNA基因序列結(jié)果，本發(fā)明Aeromonas aquariorum ZXl 應(yīng)歸屬 Aeromonas aquariorum，命名為 Aeromonas aquariorum ZXl。
[0025] 本發(fā)明的Aeromonas aquariorum ZXl于2014年12月5日保藏于廣東省微生物 菌種保藏中屯、（GIM)，地址；廣州廣東省微生物研究所，其保藏號(hào)為GIM1. 794。該廣東省微 生物菌種保藏中屯、是對(duì)外銷(xiāo)售菌種的機(jī)構(gòu)，保藏在該保藏中屯、的菌株是向外銷(xiāo)售的，因此 本領(lǐng)域技術(shù)人員可W在申請(qǐng)日之前向廣東省微生物菌種保藏中屯、請(qǐng)求購(gòu)買(mǎi)到該菌株。
[0026] 實(shí)施例2 ;Aeromonas aquariorum ZX1對(duì)硫酸鹽還原試驗(yàn)；
[0027] 培養(yǎng)基；K2HPO4O. 5g、畑典1 1. Og、酵母膏 1. Og、CaCls ? 6&0 0. Ig、NaaSOJ. Og、 化(S04)2.7H20 0. 002g、70%乳酸鋼0. 5g，蒸饋水1000血。溶解后用IN化OH調(diào)節(jié)抑值為 7.4?7.6，倒入^角瓶封口，1211：蒸汽滅菌2〇111111。另配質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.6%鹽酸半脫氨酸溶 液，臨用前按體積分?jǐn)?shù)10 %的比例加入培養(yǎng)基中。
[002引銘酸領(lǐng)懸濁液：稱(chēng)取19. 44g銘酸鐘0(2&04)與24. 44g氯化領(lǐng)炬aCl2 ? 2&0)，分 別溶于1L去離子水中，加熱至沸騰。將兩溶液傾入同一個(gè)化燒杯內(nèi)，此時(shí)生成黃色銘酸領(lǐng) 沉淀。待沉淀下降后，傾出上層清液，然后每次用約1L去離子水洗漆沉淀，共需洗漆5次左 右。最后加去離子水至比，使成懸濁液，每次使用前混勻。每5ml銘酸領(lǐng)懸濁液可W沉淀約 48mg硫酸根（so。。
[0029] 硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液；稱(chēng)取1. 4786g無(wú)水硫酸鋼（Na2S〇4,優(yōu)級(jí)純）或1. 8141g無(wú)水硫酸 鐘（K2SO4,優(yōu)級(jí)純），溶于少量水，置1000ml容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。此溶液100ml含lOOmg 硫酸根（S〇4^。
[0030] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
[003U 取 150ml 錐形瓶八個(gè)，分別加入 0、0. 25、1. 00、2. 00、4. 00、6. 00、8. 00 及 10. 00ml 硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加去離子水至50ml。向上述水樣及稀釋的硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液中各加 lml2. 5mol/L鹽酸溶液，加熱煮沸5min左右。取下后再各加25ml銘酸領(lǐng)懸濁液，再煮沸 5min左右。取下錐形瓶，稍冷后，向各瓶逐滴加入（1+1)氨水至呈巧樣黃色，再多加2滴。 待溶液冷卻后，用慢速定性濾紙過(guò)濾，濾液收集于50ml比色管內(nèi)（如濾液渾濁，應(yīng)重復(fù)過(guò)濾 至透明）。用去離子水洗漆錐形瓶及濾紙=次，濾液收集于比色管中，用去離子水稀釋至標(biāo) 線。在420nm波長(zhǎng)，用10mm比色皿測(cè)量吸光度，繪制校準(zhǔn)曲線。具體數(shù)據(jù)如表1 ;
[00對(duì)表1
[0033]

【權(quán)利要求】
l.Aeromonas aquariorum ZX1在還原硫酸鹽中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C02F3/34GK104512969SQ201410767774
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】張國(guó)霞, 周宏偉, 王魁, 孜來(lái)古力, 木海熱木 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)