復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法，其解決了現(xiàn)有降低養(yǎng)殖水體污染的微生態(tài)制劑菌種單一、不能明顯降低水體中氨氮和亞硝酸鹽的含量的技術(shù)問(wèn)題，其以糞鏈球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌為主要成分，將糞鏈球菌與釀酒酵母的混合培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液以5～7∶3～5的體積比配制而成，本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于微生態(tài)制劑制備領(lǐng)域。
【專利說(shuō)明】復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法，具體地說(shuō)是一種降低養(yǎng)殖水體污 染的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，養(yǎng)殖密度、集約化養(yǎng)殖程度均不斷提高,養(yǎng)殖水質(zhì)污染 成為阻礙這一領(lǐng)域發(fā)展的一大難題。微生態(tài)制劑對(duì)與水質(zhì)污染的優(yōu)勢(shì)，逐漸受到人們的重 視。
[0003] 從目前來(lái)看，現(xiàn)有的微生態(tài)制劑雖然品種多，但產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，而且菌種單 一，應(yīng)用范圍不夠廣泛，水體中的氨氮和亞硝酸鹽的含量不能夠明顯得到降低，對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物 有很大的毒害作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明就是為了解決現(xiàn)有降低養(yǎng)殖水體污染的微生態(tài)制劑菌種單一、不能明顯降 低水體中氨氮和亞硝酸鹽的含量的技術(shù)問(wèn)題，提供一種菌種多樣、能夠明顯降低水體中氨 氮和亞硝酸鹽的含量的降低養(yǎng)殖水體污染的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明提供一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其含有糞鏈球菌活菌數(shù)為1X109個(gè)/ml? 5X 109個(gè)/ml ;釀酒酵母活菌數(shù)為2X 108個(gè)/ml?IX 109個(gè)/ml ;枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為 1 X 109個(gè)/ml?5 X 109個(gè)/ml ;地衣芽孢桿菌活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml?5 X 109個(gè)/ml。
[0006] 本發(fā)明還提供一種復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其步驟如下：
[0007] (1)制備糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液，所使用的培養(yǎng)基含有以下重量百分 比的成分：葡萄糖1.2%?2.0 %、玉米漿粉1.2%?2.0%、酵母蛋白0.5%?1.0%、大 豆粉0· 2%?0· 6%、玉米面0· 1%?0· 3%、磷酸氫二鉀0· 1%?0· 5%、氯化鈉0· 02%? 〇· 1 %、硫酸鎂〇· 01 %?〇· 02%、硫酸銨(λ 01 %?(λ 05%，其余為水，pH = 6. 5?L 5 ;
[0008] (2)制備枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液，所使用的培養(yǎng)基含有以 下重量百分比的成分：葡萄糖0.8%?1.5%、玉米漿粉0.5?1.0 %、酵母蛋白0.3%? 0.6%、大豆粉0· 1%?0.3%、玉米面0· 1%?0.3%、磷酸氫二鉀0.02%?(λ 1%、硫酸鎂 0.01%?0.02%、硫酸銨0.01%?0.05%，硫酸錳 0.005%?0.008%，其余為水，口!1 = 7. 0 ?7. 5 ;
[0009] (3)將活菌數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的糞鏈球菌與活菌數(shù)為4 X 108個(gè) /ml?2 X 109個(gè)/ml的釀酒酵母的混合培養(yǎng)液按體積份數(shù)5?7份，和活菌數(shù)為1 X 109個(gè) /ml?2 X 101°個(gè)/ml的枯草芽孢桿菌與活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml?2 X 101°個(gè)/ml的地衣芽 孢桿菌的混合培養(yǎng)液按體積份數(shù)3?5份，進(jìn)行配制，從而得到復(fù)合微生態(tài)制劑。
[0010] 優(yōu)選地，步驟（1)中糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液的制備過(guò)程如下：
[0011] a.將糞鏈球菌和釀酒酵母的斜面分別在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅菌培 養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28?33°C、轉(zhuǎn)數(shù)200?220rpm，培養(yǎng) 10?18小時(shí)，得到活菌數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的糞鏈球菌，和活菌數(shù)為4X 108 個(gè)/ml?2 X 109個(gè)/ml的釀酒酵母，為一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，所述糞鏈球菌和釀酒酵 母的接種量均為培養(yǎng)基體積的1% ;
[0012] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5?10%，發(fā)酵條件為：溫度28?33°C、培養(yǎng)基與所 通空氣的體積比為1 :〇. 7?1. 1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180?240rpm，發(fā)酵培養(yǎng)8?16小時(shí)，得到二 級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0013] c.將步驟b所得的糞鏈球菌的種子菌液接種到二級(jí)發(fā)酵罐中，培養(yǎng)8?10小時(shí) 后，再將步驟b所得的釀酒酵母的種子菌液接到該二級(jí)發(fā)酵罐中與糞鏈球菌混合培養(yǎng)24? 36小時(shí)，得到糞鏈球菌和釀酒酵母混合培養(yǎng)液。
[0014] 優(yōu)選地，步驟c中發(fā)酵條件為：溫度28?33°C ;培養(yǎng)基與所通空氣的體積比為 1:0. 7?1. 1 ;攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180?240rpm。
[0015] 優(yōu)選地，步驟（2)中枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液的制備過(guò)程如 下：
[0016] a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的斜面在無(wú)菌環(huán)境下分別接種于1000ml搖 瓶的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28?33°C ;轉(zhuǎn)數(shù)200? 220rpm ;培養(yǎng)10?18小時(shí)，得到活菌數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的枯草芽孢桿菌 和活菌數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的地衣芽孢桿菌，為一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液， 所述草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的接種量均為培養(yǎng)基體積的1% ;
[0017] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5?10%，發(fā)酵條件為：溫度28?33°C;培養(yǎng)基與所 通空氣的體積比為1 :〇. 7?1. 1 ;攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180?240rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)8?16小時(shí)，得到 二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0018] c.將步驟b所得的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的種子菌液同時(shí)接種到二級(jí)發(fā) 酵罐中，培養(yǎng)48?60小時(shí)，既得枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液。
[0019] 本發(fā)明可降低養(yǎng)殖水體的氨氮和亞硝酸鹽含量，而且能夠拮抗病原菌，提高養(yǎng)殖 動(dòng)物的存活率。另外混合發(fā)酵技術(shù)充分利用菌種間的互利關(guān)系，減少發(fā)酵罐的占用，并且培 養(yǎng)出的菌抗逆性強(qiáng)，效果明顯。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。
[0021] 本發(fā)明中所用糞鏈球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌由中科院沈陽(yáng) 應(yīng)用生態(tài)研究所提供。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 首先制備糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0024] a.將糞鏈球菌和釀酒酵母的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅菌培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28°C、轉(zhuǎn)數(shù)220rpm，培養(yǎng)10小時(shí)，得到活菌 數(shù)均為1 X 109個(gè)/ml -級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，糞鏈球菌和釀酒酵母的接種量均為培養(yǎng)基 體積的1% ;
[0025] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5%，發(fā)酵條件為：溫度30°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體 積比為1:0. 7、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180rpm，發(fā)酵培養(yǎng)16小時(shí)，得到二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0026] c.將步驟b所得的糞鏈球菌的種子菌液接種到二級(jí)發(fā)酵罐中，培養(yǎng)8小時(shí)后，再將 步驟b所得的釀酒酵母的種子菌液接到該二級(jí)發(fā)酵罐中與糞鏈球菌混合培養(yǎng)36小時(shí)。發(fā) 酵條件為：溫度28°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體積比為1:0. 7、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180rpm，得到糞鏈 球菌和釀酒酵母混合培養(yǎng)液。
[0027] 糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方按重量比為葡萄糖1. 2%、玉 米漿粉2. 0 %、酵母蛋白0. 5 %、大豆粉0. 3 %、玉米面0. 2 %、磷酸氫二鉀0. 2 %、氯化鈉 0. 05%、硫酸鎂0. 01 %、硫酸銨0. 03%，其余為水，pH = 6. 5。
[0028] 然后制備枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0029] a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅 菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28°C、轉(zhuǎn)數(shù)220rpm，培養(yǎng)10小時(shí)， 得到活菌數(shù)均為2 X109個(gè)/ml的一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的 接種量分別培養(yǎng)基體積的1% ;
[0030] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5%，發(fā)酵條件為：溫度30°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體 積比為1:0. 7、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180rpm，發(fā)酵培養(yǎng)16小時(shí)，得到二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0031] c.將步驟b所得的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的種子菌液同時(shí)接種到二級(jí)發(fā) 酵罐中，培養(yǎng)48小時(shí)。既得枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液。
[0032] 枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方按重量比為葡萄糖 0. 8%、玉米漿粉0. 5%、酵母蛋白0. 3%、大豆粉0. 2%、玉米面0. 3%、磷酸氫二鉀0. 02%、 硫酸鎂〇. 01 %、硫酸銨〇. 01 %，硫酸錳〇. 005%，其余為水，pH = 7. 5。
[0033] 將糞鏈球菌與釀酒酵母的混合培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培 養(yǎng)液以7 :3的體積比進(jìn)行配制，從而得到降低養(yǎng)殖水體污染的微生態(tài)制劑，其中糞鏈球菌 活菌數(shù)為5 X109個(gè)/ml ;釀酒酵母活菌數(shù)為IX 109個(gè)/ml ;枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為IX 109 個(gè)/ml ;地衣芽孢桿菌活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml。
[0034] 實(shí)施例2
[0035] 首先制備糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0036] a.將糞鏈球菌和釀酒酵母的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅菌培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度30°C、轉(zhuǎn)數(shù)200rpm，培養(yǎng)16小時(shí)，得到活菌 數(shù)均為2 X 109個(gè)/ml的一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，糞鏈球菌和釀酒酵母的接種量均為培養(yǎng) 基體積的1% ;
[0037] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的7%，發(fā)酵條件為：溫度28°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體 積比為1:1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為220rpm，發(fā)酵培養(yǎng)12小時(shí)，得到二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0038] c.將步驟b所得的糞鏈球菌的種子菌液接種到二級(jí)發(fā)酵罐中，培養(yǎng)9小時(shí)后再將 步驟b所得的釀酒酵母的種子菌液接到該二級(jí)發(fā)酵罐中與糞鏈球菌混合培養(yǎng)30小時(shí)。發(fā) 酵條件為：溫度30°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體積比為1:1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為200rpm，得到糞鏈球 菌和釀酒酵母混合培養(yǎng)液（活菌數(shù)為2. 8 X 109個(gè)/ml)。
[0039] 糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方按重量比為葡萄糖1. 5%、玉 米漿粉1. 2 %、酵母蛋白1. 0 %、大豆粉0. 2 %、玉米面0. 1 %、磷酸氫二鉀0. 1 %、氯化鈉 0. 02%、硫酸鎂0. 015%、硫酸銨0. 01 %，其余為水，pH = 7. 0。
[0040] 然后制備枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0041] a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅 菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度30°C、轉(zhuǎn)數(shù)200rpm，培養(yǎng)16小時(shí)， 得到活菌數(shù)均為3 X109個(gè)/ml的一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的 接種量分別培養(yǎng)基體積的1% ;
[0042] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基裝量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的7%，發(fā)酵條件為：溫度28°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體 積比為1:1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為220rpm，發(fā)酵培養(yǎng)12小時(shí)，得到二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0043] c.將步驟b所得的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的種子菌液同時(shí)接種到二級(jí)發(fā) 酵罐中，培養(yǎng)54小時(shí)。既得枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液。
[0044] 枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方按重量比為葡萄糖 1. 0 %、玉米漿粉0. 6 %、酵母蛋白0. 5 %、大豆粉0. 1 %、玉米面0. 2 %、磷酸氫二鉀0. 03 %、 硫酸鎂〇. 02 %、硫酸銨0. 02 %，硫酸錳0. 007 %，其余為水，pH = 7. 3。
[0045] 將糞鏈球菌與釀酒酵母的混合培養(yǎng)液和枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培 養(yǎng)液以5 :5的體積比進(jìn)行配制，從而得到降低養(yǎng)殖水體污染的微生態(tài)制劑，其中糞鏈球菌 活菌數(shù)為IX 1〇9個(gè)/ml ;釀酒酵母活菌數(shù)為2 X 108個(gè)/ml ;枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為5 X 109 個(gè)/ml ;地衣芽孢桿菌活菌數(shù)為5X 109個(gè)/ml。
[0046] 實(shí)施例3
[0047] 首先制備糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0048] a.將糞鏈球菌和釀酒酵母的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅菌培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度33°C、轉(zhuǎn)數(shù)210rpm，培養(yǎng)18小時(shí)，得到活菌 數(shù)均為5 X 109個(gè)/ml -級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，糞鏈球菌和釀酒酵母的接種量均為培養(yǎng)基 體積的1% ;
[0049] b.將步驟a培養(yǎng)的種子液接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝 量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的10 %，發(fā)酵條件為：溫度33°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體積 比為1:1. 1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為240rpm，發(fā)酵培養(yǎng)8小時(shí)，得到二級(jí)發(fā)酵罐所用種子菌液；
[0050] c.將步驟b所得的糞鏈球菌的種子菌液接種到二級(jí)發(fā)酵罐中，培養(yǎng)10小時(shí)后再將 步驟b所得的釀酒酵母的種子菌液接到該二級(jí)發(fā)酵罐中與糞鏈球菌混合培養(yǎng)24小時(shí)。發(fā) 酵條件為：溫度33°C、培養(yǎng)基與所通空氣的體積比為為1:1. 1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為240rpm，得到糞 鏈球菌和釀酒酵母混合培養(yǎng)液（活菌數(shù)為5 X 109個(gè)/ml)。
[0051] 糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方按重量比為葡萄糖2.0%、玉 米漿粉1. 5 %、酵母蛋白0. 6 %、大豆粉0. 6 %、玉米面0. 3 %、磷酸氫二鉀0. 5 %、氯化鈉 0. 1 %、硫酸鎂0.02%、硫酸銨0.05%，其余為水，pH = 7.0。
[0052] 然后制備枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液，具體過(guò)程如下：
[0053] a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的斜面在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅
【權(quán)利要求】
1. 一種復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征是含有糞鏈球菌活菌數(shù)為1X ?ο9個(gè)/ml?5 X 109個(gè)/ ml ;釀酒酵母活菌數(shù)為2 X 108個(gè)/ml?1 X 109個(gè)/ml ;枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ ml?5 X 109個(gè)/ml ;地衣芽孢桿菌活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml?5 X 109個(gè)/ml。
2. -種復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征是步驟如下： (1) 制備糞鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液，所使用的培養(yǎng)基含有以下重量百分比的 成分：葡萄糖1.2%?2.0 %、玉米漿粉1.2%?2.0%、酵母蛋白0.5%?1.0%、大豆粉 0· 2%?0· 6%、玉米面0· 1%?0· 3%、磷酸氫二鉀0· 1%?0· 5%、氯化鈉0· 02%?0· 1%、 硫酸鎂0.01%?0.02%、硫酸銨0.01%?0.05%，其余為水，？!1 = 6.5?7.5; (2) 制備枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液，所使用的培養(yǎng)基含有以下重量 百分比的成分：葡萄糖0.8%?1.5%、玉米漿粉0.5?1.0%、酵母蛋白0.3%?0.6%、大 豆粉0· 1 %?0.3%、玉米面(λ 1 %?0.3%、磷酸氫二鉀0.02%?(λ 1 %、硫酸鎂0.01 %? 0.02%、硫酸銨0.01%?0.05%，硫酸錳0.005%?0.008%，其余為水邛!1=7.0?7.5; ⑶將活菌數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的糞鏈球菌與活菌數(shù)為4 X 108個(gè)/ml? 2 X 109個(gè)/ml的釀酒酵母的混合培養(yǎng)液按體積份數(shù)5?7份，和活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml? 2 X 101°個(gè)/ml的枯草芽孢桿菌與活菌數(shù)為1 X 109個(gè)/ml?2 X 101°個(gè)/ml的地衣芽孢桿菌 的混合培養(yǎng)液按體積份數(shù)3?5份，進(jìn)行配制，從而得到復(fù)合微生態(tài)制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于所述步驟（1)中糞 鏈球菌和釀酒酵母的混合培養(yǎng)液的制備過(guò)程如下： a. 將糞鏈球菌和釀酒酵母的斜面分別在無(wú)菌環(huán)境下接種于1000ml搖瓶的滅菌培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28?33 °C、轉(zhuǎn)數(shù)200?220rpm，培養(yǎng)10? 18小時(shí)，得到活菌數(shù)為2X109個(gè)/ml?1X10 1(I個(gè)/ml的糞鏈球菌，和活菌數(shù)為4X108個(gè)/ ml?2 X 109個(gè)/ml的釀酒酵母，為一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，所述糞鏈球菌和釀酒酵母的 接種量均為培養(yǎng)基體積的1% ; b. 將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝 量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5?10%，發(fā)酵條件為：溫度28?33°C、培養(yǎng)基與所通空 氣的體積比為1 :〇. 7?1. 1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180?240rpm，發(fā)酵培養(yǎng)8?16小時(shí)，得到二級(jí)發(fā) 酵罐所用種子菌液； c. 將步驟b所得的糞鏈球菌的種子菌液接種到二級(jí)發(fā)酵罐中，培養(yǎng)8?10小時(shí)后，再 將步驟b所得的釀酒酵母的種子菌液接到該二級(jí)發(fā)酵罐中與糞鏈球菌混合培養(yǎng)24?36小 時(shí)，得到糞鏈球菌和釀酒酵母混合培養(yǎng)液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于所述步驟c中發(fā)酵 條件為：溫度28?33°C ;培養(yǎng)基與所通空氣的體積比為1:0. 7?1. 1 ;攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180? 240rpm〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于所述步驟（2)中枯 草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液的制備過(guò)程如下： a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的斜面在無(wú)菌環(huán)境下分別接種于1000ml搖瓶的滅 菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝量為300ml，搖床培養(yǎng)條件為：溫度28?33°C ;轉(zhuǎn)數(shù)200?220rpm ; 培養(yǎng)10?18小時(shí)，得到活菌數(shù)為2X 109個(gè)/ml?IX 101°個(gè)/ml的枯草芽孢桿菌和活菌 數(shù)為2 X 109個(gè)/ml?1 X 101°個(gè)/ml的地衣芽孢桿菌，為一級(jí)發(fā)酵罐所用的種子液，所述草 芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的接種量均為培養(yǎng)基體積的1% ; b. 將步驟a培養(yǎng)的種子液分別接種于100L-級(jí)種子發(fā)酵罐的滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝 量為70L，接菌量為培養(yǎng)基體積的5?10%，發(fā)酵條件為：溫度28?33°C;培養(yǎng)基與所通空 氣的體積比為1 :〇. 7?1. 1 ;攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為180?240rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)8?16小時(shí)，得到二級(jí) 發(fā)酵罐所用種子菌液； c. 將步驟b所得的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的種子菌液同時(shí)接種到二級(jí)發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)48?60小時(shí)，既得枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液。
【文檔編號(hào)】C02F101/38GK104087543SQ201410375356
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月1日
【發(fā)明者】耿建, 王燕, 李貴杰, 夏冰 申請(qǐng)人:威海金牌生物科技股份有限公司