ODsoo值。由圖10可W看出B-I在鹽度為3-5范圍內(nèi)生長(zhǎng)良好,具有較強(qiáng)的耐鹽性。
[0090] (3.2.3)溫度對(duì)B-I生長(zhǎng)的影響
[0091 ]將B-I菌W相同的接種量接入溫度分別為5°C、15°C、25°C和35°C的富集培養(yǎng)基中, 18化/min培養(yǎng)3d,測(cè)定培養(yǎng)液的ODsoo值。從圖11可W看出,株菌在15-35°C時(shí)生長(zhǎng)良好,且具 有較好的耐冷性。
[0092] 嗜鹽石油控降解菌體由假單胞菌屬Pseudomonas、脂肪桿菌屬Pimelobacter、海球 菌屬M(fèi)arinococ州S、微桿菌屬M(fèi)icrobacteriumW及動(dòng)性球菌屬Planococcus組成,質(zhì)量比為 3~5:1~3:2~3:1~2:1~2。利用實(shí)施例1中獲取的Nl~M系列菌株和B-I系列菌株或者采 用市售的菌株來(lái)構(gòu)成上述嗜鹽石油控降解菌體,進(jìn)而制備用于船舶修造污水處理的固定化 微生物菌劑,該固定化微生物菌劑的固定化材料包括海藻酸鋼、CaCb、納米二氧化娃W及 低聚木糖。W下通過(guò)實(shí)施例2~6對(duì)該固定化微生物菌劑的制備過(guò)程進(jìn)行詳述。
[0093] 實(shí)施例2:用于船舶修造污水處理的固定化微生物菌劑的制備
[0094] 本實(shí)施例中,海藻酸鋼、CaCb及納米二氧化娃W及低聚木糖的質(zhì)量比為1:0.75: 0.1:0.2。嗜鹽石油控降解菌體中假單胞菌屬為B-I,脂肪桿菌屬、海球菌屬、微桿菌屬及動(dòng) 性球菌屬分別為NI、N2、N3 W及N4,且B-I、N1、N2、N3 W及M的質(zhì)量比為3:1:2:1:1,制備過(guò)程 包括W下步驟:
[00M] (1)將培養(yǎng)后的嗜鹽石油控降解菌體菌液3000巧m下離屯、4min,去除上層清液,收 集底部濃縮菌液,用無(wú)菌水將其調(diào)節(jié)至ODsoo為1,即得嗜鹽石油控降解菌體濃縮液;
[0096] (2)將一定量的海藻酸鋼和納米二氧化娃加入上述嗜鹽石油控降解菌體濃縮液 中,混合均勻,用注射器吸取混合液,該混合液中海藻酸鋼的濃度為5%,逐滴滴入到3.5% CaCb溶液中,得固定化微球,交聯(lián)12h后,用無(wú)菌水洗凈得所需的固定化微生物菌劑,該固 定化微生物菌劑中嗜鹽石油控降解菌體的含量為3 X 109cell/g。
[0097] 實(shí)施例3:用于船舶修造污水處理的固定化微生物菌劑的制備
[0098] 本實(shí)施例中,海藻酸鋼、CaCb及納米二氧化娃W及低聚木糖的質(zhì)量比為1:0.8: 0.2:0.3。嗜鹽石油控降解菌體中假單胞菌屬為B-I,脂肪桿菌屬、海球菌屬、微桿菌屬及動(dòng) 性球菌屬分別為N1、N2、N3W及N4,且B-1、N1、N2、N3W及N4的質(zhì)量比為4:3:3:2:2。制備過(guò)程 包括W下步驟:
[0099] (1)將培養(yǎng)后的嗜鹽石油控降解菌體菌液3000rpm下離屯、5min,去除上層清液,收 集底部濃縮菌液,用無(wú)菌水將其調(diào)節(jié)至ODsoo為1,即得嗜鹽石油控降解菌體濃縮液;
[0100] (2)將一定量的海藻酸鋼和納米二氧化娃加入上述嗜鹽石油控降解菌體濃縮液 中,混合均勻,用注射器吸取混合液,該混合液中海藻酸鋼的濃度為6%,逐滴滴入到4.0% CaCb溶液中,得固定化微球,交聯(lián)Hh后,用無(wú)菌水洗凈得所需的固定化微生物菌劑,該固 定化微生物菌劑中嗜鹽石油控降解菌體的含量為4X10 9cell/g。
[0101] 實(shí)施例4:用于船舶修造污水處理的固定化微生物菌劑的制備
[0102] 本實(shí)施例中,海藻酸鋼、CaCb及納米二氧化娃W及低聚木糖的質(zhì)量比為1:0.8: 0.1:0.2。嗜鹽石油控降解菌體中假單胞菌屬為B-I,脂肪桿菌屬、海球菌屬、微桿菌屬及動(dòng) 性球菌屬分別為Nl、N2、N3 W及N4,且B-I、N1、N2、N3 W及M的質(zhì)量比為5: 2:2:1: 2。制備過(guò)程 包括W下步驟:
[0103] (1)將培養(yǎng)后的嗜鹽石油控降解菌體菌液3000巧m下離屯、4min,去除上層清液,收 集底部濃縮菌液,用無(wú)菌水將其調(diào)節(jié)至ODsoo為1,即得嗜鹽石油控降解菌體濃縮液;
[0104] (2)將一定量的海藻酸鋼和納米二氧化娃加入上述嗜鹽石油控降解菌體濃縮液 中,混合均勻,用注射器吸取混合液,該混合液中海藻酸鋼的濃度為6%,逐滴滴入到3.5% CaCb溶液中,得固定化微球,交聯(lián)12h后,用無(wú)菌水洗凈得所需的固定化微生物菌劑,該固 定化微生物菌劑中嗜鹽石油控降解菌體的含量為3 X 109cell/g。
[0105] 實(shí)施例5:用于船舶修造污水處理的固定化微生物菌劑的制備
[0106] 本實(shí)施例中,海藻酸鋼、CaCb及納米二氧化娃W及低聚木糖的質(zhì)量比為1:0.75: 0.1:0.2。嗜鹽石油控降解菌體中假單胞菌屬為銅綠假單胞菌Aeruginasa,脂肪桿菌屬、海 球菌屬、微桿菌屬及動(dòng)性球菌屬的細(xì)菌分別為簡(jiǎn)單脂肪桿菌Pimerobacter simplex、嗜鹽 海球菌Marinococcus halophilus、嗜氨微桿菌ATCC15354Microbacterium ammoniaphilum ATCCl5354W及巧樣色動(dòng)性球菌Planococcus citreus,均購(gòu)于上海富眾(亞平寧)生物科技 發(fā)展有限公司,且質(zhì)量比為5:1:2:2:2。制備過(guò)程包括^下步驟:
[0107] (1)將培養(yǎng)后的嗜鹽石油控降解菌體菌液3000巧m下離屯、4min,去除上層清液,收 集底部濃縮菌液,用無(wú)菌水將其調(diào)節(jié)至ODsoo為1,即得嗜鹽石油控降解菌體濃縮液;
[0108] (2)將一定量的海藻酸鋼和納米二氧化娃加入上述嗜鹽石油控降解菌體濃縮液 中,混合均勻,用注射器吸取混合液,該混合液中海藻酸鋼的濃度為5%,逐滴滴入到3.5% CaCb溶液中,得固定化微球,交聯(lián)12h后,用無(wú)菌水洗凈得所需的固定化微生物菌劑,該固 定化微生物菌劑中嗜鹽石油控降解菌體的含量為4X10 9cell/g。
[0109] 實(shí)施例6:用于船舶修造污水處理的固定化微生物菌劑的制備
[0110] 本實(shí)施例中,海藻酸鋼、CaCb及納米二氧化娃W及低聚木糖的質(zhì)量比為1:0.8: 0.1:0.2。嗜鹽石油控降解菌體中假單胞菌屬為紅蒼白假單胞菌Rubrisuba化icans,脂肪桿 菌屬、海球菌屬、微桿菌屬及動(dòng)性球菌屬的細(xì)菌分別為簡(jiǎn)單脂肪桿菌Pimerobacter Simplex、嗜鹽海球菌Marinococcus halophiIus、娥微桿菌Microbacterium imperialeW 及巧樣色動(dòng)性球菌Planococcus Ci化eus,均購(gòu)于上海富眾(亞平寧)生物科技發(fā)展有限公 司,且質(zhì)量比為3:3:3:2:2。制備過(guò)程包括W下步驟:
[0111] (1)將培養(yǎng)后的嗜鹽石油控降解菌體菌液3000巧m下離屯、4min,去除上層清液,收 集底部濃縮菌液,用無(wú)菌水將其調(diào)節(jié)至ODsoo為1,即得嗜鹽石油控降解菌體濃縮液;
[0112] (2)將一定量的海藻酸鋼和納米二氧化娃加入上述嗜鹽石油控降解菌體濃縮液 中,混合均勻,用注射器吸取混合液,該混合液中海藻酸鋼的濃度為6%,逐滴滴入到3.5% CaCb溶液中,得固定化微球,交聯(lián)12h后,用無(wú)菌水洗凈得所需的固定化微生物菌劑,該固 定化微生物菌劑中嗜鹽石油控降解菌體的含量為3 X 109cell/g。
[0113] 實(shí)施例7:固定化微生物菌體對(duì)含油污水的降解試驗(yàn)
[0114] 將固定化菌劑微球按照體積比為2%接種于配制好的已滅菌的IOOmL含油污水中, 放在恒溫振蕩搖床中25 °C降解,搖床轉(zhuǎn)速為15化/min。
[0115] (1)原油降解效率的測(cè)定
[0116] 樣品中原油含量的測(cè)定按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法分光光度法SY/T 0530-2011進(jìn)行,測(cè)定 波長(zhǎng)選擇420nm,并按下式計(jì)算原油的降解效率(Tl):
[0117]
[0118] 式中;
[0119] Co-空白含油污水中原油的濃度(mg/L);
[0120] Cl-降解后含油污水中原油的濃度(mg/L)。
[0121] (2)菌劑生物量的測(cè)定
[0122] 樣品測(cè)定時(shí),將含油污水中的微球取出清洗后,先稱(chēng)出微球的質(zhì)量,然后對(duì)其破碎 加入25mL無(wú)菌水振蕩后,取ImL上清液用血球計(jì)數(shù)板鏡檢測(cè)定生物量,表示為cell/g(微 球)。
[0123] 在原油濃度為3g/L時(shí)對(duì)含油污水連續(xù)降解15d,測(cè)定了原油去除率與菌劑生物量 的變化。如圖12所示,經(jīng)過(guò)15d的降解,固定化菌劑對(duì)原油的降解率可達(dá)91.8%。雖然隨著降 解時(shí)間延長(zhǎng),固定化菌劑對(duì)原油的降解效率逐漸增加,當(dāng)降解時(shí)間達(dá)到7d后,降解速率趨于 平緩,對(duì)3g/L的原油的降解率可達(dá)77.3%。而生物量則呈現(xiàn)先減少后增加的再減少的趨勢(shì)。 運(yùn)是