專利名稱:一種益生菌型土壤調(diào)理劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物工程技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及農(nóng)用微生物肥料或生物有機肥料生產(chǎn)技術(shù)，尤其涉及一種益生菌型土壤調(diào)理劑及其生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
上世紀五、六十年代，化學肥料和農(nóng)藥的使用使我國農(nóng)業(yè)的發(fā)展取得了長足的進步，也給農(nóng)民帶來了巨大的效益。但是，化學肥料和農(nóng)藥的大量和超量使用，已經(jīng)給土壤、環(huán)境乃至生態(tài)系統(tǒng)造成了不可逆轉(zhuǎn)的傷害。比如土壤板結(jié)；土壤持水力下降；土壤中肥力不均衡，肥力下降；投入與產(chǎn)出比例下降。更為嚴重的是，這些化學性物質(zhì)會在動植物體內(nèi)蓄積，造成動植物原料有毒有害物質(zhì)超標，嚴重影響農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)。與此同時，殘留的化學物質(zhì)通過土壤的地下水系統(tǒng)，污染水資源，在生態(tài)系統(tǒng)循環(huán)中造成不可逆轉(zhuǎn)的破壞。
·[0003]化學肥料造成的損害已眾所周知，在此情況下，生物肥料的應(yīng)用成為農(nóng)業(yè)發(fā)展中的熱點。其中微生物肥料是近幾十年發(fā)展起來的一種新型肥料。微生物肥料是指含有活性微生物的特定制品。微生物肥料的主要優(yōu)點是能改良土壤、不污染環(huán)境、無毒副作用，是生產(chǎn)“綠色食品”的理想肥料。將微生物肥料應(yīng)用于生產(chǎn)，可增進土壤肥力，協(xié)助植物吸收營養(yǎng)，增強植物抗病及抗旱能力，節(jié)約能源，降低生產(chǎn)成本，減少環(huán)境污染。
巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)是一種植物根系促生細菌,也是微生物肥料中的常用菌種。它是一種解磷促鉀細菌，對卵磷脂、土壤中植物無法直接利用的吸附態(tài)有機磷、無機磷有明顯的分解作用，能提高土壤肥力，對固氮具有增效作用，促進作物增產(chǎn)。巨大芽孢桿菌可降低水體中的有機氮、磷，還能一定程度降解工業(yè)廢水中的氰化物等，對水體環(huán)境中的生態(tài)平衡起到一定的作用。另外，巨大芽孢桿菌可產(chǎn)亞硝酸還原酶，降低食品中亞硝酸鹽含量。所以，巨大芽孢桿菌的應(yīng)用前景非常廣闊。
枯草芽孢桿菌(Bacillus substilus)是一種被美國食品與藥品管理局(FDA)認定為GRAS(—般公認安全)的革蘭氏陽性細菌，廣泛存在于自然界，是植物根際微生態(tài)的優(yōu)勢菌株，能分泌多種對植物病原真菌具有拮抗作用的次生代謝產(chǎn)物，如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，對致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用；同時自身生長過程中合成多種活性酶以及有機酸、維生素、氨基酸類物質(zhì)，具有促進作物生長，分解釋放土壤中結(jié)合養(yǎng)分，降低土壤PH，提高作物抗性等優(yōu)點，是一種極具應(yīng)用價值的生防菌。
地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)是一種革蘭氏陽性細菌，在自然界中分布非常廣泛，生理特性也豐富多樣，是土壤和植物微生態(tài)優(yōu)勢種群之一。在一定條件下可以產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生孢子的化能異養(yǎng)型菌。能夠產(chǎn)生肽類拮抗物質(zhì)，因此命名為桿菌肽，是一種強殺菌劑，能強烈抑制G+菌，同時對部分G-菌也具有較強的抑制作用。它可產(chǎn)生多種抗生素、抗菌蛋白、小分子細菌素、溶菌酶等，對多種動、植物及人類病原菌都起到很好的抑制作用，而且地衣芽孢桿菌還具有很強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶類活性，國外還有報道指出，地衣芽孢桿菌可以產(chǎn)生苯乙酸一類的抗菌性物質(zhì)。地衣芽孢桿菌在醫(yī)藥方面的研究最為成熟，已形成了較完整的生產(chǎn)工藝，而且在醫(yī)藥商品整腸生的應(yīng)用也已較為成熟。但在防止農(nóng)作物病害、飼料的加工、環(huán)境污染治理等方面的研究，處于剛剛起步階段，發(fā)展空間將會非常廣闊。
目前阻礙微生物菌劑工農(nóng)業(yè)應(yīng)用的瓶頸問題是，利用傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵方法，獲得的微生物菌劑有效活菌數(shù)偏低，菌種單一，功能單一，應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中效果不明顯，如果要提高有效活菌數(shù)量，需要凍干、濃縮等方法，設(shè)備等成本的投入偏高，最終產(chǎn)品價位高，不容易被使用者接受；制作成顆粒應(yīng)用，造粒時烘干溫度高，導致活菌大量死亡，應(yīng)用效果差。
國家發(fā)明專利一種液態(tài)復合微生物菌肥及其生產(chǎn)方法(公開號CN1397521A)公開了一種液體劑型，含有圓褐固氮菌、巨大芽孢桿菌和硅酸鹽細菌，有效活菌數(shù)量為8億個/毫升。此發(fā)明中，直接將三種菌劑的濃縮液與營養(yǎng)物質(zhì)按一定比例混合，包裝形成產(chǎn)品。那么問題是三種菌劑的濃縮液如何獲得，菌劑的活菌濃度能夠達到多少，造成此發(fā)明專利 可實施性不強，而且其中活菌數(shù)量也偏低，使用效果會受到影響。另一項國家發(fā)明專利多元復合微生物菌肥(專利號ZL200610134541. 9)，含有10種微生物，共接種5次，培養(yǎng)52h，獲得最終產(chǎn)品。此發(fā)明的問題一是反復接種容易造成菌液污染，一旦污染菌大量繁殖，勢必影響目標菌種的活力與數(shù)量，導致產(chǎn)品質(zhì)量問題；二是培養(yǎng)時間長，獲得最后的菌液需要52h的發(fā)酵，時間與能耗成本均偏高。
針對上述問題，本發(fā)明提供一種益生菌型土壤調(diào)理劑及其生產(chǎn)方法，在低能耗條件下，短時間發(fā)酵，獲得高密度的益生菌型復合微生物菌肥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種益生菌型土壤調(diào)理劑及其生產(chǎn)方法，解決當前微生物菌肥領(lǐng)域菌劑濃度低，菌種單一，功能單一，應(yīng)用效果差的問題。
本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，包括
(I)生產(chǎn)用益生菌種子液的制備將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為8-12h，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為6-10h ；
(2)生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，115_121°C滅菌30-45分鐘，冷卻至30-35°C ；
(3)接種及發(fā)酵將所述巨大芽孢桿菌種子液按照與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的體積比為2-5%的比例接入發(fā)酵罐，在29-33°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)IO-ISh ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至33-36°C，接入所述枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為4-10%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)7-16h，獲得所述益生菌型土壤調(diào)理劑。
具體操作如下
(I)生產(chǎn)用益生菌種子液的制備以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為種子發(fā)酵培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為8-14h，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為6-12h ;備用。
作為優(yōu)選種子培養(yǎng)時間，巨大芽孢桿菌種子培養(yǎng)10h，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌種子分別培養(yǎng)8h。
(2)生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，115-121°C滅菌30-45分鐘，冷卻至30-35°C ；
所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖5_15g，乳糖5_12g，麥芽糖l_5g，可溶性淀粉l_5g，蛋白胨5-15g，酵母膏2-9g，尿素l_5g，NaC13_8g，K2SO4 0. 4-1. 0g, K2HPO4 0. 5-1. 5g, MgSO4 7H20 2-3. 5g, CaCl2 0. 8-1. 5g, CaCO3 4-6. 5g，余量為水；pH7. 5-8. 2。
作為優(yōu)選，所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基配方為，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖9-llg，乳糖7-8g，麥芽糖2-3g，可溶性淀粉2-3g，蛋白胨9-1 lg，酵母膏5_6g，尿素2_3g，NaC15_6g，K2SO4 0. 6-0. 75g, K2HPO4 0. 9-1. lg，MgSO4 7H202. 5-2. 75g，CaCl2 I. 0-1. 2g, CaCO35-5. 25g，余量為水；pH7. 9-8. I。
優(yōu)選培養(yǎng)基既能給菌種生長提供足夠的碳源、氮源以及無機鹽，同時通過加入的CaCO3控制發(fā)酵過程中的pH不至于過低，加入的CaCl2,同時具有促進菌體生長及產(chǎn)芽孢作用，使得獲得的產(chǎn)品有效活菌數(shù)高，孢子量大，保證后期加工，以及應(yīng)用到工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的良好效果。
(3)接種及發(fā)酵將所述巨大芽孢桿菌種子液按照與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的體積比為2-5%的比例接入發(fā)酵罐，在29-33°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)IO-ISh ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至33-37°C，接入所述枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為4-10%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)7-16h，獲得所述益生菌型土壤調(diào)理劑；
接入的所述枯草芽孢桿菌種子液與所述地衣芽孢桿菌種子液體積比為1:0. 25-4 ；所述枯草芽孢桿菌種子液與所述地衣芽孢桿菌種子液的接入總量與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為4-8% ；
加入的所述濃縮滅菌營養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌培養(yǎng)基含有蔗糖30_50g，乳糖30-40g，麥芽糖5-15g，可溶性淀粉5-15g，蛋白胨25_35g，酵母膏20_30g，NaCl 5-10g,K2HPO4 0. 8-1. 8g, MgSO4 7H20 2_4g，CaC035_15g，余量為水；pH7. 5-8. 2。
作為優(yōu)選，所述巨大芽孢桿菌種子液接入所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的體積比為3-4%，培養(yǎng)溫度為30-31°C，培養(yǎng)時間為ll-12h。
所述將發(fā)酵溫度調(diào)整至33_37°C，作為優(yōu)選，將發(fā)酵溫度調(diào)整至34_35°C。
作為優(yōu)選，所述枯草芽孢桿菌種子液與所述地衣芽孢桿菌種子液的接入總量與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為5-6%，加入的所述濃縮滅菌培養(yǎng)基與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為6-7%，繼續(xù)培養(yǎng)時間為9-llh。
作為優(yōu)選，加入的所述濃縮滅菌營養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌營養(yǎng)基含有蔗糖40-42g，乳糖34-35g，麥芽糖7_8g，可溶性淀粉7_8g，蛋白胨29_31g，酵母膏24_26g，NaCl7-7. 5g, K2HPO4 I. 2-1. 4g, MgSO4 7H20 3-3. 2g, CaCO3 7-7. 5g，余量為水；pH7. 8-8. 0。
在所述接種及發(fā)酵條件下培養(yǎng)，保證最終獲得的產(chǎn)品中三種益生菌的數(shù)量，同時保證三種芽孢桿菌都會產(chǎn)生大量的芽孢，確保最終產(chǎn)品的應(yīng)用效果。
本發(fā)明還提供了一種所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法制備的益生菌型土壤調(diào)理劑，所述益生菌型土壤調(diào)理劑中有效活菌數(shù)總數(shù)為50-100億個/毫升，芽孢率在90-100%。每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
本發(fā)明的優(yōu)點
I.所使用的微生物均為益生菌，產(chǎn)品綠色無公害，適宜于綠色可持續(xù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)施用。
2.采用混菌發(fā)酵，獲得的復合型微生物菌肥-益生菌型土壤調(diào)理劑，有效活菌數(shù)高，功能強大，應(yīng)用效果好。
3.益生菌型土壤調(diào)理劑產(chǎn)品應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，除了具有增強土壤肥力，改善土壤·環(huán)境的作用外，還具有強大的解藥害，抗重迎茬，抗鹽堿，提高農(nóng)作物抗病性的特點，應(yīng)用前景廣闊。
4.工藝步驟簡單，生產(chǎn)周期短，獲得的菌肥活力強，降低成本，適宜于工廠化生產(chǎn)。
具體實施方式
實施例I :
生產(chǎn)用益生菌種子液的制備以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為種子發(fā)酵培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為12h，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為10h。
生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖15g，乳糖12g，麥芽糖5g，可溶性淀粉5g，蛋白胨15g，酵母膏 9g，尿素 5g，NaCl 8g，K2SO4 I. 0g，K2HPO4 I. 5g，MgSO4 7H20 3. 5g, CaCl2 I. 5g,CaCO3 6. 5g，余量為水；pH8. 0。121°C滅菌45分鐘，冷卻至34。。。
接種及發(fā)酵將培養(yǎng)12h的巨大芽孢桿菌的種子液按照與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為5%的比例接入發(fā)酵罐，在33°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)16h ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至35°C，接入枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為10%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)12h ;接入的枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，二者體積比例為3:7，接入總量與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為8% ;加入的濃縮滅菌培養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌培養(yǎng)基含有蔗糖50g，乳糖40g，麥芽糖15g，可溶性淀粉15g，蛋白胨35g，酵母膏 30g，NaCl 10g，K2HPO4 I. 8g，MgSO4 7H204g，CaCO3 15g，余量為水；pH8. 2。
獲得最終益生菌型土壤調(diào)理劑菌肥產(chǎn)品產(chǎn)品中有效活菌數(shù)總數(shù)63億個/毫升，芽孢率96. 5%。每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
實施例2
生產(chǎn)用益生菌種子液的制備以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為種子發(fā)酵培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為Bh,枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為6h。
生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖Sg，乳糖Sg，麥芽糖2g，可溶性淀粉3g，蛋白胨6g，酵母膏 5g，尿素 3g，NaC14g，K2SO4 0. 44g，K2HPO4 0. 8g，MgSO4 7H20 2g，CaCl2 0. 8g，CaCO34g，余量為水；pH8. 2。115°C滅菌45分鐘，冷卻至31°C。
接種及發(fā)酵將培養(yǎng)8h的巨大芽孢桿菌的種子液按照與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比3%的比例接入發(fā)酵罐，在30°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)IOh ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至33°C，接入枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為5%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)8h ;接入的枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，二者體積比例為7:3，接入總量與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為4% ;加入的濃縮滅菌培養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌營養(yǎng)基含有鹿糖30g,乳糖30g,麥芽糖5g,可溶性淀粉5g,蛋白胨25g,酵母膏20g, NaCl 5g, K2HPO4 0. 8g, MgSO4 7H20 2g, CaC035g，余量為水；pH8. 2。
獲得最終益生菌型土壤調(diào)理劑菌肥產(chǎn)品產(chǎn)品中有效活菌數(shù)總數(shù)55億個/毫升，芽孢率96. 7%。每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
·[0047]實施例3
生產(chǎn)用益生菌種子液的制備以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為種子發(fā)酵培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為IOh,枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為8h。
生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖10g，乳糖10g，麥芽糖3g，可溶性淀粉3g，蛋白胨10g，酵母膏 6g，尿素 2g，NaCl 5g，K2SO4 0. 7g, K2HPO4 I. 0g，MgSO4 7H20 2. 5g, CaCl2 I. lg,CaCO3 5g，余量為水；pH8. 0。121°C滅菌30分鐘，冷卻至32°C。
接種及發(fā)酵將培養(yǎng)IOh的巨大芽孢桿菌的種子液按照與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比4%的比例接入發(fā)酵罐，在31°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)13h ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至34°C，接入枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為5%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)IOh ;接入的枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，二者體積比例為1:1，接入總量與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為6% ;加入的濃縮滅菌培養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌營養(yǎng)基含有蔗糖40g，乳糖35g，麥芽糖10g，可溶性淀粉10g，蛋白胨30g，酵母膏 25g, NaCl 7g, K2HPO4 I. 2g，MgSO4 7H203g，CaCO3 10g，余量為水；pH8. 0。
獲得最終益生菌型土壤調(diào)理劑菌肥產(chǎn)品產(chǎn)品中有效活菌數(shù)總數(shù)72億個/毫升，芽孢率94. 8%。每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
實施例4
生產(chǎn)用益生菌種子液的制備以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為種子發(fā)酵培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為Bh,枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為8h。
生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有蔗糖Sg，乳糖10g，麥芽糖4g，可溶性淀粉2g，蛋白胨8g，酵母膏 8g，尿素 3g，NaCl 7g，K2SO4 0. 4g，K2HPO4 I. 5g，MgSO4 7H20 2g，CaCl2 I. Og,CaCO3 6. 5g，余量為水；pH7. 8。115°C滅菌42分鐘，冷卻至34。。。[0055]接種及發(fā)酵將培養(yǎng)8h的巨大芽孢桿菌的種子液按照與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比5%的比例接入發(fā)酵罐，在33°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)12h ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至34°C，接入枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為8%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)8h ;接入的枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，二者體積比例為2:1，接入量與生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為7% ;加入的濃縮滅菌培養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌營養(yǎng)基含有蔗糖35g，乳糖32g，麥芽糖7g，可溶性淀粉7g，蛋白胨28g，酵母膏20g, NaCl 5g, K2HPO4 I. 5g, MgSO4 7H20 3. 3g, CaC038g，余量為水；pH8. I。
獲得最終益生菌型土壤調(diào)理劑菌肥產(chǎn)品產(chǎn)品中有效活菌數(shù)總數(shù)67. 5億個/毫升，芽孢率96. 7%。每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
實施例5
田間使用效果2011年-2012年分別在黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)光明村，黑龍江省綏化市寶山鎮(zhèn)永發(fā)村，黑龍江省青網(wǎng)縣蘆河鎮(zhèn)擁軍村，黑龍江省海倫市真理馬鈴薯種植 合作社，黑龍江省雙城市同心鄉(xiāng)同德村等地做實驗使用本發(fā)明的益生菌型土壤調(diào)理劑，供試作物為玉米、大豆、水稻、馬鈴薯、番茄、甜瓜、辣椒。
I、試驗方法
處理組將發(fā)酵得到的益生菌型土壤調(diào)理劑原液稀釋300倍，隨種子澆灌種植，每畝用量800mL。其他田間管理正常進行。
對照組不使用菌肥。其他田間管理與處理組一致。
隨機區(qū)組設(shè)置，處理組與對照組均設(shè)置3次重復。玉米、大豆、水稻每組面積667m2 ；馬鈴薯、番茄、甜瓜、辣椒每組面積200m2。
2、測定指標
在作物生長過程中觀察作物形態(tài)、生長勢、病蟲害情況，最后測產(chǎn)量。
3、結(jié)果
玉米
品種先玉335。播種日期2011年5月I日。收獲日期處理組，2011年9月20日；對照組，2011年9月30日。試驗地點黑龍江省青網(wǎng)縣蘆河鎮(zhèn)擁軍村；土壤特點鹽堿地。
結(jié)論處理組玉米5月9日出苗，出苗整齊，幼苗長勢茁壯；比對照組生長速度快；且莖粗葉色深；生長期病害少；生長后期與對照組植株差別不大。處理組果實穗大且長，籽粒飽滿，無禿尖。處理組比對照組早采收10天。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為693kg/667m2，對照組為598kg/667m2 ;增產(chǎn)率為15. 9%。
大豆
品種東農(nóng)42。播種日期2011年5月8日。收獲日期處理組2011年9月25日；對照組2011年9月30日。試驗地點黑龍江省綏化市寶山鎮(zhèn)永發(fā)村；土壤特點重茬3年。
結(jié)論處理組大豆5月18日出苗，出苗整齊，幼苗生長茁壯，且莖粗葉色深；開花期提前3天，花后結(jié)莢緊密；籽粒飽滿。生長期病害少。處理組比對照組采收早5天。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為257kg/667m2，對照組為222kg/667m2 ;增產(chǎn)率為15. 8%。
水稻[0073]品種東農(nóng)425。育苗日期2011年4月9日。定植日期2011年5月27日。收獲日期2011年9月30日。試驗地點黑龍江省綏化市寶山鎮(zhèn)永發(fā)村；土壤特點重茬3年。
結(jié)論處理組水稻定植后，緩苗快，根系發(fā)達、分蘗多；植株健壯，葉色濃綠，病蟲害少；產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為601kg/667m2，對照組為558kg/667m2 ;增產(chǎn)率為7. 7%。
辣椒
品種景椒I號。育苗日期2011年3月9日。定植日期2011年5月21日。開始采收日期2011年7月27日。試驗地點黑龍江省雙城市同心鄉(xiāng)同德村；土壤特點重茬7年。
結(jié)論處理組辣椒定植后，緩苗快，幼苗快速轉(zhuǎn)入生長狀態(tài)；葉色深綠，且莖粗較對照組粗；單株面積大；首花期比對照早2天；果實開始采摘處理組比對照組早4天；坐果率高；結(jié)果期長；處理組果實商品性好，果實顏色濃綠、色澤光亮、外形整齊；處理組病·害少；比對照組結(jié)束收獲期晚10天。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為2882kg/667m2，對照組為2331kg/667m2 ;增產(chǎn)率為 23. 6%0
馬鈴薯
品種克新12。播種日期2011年4月30日。收獲期2011年9月27日。試驗地點黑龍江省海倫市真理馬鈴薯種植合作社；土壤問題上茬藥害嚴重。
結(jié)論處理組馬鈴薯幼苗出苗快，植株茁壯，葉片大，葉色深綠，且莖粗較對照組粗；首花期比對照早2天；生長期病害少；對照組受到上茬藥害影響，苗弱，萎蔫，葉片黃；處理組結(jié)馬鈴薯多且大；果實商品性好，外形大且整齊；處理組與對照組同時采收。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為2245kg/667m2，對照組為1783kg/667m2 ;增產(chǎn)率為25. 9%。
西瓜
品種景豐寶。播種日期2011年5月15日。收獲期2011年8月12日。試驗地點黑龍江省雙城市同心鄉(xiāng)同德村；土壤問題重茬2年。
結(jié)論處理組西瓜，生長勢強，抗病性強，座果率高；葉色深綠，莖粗較對照組粗；首花期比對照早3天；處理組果實商品性好，色澤光亮、外形整齊，糖度高。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為5448kg/667m2，對照組為4305kg/667m2 ;增產(chǎn)率為26. 6%。
番茄
品種東農(nóng)708。育苗日期2012年I月5日，定植日期2012年4月15日。開始采收期2012年6月23日。試驗地點黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)光明村；土壤特征大棚重茬7年。
結(jié)論處理組番茄定植后，緩苗快，幼苗快速轉(zhuǎn)入生長狀態(tài)；葉色深綠，莖粗較對照組粗；單株面積大；首花期比對照早3天；果實開始采摘處理組比對照組早4天；坐果率高、果實大；處理組果實商品性好，果實顏色鮮艷、色澤光亮、外形整齊；處理組病害少。產(chǎn)量調(diào)查，處理組產(chǎn)量為7552kg/667m2，對照組為6281kg/667m2 ;增產(chǎn)率為20. 2%。
本發(fā)明獲得的益生菌型土壤調(diào)理劑產(chǎn)品不僅可以應(yīng)用于調(diào)理土壤，同時也可以作為農(nóng)作物葉面噴施抗病防病、微生物發(fā)酵啟動劑、畜禽舍防病抗病脫臭等應(yīng)用。
本發(fā)明不僅限于所述實施例的范圍，凡依據(jù)本發(fā)明的生產(chǎn)方法進行適當演變，所得到的生產(chǎn)方法，均屬本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括 (1)生產(chǎn)用益生菌種子液的制備將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到巨大芽孢桿菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，其中巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)時間為8-14h，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)時間均為6-12h ； (2)生產(chǎn)用培養(yǎng)基的制備及滅菌將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)，115-121°C滅菌30-45分鐘，冷卻至30-35°C ； (3)接種及發(fā)酵將所述巨大芽孢桿菌種子液按照與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的體積比為2-5%的比例接入發(fā)酵罐，在29-33°C，通氧攪拌條件下培養(yǎng)IO-ISh ;然后將發(fā)酵溫度調(diào)整至33-37°C，接入所述枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，同時加入與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基總體積比為4-10%的濃縮滅菌培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)7-16h，獲得所述益生菌型土壤調(diào)理劑。
2.如權(quán)利要求
I所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，其特征在于所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基的配方如下，每升生產(chǎn)用培養(yǎng)基中含有鹿糖5-15g,乳糖5-12g,麥芽糖l_5g,可溶性淀粉 l_5g，蛋白胨 5-15g，酵母膏 2-9g，尿素 l-5g，NaCl 3_8g，K2SO4 O. 4-1. 0g, K2HPO4O.5-1. 5g, MgSO4 · 7H20 2-3. 5g, CaCl2 0. 8-1. 5g, CaC034_6. 5g，余量為水；pH7. 5-8. 2。
3.如權(quán)利要求
I所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，其特征在于接入的所述枯草芽孢桿菌種子液與所述地衣芽孢桿菌種子液體積比為1:0. 25-4。
4.如權(quán)利要求
I所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌種子液與所述地衣芽孢桿菌種子液的接入總量與所述生產(chǎn)用培養(yǎng)基體積比為4-8%。
5.如權(quán)利要求
I所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，其特征在于加入的所述濃縮滅菌營養(yǎng)基組成為每升濃縮滅菌培養(yǎng)基含有蔗糖30-50g，乳糖30-40g，麥芽糖5-15g，可溶性淀粉5-15g，蛋白胨25-35g，酵母膏 20-30g，NaC15-10g，K2HP04 O. 8-1. 8g,MgSO4 ·7Η202-4g, CaCO3 5-15g，余量為水；pH7. 5-8. 2。
6.如權(quán)利要求
I飛任一項所述的益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法制備的益生菌型土壤調(diào)理劑，其特征在于所述益生菌型土壤調(diào)理劑中有效活菌數(shù)總數(shù)為50-100億個/毫升，芽孢率在90-100%，每種菌的有效活菌數(shù)大于2億個/毫升。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種益生菌型土壤調(diào)理劑的生產(chǎn)方法，包括(1)將巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分別接入種子培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到各自的種子液；(2)將生產(chǎn)用培養(yǎng)基加入發(fā)酵罐內(nèi)進行滅菌、冷卻；(3)將所述巨大芽孢桿菌種子液接入發(fā)酵罐，在通氧攪拌條件下培養(yǎng)，再接入所述枯草芽孢桿菌種子液與地衣芽孢桿菌種子液，繼續(xù)培養(yǎng)，獲得所述益生菌型土壤調(diào)理劑。本發(fā)明還公開了通過以上方法得到的益生菌型土壤調(diào)理劑。本發(fā)明所采用的方法科學合理，生產(chǎn)工藝步驟簡單易行，具有很強的工業(yè)化實施性。對促進農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展有重要的意義。
文檔編號C05G3/04GKCN102786934SQ201210299483
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月22日
發(fā)明者呂長山, 王金玲, 雋加香 申請人:王金玲導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan