大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本實(shí)用新型涉及細(xì)胞分離設(shè)備，特別涉及一種大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤細(xì)胞過繼免疫治療是繼手術(shù)、化療和放療之后的第四種腫瘤治療方法。體外培養(yǎng)字體免疫細(xì)胞時(shí)，需要預(yù)先采集患者50?10ml外周血，并分離外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，即外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前主要的分離方法是應(yīng)用樣本密度分離液進(jìn)行密度梯度離心法，因?yàn)檠褐懈饔行纬煞值谋戎卮嬖诓町?，因此得以分離。紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度大于分離液沉積于管底。血小板則因密度小而懸浮于血漿中，唯有與分離液密度相當(dāng)?shù)膯蝹€(gè)核細(xì)胞密集在血漿層和分離液的界面中，呈白膜狀，吸取該層細(xì)胞經(jīng)過洗滌離心重懸，即可用于治療用途的免疫細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)。
[0003]目前，在應(yīng)用樣本密度分離液進(jìn)行PBMC分離時(shí)，采用的離心管最大規(guī)格為50ml，每次每管分離的外周血樣本量為10?15ml，操作繁瑣。如圖1所示，市場(chǎng)上有一種Greinerb1-one的淋巴/單核細(xì)胞分離管，包含一個(gè)高質(zhì)量聚乙烯的多孔篩板，該版穩(wěn)固地嵌入聚丙烯材質(zhì)的離心管中，通過嚴(yán)格控制篩板的孔徑大小來分離細(xì)胞，大大縮短了樣本的處理時(shí)間。該種分離管主要有兩種規(guī)格:12ml和50ml，其50ml分離管每次處理樣本量為15?30ml血樣，雖然較傳統(tǒng)方法增加了樣本處理量，縮短了處理時(shí)間，提高了工作效率，但仍不能滿足臨床上快速處理10ml外周血樣本量的需求，有必要進(jìn)一步改進(jìn)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離技術(shù)。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004]本實(shí)用新型的目的是提供一種能夠直接從全血樣本中快速、大量提取單個(gè)核細(xì)胞的分離瓶。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)方面，提供了一種大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，包括瓶體，瓶體設(shè)有依次連通的上室、中室和下室，上室和下室的橫截面積均大于中室的橫截面積，瓶體內(nèi)設(shè)有篩濾件，瓶體呈啞鈴狀。由此，瓶體既可具有較大的容量，又由于中室的直徑較小，便于收集目的細(xì)胞?？梢淮涡苑蛛x多達(dá)10ml全血，大大節(jié)約實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間。
[0006]在一些實(shí)施方式中，篩濾件設(shè)于中室下部或下室上部，從而使得目的細(xì)胞富集于中室內(nèi)，便于收集。
[0007]在一些實(shí)施方式中，上室與中室的連接處設(shè)有倒錐形斜面，倒錐形斜面與上室側(cè)壁的夾角為120?150°，從而使上室下部呈漏斗形，便于全血中的各種細(xì)胞成分在離心力的作用下，逐步由上室向中室集中。
[0008]在一些實(shí)施方式中，中室與下室的連接處設(shè)有連接臺(tái)，連接臺(tái)與下室側(cè)壁的夾角為90?150°。從而使下室上部呈倒置的漏斗形，既可保證加入樣本分離液時(shí)，下室中的氣體順利排出下室，又可使離心初期小部分進(jìn)入下室的單個(gè)核細(xì)胞逐漸隨著樣本分離液面的升高進(jìn)入中室。而且在力學(xué)上，有助于分離瓶整體的穩(wěn)固。
[0009]在一些實(shí)施方式中，中室的外壁設(shè)有加強(qiáng)板，使得瓶體更堅(jiān)固，使用更安全。加強(qiáng)板呈中心對(duì)稱設(shè)置，從而進(jìn)一步使得瓶體堅(jiān)固。
[0010]在一些實(shí)施方式中，上室和下室的容積均大于中室的容積，從而便于收集目的細(xì)胞。
[0011]在一些實(shí)施方式中，上室的容積為50?150ml。下室的容積為40?90ml。中室的容積為15?35ml。
[0012]在一些實(shí)施方式中，篩濾件的孔徑為8_200μπι，允許細(xì)胞通過，但可避免全血加入時(shí)與樣本密度分離液相混。
[0013]在一些實(shí)施方式中，瓶體頂部設(shè)有瓶蓋，從而防止瓶體內(nèi)液體受到污染和外濺。
[0014]在一些實(shí)施方式中，瓶體頂部開設(shè)有瓶口，所述瓶口的直徑小于或等于上室的直徑。
[0015]在一些實(shí)施方式中，瓶體內(nèi)預(yù)裝有樣本密度分離液，樣本密度分離液位于篩濾件的下方空間，從而更加方便進(jìn)行細(xì)胞分離操作。
[0016]本實(shí)用新型的有益效果為:本大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的瓶體呈啞鈴狀，具有較大的容量，可一次性分離多達(dá)10ml全血，降低細(xì)胞分離難度，大大節(jié)約實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間；分離后，目的細(xì)胞將富集于中室，中室的橫截面積和體積都較小，便于收集目的細(xì)胞;加強(qiáng)板的設(shè)置，使瓶體更堅(jiān)固，使用更安全;上室的下部為錐筒形，便于在離心時(shí)細(xì)胞向中室集聚，更好的分離。
[0017]本實(shí)用新型的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶適用對(duì)象:從外周血或臍帶血提取單個(gè)核細(xì)胞(MNC);與其他產(chǎn)品配合可以實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞如調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg)、自然殺傷細(xì)胞(NK)、樹突狀細(xì)胞(DC)、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞以及B細(xì)胞等快速分離。
【附圖說明】
[0018]圖1為現(xiàn)有技術(shù)中單個(gè)核細(xì)胞分離管的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0019]圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例1的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的結(jié)構(gòu)示意圖；
[°02°]圖3為圖2所不大容量單個(gè)核細(xì)胞分尚瓶的軸向剖視圖；
[0021 ]圖4為本實(shí)用新型實(shí)施例2的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0022]圖5為本實(shí)用新型實(shí)施例3的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0024]實(shí)施例1
[0025]如圖2和圖3所示，大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，包括瓶體I，瓶體I設(shè)有依次連通的上室11、中室12和下室13，上室11和下室13的橫截面積均大于中室12的橫截面積，瓶體I內(nèi)設(shè)有篩濾件2 ο篩濾件2固定安裝于中室12下部。篩濾件2為濾網(wǎng)或篩板。
[0026]篩濾件2的網(wǎng)孔為8_200μπι，允許細(xì)胞通過，但可明顯阻遏細(xì)胞通過的速度，避免全血加入時(shí)與樣本密度分離液相混。篩濾件2可由不銹鋼等金屬制成，也可為尼龍材質(zhì)。篩濾件2也可由具有合適孔徑的塑料材質(zhì)多孔篩板替換。多孔篩板由聚乙烯(PE)或聚碳酸酯(PC)或聚丙烯(PP)微粒粘合或壓制而成，形成的篩孔允許細(xì)胞通過，但可明顯阻遏細(xì)胞通過的速度，避免全血加入時(shí)與樣本密度分離液相混。
[0027]中室12的外壁設(shè)有加強(qiáng)板3。本實(shí)施例中加強(qiáng)板3為平板狀。加強(qiáng)板3個(gè)數(shù)為多個(gè)，在瓶體I外壁呈中心對(duì)稱設(shè)置。
[0028]上室11與中室12的連接處設(shè)有倒錐形斜面14，倒錐形斜面14與上室11側(cè)壁的夾角α為120?150°，最佳的，α為135°。中室12與下室13的連接處設(shè)有連接臺(tái)15，連接臺(tái)15與下室13側(cè)壁的夾角β為90?150°，最佳的，β為110°。
[0029]瓶體I呈啞鈴狀，上室11和下室13的容積均大于中室12的容積。上室11、中室12和下室13均為圓柱狀。上室11的側(cè)壁印有最大加樣線。
[0030]瓶體I的底部為半球形。瓶體I頂部還加設(shè)有瓶蓋4。瓶蓋4與瓶體I的瓶口為螺紋連接。
[0031]本實(shí)施例的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的各部位尺寸可根據(jù)需要設(shè)計(jì)成不同的規(guī)格，以求分別對(duì)應(yīng)用于分尚30?50ml、50?80ml、80?10ml樣本量的外周血。
[0032]在使用時(shí)，大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶篩濾件2下方的下室中可預(yù)裝樣本密度分離液。分離瓶配有適合的圓底離心適配器，可在離心吊籃中使用。
[0033]使用本分離瓶在室溫下進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離操作的步驟為:
[0034]1、吸取與分離瓶篩濾件下方容積相等的樣本密度分離液到分離瓶，需要說明的是，當(dāng)瓶體I內(nèi)預(yù)裝有樣本密度分離液時(shí)，則不需要進(jìn)行此步驟；
[0035]2、室溫1000G離心30秒，使樣本密度分離液進(jìn)入下室并充滿篩濾件下方容積；
[0036]3、在分離瓶中倒入抗凝血樣品，無需特地稀釋血液，但如需要，可以直接在分離瓶中倒入平衡鹽溶液進(jìn)行稀釋；
[0037]4、1000G離心10分鐘(或800G離心15分鐘)；
[0038]5、離心后，分離瓶內(nèi)樣品分層如下:血漿-單個(gè)核細(xì)胞-分離液-篩板-分離液-紅細(xì)胞；
[0039]6、可用移液管吸取單個(gè)核細(xì)胞或直接傾倒入另一管中，加入PBS，用移液管重懸清洗細(xì)胞。室溫250G離心5分鐘；
[0040]7、重復(fù)清洗細(xì)胞2次，用PBS或細(xì)胞培養(yǎng)液重懸獲得單個(gè)核細(xì)胞，可直接存放于凍存管或用于培養(yǎng)等下一階段使用。
[0041 ] 實(shí)施例2
[0042]如圖4所示，與實(shí)施例1不同的是，本實(shí)施例的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的瓶體I的底部為錐形，篩濾件2設(shè)于下室13上部。
[0043]實(shí)施例3
[0044]如圖5所示，與實(shí)施例1不同的是，本實(shí)施例的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶的瓶體I的底部為半球形，篩濾件2設(shè)于下室13上部。需要說明的是，瓶體I也可以為平底。
[0045]以上所述的僅是本實(shí)用新型的一些實(shí)施方式。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實(shí)用新型創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，包括瓶體(I)，所述瓶體(I)設(shè)有依次連通的上室(11)、中室(12)和下室(13)，所述上室(11)和下室(13)的橫截面積均大于中室(12)的橫截面積，所述瓶體(I)呈啞鈴狀，所述瓶體(I)內(nèi)設(shè)有篩濾件(2)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述篩濾件(2)設(shè)于中室(12)下部或下室(13)上部。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述上室(11)與中室(12)的連接處設(shè)有倒錐形斜面(14)，所述倒錐形斜面(14)與上室(11)側(cè)壁的夾角為120?150。ο4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述中室(12)與下室(13)的連接處設(shè)有連接臺(tái)(15)，所述連接臺(tái)(15)與下室(13)側(cè)壁的夾角為90?150°。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述中室(12)的外壁設(shè)有加強(qiáng)板(3)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述上室(11)和下室(13)的容積均大于中室(12)的容積。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述篩濾件(2)的網(wǎng)孔為8-200μηι。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，瓶體(I)頂部設(shè)有瓶蓋(4)。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述瓶體(I)頂部開設(shè)有瓶口，所述瓶口的直徑小于或等于上室(11)的直徑。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，其特征在于，所述瓶體(I)內(nèi)預(yù)裝有樣本密度分離液，所述樣本密度分離液位于篩濾件(2)的下方空間。
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種大容量單個(gè)核細(xì)胞分離瓶，包括瓶體，瓶體設(shè)有依次連通的上室、中室和下室，上室和下室的橫截面積均大于中室的橫截面積，瓶體呈啞鈴狀，瓶體內(nèi)設(shè)有篩濾件。由此，瓶體既具有較大的容量，又因中室的直徑較小，便于收集目的細(xì)胞?？梢淮涡苑蛛x多達(dá)100ml全血，大大節(jié)約實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間。
【IPC分類】C12M1/24, C12M1/12
【公開號(hào)】CN205241678
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201521028813
【發(fā)明人】何向鋒, 沈康, 何守貴, 施文
【申請(qǐng)人】何守貴
【公開日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2015年12月11日