一類含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗腫瘤化合物的設(shè)計、合成及生物活性評價的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一類含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物、 其制備方法及應(yīng)用。
[0002] 發(fā)明簡介
[0003] 惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的常見疾病。尋找有效的抗腫瘤藥物與方法，徹底 攻克癌癥，是一項世界性的難題。雖然抗腫瘤藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機制是各種各樣，但是目 前臨床上常用的抗腫瘤藥物普遍存在對實體瘤療效較差、毒副作用大以及容易產(chǎn)生多藥耐 藥性等諸多缺點。因此發(fā)現(xiàn)高效低毒的新型抗腫瘤藥物，仍是一項極其重要的研究課題。
[0004] 微管是細(xì)胞骨架的主要組成部分，由α微管蛋白（α-tubulin)和β微管蛋白（β-tubulin)異二聚體組成，具有維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分裂、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及物質(zhì)輸送等過程中起著 重要作用?？刮⒐芩幬镆呀?jīng)成為一種主要的化療藥物，廣泛應(yīng)用于臨床各類腫瘤治療中。微 管蛋白抑制劑通過與微管蛋白特定位點結(jié)合，影響和干擾微管蛋白的聚合和解聚的動力 學(xué)，進(jìn)而阻斷Μ期紡錘體的形成。使腫瘤細(xì)胞生長停滯于G2/M期。臨床上應(yīng)用的微管蛋白抑 制劑主要有以紫杉醇為代表的抑制微管蛋白解聚藥物和以長春堿類為代表的抑制微管聚 合藥物。然而，上述藥物毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、合成難度大等問題。尋找新 型、高效、低毒的微管抑制劑已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究的一個熱點。直到1987年美國國家 癌癥研究所從南非矮生柳樹中發(fā)現(xiàn)了天然活性產(chǎn)物CA-4XA-4是一類結(jié)構(gòu)簡單的順式二苯 乙烯類化合物，它是目前已知的微管蛋白抑制劑中活性最強的化合物之一。然而CA-4水溶 性差、生物利用度低，而且給藥后CA-4很容易轉(zhuǎn)變?yōu)闊o藥理活性的結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定的反式結(jié) 構(gòu)。因此為了克服這一缺點，國際上近年來圍繞CA-4的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了改造，作了大量的工作， 已合成了數(shù)百個CA-4衍生物，我們這發(fā)明就是根據(jù)CA-4進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一類肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗腫瘤化合物的制備方 法及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：
[0007] -類肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物，其結(jié)構(gòu)如式所示：
[0009] 其中，心選自：-H、-〇CH3;R2選自：-H、-Br;R3選自：3,4,5-0〇1 3、3,4-0〇13、2-0!1、2-0CH3、3-0CH3、4-0CH3、2，4，5-0CH3、3-OH、4-OH、2-F、3-F、4-F、2-Br、3-Br、4-Br、4-C1、4-N〇2。
[0010] 制備方法包括如下步驟：
[0011]步驟1.室溫條件下，向反應(yīng)容器中依次加入結(jié)構(gòu)A化合物、HOBt和EDC · HC1，在乙 腈中反應(yīng)2小時。然后把反應(yīng)物移至0~10°C加入水合肼。TLC跟蹤反應(yīng)，充分反應(yīng)后，得到結(jié) 構(gòu)如式B所示的化合物。
[0013]步驟2.向反應(yīng)容器中依次加入結(jié)構(gòu)如式B所示的化合物以及結(jié)構(gòu)如式C所示的化 合物，乙酸作催化，在無水乙醇體系中回流，TLC跟蹤反應(yīng)。充分反應(yīng)后，得到結(jié)構(gòu)如式D所示 的化合物。
[0015] 式A~D中，Ri選自：-H、-〇CH3;R2選自：-H、-Br;R3選自 ：3,4,5-0CH3、3,4-0CH3、2-OH、 2-OCH3、3-0CH3、4-0CH3、2，4，5-0CH3、3-OH、4-OH、2-F、3-F、4-F、2-Br、3-Br、4-Br、4-C1、4- N〇2〇
[0016] 本發(fā)明對人肝癌細(xì)胞(HEPG2)，人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)，人肺癌細(xì)胞(A549)有明顯 的抑制作用，因此本發(fā)明的含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物可以應(yīng)用于制備抗腫瘤藥 物。
【具體實施方式】
[0017] 在某個具體的實施例中，本發(fā)明的制備過程和相關(guān)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式如下所述：
[0019] -種制備上述含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗腫瘤化合物的方法，它包括以下步 驟：
[0020] 步驟a .將多羥基取代的肉桂酸（1 Ommo 1)溶于15mL乙腈溶劑中，再加入HOB t (12mmol)和EDC · HC1 (12mmol)，室溫攪拌2小時。將反應(yīng)液移至0~10°C，逐滴滴加水合肼 (36mmol) JLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液真空旋干，用乙酸乙酯和飽和食鹽水萃取， 得到有機層真空旋干等到4a-c。
[0021 ] 步驟b ·將化合物4a_c( 1 .Ommol)和不同取代的苯甲醛（1 · lmmol)溶于20mL的無水 甲醇中，攪拌條件下滴加2滴乙酸催化，回流條件下攪拌反應(yīng)2小時，直至有明顯的沉淀產(chǎn) 生。將反應(yīng)物倒入冰飽和食鹽水中，產(chǎn)生沉淀，過濾，將得到的沉淀水洗和在無水乙醇中重 結(jié)晶得到5a-7g。
[0022] 實施例一：
[0023] (E)-N'-( (E)-3,4,5-三甲氧基芐基)-3-(3，4,5_三甲氧基苯基）乙酰肼(5a)的制 備
[0025] 將(E)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-丙烯酸（lOmmol)溶于15mL乙腈溶劑中，再加入 H0Bt( 12mmol)和EDC · HC1 (12mmol)，室溫攪拌2小時。將反應(yīng)液移至0~10°C，逐滴滴加水合 肼（36mmol)，TLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液真空旋干，用乙酸乙酯和飽和食鹽水萃 取，得到有機層真空旋干等到4a。再將化合物4a(l. Ommol)和3，4,5-三甲氧基苯甲醛 (1. lmmol)溶于20mL的無水甲醇中，攪拌條件下滴加2滴乙酸催化，回流條件下攪拌反應(yīng)2小 時，直至有明顯的沉淀產(chǎn)生。將反應(yīng)物倒入冰飽和食鹽水中，產(chǎn)生沉淀，過濾，將得到的沉淀 水洗和在無水乙醇中重結(jié)晶得到5a。得淡黃色的粉末，產(chǎn)率：89.1 % .m. p . 219-221 °C . 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)S: 11.68(s，0.58H)，11.55(s，0.42H)，8·16(s，0.56H)，7.98(s， 0.44H)，7.61(dd，J=18.5,9.3Hz，1.49H)，7. ll(d，J = 3.8Hz，2H)，7.04(s，lH)，6.99(s， lH)，6.67(d，J=15.7Hz，0.51H)，3.85(d，J = 6.1Hz，12H)，3.71(d，J=1.9Hz，6H) .MS(ESI) m/z：431.17(C22H26N2〇7, [M+H] + ) .Anal .Calcd for C22H26N2O7 ： C, 61.39 ； H, 6.09 ； N, 6.51.Found：C,61.48；H,6.09；N,6.49.
[0026] 實施例二：
[0027] 化)-^-(化)-3,4_二甲氧基亞芐基)-3_(3,4,5-三甲氧基苯基）乙酰肼(5e)的制 備
[0029] 制備方法參考實施例一。得黃色粉末，產(chǎn)率：87.7% .1114.208-2101.? NMR (400MHz，DMS〇-d6)S: 11.56(s，0.58H)，11.40(s，0.42H)，8.15(s，0.59H)，7.98(s，0.41H)， 7.68-7.46(m，2H)，7.33(s，0.56H)，7.20(dd，J = 8.3Hz，0.57H)，7.17(d，J = 8.1Hz，0.43H)， 7.n-6.95(m，3H)，6.65(d，J=15.7Hz，0.56H)，3.84(t，J = 4.1Hz，9H)，3.81(d，J = 4.2Hz， 3H)，3 · 70(s，3H) .MS(ESI)m/z:401 · 16(C2iH24N2〇6，[M+H] + ) ·Anal ·Calcd for C21H24N2O6:C， 62.99;H，6.04;N，7.00.Found:C，62.86 ;H，6.02;N，7.01.
[0030] 實施例三：
[0031] (E)-3-(2-溴-3,4,5-三甲氧基苯基^^-("丨^^-三甲氧基芐基丨丙烯酸酰肼 (6a)的制備
[0033] 制備方法參考實施例一。得黃綠色晶體，產(chǎn)率78.4% .1114.241-2431.? NMR (300MHz，DMS〇-d6)S : 11 · 73(s，0·47H)，11.67(s，0.53H)，8.19(s，0.51H)，8·03-7·79(ι?， 1.49H)，7.69(d，J=15.8Hz，0.51H)，7.42(s，0.49H)，7.20(s，0.49H)，7.08(d，J=18.7Hz， 2H)，6 · 71 (d，J= 15 · 6Hz，0· 51H)，3 · 91 (s，3H)，3 ·89-3·77(ι?，12Η)，3· 71 (d，J = 4.0Hz，3H) ?13CMffi(101MHz，DMS0-d6)S:166.17，161.45，153.64，153.59，153.25，150.97，150.89， 147.47,144.62,144.49,143.43,139.97,139.71，139.32,138.79,130.19,130.16,130.04， 123.42，120.34，112.28，111.96，107.26，106.88，104.85，104.56,61.31，61.28,60.60， 60.56,56.56,56.42,56.27,56.15.MS(ESI)m/z:509.08(C22H25BrN2〇7，[M+H] + ) .Anal.Calcd for C22H25BrN2〇7：C,51.88；H,4.95；N,5.50.Found：C,51.92；H,4.94；N,5.51.
[0034] 實施例四：
[0035] (E)-3-(2-溴-3,4,5-三甲氧基苯基甲氧基亞芐基)丙烯酸酰肼(6b) 的制備
[0037] 制備方法參考實施例一。得黃色晶體，產(chǎn)率70.8% .1114.205-2071.4 NMR (300MHz，DMS〇-d6)S: 11.76(s，0.60H)，11.58(s，0.40H)，8.61(s，0.59H)，8.43(s，0.41H)， 8.(n-7.93(m，0.61H)，7.86(dd，J=14.0,5.1Hz，1.39H)，7.56(d，J=15.8Hz，0.46H)，7.42 (q，J = 8.1Hz，lH)，7.33(s，0.41H)，7.18(s，0.59H)，7.15-7.07(m，lH)，7.02(q，J = 7.2Hz， lH)，6.67(d，J=15.6Hz，0.54H)，3.93(d，J=12.1Hz，3H)，3.87(d，J = 4.0Hz，3H)，3.83(d，J = 6.6Hz，6H).13CMlR(101MHz，DMS0-d6)S:166.13，161.30，158.19，158.08，153.32，