一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法，其特征是它包括以下步驟(1)菌種活化 (2)種子液制備 (3)增殖培養(yǎng) (4)菌體收集(5)預凍(6)真空低溫冷凍干燥。本發(fā)明方法生產(chǎn)的復合乳酸菌凍干粉適于在食品工業(yè)中應用。
【專利說明】
一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法
技術領域
[0001]本發(fā)明屬于生物工程技術領域，涉及一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法。
【背景技術】
[0002]生產(chǎn)發(fā)酵乳制品最重要的要素是發(fā)酵過程中使用的乳酸菌菌種，只有好的乳酸菌菌種才能生產(chǎn)出優(yōu)質的酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品。青藏高原牧區(qū)具有非常特殊的地理生態(tài)環(huán)境，海拔高、晝夜溫差大。當?shù)啬撩癫捎们О倌陙硌匾u古老而傳統(tǒng)的方法制作牦牛酸奶，將新鮮的牦牛乳加熱煮沸，冷卻后接種上次制作預留的酸奶(接種量一般是3%?5%)，在室內(nèi)放置(10?25°C)至凝乳，屬于典型的低溫發(fā)酵。在長期的自然進化過程中，牦牛乳酸奶中傳代性好、抗逆性強、凝乳狀態(tài)好、風味獨特、低溫發(fā)酵的的優(yōu)良乳酸菌得到富集。
[0003]前期我們采用改良M17培養(yǎng)基從甘肅省甘南自治州的發(fā)酵牦牛乳中分離得到一株乳酸乳球菌乳酸亞種 1_3_5 (Lactococcus lactis subsp.Zaciis，保藏號CGMCC 4476) 0該菌株在25°C下發(fā)酵12h即可凝乳，用該菌株生產(chǎn)的酸奶具有粘度高、貯藏時后酸化弱的特點，在本
【申請人】2011.08.03提交的CN102321550A專利申請中已經(jīng)提交微生物保藏。同時采用Elliker培養(yǎng)基分離得到的一株干酪乳桿菌(Lactobacillus casei，保藏號CGMCC N0.4775)2。該菌株已在牦牛乳硬質干酪中進行了成功應用，在本
【申請人】2011.10.24提交的CN102367428A專利申請中已經(jīng)提交微生物保藏。在進一步的研究中，我們發(fā)現(xiàn)這兩株菌在復配發(fā)酵時具有良好的共生關系，可用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品。
[0004]目前國內(nèi)酸奶和干酪乳酸菌發(fā)酵劑大多采用國外菌株。本發(fā)明所涉及一種復合乳酸菌凍干粉的制備方法，具有方法簡單、易操作、活菌數(shù)高等優(yōu)點，生產(chǎn)的復合乳酸菌凍干粉適合應用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品的加工。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法。本發(fā)明所涉及一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法。本發(fā)明的目的是按如下技術方案實現(xiàn)的，其特征是它包括以下步驟:
(1)菌種活化:將冷凍保藏的兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復以上操作4~6次以恢復菌株活力；
(2)種子液制備:兩菌株充分活化后，分別以接種量3%(V/V)分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25 °C恒溫培養(yǎng)12?14h得到種子液；
(3)增殖培養(yǎng):將種子液以球桿菌比例2:1(V/V)、接種量3 % (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h;
(4)菌體收集:將培養(yǎng)液在4°C、5000r/mim離心16?20 min得到菌泥；
(5)預凍:將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在-30°C預冷12小時；
(6)真空低溫冷凍干燥:將預凍后的菌泥加入凍干機，保持-300C到-400C，冷凍干燥16?24小時，得到復合乳酸菌凍干粉。
[0006]本發(fā)明的有益效果
(I)本發(fā)明方法采用的菌種分離自天然發(fā)酵的牦牛乳酸奶，具有自主知識產(chǎn)權。
[0007](2)本發(fā)明酸奶發(fā)酵劑的制備方法，具有方法簡單、易操作等優(yōu)點。制備的酸奶發(fā)酵劑，活菌數(shù)達到111CFlVg。
[0008](3)本發(fā)明生產(chǎn)的酸奶發(fā)酵劑適合應用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品的加工。
【具體實施方式】
[0009]下面的實施例可以進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0010]實施例1
將冷凍保藏的兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復以上操作4次以恢復菌株活力。兩菌株充分活化后，分別以接種量3% (V/V)分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)12h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3 % (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心16 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1: 3比例混合，在-30 0C預冷12小時。將預凍后的菌泥加入凍干機，保持-30 0C到-400C，冷凍干燥16小時，得到酸奶發(fā)酵劑，其活菌數(shù)達到4.1OX 10nCFU/g。
[0011]實施例2
將冷凍保藏的兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復以上操作5次以恢復菌株活力。兩菌株充分活化后，分別以接種量3% (V/V)分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)13h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3 % (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心18 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1: 3比例混合，在-30 0C預冷12小時。將預凍后的菌泥加入凍干機，保持-30 0C到-400C，冷凍干燥20小時，得到酸奶發(fā)酵劑，其活菌數(shù)達到4.20X 10nCFU/g。
[0012]實施例3
將冷凍保藏的兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復以上操作6次以恢復菌株活力。兩菌株充分活化后，分別以接種量3% (V/V)分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)14h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3 % (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心20 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1: 3比例混合，在-30 0C預冷12小時。將預凍后的菌泥加入凍干機，保持-30 0C到-400C，冷凍干燥24小時，得到酸奶發(fā)酵劑，其活菌數(shù)達到4.30X 10nCFU/g。
【主權項】
1.一種酸奶發(fā)酵劑的制備方法，其特征是它包括以下步驟: (1)菌種活化:將冷凍保藏的兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復以上操作4~6次以恢復菌株活力； (2)種子液制備:兩菌株充分活化后，分別以接種量3% (V / V)分別接入M R S液體培養(yǎng)基，于25 °C恒溫培養(yǎng)12?14h得到種子液； (3)增殖培養(yǎng):將種子液以球桿菌比例2:1(V/V)、接種量3 % (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h; (4)菌體收集:將培養(yǎng)液在4°C、5000r/mim離心16?20 min得到菌泥； (5)預凍:將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在-30°C預冷12小時； (6)真空低溫冷凍干燥:將預凍后的菌泥加入凍干機，保持-300C到-40 0C，冷凍干燥16?24小時，得到復合乳酸菌凍干粉。
【文檔編號】C12N1/04GK105950522SQ201610592917
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年7月26日
【發(fā)明人】張衛(wèi)兵, 李曉鵬, 曹磊
【申請人】甘肅金亞科技發(fā)展有限公司