8]實(shí)施例2
一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)清理金槍魚魚骨上面的魚肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的顆粒，將魚骨顆粒浸入浸泡液中，溫度50°C，浸泡時(shí)間4.5h，撈出瀝干后超微粉粹至粒徑5-10 μ m的魚骨粉末，-10°C下保存?zhèn)溆?；其中，浸泡液由以下重量份的原料組成:橘子皮48份、山楂23份、胡蘿卜18份、野菊花3份、茶葉35份、殼聚糖16份、海藻酸鈉13份與水285份，魚骨顆粒與浸泡液的質(zhì)量比為1:10 ;浸泡液制備時(shí)，先將水加熱至65°C，加入橘子皮、山楂、胡蘿卜、野菊花與茶葉，繼續(xù)加熱至水沸騰5次后降溫到50°C，然后加入殼聚糖與海藻酸鈉而制得；
b)將步驟a)得到的魚骨粉末加入至2mol/L的乙酸溶液中，并加熱至60°C，超聲震蕩4h，14000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置3h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20°C下保存llh，得到魚骨膠原蛋白；其中，添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽4份、果糖6份、富砸酵母6份、天冬酰胺12份、蛋氨酸13份，添加劑的加入量為魚骨粉末質(zhì)量的5倍，魚骨粉末與乙酸溶液的料液比為Ig:40mL ;超聲波功率為60kw ；
C)向步驟C)得到的魚骨膠原蛋白中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至1.8，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)1.5h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至7.9，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5.5h，得到酶解產(chǎn)物；其中，復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1: 1.2，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為2.7:1，復(fù)合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.55%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的0.63% ;
d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液；玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以110mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)10次，然后以14000r/min離心3min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚魚骨膠原蛋白肽。其中，活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2 ;循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為1.8T。金槍魚魚骨膠原蛋白肽的得率93%，純度 81%。
[0019]實(shí)施例3
一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)清理金槍魚魚骨上面的魚肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的顆粒，將魚骨顆粒浸入浸泡液中，溫度55°C，浸泡時(shí)間6h，撈出瀝干后超微粉粹至粒徑5-10 μπι的魚骨粉末，-10°C下保存?zhèn)溆茫黄渲?，浸泡液由以下重量份的原料組成:橘子皮50份、山楂25份、胡蘿卜26份、野菊花5份、茶葉40份、殼聚糖18份、海藻酸鈉15份與水350份，魚骨顆粒與浸泡液的質(zhì)量比為1:10 ;浸泡液制備時(shí)，先將水加熱至65°C，加入橘子皮、山楂、胡蘿卜、野菊花與茶葉，繼續(xù)加熱至水沸騰5次后降溫到55°C，然后加入殼聚糖與海藻酸鈉而制得；
b)將步驟a)得到的魚骨粉末加入至3mol/L的乙酸溶液中，并加熱至65°C，超聲震蕩5h，15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2_4h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20°C下保存12h，得到魚骨膠原蛋白；其中，添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽5份、果糖7份、富砸酵母10份、天冬酰胺15份、蛋氨酸15份，添加劑的加入量為魚骨粉末質(zhì)量的6倍，魚骨粉末與乙酸溶液的料液比為Ig:40mL ;超聲波功率為 65kw ；
c)向步驟c)得到的魚骨膠原蛋白中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至2.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)6h，得到酶解產(chǎn)物；其中，復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:1.2，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為2.7:1，復(fù)合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.7%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的0.9% ;
d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液；玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以120mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)15次，然后以15000r/min離心4min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚魚骨膠原蛋白肽。其中，活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2 ;循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為1.8T。金槍魚魚骨膠原蛋白肽的得率94%，純度 82%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: a)清理金槍魚魚骨上面的魚肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的顆粒，將魚骨顆粒浸入浸泡液中，溫度45-55°C，浸泡時(shí)間3-6h，撈出瀝干后超微粉粹至粒徑5-10 μ m的魚骨粉末，-10°C下保存?zhèn)溆茫? b)將步驟a)得到的魚骨粉末加入至l-3mol/L的乙酸溶液中，并加熱至55_65°C，超聲震蕩3-5h，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2_4h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在_20°C下保存10_12h，得到魚骨膠原蛋白； c)向步驟c)得到的魚骨膠原蛋白中加入去離子水，調(diào)節(jié)PH至1.3-2.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)l_2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至7.5-8.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5_6h，得到酶解產(chǎn)物； d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液；玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以100-120mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)5_15次，然后以12000_15000r/min離心2-4min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚魚骨膠原蛋白肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟a)中浸泡液由以下重量份的原料組成:橘子皮45-50份、山楂20-25份、胡蘿卜14-26份、野菊花1-5份、茶葉30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉12-15份與水200-350份，魚骨顆粒與浸泡液的質(zhì)量比為1:10。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3-5份、果糖5-7份、富砸酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚骨粉末質(zhì)量的4-6倍，魚骨粉末與乙酸溶液的料液比為Ig:40mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟d)中活性炭的粒度為400目，比表面積1450 m2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為0.2-1.8T。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟c)中復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:1.2，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為2.7:1，復(fù)合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.2-0.7%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的0.5-0.9%。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，浸泡液制備時(shí)，先將水加熱至65°C，加入橘子皮、山楂、胡蘿卜、野菊花與茶葉，繼續(xù)加熱至水沸騰5次后降溫到45-55°C，然后加入殼聚糖與海藻酸鈉而制得。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中超聲波功率為55-65kw。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，將金槍魚魚骨粉碎后進(jìn)行預(yù)處理，然后加入添加劑制成膠原蛋白，最后酶解而制得。本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收；為補(bǔ)硒保健食品與藥物開發(fā)提供了一種技術(shù)支持，同時(shí)也為金槍魚魚骨的高值化利用提供了一條新思路。
【IPC分類】C07K1/34, C07K1/16, C07K1/36, C12P21/06
【公開號(hào)】CN105087729
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510498969
【發(fā)明人】楊會(huì)成
【申請(qǐng)人】浙江省海洋開發(fā)研究院
【公開日】2015年11月25日
【申請(qǐng)日】2015年8月14日