>[0025] (3)將種子液接種于稀釋的污水中，在人工氣候室中進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每 天取樣測(cè)定生物量并進(jìn)行水質(zhì)分析。
[0026] (4)待步驟(3)所述的藻體到達(dá)穩(wěn)定期，將藻液在4500~6500r/min的速度下離心8 ~1 Omin，倒掉上清液，得到底泥。
[0027] (5)對(duì)步驟(4)中的藻泥進(jìn)行冷凍干燥，得干燥粉。
[0028]水質(zhì)指標(biāo)及藻體生物量測(cè)定
[0029] 取藻液20ml在6000r/min條件下離心10min，底部藻泥置于60°C恒溫箱中烘干至恒 重，測(cè)其生物量濃度(g/L)。上清液經(jīng)0.45μπι醋酸纖維濾膜低壓過濾用于分析氮磷濃度?？?氮的測(cè)定采用堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法(HJ636-2012)，氨氮的測(cè)定采用納氏試劑 分光光度法(HJ535-2009)，總磷的測(cè)定采用鉬酸銨分光光度法(GB11893-89).
[0030] 生物質(zhì)結(jié)果如圖1所示：生活污水及不同稀釋倍數(shù)培養(yǎng)液所獲得生物質(zhì)均顯著高 于BG11，并由表1可知，收獲時(shí)生物質(zhì)、生物質(zhì)產(chǎn)率以及比生長速率都顯著高于BG11。綜合比 較，稀釋100倍時(shí)藻類藻體在收獲時(shí)獲得生物質(zhì)為〇. 40g/L，生物質(zhì)產(chǎn)率為0.025CT1以及比生 長速率105.5mg/L/d，都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于BG11。相比于生活污水，稀釋100倍培養(yǎng)基具有可同時(shí)處理 兩種污水并獲得較優(yōu)的藻類生長特性的優(yōu)勢(shì)。因此，稀釋100倍混合培養(yǎng)基可作為一種替代 培養(yǎng)基來培養(yǎng)色球藻SDEC-6獲得生物質(zhì)。
[0031] 表1不同培養(yǎng)基最終生物質(zhì)、生物質(zhì)濃度及比生長速率
[0032]
[0033]水質(zhì)指標(biāo)監(jiān)測(cè)分析：由表2可知藻類收獲后總磷去除相對(duì)較快，生活污水、稀釋50 倍、100倍、200倍均超過90%，其中稀釋100倍達(dá)到97.3%，總氮、氨氮去除率則相對(duì)較低。相 比于生活污水，稀釋100倍培養(yǎng)基能去除更多的營養(yǎng)元素濃度。因此，綜合比較，稀釋100倍 去除率相對(duì)較好。
[0034]表2不同稀釋倍數(shù)下各項(xiàng)水質(zhì)指標(biāo)及去除率 [0035]
[0036]實(shí)施例2色球藻SDEC-6的油脂積累特性 [0037]油脂含量分析：
[0038] 稱取約O.lg干藻粉于50mL離心管中，加入10mL甲醇/氯仿(v/v=l:2)溶液，用超聲 破碎儀處理l〇min，以4000r/min的速度離心10min，將分層的兩相中的有機(jī)相轉(zhuǎn)移到60mL分 液漏斗中，整個(gè)提取過程重復(fù)兩次。根據(jù)分液漏斗中提取液的體積，投加0.9%的氯化鈉溶 液(加入體積為提取液的1/5)，充分搖勻約lmin，靜置15min測(cè)量下層提取液的體積并取5mL 于10mL玻璃試管中，用氮?dú)獯蹈?，將玻璃管置?0°C烘箱中烘至恒重（約30min)。油脂含量 計(jì)算如下：
[0039]
[0040] 式中：LW-基于干重下的油脂含量，g/g [00411 im-藻粉干重，g
[0042] m2-帶油脂的10mL玻璃管干重，g
[0043] mo-lOmL玻璃管干重，g
[0044] v-低相油脂的體積，mL
[0045] 結(jié)果如圖2示，以BG11和校園污水為對(duì)照，各培養(yǎng)基中藻類油脂含量隨消化液濃度 的增加而增加，且各混合培養(yǎng)基中藻類油脂含量均高于生活污水中藻類的油脂含量，稀釋 10倍油脂含量達(dá)到最大38.65%，稀釋5倍和直接用消化液培養(yǎng)藻類均未生長，各培養(yǎng)基中 藻類的油脂產(chǎn)率均比BG11高約兩倍，其中稀釋10倍和100倍均超過11.7mg/L/d，稀釋10倍最 大為11.79mg/L/d，稀釋100倍次之為11.76mg/L/d。由油脂積累數(shù)據(jù)可知，由生活污水稀釋 餐廚垃圾厭氧消化液作為混合培養(yǎng)液可作為一種廉價(jià)的替代培養(yǎng)基培養(yǎng)色球藻SDEC-6,所 獲得生物質(zhì)具有遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于在BG11和生活污水中培養(yǎng)的特質(zhì)。
[0046] 上述雖然結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范 圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不 需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液培養(yǎng)色球藻的方法，其特征為包括如下步 驟： (1) 將色球藻SDEC-6置于BG11培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)； (2) 配置不同稀釋濃度的混合培養(yǎng)液，消化液與生活污水的比例分別1:4~1:199,稀釋 倍數(shù)分別為5倍~200倍，將步驟（1)制得的藻細(xì)胞種子液接種到裝有上述混合培養(yǎng)液的錐 形瓶中，接種后生物質(zhì)密度為0.13~0.14g/L; (3) 將步驟（2)制得的反應(yīng)裝置置于人工氣候室中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度25°C， 60001ux連續(xù)光照； (4) 將步驟(3)培養(yǎng)的色球藻SDEC-6進(jìn)行離心收獲，將離心后的底泥進(jìn)行冷凍干燥，獲 得干藻粉，用于成份分析。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液培養(yǎng)色球藻的方法，其 特征在于，所述步驟（2)中消化液經(jīng)六層紗布過濾并以4500~6500r/min的速度離心8~ lOmin;生活污水經(jīng)六層紗布過濾。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液培養(yǎng)色球藻的方法，其 特征在于，所述步驟(2)的培養(yǎng)周期為10d。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液培養(yǎng)色球藻的方法，其 特征在于，所述步驟(4)中成份分析為計(jì)算色球藻SDEC-6中的油脂含量。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液培養(yǎng)色球藻的方法，屬于微藻生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明用BG11、生活污水、消化液及不同稀釋倍數(shù)的培養(yǎng)液對(duì)色球藻SDEC-6進(jìn)行恒溫光照培養(yǎng)，至生長末期對(duì)其進(jìn)行收獲。結(jié)果表明，色球藻SDEC-6在生活污水及不同稀釋倍數(shù)下的生物量、生長速率、油脂含量等均高于BG11并且稀釋100倍培養(yǎng)基所獲得的生物質(zhì)及油脂含量均高于生活污水。綜上所述，用生活污水稀釋餐廚垃圾厭氧消化液獲得的混合培養(yǎng)液可作為一種優(yōu)質(zhì)的替代培養(yǎng)基并能促進(jìn)生物質(zhì)產(chǎn)量，降低培養(yǎng)成本，值得推廣使用。
【IPC分類】C02F3/32, C12R1/89, C12N1/12
【公開號(hào)】CN105483015
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610034390
【發(fā)明人】裴海燕, 成娟, 韓飛, 蔣麗群, 聶昌亮, 張立杰
【申請(qǐng)人】山東大學(xué)
【公開日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2016年1月19日