一株降解氯氰菊酯金花菌的篩選鑒定及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一株從茯磚茶中篩選出的對(duì)氯氰菊酯具有較高降解能力的菌株ET1，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。該菌株ITS基因序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的登錄號(hào)為KF317836，經(jīng)形態(tài)學(xué)及ITS序列分析被鑒定為冠突散囊菌（Eurotium?cristatum），為無(wú)毒有益菌，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年10月08日，保藏編號(hào)：CGMCC?No.8293。該菌株還對(duì)其它擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥有一定降解作用，并能降解其有毒中間產(chǎn)物（3-苯氧基苯甲酸）。該菌株不僅可用于被擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥所污染的茯磚茶及茶葉，也可用于土壤、污水的生物修復(fù)或生物凈化，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，進(jìn)而保障農(nóng)產(chǎn)品安全。
【專利說(shuō)明】一株降解氯氰菊酯金花菌的篩選鑒定及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一株降解氯氰菊酯“金花菌”的篩選鑒定及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]氯氰菊酯(Cypermethrin, CY)是擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥中最常用品種之一,其廣泛應(yīng)用于茶樹(shù)、果蔬、人畜等蟲(chóng)害的防治。由于其具有疏水性強(qiáng)、對(duì)光熱穩(wěn)定等特性，因此自然降解速率慢，在環(huán)境中半衰期長(zhǎng)達(dá)94.2 d-1103 d，易導(dǎo)致其在環(huán)境中殘留蓄積，因此其在土壤、水體、農(nóng)畜產(chǎn)品中常出現(xiàn)較高的檢出率和超標(biāo)率。氯氰菊酯對(duì)魚(yú)類及其他水生動(dòng)物有高毒性，其還能在動(dòng)植物體內(nèi)蓄積，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有急性毒性，并能損傷男性生殖系統(tǒng)發(fā)育，長(zhǎng)期接觸還可能引發(fā)多種慢性疾病，美國(guó)環(huán)境保護(hù)局已將其認(rèn)定為一種致癌劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥作為目前最有發(fā)展前景的殺蟲(chóng)劑，在尚未找到新型替代化合物之前，未來(lái)幾十年內(nèi)仍將被廣泛使用，因而迫切需要研究殘留農(nóng)藥的降解。微生物降解是各種農(nóng)藥降解方法中較為綠色和高效的一種。目前氯氰菊酯降解菌主要以細(xì)菌為主，報(bào)道的具有降解氯氰菊酯的真菌不多，而真菌又是一類潛在的農(nóng)藥降解菌，其氧化酶系對(duì)多種芳香族類化合物、殺蟲(chóng)劑、染料等異生化合物具有較強(qiáng)的降解能力，有研究還指出真菌對(duì)某些頑固異生化合物的降解效果優(yōu)于細(xì)菌?，F(xiàn)階段氯氰菊酯降解真菌的分離均來(lái)源于農(nóng)藥廠污泥，而源于發(fā)酵食品或發(fā)酵醅能降解氯氰菊酯的有益真菌少見(jiàn)報(bào)道。
[0004]茯磚茶上長(zhǎng)有大量金黃色顆粒，俗稱“金花”，即“金花菌”(goiden flowerfungus)，在分類上屬于冠突散囊菌，它是茯磚茶中的優(yōu)勢(shì)有益菌，也是茯磚茶獨(dú)特風(fēng)味的主要影響因素。長(zhǎng)年飲用茯磚茶有調(diào)理腸胃、促進(jìn)消化、降血糖、降血脂、增強(qiáng)人體體質(zhì)及延緩衰老等功效，而這些功效 與“金花菌”的作用是密不可分的?，F(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外對(duì)茯磚茶中“金花菌”的研究主要集中在“金花菌”的分類鑒定及其發(fā)酵特性等方面，而對(duì)于其能否降解農(nóng)藥的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。近年來(lái)擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥在茶樹(shù)栽培中的大量施用，導(dǎo)致茶葉中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥的殘留問(wèn)題較為嚴(yán)重，所以，“金花菌”對(duì)于農(nóng)藥降解方面的研究與應(yīng)用具有重要意義。
[0005]本專利是從湖南省生產(chǎn)的十余種不同品牌的茯磚茶中分離、篩選出的一株可較高效降解氯氰菊酯的菌株，經(jīng)ITS測(cè)序鑒定，采用Blast進(jìn)行基因同源性比對(duì)分析表明，菌株ETl的ITS序列與登錄號(hào)JX869560等冠突散囊菌有99%的相似性，也有相似的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。根據(jù)菌株ETl的形態(tài)學(xué)特征和ITS序列比對(duì)，將該菌株鑒定為冠突散囊菌{EurotiumCristatumYirW0經(jīng)過(guò)試驗(yàn)可知該菌株在F1D培養(yǎng)基中7d內(nèi)對(duì)50 mg/L氯氰菊酯的降解率為53.35%。動(dòng)力學(xué)研究表明，該菌株在測(cè)試的底物(氯氰菊酯)質(zhì)量濃度、溫度、pH范圍內(nèi)，氯氰菊酯的半衰期為7.11~8.98d，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其自然半衰期(94.2 d-1103 d)。此外，菌株ETl對(duì)50 mg/L溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和氯菊酯7d降解率分別為27.53%,38.00%、33.23%和25.34%。充分說(shuō)明該菌株作為有益菌株不僅在茯磚茶生產(chǎn)上具有應(yīng)用價(jià)值，并且在處理含擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥污染的茶葉生產(chǎn)及土壤和水體生物修復(fù)方面具有很好的應(yīng)用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一株可降解氯氰菊酯的菌株一冠突散囊菌{Eurotiumcristatum, “金花菌”)及其應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明所提供的降解菌株經(jīng)鑒定為冠突散囊菌(Jkirotium cristatum),俗稱“金花菌”，編號(hào)為ETl，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年10月08日，保藏編號(hào)=CGMCC N0.8293。
[0008]本發(fā)明所提供的降解菌株cristatum ETl的形態(tài)學(xué)特性:菌株ETl在PDA平板上菌落呈不規(guī)則的圓形，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌落直徑逐漸長(zhǎng)大，培養(yǎng)5d后菌落直徑達(dá)45.0mm，菌落表面粗糙，菌落邊緣呈乳白色，向外延伸呈放射狀，由外到內(nèi)顏色逐漸加深，中間呈黑褐色，可見(jiàn)菌株ETl產(chǎn)黑褐色色素，并且色素能滲透到培養(yǎng)基中。
[0009]本發(fā)明所提供的降解菌株的分離、篩選、鑒定。
[0010]取不同茯磚茶樣品，用茶刀將茶磚從中間切開(kāi)，采用直接分離法用接種針挑取茶樣表面的金黃色顆粒點(diǎn)接到PDA平板上，30°C倒置培養(yǎng)，待長(zhǎng)出“金花菌”菌落后從中挑取進(jìn)行平板劃線培養(yǎng)。重復(fù)劃線培養(yǎng)3-4次至純化，4°C斜面保存?zhèn)溆谩?br> [0011]在無(wú)菌條件下將分離純化的“金花菌”分別從試管斜面上用無(wú)菌孢子稀釋液(配方:吐溫80 0.2%，瓊脂0.1%，蒸餾水IOOmL)洗下，轉(zhuǎn)移至盛有IOOmL無(wú)菌孢子稀釋液的250mL錐形瓶中，充分振蕩混勻，并調(diào)節(jié)孢子濃度約為6.0X IO8個(gè)/mL，于4°C保存?zhèn)溆谩７謩e將孢子懸液按5% (v/v)接種量接種于裝有30mL H)培養(yǎng)基(含氯氰菊酯50mg/L)的250mL三角瓶中，另設(shè)接種相同量的孢子稀釋液為空白對(duì)照，30°C，180r/min振蕩培養(yǎng)7d,測(cè)定各培養(yǎng)液中氯氰菊酯的殘留質(zhì)量濃度，確定各菌株對(duì)氯氰菊酯的降解能力，從中篩選出較高效的氯氰菊酯降解菌。
[0012]菌株形態(tài)鑒定:菌落近圓形，菌落表面粗糙，菌落邊緣呈乳白色，向外延伸呈放射狀，由外到內(nèi)顏色逐漸加深，中間呈黑褐色，產(chǎn)色素；個(gè)體形態(tài)鑒定:菌株ETl的孢子類型由有性型和無(wú)性型組成；菌株ETl的有性結(jié)構(gòu)為子囊果，即黃色閉囊殼，子囊果呈球形或近球形，子囊果容易破裂釋放出子囊，子囊內(nèi)一般含有8個(gè)子囊孢子，子囊破裂釋放出子囊孢子；菌株ETl的無(wú)性結(jié)構(gòu)為菌絲和頂囊，菌絲為有隔菌絲，頂囊呈球形或燒瓶型，產(chǎn)分生孢子。
[0013]菌株ETl分子遺傳學(xué)鑒定。
[0014]菌株ETl經(jīng)ITS序列測(cè)定，獲得如下序列: GGACCTCTGGGTCAACCTCCCATCCGTGTCTATCTGTACCCTGTTGCTTCGGCGTGGCCACGGCCCGCCGGA
GACTAACATTTGAACGCTGTCTGAAGTTTGCAGTCTGAGTTTTTAGTTAAACAATCGTTAAAACTTTCAACAACGGA
TCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAA·GAACGCAGCGAAATGCGATAATTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATC
GAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCA
CGGCTTGTGTGTTGGGCTTCCGTCCCTGGCAACGGGGACGGGCCCAAAAGGCAGTGGCGGCACCATGTCTGGTCCTC
GAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCCCGTAGGTCCAGCTGGCAGCTAGCCTCGCAACCAATCTTTTTAACCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAA
該菌株的ITS基因測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中序列進(jìn)行Blast同源性比對(duì)，該菌株序1^與Eurotium crisiaiw?菌株基因序列高度同源,得到登錄號(hào)為KF317836。
[0015]本發(fā)明所提供的降解氯氰菊酯的菌株ETl是從不同茯磚茶中分離、篩選得到的，根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和ITS基因序列分析被鑒定為冠突散囊菌{Eurotium cristatum)。該菌株在一定溫度和PH范圍內(nèi)均對(duì)氯氰菊酯有降解能力，保藏于于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年10月08日，保藏編號(hào):CGMCC N0.8293。
[0016]本發(fā)明所用培養(yǎng)基為:馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(PD):新鮮馬鈴薯去皮切塊300g，蔗糖20g，蒸餾水1000mL,調(diào)節(jié)pH至6.0 ;固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中再加20g/L瓊脂，121 °C，滅菌 20min。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為降解菌株ETl培養(yǎng)5d的菌落培養(yǎng)特征。
[0018]圖2為降解菌株ETl的細(xì)胞形態(tài)圖一子囊果。
[0019]圖3為降解菌株ETl的細(xì)胞形態(tài)圖一子囊和子囊孢子。
[0020]圖4為降解菌株ETl的細(xì)胞形態(tài)圖一菌絲和頂囊。
[0021]圖5為溫度對(duì)降解菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響。
[0022]圖6為pH值對(duì)降解菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響。
[0023]圖7為底物質(zhì)量濃度對(duì)降解菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)例1:確定氯氰菊酯降解菌株ETl的生長(zhǎng)情況與氯氰菊酯降解的關(guān)系。
[0025]I)菌種活化:挑取降解氯氰菊酯的菌株ETl至H)液體培養(yǎng)基中，30°C，180r/min搖床振蕩培養(yǎng)4d;然后連續(xù)劃線于PDA平板、挑取單菌落培養(yǎng)兩次(30 V )4d，挑取單菌落至PDA斜面30 V培養(yǎng)4d備用；2)用無(wú)菌生理鹽水洗下斜面上菌體并調(diào)整孢子濃度為6.0 X IO8個(gè)/mL，制成種子液。
[0026]生長(zhǎng)曲線的測(cè)定:將降解菌株ETl的種子液按5%接種量接種于含有50mg/L氯氰菊酯的H)液體培養(yǎng)基中，分裝30 mL/250mL錐形瓶，30°C、180r/min振蕩培養(yǎng)8d，取樣時(shí)間為每24h取樣I瓶，將樣品過(guò)濾，得菌絲球，于80°C干燥至恒重，以菌體干重、代表其生物量。
[0027]降解曲線的測(cè)定:將降解菌株ETl的種子液按5%接種量接種于含有50mg/L氯氰菊酯的H)液體培養(yǎng)基中，分裝30 mL/250mL錐形瓶，設(shè)接種5%無(wú)菌水為空白對(duì)照，30°C、180r/min振蕩培養(yǎng)8d,取樣時(shí)間為每24h取樣I瓶,米用全量取樣的方式，即取整瓶培養(yǎng)液作為分析樣品，測(cè)定其對(duì)氯氰菊酯的降解率。
[0028]將整瓶培養(yǎng)液，加入30mL乙腈，超聲(40kHz，300W)輔助提取30min，移取2.0mL提取液用乙腈定容至IOmL,混勻，12000r/min離心IOmin,上清液用有機(jī)相濾膜(0.45 μ m)過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液用于HPLC檢測(cè)。色譜條件:色譜柱為Gemini IOOA (:18柱(5.0μ m, 150 mm X4.60 mm (1.d.));流動(dòng)相為乙腈和超純水(76: 24 (v/v));檢測(cè)波長(zhǎng)210nm ;柱溫 25°C ;流速 1.0 mL/min ;進(jìn)樣量 10 μ L。[0029]由結(jié)果可知降解菌株ETl經(jīng)過(guò)8d培養(yǎng)，除去對(duì)照組氯氰菊酯的損失部分，實(shí)驗(yàn)組中53.35%氯氰菊酯被菌株ETl降解，培養(yǎng)7d內(nèi)，氯氰菊酯與降解菌株生長(zhǎng)呈正相關(guān)，菌株對(duì)氯氰菊酯降解速率較快，培養(yǎng)7d菌體生物量達(dá)到最大，此后菌體生長(zhǎng)趨于穩(wěn)定，降解速率也隨之減緩。
[0030]實(shí)例2:降解菌株ETl對(duì)氯氰菊酯的降解特性。
[0031]I)培養(yǎng)溫度對(duì)菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響按5.0% (v/v)的接種量，將菌株種子液(6.0X IO8個(gè)/mL)接種于氯氰菊酯濃度為50 mg/L的H)液體培養(yǎng)基(pH6.0)中，分裝30 mL/250 mL錐形瓶，于不同溫度下(25 °C, 30 °C, 35 °C ) 180 r/min振蕩培養(yǎng)，間隔24h取樣。用[0023]所述方法測(cè)定氯氰菊酯降解率。
[0032]2) pH對(duì)菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響按5.0% (v/v)的接種量，將菌株種子液(6.0X108個(gè)/mL)接種于不同pH (5.0，6.0，7.0)的氯氰菊酯濃度為50 mg/L的PD液體培養(yǎng)基中，分裝30 mL/250 mL錐形瓶，30°C，180 r/min振蕩培養(yǎng)，間隔24h取樣。用
[0023]所述方法測(cè)定氯氰菊酯降解率。
[0033]3)底物濃度對(duì)菌株ETl降解氯氰菊酯速率的影響按5.0% (v/v)的接種量，將菌株種子液(6.0XlO8個(gè)/mL)接種于氯氰菊酯質(zhì)量濃度不同的H)液體培養(yǎng)基(pH6.0 ; 20mg/L，50 mg/L, 100 mg/L)中，分裝 30 mL/250 mL 錐形瓶，30°C、180 r/min 振蕩培養(yǎng)，間隔24h取樣。用[0023]所述方法測(cè)定氯氰菊酯降解率。
[0034]菌株ETl對(duì)氯氰菊酯的降解特性結(jié)果:在測(cè)試的培養(yǎng)溫度、PH值、底物(氯氰菊酯)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，氯氰菊酯半衰期為7.11~8.98d，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其自然降解半衰期(94.2 d-1103d)，隨著底物質(zhì)量濃度的降低，氯氰菊酯的降解速率加快，降解率增高，7d內(nèi)對(duì)20mg/L氯氰菊酯降解率可達(dá)63.5% ;溫度在25°C~35°C范圍內(nèi)，菌株ETl對(duì)氯氰菊酯降解率的變化相對(duì)不大；在PH5 -7范圍內(nèi)，pH對(duì)底物降解率的影響相對(duì)較小，在pH6時(shí)，菌株對(duì)氯氰菊酯的降解速率相對(duì)較高。這一研究結(jié)果可為菌株ETl應(yīng)用于茯磚茶的生產(chǎn)以及污水處理和土壤修復(fù)提供一定的數(shù)據(jù)參考。
[0035]實(shí)例3:氯氰菊酯降解菌株ETl對(duì)其降解中間產(chǎn)物3-苯氧基苯甲酸的降解效果。
[0036]將降解菌株的種子液按5%接種量接種于50mg/L3_苯氧基苯甲酸的H)液體培養(yǎng)基中，分裝30 mL/250mL錐形瓶，設(shè)接種5%無(wú)菌水為空白對(duì)照，30°C、180r/min振蕩培養(yǎng)7d，采用全量取樣的方式，即取整瓶培養(yǎng)液作為分析樣品，測(cè)定其對(duì)3-苯氧基苯甲酸的降解率。
[0037]將整瓶培養(yǎng)液，加入30mL乙腈，超聲(40kHz，300W)輔助提取30min，移取2.0mL提取液用乙腈定容至IOmL,混勻，12000r/min離心IOmin,上清液用有機(jī)相濾膜(0.45 μ m)過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液用于HPLC檢測(cè)。色譜條件:色譜柱為Gemini IOOA C18柱(5.0ym,150mm X4.60mm);流動(dòng)相為乙腈和pH 2.5的磷酸去離子水溶液，體積比為55:45，流速
0.7mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，柱溫25°C，進(jìn)樣量10 μ L。
[0038]測(cè)定結(jié)果表明，去除對(duì)照組3-苯氧基苯甲酸的損失部分，實(shí)驗(yàn)組中3-苯氧基苯甲酸可被菌株ETl完全降解。
[0039]實(shí)例4:氯氰菊酯降解菌株ETl對(duì)其它擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥的降解效果。
[0040]將降解菌株ETl的種子液按5%接種量接種于50mg/溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和氯菊酯的H)液體培養(yǎng)基中，分裝30 mL/250mL錐形瓶，設(shè)接種5%無(wú)菌水為空白對(duì)照，30°C、180r/min振蕩培養(yǎng)。
[0041]培養(yǎng)7d后取樣，用[0023]所述方法測(cè)定其降解情況，去除對(duì)照組的損失部分，實(shí)驗(yàn)組中溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和氯菊酯的降解率分別為:27.53%、38.00 %、33.23% 和 25.34%ο
[0042]實(shí)例5:氯氰菊酯降解菌株ETl對(duì)被污染的土壤中氯氰菊酯的降解效果。
[0043]從四川省雅安市名山區(qū)某茶園土壤中取一定量的土壤樣品，添加氯氰菊酯使其濃度約為20mg/kg，將降解菌株ETl的種子液按5%接種量接種(實(shí)驗(yàn)組)，設(shè)接種5%無(wú)菌水為空白對(duì)照，30°C培養(yǎng)，每24h取樣，用[0023]所述方法采用HPLC檢測(cè)。
[0044]通過(guò)HPLC檢測(cè)樣品中氯氰菊酯的殘留量，空白樣品內(nèi)氯氰菊酯含量變化較小，實(shí)驗(yàn)組的樣品在7d時(shí)氯氰菊酯的降解率可達(dá)41.83%。
[0045]實(shí)例6:氯氰菊酯降解菌株ETl對(duì)茶葉樣品中氯氰菊酯的降解效果。
[0046]從四川省雅安市某茶店購(gòu)買一定量的黑毛茶，添加氯氰菊酯使其濃度約為20mg/kg,將降解菌株ETl的種子液按5%接種量接種(實(shí)驗(yàn)組)，設(shè)接種5%無(wú)菌水為空白對(duì)照，30°C培養(yǎng)，每24h取樣，用[0023]所述方法檢測(cè)。
[0047]通過(guò)HPLC檢測(cè)樣品中氯氰菊酯的殘留量，空白樣品內(nèi)氯氰菊酯含量變化較小，實(shí)驗(yàn)組的樣品在7d時(shí)氯氰菊酯的降解率可達(dá)60.5%，若再延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間，將會(huì)進(jìn)一步提高降解率。據(jù)報(bào)道，茶葉中農(nóng)藥的實(shí)際污染量較高時(shí)也僅有幾個(gè)mg/kg，茯磚茶的發(fā)酵周期一般在15天左右，因此，可以推測(cè)用菌株ETl制作茯磚茶時(shí)，可將殘留農(nóng)藥完全降解。
[0048]以上的實(shí)例僅僅是對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行描述，而并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以對(duì)上述說(shuō)明進(jìn)行改進(jìn)或變形，但所有的這些改進(jìn)或變形均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求確定的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一株冠突散囊菌crisiaiw?),俗稱“金花菌”,其特征在于保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC N0.8293，保藏日期2013年10月08日。
2.權(quán)利要求1所述冠突散囊菌ETl{Eurotium cristatum),其特征在于:(I)個(gè)體形態(tài)特征:真菌，由有性結(jié)構(gòu)和無(wú)性結(jié)構(gòu)組成，有性結(jié)構(gòu)為子囊果，呈球形或近球形，子囊果容易破裂釋放子囊及子囊孢子，無(wú)性結(jié)構(gòu)為菌絲和頂囊，菌絲為有隔菌絲，頂囊呈球形或燒瓶型，產(chǎn)分生孢子；(2)菌落特征:在PDA平板上菌落呈不規(guī)則的圓形，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌落直徑逐漸長(zhǎng)大，培養(yǎng)5d后菌落直徑達(dá)45.0mm,菌落表面粗糙，菌落邊緣呈乳白色，向外延伸呈放射狀，由外到內(nèi)顏色逐漸加深，中間呈黑褐色，可見(jiàn)菌株ETl產(chǎn)黑褐色色素，并且色素能滲透到培養(yǎng)基中；(3) ITS序列特征:該菌株的ITS基因測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中序列進(jìn)行Blast同源性比對(duì),該菌株序列菌株基因序列高度同源，得到登錄號(hào)為KF317836。
3.權(quán)利要求1-2所述冠突散囊菌ETl在降解氯氰菊酯中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冠突散囊菌ETl的應(yīng)用，其特征在于，降解組合條件為:溫度25-35°C, pH=5.0-7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冠突散囊菌ETl的應(yīng)用，其特征在于，降解組合條件為:溫度300C，pH=6.0,接種量5%，裝液量30mL，搖床轉(zhuǎn)速180r/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冠突散囊菌ETl的應(yīng)用，該菌株可用于多種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥的生物降解，同時(shí)可降解氯氰菊酯的降解中間產(chǎn)物3-苯氧基苯甲酸，以及這些物質(zhì)污染的茯磚茶及茶葉的生物降解和土壤、水體的生物修復(fù)或生物凈化，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，進(jìn)而保障農(nóng)產(chǎn)品安全。`
【文檔編號(hào)】B09C1/10GK103627641SQ201310541152
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月5日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)